يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

الكيمياء المناعية الكمية للمكروية الخلوية في المرضى ارتجاجات الأرومة الدبقية

9.4K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/56025

⸱

يوليو 31, 2017

 , 

في هذه المقالة

ملخص

وقد تم تطوير هذا البروتوكول لتحديد كميا مكونات المكروية الورم في ريسيكلتيونس المريض ورم أروميوجيستوك باستخدام الكيمياء المناعية و إيماجيج.

الملخص

مع الاهتمام المتزايد في المكروية الورم، وضعنا إلى وضع طريقة لتحديد على وجه التحديد مكونات المكروية داخل عينات المريض من أرومة دبقية، والأكثر دموية والأكثر سرطان الدماغ الغازية. ليس فقط الطرق الكمية المفيدة لوصف الأنسجة المريضة بدقة، فإنها يمكن أيضا أن تسهم في تشخيص أكثر دقة، والتشخيص، وتطوير النظم التي تعمل على الأنسجة الأنسجة والاستبدالات. في الخلايا الدبقية، الخلايا الدبقية، مثل الخلايا الدبقية الصغيرة و الخلايا النجمية، وقد ارتبطت بشكل مستقل مع سوء التشخيص على أساس الدرجات علم الأمراض. ومع ذلك، فإن حالة هذه الخلايا وغيرها من مكونات الخلية الدبقية لم يتم وصفها بشكل جيد كميا. هذا يمكن أن يكون صعبا بسبب العمليات الكبيرة التي تميز هذه الخلايا الدبقية. وعلاوة على ذلك، فإن معظم التحليلات النسيجية تركز على عينة الأنسجة الشاملة أو فقط في الجزء الأكبر من الورم، بدلا من تحديد الكميات على أساس المناطق الطرافةهين الأنسجة غير متجانسة للغاية. هنا، نحن تصف طريقة لتحديد وتحليل كميا من السكان من الخلايا الدبقية داخل الورم السائبة والمناطق المجاورة من استئصال الورم من مرضى أرومة دبقية. استخدمنا المناعية اللوني لتحديد السكان الخلية الدبقية في استئصال الورم المريض و إيماجيج لتحليل التغطية في المئة من تلطيخ لكل السكان الدبقية. مع هذه التقنيات ونحن قادرون على وصف أفضل الخلايا الدبقية في جميع أنحاء المناطق المكروية الورم الدبقية.

المقدمة

ورم أرومي دبقي (غم)، وسرطان الدماغ الأكثر شيوعا والخبيثة، وتتميز غزو منتشر للغاية من السائبة الورم الرئيسي في محيط حمة صحية المحيطة 1 ، 2 . هذا الغزو منتشر يجعل الورم من الصعب بشكل خاص على استئصال تماما، والخلايا السرطانية الغازية التي تبقى بعد العلاج هو السبب الأكثر شيوعا لتكرار لا مفر منه 2 ، 3 ، 4 . في السابق، وجدنا تثبيط غزو خلية دبقية منتشر ليكون مفيدا علاجيا 5 ، ولكن لا يعرف سوى القليل عن الآليات المعقدة المساهمة في غم غزو. وقد تورط المكروية الورم،....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

هذا البروتوكول يحدد المكونات الخلوية في الفورمالين ثابتة البارافين جزءا لا يتجزأ من عينات (فب)، كما هو الحال بالنسبة لعينات المريض السريرية السريرية. التضمين البارافين يسمح لأفضل صيانة التشكل الخلوي والأنسجة وكذلك لديه طول العمر أفضل من المقاطع. تم الوصول إلى العينات المستخدمة في هذا التحليل من خلال مرفق أبحاث المستودعات الحيوية والأنسجة بجامعة فرجينيا. تم اختيار عينات المرضى من قبل طبيب الأعصاب على أساس تشخيص نهائي من ورم أرومي دبقي (نجمي، الصف الرابع لمنظمة الصحة العالمية) الذين أكملوا استئصال الورم في جامعة فيرجينيا بين عامي 2010 و 2013، وتم إلغاء تحديدها قبل هذا التحليل 11 .

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

لهذا التحليل، تم تحديد منطقتين من المصالح داخل استئصال الورم لدينا - الجزء الأكبر السرطانية الورم والمناطق المجاورة، تتألف أساسا من نسيج صحي مع الخلايا السرطانية الغازية منتشر ( الشكل 1A ، 1B ) من قبل علماء الأعصاب المتعاونين على الهيماتوكسيلين والمريض الملون يوزين العينات. داخل كل عينة المريض، تلطيخ إيجابي لالخلايا النجمية ( الشكل 1C )، تم تحديد الدبقية الصغيرة (

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

طريقة لدينا المقترحة هنا هو النهج الكمي لتحليل العينات النسيجية الملون باستخدام المناعية التقليدية اللونية. المنهجية الحالية لهذا النوع من التحليل تشمل بروتوكولات تلطيخ مماثلة تليها الدرجات من قبل علماء الأمراض مستقل. وكانت هذه الطريقة موثوق بها، ولكن بالنسبة لعدد من التطبيقات، وهناك حاجة إلى فهم أكثر دقة للمكياج الخلوي، مثل فهم أفضل للتغاير المرتبطة بالأورام والتلخيص الدقيق للأورام للدراسات في المختبر.

هذا البرو.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

شكر وتقدير

المؤلفين أشكر درس. فهد بفاكيه وجيم مانديل لاقتناء وتحديد عينات المرضى، غاريت بيغلي للمساعدة في المناعية، ومرفق البحوث البيولوجية والأنسجة، ومركز بحوث القلب والأوعية الدموية الأساسية الأنسجة، ومرفق التحليل الجزيئي البيولوجي في جامعة فيرجينيا للحصول على مساعدة مع اكتساب العينة، المناعية، والتصوير.

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
زيلينفيشر كيميكالX3P
الإيثانول
محلول كشف المستضد عالي الأس الهيدروجينيVector LabsH-3301
TBS
Triton-XAmresco9002-93-1
مصل
المضاد ALDH1L1 abcam ab56777
مكافحة Iba1 abcam ab5076
بروتين محدد مضاد للخلايا قليلة التغصن1 abcam ab53041
ImmPRESS مضاد للماعزمختبرات ناقلاتMP-7405
ImmPRESS عالمي (مضاد للفأر / أرنب)Vector LabsMP-7500
بيروكسيد الهيدروجينSigma Aldrich216763
ImmPACT DAB الركيزةVector LabsSK-4105
Hematoxylin counterstainThermoScientific72404
Histochoice تصاعد وسائل الإعلامAmrescoH157-475
Aperio ScanscopeLeica Biosystems
Image LeicaBiosystems
Super HT PAP PenResearch Products International195506
الحصان

المراجع

  1. Claes, A., Idema, A. J., Wesseling, P. Diffuse glioma growth: a guerilla war. Acta Neuropathol. 114 (5), 443-458 (2007).
  2. Holland, E. C. Glioblastoma multiforme: the terminator. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 97 (12), 6242-6244 (2000).
  3. Wild-Bode, C., Weller, M., Rimner, A., D....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

البيئة الدقيقة لأورام الأرومة الدبقيةالكيمياء النسيجية المناعية الملونةتحليل ImageJتقدير كمية الخلايا الدبقيةاستئصالات أورام المرضىاستعادة المستضدمحلول النفاذيةالأجسام المضادة الأوليةمادة DAB الركيزةصبغة الهيماتوكسيلين المقابلة