هذا نظام غذائي الدهون عالية التغذية البروتوكول للحث على السمنة في المورفولوجية، نموذجا لفهم الآليات الجزيئية الأساسية المتورطين في ليبوتوكسيسيتي. كما يوفر مقايسة ترياسيلجليسيريدي إنتاجية عالية لقياس تراكم الدهون في أخرى يحتمل أن تكون نماذج (الحشرات) تحت مختلف الظروف الغذائية أو البيئية أو الوراثية أو الفسيولوجية و المورفولوجية .
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تغذية حمية الدهون عالية وإنتاجية عالية بالانزيم ترياسيلجليسيريدي في Melanogaster المورفولوجية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
أمراض القلب هي السبب الأول للوفيات البشرية في العالم. وأظهرت العديد من الدراسات اتصالات قوية بين السمنة وقصور القلب في البشر، ولكن المزيد من الأدوات وجهود البحوث ضرورية لتوضيح أفضل الآليات التي ينطوي عليها. لأكثر من قرن، كانت مفيدة في اكتشاف الجينات الرئيسية والمسارات الجزيئية التي ثبت أنها تكون حفظت عاليا عبر الأنواع نموذج المورفولوجية وراثيا على درجة عالية من المرونة. العديد من العمليات البيولوجية وآليات المرض هي المصانة وظيفيا في الطيران، مثل التنمية (مثلاً، خطة الجسم، القلب)، والسرطان، وأمراض الأعصاب. في الآونة الأخيرة، دراسة السمنة والأمراض الثانوية، مثل أمراض القلب في نموذج الكائنات، لعبت دوراً تنتقد بشدة في التعرف على المنظمين الرئيسيين المتورطين في المتلازمة الأيضية في البشر.
وهنا، نقترح استخدام هذا الكائن النموذج كأداة فعالة للحث على السمنة، أي، تراكم الدهون، ووضع بروتوكول فعال لرصد محتوى الدهون في شكل تراكم العلامات. بالإضافة إلى حفظت عاليا، ولكن أقل تعقيداً الجينوم، قد الطاير أيضا عمر قصيرة للتجريب السريع، جنبا إلى جنب مع الفعالية من حيث التكلفة. تقدم هذه الورقة بروتوكول مفصلاً "الدهون في" النظام الغذائي (HFD) عالية التغذية في المورفولوجية للحث على السمنة ومقايسة ترياسيلجليسيريدي (العلامة) إنتاجية عالية لقياس الزيادة المرتبطة بها في محتوى الدهون، بهدف أن تكون الغاية استنساخه و كفاءة للفحص الوراثي أو الكيميائية على نطاق واسع. هذه البروتوكولات وتتيح فرصاً جديدة كفاءة التحقيق في الآليات التنظيمية المعنية بالسمنة، فضلا عن توفير منصة موحدة لبحوث اكتشاف المخدرات للاختبار السريع لتأثير المخدرات المرشحين على تطوير أو الوقاية من السمنة ومرض السكري والأمراض الأيضية.
المقدمة
ونحن في زمن حيث السمنة، والأعباء الاقتصادية المرتبطة به، هي مشكلة في جميع أنحاء العالم1. اثنان من كل ثلاثة أميركيين هم يعانون من زيادة الوزن أو السمنة بأمراض القلب ذات الصلة، السبب الرئيسي للموت داخل السكان البالغين2. أساليب فعالة جديدة مطلوبة للتحقيق على نحو كاف المكونات الوراثية والجزيئية المتورطين في التنظيم لمتلازمة الأيض استخدام نموذج الكائنات الحية. ولهذا السبب، علينا اختيار نموذج المورفولوجية ذبابة الفاكهة نظراً لأنها تشترك في العمليات البيولوجية الأساسية مع الثدييات، بما في ذلك الفئران والبشر3،4،،من56. الجينوم المورفولوجيةالمصانة عاليا خلال تطور لكن عموما أصغر بكثير مع تقليل الازدواجية الجينات والأيضية التعقيد، مما يجعله مثاليا لفهم الآليات الأساسية التي تورط في العديد من الأمراض التي تصيب الإنسان4 , 7 , 8. أيضا، العمليات المميزة التي تقوم بها الأنسجة الدهنية، القناة الهضمية والبنكرياس وتتمثل في يطير والتوسط من أجل المهام التنظيمية في استقلاب السكر والدهون، على سبيل المثال، التي مماثلة للبشر9، 10،11. وعلاوة على ذلك، المسارات الجزيئية الأساسية المعنية بمكافحة السمنة ومقاومة الأنسولين ومرض السكري في البشر هي المصانة وظيفيا في melanogaster المورفولوجية12،،من1314 , 15 , 16-مثل الكائنات الحية العليا، المورفولوجية له قلب ضرب التي شكلتها عمليات مماثلة لل3،قلب الثدييات17أثناء التطوير. وهكذا، وضع HFD موثوقة تغذية البروتوكول والمقايسة علامة عالية الإنتاجية، تكييفها لأغراض فحص كفاءة استخدام مربع الأدوات الجينية من المورفولوجية، توفر وسيلة هامة دراسة وفهم الأساس الجيني الكامنة وراء الأمراض الأيضية المعقدة.
الطعام HFD نفسه مصنوع من طعام يطير مختبر قياسية وتستكمل مع زيت جوز الهند، التي يتكون معظمها من الأحماض الدهنية المشبعة التي من المعروف أن تترافق مع متلازمة الأيض18. في حين حمل السمنة في نماذج الثدييات، مثل القوارض، يمكن أن يستغرق أشهر19،20، HFD الأمثل لدينا تغذية البروتوكول في المورفولوجية فعالية وتكاثر يزيد المحتوى العضوي من الدهون في غضون 12،أيام14. يسمح هذا البروتوكول، بالاقتران مع مقايسة عالية إنتاجية العلامة، كفاءة الفحص الشامل لآثار العوامل الوراثية والتأثيرات البيئية والمرشحين المخدرات ليكتشف المغيرون جديدة للتمثيل الغذائي للدهون. ونتيجة لذلك، يرجح هذه البروتوكولات ذات الصلة فهم و/أو مكافحة السمنة والأمراض البشرية المرتبطة بالسمنة.
البروتوكول تغذية متعددة الاستعمالات ويمكن تطبيقها على دراسة الآثار الأيضية والوظيفية لواحد من الأحماض الدهنية المشبعة أو غير المشبعة. استخدام هذا الفحص علامة عالية الإنتاجية لا تقتصر على melanogaster دال، ولكن يمكن أن تتكيف مع مجموعة متنوعة من الكائنات نموذج صغير مع بشرة أو صعبة مصفوفات خارج الخلية (مثلاً، وغيرها من الأنواع المورفولوجية ، C. ايليجانس والأخرى الناشئة الكائنات اللافقارية النموذجي) لقياس الدهون تحت مختلف الظروف البيئية أو الوراثية أو الفسيولوجية، في أي مرحلة من مراحل التنمية، ومرحلة البلوغ أو مرحلة المرض الأيضي. فحص العلامة يستند إلى مقياس قياس ألوان لسلسلة من التفاعلات الانزيمية التي تتحلل العلامات في الأحماض الدهنية الحرة والجلسرين ووالغليسيرول 3-الفوسفات، وأخيراً ح2س2 أن يتفاعل مع 4-أمينوانتيبيريني (4-الوكالة الأسترالية) و 3، 5- ثنائي-2-هيدروكسيبينزيني المشبعة بالفلور أوكتين (المجالس 3.5) لإنتاج منتج ملونة حمراء التي يتم قياسها باستخدام جهاز المطياف الضوئي 96-جيدا.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1-HFD تغذية بروتوكول
الجدول 1. الوصفة الغذائية يطير.
يلخص هذا الجدول مختلف المكونات المستخدمة في إعداد التحكم بالغذاء. مرة واحدة، 10 مل الطعام هو سكب قنينة وتبريده والمخزنة في 4 درجات مئوية للتخزين على المدى الطويل.
- HFD إعداد
- لجعل 1 كغم من الأغذية عالية الدهون، تزن 700 غرام غذاء يطير العادية مسبقة الصنع (انظر الجدول 1) و 300 غرام زيت جوز الهند في حاويتين منفصلة باستخدام رصيد التحليلي.
- حرارة الحاوية كل على حدة في الميكروويف، حتى تذوب المحتويات تماما. صب زيت جوز الهند في وعاء الغذاء يطير. يحرك باستخدام خفقت حتى يخلط الزيت جيدا في الطعام يطير.
ملاحظة: لا قطع من المواد الغذائية أو النفط يجب أن تكون مرئية. عندما يذوب الطعام يطير في الميكروويف، تتوقف على فترات من 1 دقيقة لخلط الطعام ومنع يغلي.
إعادة وزن - الدهون المرتفعة للمواد الغذائية. إذا كان إجمالي وزن أقل من 1 كجم (700 غ من المواد الغذائية + 300 غرام من زيت جوز الهند)، إضافة لتعويض التبخر أثناء التسخين ويعود الوزن إلى 1 كجم من الماء (حوالي 10 مل)
- من أجل حوالي 10 مل جيدا مختلطة عالية الدهون الغذائية كل قنينة (حوالي 25 في المائة حجم القنينة). وبعد ذلك، تغطي بالقماش القطني لمنع الذباب ' التلوث. بارد ح 1 في درجة حرارة الغرفة ثم نقل القوارير إلى 4 درجة مئوية لتخزين تصل إلى 4 أسابيع-
ملاحظة: يتم استخدام الغذاء الطبيعي (NF) كغذاء تحكم. أيضا من أجل 10 مل (حوالي 25 في المائة حجم القنينة) من NF كل قنينة. للطعام HFD، يستعاض عن 30% من المواد الغذائية NF بزيت جوز الهند. للتحكم والظروف التجريبية، أعطيت الذباب على نفس القدر من NF و HFD (10 مل أغذية كل قنينة).
رقم 1 . HFD تغذية في المورفولوجية.
المخطط يبين الخطوات التغذية المختلفة للذباب على مراقبة المواد الغذائية (النظام الغذائي العادي دون إضافة زيت جوز الهند-NF) أو HFD (بالإضافة إلى زيت جوز الهند). العملية برمتها تستغرق 10 أيام بعد المجموعة الأولى من الذباب الكبار. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
- HFD تغذية melanogaster دال-
ملاحظة: يتضمن هذا البروتوكول مراقبة الأغذية وتغذية الإجراءات التي تتوافق مع أي خط الطيران HFD. يتم وضع عنصر التحكم والذباب التجريبية في قارورة تحتوي على نفس كمية الطعام (NF أو HFD).- CO استخدام 2 تخدير الذباب.
ملاحظة: المبتدئون، الرجاء قراءة مرجع 21 لإلقاء نظرة عامة على رفع ومعالجه ميلانوجاستير د.
جمع - 0-5 الذباب يوم القديمة من قنينات ونقل (عن طريق التقليب) الذباب في قارورة جديدة تتضمن NF (سبق تسخينها في درجة حرارة الغرفة). اسمحوا أن الذباب لسن 5 أيام إضافية في 21 درجة مئوية.
- في نهاية 5 أيام، أخرج قارورة تحتوي على HFD و NF من 4 درجة مئوية.
ملاحظة: كما يمكن التشديد على درجات حرارة باردة الذباب المعيشة، اسمحوا قنينات الجلوس مدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة لالاحماء قبل الاستخدام. - باستخدام مناديل، تنظيف وإزالة السوائل الزائدة من الجانبين من القنينات.
- إدراج قطعة صغيرة من ورق الترشيح، عن 1 سم × 3 سم، في الأغذية عالية الدهون ﻻستيعاب أي السائل الفائض.
ملاحظة: هذه الخطوة حاسمة لمنع الذباب من الالتصاق بالطعام HFD.
وبعد ذلك، نقل - الذباب على الأغذية عالية الدهون (بالتقليب). تكمن في قنينات أفقياً إلى جانبهم، (غير الدائمة) في 21-22 درجة مئوية لمدة 5 أيام-
ملاحظة: تجنب ارتفاع درجات الحرارة كهذا يمكن أن تذوب جزئيا الطعام الدهون عالية، تسبب الذباب إلى التمسك بالغذاء ويموت. - بعد 5 أيام، نقل (عن طريق التقليب) الذباب من NF و HFD في قارورة جديدة دون طعام للسماح بالشجاعة لفارغة لمدة 30 دقيقة. بعد ذلك، انتقل إلى وزنها الذباب.
ملاحظة: إحدى الخطوات الحاسمة في هذا HFD تغذية البروتوكول إعداد HFD جيدا مختلطة، خالية من أي قطع من الطعام يطير أو زيت مكثف. ينصح بخلط متجانس وتبريد HFD إلى 45-30 درجة مئوية، قبل سكب قنينة وتخزين المواد الغذائية في سن مناسبة ° C. 4 مطابقة للتحكم والذباب التجريبية مهم فضلا عن الأوضاع التغذوية والبيئية الخاضعة للرقابة المسبقة لتغذية HFD. أثناء مرحلة الرضاعة، يجب إعطاء عنصر التحكم والذباب التجريبية على نفس القدر من NF و HFD. ابدأ بجمع الذباب من قنينات مكتظة أو زجاجات (لتجنب آثار تخذها). دائماً وضع حد أقصى 25 الذباب كل قنينة خلال NF و HFD التغذية لتجنب القيود الغذائية أو غيرها من الآثار الازدحام. HFD يتكون من زيت جوز الهند 30%، وبالتالي درجات الحرارة 22 درجة مئوية قد تذوب جزئيا HFD، تسبب الذباب عصا على الأغذية الدهنية ويموت. قبل وضع الذباب HFD، تنظيف قنينات لإزالة أي بقايا النفط وإدراج ورقة تصفية ﻻستيعاب أي السوائل الزائدة في الطعام. أثناء الاحتضان الذباب على HFD، تزرع قارورة على الجانبين لتوفير سطح أفقي خال من الدهون للذباب.
- CO استخدام 2 تخدير الذباب.
- يزن الذباب
- لكل التركيب الوراثي والجنس لفحصها، استخدم مقياس حساس جداً لتسجيل أوزان أنابيب مل 1.7 المسمى مسبقاً، فارغة.
- استخدام مخدر يطير أو CO 2، تخدير وجمع الذباب 36 من نفس النمط الوراثي، نوع الجنس، وتغذي حالة مع فرشاة واحدة قبل وزنه 1.7 مل الأنبوبة.
- وزن الأنبوبة المحتوية على الذباب بنفس المقياس حساسة جداً-
- تحديد متوسط وزن الذبابة بعد هذه الصيغة:
ملاحظة: عدد الذباب في هذا البروتوكول هو 36- - فلاش تجميد أنابيب 1.7 مل تحتوي على الذباب التي تغرق في النتروجين السائل للحد الأدنى 2 جمع ووضع الأنابيب في مربعات. بعد ذلك، نقل المربعات إلى-80 درجة مئوية (درجة الحرارة الأفضل) لتخزين حتى الاستخدام مع المقايسة العلامة.
تنبيه: النتروجين السائل في درجة حرارة منخفضة للغاية. الرجاء استخدام معدات الحماية الشخصية الملائمة.
2. العلامة بالانزيم
- إعداد تركيزات القياسية العلامة
- إعداد 500 مل PBT (PBS 1 X، 0.05% تريتون).
- استخدام أنابيب 0.5 مل والحل العلامة (جدول المواد)، إعداد 100 ميليلتر من فارغة (PBT فقط) و 100 ميليلتر من ستة تركيزات العلامة القياسية (2 ميكروغرام/ميليلتر؛ 1 ميكروغرام/ميليلتر؛ 0.5 ميكروغرام/ميليلتر؛ 0.25 ميكروغرام/ميليلتر؛ 0.125 ميكروغرام/ميليلتر؛ 0.0625 ميكروغرام/ميليلتر) مع PBT.
- وضع الأنابيب في الجليد، والمضي قدما في طحن الذباب.
- طحن الذباب
- إخراج الذباب المجمدة من-80 درجة مئوية (الخطوة 1، 3). نقل الأنابيب التي تحتوي على الذباب في مدت
- أولاً، مكان المعدن 2 مم طحن كرات في موزع كرة 96-جيدا، واستخدام الرسام صغيرة لإزالة كرات إضافية. لوحة
- مكان الطحن جيدا 96 رأسا على رأس موزع الكرة وانعكاس لنقل الكرات المعدنية مباشرة إلى لوحة طحن. يجب أن يكون هناك كرة واحدة كل بئر-
- ماصة متعددة القنوات، باستخدام إضافة 600 ميليلتر من PBT في كل صف من لوحة طحن 96-جيدا-
- مع الملقط، إضافة 3 رحلات كل بئر. تشير إلى حالة التركيب الوراثي والجنس والغذاء الذباب في كل صف/بئر لصفيحة الطحن 96-جيدا-
- مكان محكم قبعات على لوح طحن 96-جيدا. يمكن وضع الشريط في الأعلى التأكد من أنه لا يوجد أي تسرب.
- بشكل صحيح وضع لوحات طحن 96-جيدا في آلة طحن. تعيين الجهاز إلى أعلى سرعة واضغط " تشغيل " لطحن الذباب للحد الأدنى 3
- بعد 3 دقائق، تتوقف طحن والمضي قدما في لوحة الطرد المركزي: سينتريفوجنرال الكتريك لمدة 15 دقيقة في 4,000 س ز، 4 درجة مئوية. بعد الطرد المركزي، إدارة لوحة طحن بعناية لتجنب خلط المادة طافية مع بيليه.
- تحميل عينة وتحديد محتويات العلامة
- تأخذ لوحة جهاز المطياف الضوئي 96-بئر جديدة. استخدام ماصة متعددة القنوات، تحميل 200 ميليلتر من الكاشف العلامة في كل صف من اللوحة.
- تحميل 20 ميليلتر من PBT في البئر الأولى من الصف الأول، لإنشاء قرص فارغ. مزيج من بيبيتينج صعودا وهبوطاً. تجنب تشكيل فقاعات. آبار
- حمولة 20 ميليلتر من كل تمييع القياسية (من الخطوة 2.1.2) إلى ما تبقى من الصف الأول ومزيج من بيبيتينج صعودا وهبوطاً. تجنب تشكيل فقاعات.
- ماصة متعددة القنوات، باستخدام نقل 20 ميليلتر من المادة طافية من كل صف لصفيحة الطحن إلى الصف المطابق في لوحة جهاز المطياف الضوئي 96-جيدا. "الماصة؛" صعودا ونزولاً مزيج جيد. تجنب تشكيل فقاعات.
- بعد ذلك، ضع إحباط غاز نفاذية عبر الجزء العلوي من لوحة 96-جيدا-
- احتضان لوحة عند 37 درجة مئوية للحد الأدنى 10
ملاحظة: إذا كان هناك فقاعات في الآبار، الطرد المركزي لوحة لمدة 2 دقيقة في 2,000 ز x لإزالة جميع الفقاعات. وجود فقاعات سوف تتدخل امتصاص القراءة. - القراءة امتصاص لكل بئر من اللوحة في 550 نانومتر استخدام قارئ ميكروسكوبية متوافقة. المقبل، وتتبع المنحنى القياسي وتحديد التركيز [ميكروغرام/ميليلتر] للعينات غير معروف.
- لتحديد كمية المحتوى العلامة الواحدة ومتوسط وزن الذبابة، استخدم الصيغة التالية:
ملاحظة: في هذا البروتوكول، وقد مفروم 3 الذباب في 600 ميليلتر من PBT؛ ونتيجة لذلك، هو حجم يعني الواحد يطير 200 ميليلتر.
- المقايسة برادفورد والتطبيع لتمييز المحتوى مع المحتوى البروتيني
- إعداد سبعة 100 ميليلتر من ألبومين المصل البقري (BSA) تخفيف القياسية (75 ميكروغرام/مل؛ 100 ميكروغرام/مل؛ 150 ميكروغرام/مل 200 ميكروغرام/مل؛ 250 ميكروغرام/مل؛ 500 ميكروغرام/مل؛ 1,000 ميكروغرام/مل) مع PBT.
- تأخذ لوحة 96-بئر جديدة وتحميل 200 ميليلتر من 1 X برادفورد الكاشف في كل صف من اللوحة.
- في البئر الأولى من الصف الأول، إضافة 10 ميليلتر من PBT لإنشاء قرص فارغ. مزيج من بيبيتينج صعودا وهبوطاً. تجنب تشكيل فقاعات. آبار
- إضافة 10 ميليلتر من كل تمييع القياسية في ما تبقى من الصف الأول ومزيج من بيبيتينج صعودا وهبوطاً. تجنب تشكيل فقاعات.
- باستخدام ماصة متعددة القنوات، نقل 10 ميليلتر ذبابة طافية من كل صف لصفيحة الطحن في الصف المطابق في لوحة 96-جيدا. "الماصة؛" صعودا ونزولاً مزيج جيد. تجنب تشكيل فقاعات.
- مكان إحباط غاز نفاذية عبر الجزء العلوي من لوحة 96-جيدا-
- احتضان اللوحة في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق. إذا كان هناك فقاعات في الآبار، الطرد المركزي لوحة لمدة 2 دقيقة في 2,000 س ز لإزالتها.
ملاحظة: وجود فقاعات سوف تتدخل امتصاص القراءة. - استخدام جهاز المطياف الضوئي للقراءة امتصاص الفراغ والمعايير وعينات غير معروف ب 595 نانومتر. استخدام المنحنى القياسي لتحديد التركيزات [ميكروغرام/ميليلتر] من العينات في كل صف-
- تطبيع العلامة المحتوى مع مستوى البروتين باستخدام الصيغة التالية:
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
في ميلانوجاستير د، هناك كما الحال بالنسبة للأنواع الأخرى، مظهري الجنسي بين الذكور والإناث22. من المعروف أن النساء هن أكبر، مع المزيد من الدهون في البطن بهم، من الذكور22. لاختبار فعالية البروتوكول لدينا، نحن إجراء فحوصات العلامة لتحديد الاختلافات في تمييز المحتوى بين الذكور والإناث في المختبر القياسية wildtype (w1118) الذباب. البيانات تبين أن الإناث أكثر من الدهون الجسم كله من نظرائهن من الذكور (
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
التعريفي السمنة في الفئران يمكن أن يستغرق أشهر19،20. في الذباب، يسمح هذا HFD تغذية البروتوكول لتحريض تراكم الدهون الزائدة في غضون أيام أو أقل، مما تسبب في زيادة في تراكم الدهون إلا بعد 18 ساعة (انظر الشكل 2). HFD تغذية مع بروتوكول وصف يزيد محتوى الجلوكوز 12 ويقلل بم lipase و التعبير PGC-124. وهذا على عكس الصيام للكبار المورفولوجية الذي يتسبب في انخفاض سريع في كل من الد...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
نود أن نشكر تايلور إريكا لتحرير هذه المخطوطة. تم تمويل هذا العمل من المنح التي تقدمها "المعاهد الوطنية للصحة" (P01 HL098053، P01 AG033561 و R01 HL054732) إلى سنغ، الملحق أبحاث ما بعد الدكتوراه (R01 HL085481) والزمالة (أوو) إلى S.B.D.، والمنح المقدمة من "جمعية القلب الأمريكية" إلى S.B.D. و R.T.B.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| Talboys الكرة القطارة / موزع الخرزة | Talboys | #: 930150 | |
| Talboys عالية الإنتاجية الخالط | Talboys | #: 930145 | |
| كرات طحن ، الفولاذ المقاوم للصدأ ؛ | OPS Diagnostics، LLC | # GBSS 156-5000-01 | 5000 كرات |
| Masterblock 96 Well Microplates Deep | Greiner Bio-One | # T-3058-1 | علبة من 80 لوحة |
| Greiner ؛ 96 بئر صفيحة مسطحة | القاع Sigma Aldrich | # M4436 | 40 لوحة |
| Greiner CapMat لختم الألواح متعددة الآبار | Sigma Aldrich | # C3606 | 50 لوحة مانعة للتسرب خزانات |
| الكاشف & نب سب. | Thomas Scientific | # 1192T71 | 12 / PK |
| Thermo Scientific Finnpipette 4661040 | Thermo Scientific | # 4661040 | 1-10 ul multipipette |
| Thermo Scientific Finnpipette 4661070 | Thermo Scientific | # 4661070 | 30-300ul multipipette |
| Thermo Scientific Finnpipette 4661020 | Thermo Scientific | # 4661020 | 10-100ul multipipette |
| متعدد القنوات نصائح | Denville Scientific Inc | # P3131-S | ل 10 ماصة uL |
| نصائح متعددة القنوات | Denville Scientific Inc | # P3133-S | ل 200 uL ماصة |
| نصائح متعددة القنوات | Denville Scientific Inc | #P1125 | لماصة 100 uL |
| ملقط & nbsp ؛ | روبوز جراحي | # 5 دومونتس | ملقط فائق النعومة |
| Mettler Toledo Excellence XS Analytical Balance MFR # XS64 | خبراء علميون Cole-Parmer | # EW-11333-00 | |
| Metler Toledo Excellence XS Toploading Balance | Cole-Parmer خبراء | علميون# EW-11333-49 | |
| 96-Well Microplate جهاز | طرد مركزي Hettich Zentrifugen | # Rotina 420R | |
| Microplate الأجهزة الجزيئية | للقارئ# SpectraMax 190 | ||
| Lab-Line Bench Top Orbit Environ Shaker حاضنة | Biostad | # 3527 | |
| كاشف الدهون الثلاثية اللانهائية | Thermo Scientific | # TR22421 | |
| Triglyceride Standard | Stanbio | # 2103 - 030 | |
| البداية السريعة برادفورد بروتين الفحص | Bio-RAD | # 500-0205 | 1x كاشف صبغ |
| زيت جوز الهند | نوتيفا | # 692752200014 | 15 0z جرة |
| PBS 10X | Thermo Scientific | # AM9625 | 500 مل |
| Triton X-100 | Sigma Aldrich | # 9002-93-1 | |
| رقائق معدنية نفاذة للغاز | Macherey-Nagel | # 740675 | 50 قطعة |
| ورق فلتر | VWR | # 28317-241 | عبوة من 100 |
| قارورة | ذبابة الفاكهةGenesee Scientific | Cat #: 32-116SB | |
| بدء سريع مصل الأبقار الألبومين القياسي | Bio-Rad | # 5000206 | |
| FlyNap Anesthetic | Carolina | # 173025 | 100 مل |
| Kimwipes Low-Lint | Uline | # S-8115 | 1-Ply ، 4.4 × 8.4 " |
المراجع
- Ng, M., et al. Global, regional, and national prevalence of overweight and obesity in children and adults during 1980-2013: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2013. Lancet. 384, 766-781 (2014).
- Murphy, S. L., et al. Mortality in the United States, 2014. NCHS data brief, no 229. , Available from: https://www.cdc.gov/nchs/products/databriefs/db229.htm (2015).
- Bodmer, R. Heart development in Drosophila and its relationship to vertebrates. Trends Cardiovasc Med. 5, 21-28 (1995).
- Brumby, A. M., Richardson, H. E. Using Drosophila melanogaster to map human cancer pathways. Nat Rev Cancer. 5, 626-639 (2005).
- Chan, H. Y., Bonini, N. M. Drosophila models of human neurodegenerative disease. Cell Death Differ. 7, 1075-1080 (2000).
- Levine, M., et al. Human DNA sequences homologous to a protein coding region conserved between homeotic genes of Drosophila. Cell. 38, 667-673 (1984).
- Bier, E. Drosophila, the golden bug, emerges as a tool for human genetics. Nat Rev Genet. 6, 9-23 (2005).
- Bier, E., Bodmer, R. Drosophila, an emerging model for cardiac disease. Gene. 342, 1-11 (2004).
- Noyes, B. E., et al. Identification and expression of the Drosophila adipokinetic hormone gene. Mol Cell Endocrinol. 109, 133-141 (1995).
- Rajan, A., Perrimon, N. Of flies and men: insights on organismal metabolism from fruit flies. BMC Biol. 11, 38(2013).
- Rulifson, E. J., et al. Ablation of insulin-producing neurons in flies: growth and diabetic phenotypes. Science. 296, 1118-1120 (2002).
- Birse, R. T., et al. High-fat-diet-induced obesity and heart dysfunction are regulated by the TOR pathway in Drosophila. Cell Metab. 12, 533-544 (2010).
- Musselman, L. P., et al. A high-sugar diet produces obesity and insulin resistance in wild-type Drosophila. Dis Models Mech. 4, 842-849 (2011).
- Diop, S. B., Bodmer, R. Gaining Insights into Diabetic Cardiomyopathy from Drosophila. Trends Endocrinol Metab. 26, 618-627 (2015).
- Williams, M. J., et al. The Obesity-Linked Gene Nudt3 Drosophila Homolog Aps Is Associated With Insulin Signaling. Mol Endocrinol. 29, 1303-1319 (2015).
- Morris, S. N., et al. Development of diet-induced insulin resistance in adult Drosophila melanogaster. Biochim Biophys Acta. 1822, 1230-1237 (2012).
- Bodmer, R. The gene tinman is required for specification of the heart and visceral muscles in Drosophila. Development. 118, 719-729 (1993).
- Erkkila, A., et al. Dietary fatty acids and cardiovascular disease: an epidemiological approach. Prog Lipid Res. 47, 172-187 (2008).
- Ganz, M., et al. High fat diet feeding results in gender specific steatohepatitis and inflammasome activation. World J Gastroenterol. 20, 8525-8534 (2014).
- Wang, C. Y., Liao, J. K. A mouse model of diet-induced obesity and insulin resistance. Methods Mol Biol. 821, 421-433 (2012).
- Stocker, H., Gallant, P. Getting started: an overview on raising and handling Drosophila. Methods Mol Biol. 420, 27-44 (2008).
- Mathews, K. W., et al. Sexual Dimorphism of Body Size Is Controlled by Dosage of the X-Chromosomal Gene Myc and by the Sex-Determining Gene tra in Drosophila. Genetics. 205, 1215-1228 (2017).
- Golay, A., Bobbioni, E. The role of dietary fat in obesity. Int J Obes Relat Metab Disord. 21, Suppl 3 2-11 (1997).
- Diop, S. B., et al. PGC-1/Spargel Counteracts High-Fat-Diet-Induced Obesity and Cardiac Lipotoxicity Downstream of TOR and Brummer ATGL Lipase. Cell Rep. 10, 1-13 (2015).
- Chatterjee, D., et al. Control of metabolic adaptation to fasting by dILP6-induced insulin signaling in Drosophila oenocytes. Proc Natl Acad Sci U S A. 111, 17959-17964 (2014).
- Palanker, L., et al. Drosophila HNF4 regulates lipid mobilization and beta-oxidation. Cell Metab. 9, 228-239 (2009).
- Heinrichsen, E. T., Haddad, G. G. Role of high-fat diet in stress response of Drosophila. PLoS One. 7, 42587(2012).
- Kitahara, C. M., et al. Association between class III obesity (BMI of 40-59 kg/m2) and mortality: a pooled analysis of 20 prospective studies. PLoS Med. 11, 1001673(2014).
- Reis, A., et al. A comparison of five lipid extraction solvent systems for lipidomic studies of human LDL. J Lipid Res. 54, 1812-1824 (2013).
- Turne, C., et al. Supercritical fluid extraction and chromatography for fat-soluble vitamin analysis. J Chromatogr A. 936, 215-237 (2001).
- Na, J., et al. Drosophila model of high sugar diet-induced cardiomyopathy. PLoS Genet. 9, 1003175(2013).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
