مقالة منهجية

طرق ونصائح للإدارة عن طريق الحقن الوريدي من الفيروسات المرتبطة بالغدد للفئران والتقييم لتوصيل الجهاز العصبي المركزي

DOI:

10.3791/55994

⸱

أغسطس 25, 2017

 ,  ,  ,  , 
1Department of Pharmacology, Toxicology, and Neuroscience, Louisiana State University Health Sciences Center, 2Department of Molecular & Integrative Physiology, University of Kansas Medical Center

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وتغطي الطرق لتسليم الجهاز العصبي المركزي على نطاق واسع جينات في الفئران. في هذا المثال، الغرض هو تقليد مرض الذي يؤثر على كامل الحبل الشوكي. يمكن استخدام تنبيغ على نطاق واسع لتقديم بروتين علاجي للجهاز العصبي المركزي من إدارة مرة واحدة، والأجهزة الطرفية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نواقل الفيروسات المرتبطة بالغدة (إف) كاشف رئيسية في علوم الأعصاب متفاوت يكرر المتناوب القصير إينتيرسباسيد بانتظام (كريسبر)، أوبتوجينيتيكس، واستهداف لوكس cre، إلخ. والغرض من هذه المخطوطة مساعدة المحقق محاولة توسعية الجهاز العصبي المركزي (CNS) نقل الجينات في الفئران عن طريق حقن الوريد الذيل من إف. التعبير على نطاق واسع ذات الصلة للشروط مع علم الأمراض على نطاق واسع، ونموذج فأر كبير نظراً لحجم أكبر وأوجه التشابه الفسيولوجي للبشر مقارنة بالفئران. في تطبيق هذا المثال، يستخدم توصيل الخلايا العصبية على نطاق واسع لتقليد مرض الأعصاب يؤثر على كامل الحبل الشوكي، التصلب العضلي الجانبي (المرض). يمكن أيضا استخدام توصيل الجهاز العصبي المركزي على نطاق واسع كفاءة إيصال العوامل العلاجية البروتين في الدراسات ما قبل السريرية. بعد فاصل تعبير بعد حقن لعدة أسابيع، يتم تقييم الآثار المترتبة توصيل. لناقل تحكم البروتينات فلورية خضراء (التجارة والنقل)، تقدر كمية بروتينات فلورية خضراء في المخيخ بسرعة وبشكل موثوق بها برنامج تصوير أساسية. تعمل المرض الحركية التي هي الناجمة عن المرض ذات الصلة استجابة ترانساكتيفي البروتين البروتين الحمض النووي ملزم من كاتشين 43 (ماساتشوستس-43)، وسجل العجز منعكس الهروب وروتارود. أبعد من النمذجة المرض والعلاج الجيني، هناك مختلف التطبيقات المحتملة لاستهداف الجينات على نطاق واسع وصفها هنا. التوسع في استخدام هذا الأسلوب سوف تساعد في التعجيل بفرضية اختبار في علوم الأعصاب ونيوروجينيتيكس.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الناقلة المؤتلف الفيروسات المرتبطة بالغدة (إف) أدوات لا غنى عنها للجهاز العصبي المركزي للبحث نظراً لأنها تتسم بالكفاءة حتى ترانسدوسينج الحية في الخلايا العصبية. إف الناقلة مرنة جداً لدراسة المتسلسلات مختلفة و isoforms البروتين والأنسجة المختلفة والمضيف مختلفة الأنواع وطرق مختلفة للإدارة. على سبيل المثال، يمكن أن تدار إف للفئران بأحد الأجهزة الطرفية، نسبيا غير الغازية، الحقن الوريدي ترانسدوسي الخلايا العصبية في جميع أنحاء الجهاز العصبي المركزي صيغته الأولى الموصوفة في فوست et al. ودوكي et al. (انظر ورقة جوف من جومباش et al. (2014)). 1 , 2 , 3 يستخدم هذا النهج إيصال الجينات في الفئران للتعبير عن كفاءة أما البروتينات الفلورية الخضراء (بروتينات فلورية خضراء) أو المتصلة المرض بالبروتين، استجابة ترانساكتيفي البروتين الحمض النووي ملزم من كاتشين 43 (ماساتشوستس-43) في الجهاز العصبي المركزي. 4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 العامل في الفئران هام للمعلمات الفسيولوجية والأيضية للفئران أقرب إلى البشر بالمقارنة مع الفئران وهناك فحوصات السلوكية والسمية التي صممت خصيصا للفئران. وعلاوة على ذلك، أصبحت أكثر من خطوط الفئران المعدلة وراثيا المتوفرة التي يمكن استخدامها في الدراسات نقل الجينات إف.

وترد تفاصيل أساليب لنقل الجينات CNS توسعية في الفئران، وتقدير النتائج سريعة وموثوق بها. توصيل الجهاز العصبي المركزي على نطاق واسع يستخدم لتقليد الأعراض للمرض في الفئران بالإعراب عن ماساتشوستس-43 في الحبل الشوكي. الأسلوب حقن الوريد ذيل ناقل ماساتشوستس-43 الفئران البالغين الشباب كالمستخدمة في جاكسون et al. 6 , 8 , 9 وبعد عدة أسابيع، هي سجل العجز الحركي الناجم عن ماساتشوستس-43 بطريقتين: الهروب العاكسة وروتارود كما استخدمت في دايتون وآخرون وجاكسون et al. 5 , 6 , 7 , 9 الذي يحسب لناقل بروتينات فلورية خضراء السيطرة، في تحليل الجثة، منطقة المخيخ فلوري كمؤشر لكفاءة توصيل المستخدمة في جاكسون et al. 6 , 8 تحليل المخيخ ثبت أن مؤشر سريع وموثوق بها لدرجة توصيل الجهاز العصبي المركزي بعد تسليم الجينات المحيطية، وينبغي أن تنطبق على مجموعة متنوعة من النهج محاولة نقل الجينات الطرفية للوسطي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

جميع الإجراءات اتبعت المبادئ التوجيهية الملائمة للمعاهد الوطنية للصحة. كافة الإجراءات المتبعة البروتوكولات الحيوانية التي أقرتها لجنة الاستخدام في مركز العلوم الصحية خدمات المتعلمين في شريفبورت ورعاية الحيوان. واستخدمت هذا الإجراء إناث الفئران سبراغ داولي في 6 أسابيع عمر-

1-تحديد الجرعات/وحدات تخزين ناقل بحاجة

  1. وزن الفئران حقن وتحديد كمية النواقل الفيروسية اللازمة لكل الحيوانات استناداً إلى عيار (تركيز) لإعداد ناقلات الأمراض. استخدام جرعات المتجهات التي نجحت سابقا للتعبير الفعال في الفئران الجهاز العصبي المركزي (انظر جاكسون et al. 6).
    ملاحظة: ل AAV9، ماساتشوستس-43 أو بروتينات فلورية خضراء AAV9، جرعة نموذجية بين 3 × 10 13-1 × 10 14 ناقل جينومات/كغ. على الفئران البالغين الشباب في 6 أسابيع عمر تزن حوالي 150 غ.
  2. جعل جرعة مكافئة للكيلو في جميع الحيوانات لمقارنات منهجية. تأمين وحدة التخزين لا تتجاوز كميات حقن نصح القياسية (250-500 ميليلتر للفئران 250 غرام). وحدة تخزين حقن نموذجية 200 ميكروليتر للفئران البالغين صغار.

2. إعداد محطة العمل

  1. جمع كل ما يلزم من لوازم: واحد البارافين الفيلم ساحة (حوالي 5 × 5 سم) كل الحيوان، والكحول أحد إعداد لوحة كل الحيوانات، شاش منصات (2-3 للحيوان الواحد)، نصائح بيبيت، وميكروبيبيتي.
  2. تحضير السطح العامل عن طريق تنظيف السطح مع الإيثانول 70%. ضع وسادة تدفئة أسفل مع درجة حرارة تعيين إلى منخفض (~ 37 درجة مئوية). ضع وسادة مقعد على رأس لوحة تدفئة.
    3. التخدير
  3. تحضير الغاز (إيسوفلوراني). ضمان كافية الأوكسجين وغاز التخدير لهذا الإجراء. تنظيف القناع الدائرة والتخدير التعريفي مع الإيثانول 70%، ووضع قناع التخدير على لوح مقاعد البدلاء.

3. إعداد الموجه

  1. ذوبان الجليد في الموجه في درجة حرارة الغرفة، وتسمية أنبوب ميكروسينتريفوجي العقيمة واحد لكل الحيوانات.
  2. بيبيت تحدد حجم إف في خطوة 1.1 إلى الأنبوب المناسب وتحقيق حجم ما يصل إلى حجم الحقن المطلوب (هنا، 200 ميكروليتر) مع لاكتاتيد في المسابقة ' المالحة أو حل s-
  3. نبض دوامة العينة s 1-2 والنبض ثم الطرد المركزي ل 5 ق إحضار العينة إلى الجزء السفلي من الأنبوب.
  4. بيبيت حجم مجموع الحقن للفئران من الأنبوب وعلى الساحة من الفيلم البارافين.
  5. مكان إبرة قياس 30 على حقنه 1 مل.
  6. مكان الإبرة مع المجسم مشطوف الحواف أسفل داخل المتجهة على الفيلم البارافين. سحب على المكبس حقنه حتى تصبح جميع الفيروس في الإبر والمحاقن. كن حذراً لتجنب رسم فقاعات الهواء إلى الإبرة، الذي يصبح أسهل مع الممارسة.

4. إعداد الفئران

  1. بدوره الأوكسجين يصل إلى 1 لتر في الدقيقة وتعيين التخدير إيسوفلوراني إلى 5%. التأكد من أن تتدفق التخدير الغاز إلى قاعة التعريفي بالتحقق من جميع خراطيم توصيل وتوجهات محبس الحنفية.
  2. مكان الفئران في قاعة تحريض التخدير الغاز حوالي 3 دقائق، حتى الجرذان لا يستجيب.
  3. ضمان العمق الكافي للتخدير معسر إصبع القدم. ينبغي أن يكون هناك أي حركة في القدم أو الساق بعد رشة تو.
  4. تقليل التخدير isoflurane إلى 2% للمحافظة على التخدير وضبط محبس الحنفية حيث تتدفق إلى قناع التخدير التخدير.
  5. مكان الفئران ' s الآنف في قناع التخدير وضبط الفئران بحيث أنه يكذب على جانبها.
  6. التعرف على المنوال الذيل الأفقي.
    ملاحظة: عروق الذيل الأفقي تكمن في حوالي 10 و 2 س ' على مدار الساعة مع الظهرية أعلى الذيل 12 س ' على مدار الساعة. مع الفئران ملقاة على جانبها، يجب أن تواجه على المنوال الذيل الأفقي المكياج.
  7. مسح منطقة الحقن مع لوحة إعداد الكحول. موقع الحقن هو الثلثين أسفل طول الذيل.

5. حقن الناقل

  1. اعتقادا راسخا بالذيل قليلاً فوق منطقة الحقن باستخدام إصبع واحد مباشرة عبر الوريد الذيل الأفقي؛ وهذا سوف تمدد الوريد.
  2. مع المجسم مشطوف الحواف مواجها لأعلى، قم بمحاذاة الإبرة بالوريد الذيل مرئية في نفس الاتجاه.
  3. بيرس الجلد على المنوال ذيل بينما أخذ الحيطة لتجنب من ناحية أخرى عقد الذيل والضغط في هذا السياق ذيل.
  4. الإفراج عن ضغوط على المنوال الذيل للسماح بتدفق الدم الطبيعي.
    5. تحريك
  5. الإبرة الوريد. للتأكد من أن الإبرة قد ثقب الوريد الذيل، سحب قليلاً على المكبس. إذا كانت الإبرة في الوريد، وسوف تدفق الدم في الإبرة.
    1. تغيير موضع الإبرة حسب الحاجة. ثم تثبيت الإبرة، نقل اليد فوق موقع الحقن إلى أسفل موقع الحقن ويعقد نهاية المحاقن ضد الذيل.
  6. ببطء بحقن الناقل الذيل (حوالي 20 ميليلتر/s)-
    ملاحظة: السياق قد تفقد اللون كالتدفقات المتجهة من خلال ذلك. تتضمن علامات أن الحل تم حقن خارج هذا السياق بلبينغ، تبييض البشرة، أو مقاومة عند الحقن المتجه. مع الممارسة، يمكن التقليل من التعرض خارج الأوعية الدموية-
  7. بعد قد تم إدارته الناقل، إزالة الإبرة من الفئران واضغط وسادة شاش ضد موقع الحقن للمساعدة في وقف النزيف عن 30-60 س.

6. تنظيف

  1. إيقاف isoflurane التخدير والأوكسجين. مراقبة الفئران حتى أنه يستعيد وعيه، ومن ثم إعادته إلى قفصة.
    2. ضع
  2. بعناية جميع الإبر في حاوية الأدوات الحادة. التخلص من جميع المواد المتاح الأخرى التي يحتمل أن تكون ملوثة مع إف في حاوية واقية مناسبة. تنظيف محطات العمل مع الإيثانول 70%-

7. تقييم منعكس الهروب اللكتات

ملاحظة: العجز اللكتات تنشأ عادة من 2-6 أسابيع بعد نقل الجينات، ماساتشوستس-43، اعتماداً على الجرعة متجه.

  1. على سطح مستو واضحة من الحطام، مع اثنين من أصابع الاستيلاء على الفئران ' s الذيل حوالي 2 سم من الجسم. رفع الفئران بلطف حتى شنقاً الأمامية أثناء عرض الجانب البطني السفلي من الفئران.
    1. تنفيذ الإجراء أسبوعيا طوال الوقت-الدورة التجريبية بعد نقل الجينات (مثلاً، تصل إلى 12 أسبوعا بعد نقل الجينات).
      ملاحظة: أيضا نقاط العجز في فوريليمب بهذه الطريقة، ولكن العجز اللكتات أكثر من المحتمل أن يحدث في هذا النموذج، اعتماداً على الجرعة النواقل المستخدمة.
  2. مراقبة في هيندليمبس لملاحظة س. 10 إذا كان أحد أو كلا هيندليمبس نكشر نحو خط الوسط خلال 10 س.
  3. تكرار هذا الاختبار لما مجموعة ثلاث مرات مع 30 ثانية بين المحاكمات. إذا كان يتم مثبت هيندليمبس أحدهما أو كليهما لكل من ثلاث محاكمات، تظهر الفئران الخلل في السيارات. تسجيل البيانات (يدوياً في المذكرات) أما أحادية أو ثنائية اللكتات العجز الحالي إذا كان هناك انقباض عبر جميع المحاكمات الثلاث متسقة.

8. تقييم السيارات الدالة على روتارود

  1. لإعداد روتارود، ضع وسادة مقعد تحت روتارود وتعيين تسريع للثورات 4-40 في الدقيقة (لفة في الدقيقة) أكثر من 2 دقيقة (المعدل يزيد بدوره في الدقيقة ~0.3/s). وقت أسبوع 12-دورة تدريبية، تشغيل المواضيع في 2، 4، 8، ونقل 12 أسبوعا بعد الجينات.
    2. السماح
  2. الفئران لتأقلم إلى غرفة الاختبار عن 20 دقيقة
  3. لتدريب الفئران لاستخدامها في روتارود للمرة الأولى، أولاً ابدأ روتارود بسرعة تعيين 4 لفة في الدقيقة، ثم وضع الفئران في روتارود. السماح للفئران لسيرا على الأقدام للثورة كامل واحد لفة في الدقيقة 4، ثم البدء في تسريع والسماح للفئران للمشي على روتارود حتى أنه يقع. مواصلة التدريب حتى يمكن استمرار سيرا على الأقدام الفئران لمالا يقل عن 40 ثانية. وسيدرب سهولة الفئران صحية، والشباب البالغين بهذه الطريقة.
    1. في حالة الفئران مع إعاقة حركية ملحوظة، التي قد تمنع الفأر من تحقيق كمون أساس سقوط 40 s، توفر الفئران محاولات التدريب 3-5 قبل بدء التسجيل روتارود-
  4. لبدء اختبار روتارود، وضع الفئران في روتارود والبدء في التعجيل روتارود. ملاحظة الوقت الذي يسقط الفئران من روتارود؛ هذا هو زمن الوصول في الانخفاض. إذا كان لا يزال الفئران في روتارود بعد 120 s، كاب الدورة في هذه المرحلة وإزالة الفئران من روتارود وسجل زمن سقوط 120 س.
  5. تكرار الاختبار أكثر مرتين لما مجموعة ثلاث محاكمات. لتقليل تأثير التعب، الفضاء المحاكمات على الأقل 5 دقيقة عن بعضها البعض. متوسط عشرات المحاكمات الثلاث. هو جرذ الكبار فوائضه عادة لديها زمن الوصول متوسط سقوط > 40 س.
  6. مكان الفئران مرة أخرى في القفص، وتنظيف روتارود والمناطق المحيطة بها مع الإيثانول 70%-

9. التحديد الكمي لتعبير بروتينات فلورية خضراء في المخيخ

  1. تخدير الفئران ونتخلل مع الفوسفات مخزنة المالحة (PBS)، ومن ثم بارافورمالدهيد 4%. تشريح المخ والحبل الشوكي وامتصاص الأنسجة في مثبت بين عشية وضحاها وثم نقلها إلى حل سكروز 30%. وبعد الموازنة، خفض 50 ميكرومتر المقاطع الاكليلية في مبضع انزلاق مع تجميد المرحلة 4 ، ، من 5 6-
    2. اختر
  2. 3-6 أقسام المخيخ التي متباعدة بشكل متساو في ودودة، الفص الوسطى من المخيخ. فلوريسسينتلي التسمية التجارة والنقل إلى أقصى حد الإشارة. استخدام جسم الأولية للتجارة والنقل في 1: 500 واستخدام جسم الثانوي مترافق أليكسا-488 في إضعاف رافعة 4 ، ، من 5 6-
    ملاحظة: انظر مراجع 4 ، ، من 5 6 للمزيد من التفاصيل عن أخذ العينات، تمزيقها، وتلطيخ الإجراءات.
  3. فوتوميكروجراف كل مقطع في منطقة محددة من الاهتمام مع عدسة تكبير منخفض باستخدام مجهر. استخدام هدفا X 2.5 (N.A. 0.12) وعامل تصفية مجموعة 10، 450-490/515-565 الإثارة/الانبعاثات). الاحتفاظ بإعدادات الكاميرا (التعرض مرات، مثلاً، 2 s) نفسه عبر عينات تحليلها. حفظ ك. ملف TIF.
    4. افتح
  4. في الصورة المجهرية في البرنامج صورة سليل متاحة على نطاق واسع؛ وسيتم فتح نافذتين. إغلاق الإطار المبين ك " "الألوان الجدولية" ".
  5. اختيار " خيارات "، ثم " SliceŔ الكثافة يتم الإشارة إلى طائفة من ظلال اللون الأحمر على نافذة البحث الجدول (طرفية). في الإطار، استخدم المؤشر لتعبئة في محدد بروتينات فلورية خضراء وسم فقط وتتوقف عندما تبدأ الخلفية غير محددة ليتم انتقاؤها في الصورة-
    ملاحظة: هذا سوف تبرز منطقة الفلورسنت في الصورة المجهرية كمياً. ينبغي أن يكون الأمثل الإعدادات لالتقاط كافة الخلايا الفلورسنت واضح على وجه التحديد. مع الممارسة، هذا الأسلوب يمكن تمييز التحديد fluorescence محددة.
  6. قبل قياس المجال الفلورسنت، أولاً التأكد من وجود القياسات التي أجريت في الوحدات الصحيحة (بكسل). للقيام بهذا، انقر فوق " تحليل "، ثم " ScaleŔ تعيين السطر الرابع ينبغي أن أقول " الوحدات ". من القائمة المنسدلة، اختر بكسل لقياس بكسل، ثم انقر فوق " موافق ". تبديل خيارات التحليل إلى " "الثقوب الداخلية تشمل" " لضمان إدراج خلايا الجسم بأكمله في التحليل-
    7. انقر فوق
  7. لقياس المنطقة الفلورسنت، " تحليل " ومن ثم انقر فوق " تدبير ". لمشاهدة هذه القيمة، انقر فوق " تحليل " ثم انقر فوق " ResultsŔ إظهار سوف تظهر نافذة نتائج. قياس المساحة الفلورسنت ستكون تحت عنوان المسمى " منطقة "-
  8. لضمان توحيد جميع القياسات، لا تقم بتغيير قيم مميزة في نافذة طرفية.
  9. مرة واحدة وقد سجلت جميع القياسات، متوسط القيم لكل الحيوانات (من 3-6 أقسام للحيوان الواحد). استخدام اختبار إحصائية مناسبة لمقارنة المناطق ترانسدوسيد بين المجموعات. 6

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ينبغي أن تنشأ العاهات، ماساتشوستس-43 موتور المستحثة خلال 2-6 أسابيع حسب جرعة ماساتشوستس إف-43 المستخدمة (الشكل 1). سيؤدي إلى حقن الوريد الذيل غير ناجحة في جزئية أو لا العاهات؛ إف يجب أن تصل إلى مجرى الدم تنتج الأثر. سيؤدي إلى حقنه ناجح للتجارة والنقل إف في التعبير التجارة والنقل في جميع أنحاء المخ والحبل الشوكي بطريقة تعتمد جرعة متجه. عند استخدام المروج المؤتلف قوية للتعبير بالسيارة، الفيروس المضخم للخلايا الدجاج بيتا أكتين الهجين المروج، المعروف أيضا بالمروج...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم اختبار مجموعة متنوعة من طرق التسليم لناقلات إف: داخل متني، داخل-سيريبروفينتريكولار، داخل thecal، عن طريق الحقن الوريدي، داخل الآنف، وداخل العضلات، إلخ. قد يكون كل مسار مزايا محددة، فضلا عن العيوب. إدارة السياق ذيل إف للفئران الكبار وسيلة يمكن الاعتماد عليها لتحقيق توصيل متسقة من الجهاز العصبي المركزي. أسلوب الحقن الطرفية يتجنب إدخال قنية الحقن في أنسجة الجهاز العصبي المركزي وبالتالي كسبها. كفاءة الجهاز العصبي المركزي التعبير الذي يمكن أن يتحقق بهذه الطريقة هو أكبر ميزة لهذه التقنية. المزايا العملية الأخرى أن أسلوب الح...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تمويل هذا العمل من قبل المرض المداواة كاريوفارم، رابطة، وجهازا ميرا وهبة خيرية لأبحاث المرض من لوسون توماس، ونحن ممتنون. ونحن نشكر بستان اليسي ودونا بورني للمشورة والتدريب. جاس تدعمها "المؤسسة كذب" و "المعاهد الوطنية للصحة" منح GM103418.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
مقياسPelouzeSP5
Nalgene دلوThermo Scientific120140004000 مل
أنبوب الطرد المركزي الدقيقالولايات المتحدة الأمريكية Scientific1615-5500
محلول Rynecer اللضعباكستر للرعاية الصحية0338-0114-04
دوامة صغيرةفيشر Scientific128101
الطرد المركزيمختبر Eppendorf22624415
BemisPM996
1 مل حقنةBD309626يأتي مع إبرة 25 جرام متصلة.
استبدلها بإبرة 27-30 جرام للحقن
30 جرام إبرةBD305106
IsofluranePiramal Healthcare66794-013-25Isoflurane USP 250 مل
قناع التخديرKopf Instruments906
GauzeHenry Schein100-25242 "× 2" (5 سم × 5 سم)
نصائح ماصةالولايات المتحدة الأمريكية العلمية1111-0816
MicropipetGilson4642080
مبخر التخدير بالغازSurgiVet4214322Classic T3
Gas CatalystSpangeVet32373B10Enviro-PURE
Sears17280
وسادة مقعدVWR56617-006
RotarodPanlab / Harvard Apparatus76-07724 فئران / 4 فئران
70٪ مختبرات الإيثانولديكون ، إنك.2401140 دليل
70٪ IsopropanolVWR89108-160
سليل صورةScion Corporation
GFP Tag الأجسام المضادة متعددة النسيلةInvitrogenA11122الجسم المضاد الأساسي - 1: 500 تخفيف
AlexaFluor 488InvitrogenA11070الجسم المضاد الثانوي - 1: 300 تخفيف
Axioskop 40 مجهرزايس
فيلم وسادة تسخين

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Foust, K., Nurre, E., Montgomery, C., Hernandez, A., Chan, C., Kaspar, B. Intravascular AAV9 preferentially targets neonatal neurons and adult astrocytes. Nat. Biotechnol. 27 (1), 59-65 (2009).
  2. Duque, S., et al. Intravenous administration of self-complementary AAV9 enables transgene delivery to adult motor neurons. Mol. Ther. 17 (7), 1187-1196 (2009).
  3. Gombash Lampe, S., Kaspar, B., Foust, K. Intravenous injections in neonatal mice. J. Vis. Exp. (93), e52037(2014).
  4. Wang, D., et al. Expansive gene transfer in the rat CNS rapidly produces amyotrophic lateral sclerosis relevant sequelae when TDP-43 is overexpressed. Mol. Ther. 18 (12), 2064-2074 (2010).
  5. Dayton, R., et al. Selective forelimb impairment in rats expressing a pathological TDP-43 25 kDa C-terminal fragment to mimic amyotrophic lateral sclerosis. Mol. Ther. 21 (7), 1324-1334 (2013).
  6. Jackson, K., Dayton, R., Klein, R. AAV9 supports wide-scale transduction of the CNS and TDP-43 disease modeling in adult rats. Mol. Ther. Methods Clin. Dev. 2, 15036(2015).
  7. Jackson, K., et al. Preservation of forelimb function by UPF1 gene therapy in a rat model of TDP-43-induced paralysis. Gene Therapy. 22 (1), 20-28 (2015).
  8. Jackson, K., Dayton, R., Deverman, B., Klein, R. Better targeting, better efficiency for wide-scale neuronal transduction with the synapsin promoter and AAV-PHP.B. Front. Mol. Neurosci. 9, 116(2016).
  9. Jackson, K., et al. Severe respiratory changes at end stage in a FUS-induced disease state in adult rats. BMC Neuroscience. 17 (1), 69(2016).
  10. Xu, L., et al. CMV-beta-actin promoter directs higher expression from an adeno-associated viral vector in the liver than the cytomegalovirus or elongation factor 1 alpha promoter and results in therapeutic levels of human factor X in mice. Hum Gene Ther. 12 (5), 563-573 (2001).
  11. Jackson, K., Dayton, R., Klein, R. Gene vector "magic bullet": targeted expression in the central nervous system after peripheral delivery using the synapsin promoter. Expert Opin Ther Targets. 20 (10), 1153-1154 (2016).
  12. van Hulst, R., Klein, J., Lachmann, B. Gas embolism: pathophysiology and treatment. Clin. Physiol. Funct. Imaging. 23 (5), 237-246 (2003).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

GFP Scion Image

مقالات ذات صلة