Method Article

تحسين تطبيق أمين ديكستران بيوتينيلاتيد عالية الوزن الجزيئي للإسقاط ثالاموكورتيكال تتبع في الفئران

DOI:

10.3791/55938

⸱

April 12th, 2018

 ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Acupuncture and Moxibustion, China Academy of Chinese Medical Sciences

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نقدم هنا، بروتوكول المكرر لفعالية الكشف عن بيوتينيلاتيد ديكستران أمين (BDA) وسم مع الفلورسنت تلطيخ الأسلوب من خلال مسار العصبية المعاملة بالمثل. ومناسبة لتحليل بنية غرامة من BDA وسم ويميزه عن سائر العناصر العصبية تحت ليزر [كنفوكل] مجهر مسح.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ارتفاع الوزن الجزيئي بيوتينيلاتيد ديكستران أمين (BDA) استخدمت الراسم نيورواناتوميكال درجة عالية من حساسية لعقود عديدة. نظراً لتأثر نوعية وصفها عوامل مختلفة، من هنا، نحن نقدم بروتوكول المكرر لتطبيق عالية الوزن الجزيئي BDA لدراسة وضع العلامات العصبية الأمثل في الجهاز العصبي المركزي. بعد ضخ BDA المناظير باستخدام الأشعة في نواة بوستيروميديال البطني (VPM) المهاد في الفئران من خلال ماصة زجاجية حساسة، ملطخة بنيون ستريبتافيدين-أليكسا (AF) 594 BDA وكونتيرستينيد بوصمة عار الفلورسنت نسل AF500/525. على خلفية خضراء نسل تلطيخ، العلامات BDA الحمراء، بما في ذلك الهيئات الخلايا العصبية ومحطات محواري، أكثر اختلافاً واضحا تجلى في قشرة سوماتوسينسوري. وعلاوة على ذلك، مضاعفة تلطيخ الفلورسنت ل BDA وأجرى بارفالبومين البروتين الكالسيوم الملزمة (PV) لمراعاة الترابط بين وسم BDA وإينتيرنيورونس الكهروضوئية-الإيجابية في الهدف القشرية، وإتاحة الفرصة لدراسة المحلية العصبية الدوائر وخصائصها الكيميائية. وهكذا، هذا الأسلوب المكرر ليس فقط مناسبة لتصور وضع العلامات مع الوزن الجزيئي عالية BDA من خلال المسارات العصبية المتبادل بين قشرة الدماغ والمهاد العصبية ذات جودة عالية، ولكن سوف تسمح أيضا مظاهرة متزامنة من علامات العصبية الأخرى مع نيون هيستوتشيميستري أو إيمونوتشيميستري.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ارتفاع الوزن الجزيئي BDA (الوزن الجزيئي 10,000)، تتبع حساسة للغاية، وقد استخدمت لتتبع المسارات العصبية في الجهاز العصبي المركزي لما يزيد على 20 سنة1. على الرغم من أن استخدام BDA المسالك العصبية شائعة تتبع الأسلوب، يمكن أن تتأثر نوعية BDA وسم في الحيوانات بمختلف العوامل1،،من23. دراستنا الأخيرة أشارت إلى أن الهيكل الأمثل لوسم BDA هو المرتبطة بوقت مناسب بعد انتهاء حقن بقاء، بل يرتبط أيضا ب أسلوب المصبوغة4. حتى الآن، ومجمع عبدين-البيوتين-البيروكسيديز التقليدية (ABC)، streptavidin-fluorescein isothiocyanate، وستريبتافيدين-AF594 استخد....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذه الدراسة أقرته لجنة الأخلاقيات في "الصين أكاديمية من الصينية العلوم الطبية" (مرجع رقم 20160014). وأجريت جميع الإجراءات وفقا "المعاهد الوطنية للصحة دليل" لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية (أكاديمية الصحافة الوطنية، واشنطن، العاصمة، 1996). واستخدمت في هذه الدراسة الفئران الذكور الكبار الأربعة (وزن ز 250-280). جميع الحيوانات يقع في دائرة ضوء/الظلام ح 12 مع التحكم في درجة الحرارة والرطوبة، والسماح بحرية الوصول إلى الغذاء والمياه. وقد أظهرت الأدوات والمواد المستخدمة في هذه الدراسة في الشكل 1.  قبل الجراحة، تم تنظيف جميع الصكوك، مثل الإطار ستيريوتاكسيك وماصة زجاجية، استخدام الإيثانول 70%.

1-العمليات الجراحية

<....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وكان البقاء على قيد الحياة لمدة 10 أيام بعد ضخ BDA في VPM كافية لإنتاج المكثف العصبية وضع العلامات على المناطق القشرية المقابلة عن الجانب الحقن (الشكل 2). سي التقليدية وفلوري تلطيخ الإجراءات ل BDA كشفت عن نمط مماثل لوضع العلامات العصبية على S1، بما في ذلك أنتيروجراديلي المسمى ثالاموكورتيكال محاور عصبية والمسمى ريتروجراديلي كورتيكوثالاميك الخلايا العصبية (الشكل 2، د ).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تحديد تتبع الصحيح خطوة حاسمة لتجربة ناجحة من اقتفاء أثر العصبية. في عائلة BDA، عالية الوزن الجزيئي BDA (الوزن الجزيئي 10,000) وأوصى بشكل تفضيلي نقلها عن طريق المسار العصبية anterograde على النقيض من الوزن الجزيئي المنخفض BDA (الوزن الجزيئي 3,000)2،3 , 11 , 12 , 13-ومع ذلك، اقترح العديد من الدراسات أيضا أن الوزن الجزيئي عالية BDA يمكن استخدامها المحتمل أيضا لتت.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تمويل هذه الدراسة الوطنية العلوم الطبيعية مؤسسة من الصين (مشروع القانون رقم 81373557؛ 81403327 رقم).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
البيوتينيل ديكستران أمين (BDA)المجسات الجزيئيةD195610,000 الوزن الجزيئي
ستربتافيدين-أليكسا فلور 594مجسات جزيئيةS32356حماية من الضوء
500/525 صبغة نيسل الفلورسنت الأخضرالمجسات الجزيئيةN21480حماية من الضوء
أداة التجرح التجسيمي للدماغNarishigeSR-50
تجميد ميكروتومThermoMicrom International GmbH
التصوير متحد البؤرنظام أوليمبوسFV1200
نظام Micro DrillSaeyang MicrotechMarathon-N7
SpragueDawley Institute of Drug Animal Sciences ، الأكاديمية الصينية للعلوم الطبيةSCKX (يونيو) 2012-004
Vectastain ABC KitVector LaboratoriesPK-4000
superfrost plus microscope slidesThermo#4951PLUS-00125x75x1mm
Photoshop and IllustrationAdobeCS5

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Veenman, C. L., Reiner, A., Honig, M. G. Biotinylated dextran amine as an anterograde tracer for single- and double-labeling studies. J Neurosci Methods. 41, 239-254 (1992).
  2. Reiner, A., Veenman, C. L., Medina, L., Jiao, Y., Del Mar, N., Honig, M. G. Pathway tracing....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

High Molecular Weight Biotinylated Dextran AmineThalamocortical Projection TracingStereotactic InjectionVentral Posteromedial NucleusFluorescent Streptavidin Alexa 594Fluorescent Nissl StainParvalbumin ImmunostainingNeural Circuit AnalysisCentral Nervous SystemSomatosensory Cortex

Related Articles