التقليدية البلازما هلام (سغي) التجارب تتطلب جهاز معقد والاستهلاك الكيميائي عالية. يعرض هذا العمل بروتوكولا يصف طريقة منخفضة التكلفة لفصل شظايا الحمض النووي ضمن إطار زمني قصير.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
في الوقت الحقيقي تتبع فصل جزء من الحمض النووي عن طريق الهاتف الذكي
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
لوح هلام الكهربائي (سغي) هو الأسلوب الأكثر شيوعا لفصل شظايا الحمض النووي. وبالتالي، فإنه يطبق على نطاق واسع في مجال البيولوجيا وغيرها. ومع ذلك، فإن بروتوكول سغي التقليدية مملة جدا، وتستغرق التجربة وقتا طويلا. وعلاوة على ذلك، فإن استهلاك المواد الكيميائية في تجارب سغي عالية جدا. هذا العمل يقترح طريقة بسيطة لفصل شظايا الحمض النووي على أساس رقاقة سغي. يرصد رقاقة بواسطة آلة الحفر. وتستخدم صفائح من البلاستيك لأطوال موجات الإثارة والانبعاث للإشارة البصرية. يتم جمع إشارة مضان من العصابات الحمض النووي عن طريق الهاتف الذكي. للتحقق من صحة هذه الطريقة، تم فصل 50، 100، و 1،000 بب الحمض النووي سلالم. وتظهر النتائج أن سلم الحمض النووي أصغر من 5000 بب يمكن حلها في غضون 12 دقيقة ومع ارتفاع القرار عند استخدام هذه الطريقة، مشيرا إلى أنه هو بديل مثالي لطريقة سغي التقليدية.
المقدمة
هلام الكهربائي بلاطة (سغي) هو الأسلوب الأكثر فعالية ل فصل الحمض النووي جزء 1 ، 2 ، 3 ، 4 ، 5 وبالتالي فهو يعتبر أداة تنوعا في التحليلات البيوكيميائية والبيولوجية 6 ، 7 ، 8 . ومع ذلك، تشير العديد من التجارب أن سغي مقيدة بالمشاكل الأربعة التالية: (1) عمليات الفصل تستغرق عدة ساعات، وحتى أيام. (2) استهلاك المواد الكيميائية مرتفع جدا. (3) فإنه يتطلب جهاز معقد (على سبيل ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. التصميم الأساسي لل سغي رقاقة
- استخدام أي البلاستيك الشفاف، مثل البولي ميثيل ميثاكريلات (بمما) أو البولي.
ملاحظة: ويتجلى رقاقة سغي في الشكل 1B . تتكون رقاقة سغي من ثقوب اسطوانية لعازلة تب، وقنوات فصل الحمض النووي، واثنين من الممرات جزءا لا يتجزأ من الثقوب للقطب. - تصنيع صفائف من قنوات سغي في كتلة بمما باستخدام آلة النقش بالليزر.
ملاحظة: المعلمات الهندسية للرقاقة تعتمد على حجم الحمض النووي لفصلها. على سبيل المثال، المعلمات قناة الأمثل لل رقاقة سغي ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
الشكل 4 ، الشكل 5 ، والشكل 6 تمثل نتيجة نموذجية بعد الكهربائي للهلام من 50، 100، و 1،000 السلالم الحمض النووي بب. بعد التجربة، تم فصل شظايا الحمض النووي بشكل جيد. وعلاوة على ذلك، تم فصل نفس العينات في 4 قنوات من رقاقة سغي، والتي تبين أن شظايا الحمض النووي من نفس الحجم تتحرك نفس المسافة في كل تجربة.
ويمكن تقييم أداء فصل.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
ويستخدم على نطاق واسع أغاروس هلام الكهربائي لفصل الحمض النووي، رنا، والبروتين. يقترح هذا العمل طريقة جديدة لتحل محل بروتوكول هلام الكهربائي التقليدية. النتائج تثبت أن 50، 100، و 1000 بب الحمض النووي سلالم يمكن فصلها جيدا في مثل هذا الجهاز تجميعها صغيرة. ميزة كبيرة من هذا الأسلوب هو أنه ليس فقط يمكن فصل الأحماض النووية مع القليل من استهلاك المواد الكيميائية، ولكن يمكن أيضا تسجيل عملية الفصل. على الرغم من أن شظايا الحمض النووي تبدو واسعة في الشكل 2 ، يم.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
ونحن نقدر الامتنان الدعم من مؤسسة العلوم الطبيعية الوطنية في الصين (رقم 21205078) وصندوق البحوث لبرنامج الدكتوراه للتعليم العالي في الصين (No.20123120110002). وقد حظي هذا العمل بدعم جزئي من البرنامج الوطني للبحوث والتنمية الرئيسية في الصين (2016YFB1102303)، وبرنامج البحوث الأساسية الوطنية للصين (973Program؛ 2015CB352001)، والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (61378060).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 10 وأقات. TBE | بكين Solarbio للعلوم & التكنولوجيا المحدودة | T1051 | |
| سلم الحمض النووي 50 نقطة أساس | تاكارا بيو إنك. | 3421A | |
| سلم الحمض النووي 100 نقطة أساس | تاكارا بيو إنك. | 3422A | |
| 1 كيلو بايت سلم الحمض النووي | تاكارا بيو إنك. | 3426 أ | |
| سيبر جرين | تاكارا بيو إنك | 5760A | |
| شركة Agarose | Sigma-Aldrich |
المراجع
- Carle, G. F., Olson, M. V. Separation of chromosomal DNA molecules from yeast by orthogonal-field-alternation gel electrophoresis. Nucleic. Acids. Res. 12 (14), 5647-5664 (1984).
- McDonell, M. W., Simon, M. N., Studier, F. W.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
