نحن تصف طريقة القائم على هبلك لتحديد N- حمض أسيتيلنورامينيك وحمض N- جليكوليلورامينيك في الكبد الماوس والحليب.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تحديد الأحماض السياليك في الكبد وعينات الحليب من البرية من نوع و
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
كماه (سيتيدين مونوفوسفهات-N-أسيتيلنورامينيك حامض هيدروكسيلاز) هو المسؤول عن أكسدة أحماض سيتيدين أحادي فوسفات - N- أسيتيلنورامينيك في الثدييات. ومع ذلك، لا يمكن للبشر أكسدة حمض السيتيدين مونوفوسفهات-N- أسيتيلنورامينيك إلى حمض سيتيدين مونوفوسفهات-N- جليكولنورامينيك بسبب حذف اكسون الابتدائي للجين كماه . لفهم الآثار والآثار المترتبة على عدم وجود نشاط سماه بمزيد من التفصيل، ونموذج تدق كماه في الفئران هو من اهتمام كبير في البحوث الأساسية والتطبيقية. طريقة التحليل لتحديد النمط الظاهري لهذا النموذج الماوس هو موضح هنا بالتفصيل، ويستند على الكشف عن كل من N- حمض أسيتيلنورامينيك وحمض N- غليكوليلورامينيك في الكبد وحليب البرية من نوع و كماه تدق الفئران. يتم الافراج عن الأحماض السياليك الذاتية و ديريفاتيزد مع o- فينيلينديامين لتوليد المشتقات الفلورية، والتي يمكن تحليلها لاحقا من قبل هبلك. يمكن أن يكون البروتوكول المقدمكما طبقت لتحليل عينات الحليب والأنسجة من مختلف الأصول الأخرى، ويمكن أن تكون مفيدة للتحقيق في الآثار الغذائية والصحية للحمض N-غليكوليلورامينيك.
المقدمة
N- حمض أسيتيلنورامينيك (Neu5Ac) وحمض N- جليكولنورامينيك (Neu5Gc) هي الأحماض السياليك الأكثر شيوعا في معظم الثدييات 1 . على الرغم من أن قادرة على تصنيع Neu5Ac داخليا، والبشر ليست قادرة على إنتاج Neu5Gc بسبب حذف اكسون الابتدائي على ترميز الجينات سماه ل هيدروكسيلاز سمب-Neu5Ac 2 ، 3 . ومع ذلك، يمكن للمنتجات الغذائية الحيوانية القائمة على مصادر غذائية من Neu5Gc 4 ، 5 ، 6 ، مما يؤدي إلى إنتاج الأجسام المضادة لمكافحة Neu5Gc، وبالتالي تؤدي إلى استجابة م....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقد وافقت اللجنة الأخلاقية لمركز الحيوان التجريبي في جامعة نانجينغ الزراعية وفقا للإجراءات الوطنية لرعاية الحيوان التجريبي (وزارة العلوم والتكنولوجيا، العلاقات العامة في الصين، 2006) مع الحيوانات الموجودة في سف منشأة (رقم التصريح: سيكسك-J-2011-0037).
1. كماه المغلوب خارج الماوس نموذج
- استخدام البرية من نوع C57Bl / 6 الفئران من مركز الطب المقارن من جامعة يانغتشو (الصين).
ملاحظة: تم إنشاؤها كماه تدق الفئران خارج استنادا إلى المعلومات المقدمة من السا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
ويرد نظرة عامة التخطيطي لطريقة تحليل وصفها في الشكل 1 ، ويتضمن عزل الأحماض السياليك من عينات الحليب والكبد من نوع البرية و كماه تدق الطرد الفئران متحولة، ومشتق مضان وتحليل هبلك من هذه المكونات. الشكل 2 والشكل 3 تظهر كروماتوغرامز هبلك ممثل من أحماض سياليك ديريفاتيزد من عينات الحليب والكبد من هومو- متخالف المغلوب خارج الفئران سماه<.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يسمح البروتوكول هنا تقديم التقييم phenotypical من متماثل الفئران خروج المغلوب Cmah من خلال تحليل وقياس كميات النسبية Neu5Gc من الحليب والكبد العينات. تم إجراء التحليل باستخدام إعداد هبلك القياسية مع الكشف مضان. الخطوة الأكثر أهمية من هذا الإجراء هو إعداد الأعمدة تبادل أنيون وأداء اللوني التبادل أنيون. لتسوية الراتنج بشكل صحيح وجمع الحق غسل وكسور شطف يأخذ قليلا من الممارسة.
بدلا من ذلك، هنا يستخدم وكيل ال.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
شكر وتقدير
وقد دعم هذا العمل جزئيا من قبل مؤسسة العلوم الطبيعية في الصين (أرقام المنحة 31471703، A0201300537 و 31671854 ل جف و ل)، و 100 خطة المواهب الخارجية (منحة رقم JSB2014012 إلى جف).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| <قوي>المواد الكيميائية: < / قوي > | |||
| N-acetylneuraminic حمض | Sigma | A0812 | |
| N-glycolylneuraminic حمض | Sigma | 50644 | يجب أن يكون 1 ملغ aliquot كافيا |
| o-Phenylenediamine | Sigma | 694975 | |
| كبريتات الهيدروجين الصوديوم | J& K Scientific Ltd | 75234 | |
| الأدوات / المواد: < / قوي> | |||
| 3 مل أنابيب SPE | Supelco | Sigma 57024 | أعمدة استخراج الطور الصلب الفارغة |
| Luer stopcock | Sigma | S7396 | لوقف تدفق أنبوب SPE |
| Dowex 1X8 | Dow Chemicals | Sigma 44340 | 200 - 400 شبكة |
| طاحونة الأنسجة | Sigma | D8938 | ضيق |
| صالح < قوي > تحليل HPLC: < / قوي > | |||
| الاسترداد HPLC قارورة | Agilent Technologies | # 5188-2788 | |
| نظام HPLC | Shimadzu | Nexera | |
| ل HPLC | Shimadzu | RF-20Axs | |
| HPLC Column | Phenomenex | Hyperclone ODS | 250 × 4.6 مم |
| LCMS-grade H2< / sub>O | Merck Millipore | #WX00011 | |
| LCMS-grade Acetonitrile | Merck Millipore | # 100029 | |
| محلول هيدروكسيد الأمونيوم | Fluka | # 44273 | puriss. P.a. |
المراجع
- Lamari, F. N., Karamanos, N. K. Separation methods for sialic acids and critical evaluation of their biologic relevance. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 781 (1-2), 3-19 (2002).
- Irie, A., Koyama, S., Kozutsumi, Y., Kawasaki, T., Suzuki, A.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
