يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

جيل طراز انسداد الشعب الهوائية المزمن في الفئران بالتعرض للأوزون المتكررة

10.9K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/56095

⸱

أغسطس 25, 2017

 ,  ,  , 
1Cellular Biomedicine Group, Shanghai, 2Cellular Biomedicine Group, Cupertino, 3Department of Respiratory Medicine, Shanghai General Hospital, Shanghai Jiaotong University

في هذه المقالة

ملخص

تصف هذه الدراسة نجاح توليد نموذج جديد للحيوان مرض الانسداد الرئوي المزمن (COPD) وذلك بتعريض الفئران لتركيزات عالية من الأوزون مرارا وتكرارا.

الملخص

مرض الانسداد الرئوي المزمن (COPD) يتسم باستمرار تدفق الهواء الرئة والحد من تدمير متني. أنها نسبة عالية جداً في شيخوخة السكان. العلاجات التقليدية الحالية لهذا المرض تركز أساسا على تعديل أعراض المخدرات؛ وبالتالي، ثمة حاجة ملحة في تطوير علاجات جديدة. نماذج حيوانية المؤهلين لهذا المرض يمكن أن تساعد على وصف الآليات الكامنة، ويمكن أن تستخدم لفحص المخدرات الجديدة. النماذج الحالية من هذا المرض، مثل ليبوبوليساكتشاريدي (LPS) أو elastase البنكرياس الخنزير (معدات الوقاية الشخصية)-نموذج انتفاخ المستحث، تولد آفات شبيهة بهذا المرض في الرئتين والخطوط الجوية ولكن لا تشبه إلا الآلية المرضية لهذا المرض البشري. دخان سجائر (CS)-نموذج المتعمد لا تزال واحدة من الأكثر شعبية نظراً لأنه ليس فقط يحاكي آفات شبيهة بهذا المرض في الجهاز التنفسي، بل أنها تقوم أيضا على واحد من المواد الخطرة الرئيسية التي تسبب هذا المرض في البشر. بيد أن جوانب تستغرق وقتاً طويلاً وتتطلب عمالة مكثفة من طراز المستحثة CS تحد كبير تطبيقه في فحص المخدرات الجديدة. في هذه الدراسة، بنجاح إنشاء نموذج جديد لهذا المرض وذلك بتعريض الفئران إلى مستويات عالية من الأوزون. أظهر هذا النموذج ما يلي: 1) انخفض حجم الزفير القسري 25 و 50 و 75/القسري القدرات الحيوية (FEV25/FVC، FEV50/FVC، و FEV75/FVC)، التي تشير إلى تدهور وظائف الرئة؛ 2) الحويصلات الهوائية في الرئة الموسع، مع تدمير متني الرئة؛ 3) تخفيض وقت التعب والمسافة؛ و 4) زاد الالتهاب. أخذت معا، تبين هذه البيانات أن نموذج التعرض (عمر الفاروق) الأوزون هو نموذج حيوان موثوقة أنه مماثل للبشر المفرط الأوزون أحد العوامل المسببة لهذا المرض. بالإضافة إلى ذلك، استغرق الأمر سوى 6-8 أسابيع، على أساس عملنا السابق، لإنشاء نموذج عمر الفاروق، في حين أنه يتطلب 3-12 شهرا للحث على الطراز دخان السجائر، مشيراً إلى أن النموذج عمر الفاروق الذي قد يكون خياراً جيدا للبحوث هذا المرض.

المقدمة

ويقدر أن هذا المرض، بما في ذلك انتفاخ الرئة والتهاب القصبات المزمن، قد يكون السبب الرئيسي الثالث للوفاة في العالم بحلول عام 20201،2. يحتمل حدوث هذا المرض في عدد سكان ما يزيد على 40 عاماً يقدر أن 12.7 في المائة عند الذكور و 8.3% في الإناث خلال ال 40 عاماً القادمة3. لا توجد أدوية متوفرة حاليا لعكس التدهور التدريجي لمرضى هذا المرض4. موثوق بها من نماذج حيوانية لهذا المرض ليس فقط الطلب التقليد عملية باثولوجية المرض ولكن أيضا تحتاج إلى فترة قصيرة من جيل. النماذج الحالية من هذا المرض، بما في ذلك لبس أو نموذج المستحثة بمعدات الوقاية الشخصية، يمكن أن تحدث أعراض مثل انتفاخ الرئة5،6. إدارة واحدة أو تحديا أسبوعا من لبس أو معدات الوقاية الشخصية لنتائج الفئران أو الجرذان في neutrophilia ملحوظ في سائل الغسل للفيسيولوجيا (بالف)، الزيادات الوسطاء المحترفين التحريضية (مثلاً، تنف-α وايل-1β) في بالف أو في مصل الدم، وتنتج الرئة المسافات الجوية تدمير الموسع متني وحدود تدفق الهواء5،،من67،9،،من810. ومع ذلك، لبس أو معدات الوقاية الشخصية ليست الأسباب لهذا المرض البشري وبالتالي لا تحاكي عملية المرضية11. نموذج المستحثة CS المنتجة الحد من استمرار تدفق الهواء، وتدمير متني الرئة، وانخفاض القدرة على ممارسة الرياضة الوظيفية. ومع ذلك، يتطلب بروتوكول CS تقليدية لتوليد هذا المرض نموذج12،13،،من14153 أشهر على الأقل. وبالتالي، من المهم إنشاء نموذج حيوانية جديدة، أكثر كفاءة تفي بالمتطلبات اثنين.

في الآونة الأخيرة، بالإضافة إلى تدخين السجائر، تلوث الهواء، والتعرض المهني أصبحت الأسباب الأكثر شيوعاً لهذا المرض16،،من1718. الأوزون، كأحد الملوثات الرئيسية (على الرغم من عدم العنصر الرئيسي لتلوث الهواء) ومباشرة يمكن أن تتفاعل مع الجهاز التنفسي وتلف أنسجة الرئة للأطفال والشباب البالغين19،20،21 ،،من2223،،من2425. الأوزون، فضلا عن المنبهات الأخرى بما في ذلك لبس، ومعدات الوقاية الشخصية، وخدمات العملاء، ويشاركون في خطيرة من المسارات البيوكيميائية الرئوية الأكسدة وتلف الحمض النووي وترتبط باستهلال وتعزيز هذا المرض26،27. وثمة عامل آخر أن تتدهور أعراض بعض المرضى من هذا المرض بعد التعرض للأوزون، مما يشير إلى أن الأوزون يمكن أن تعطل الرئة الدالة18،،من2829. لذلك، نحن إنشاء نموذج جديد لهذا المرض وذلك بتعريض الفئران لتركيزات عالية من الأوزون مرارا وتكرارا لمدة 7 أسابيع؛ وادي ذلك إلى تدفق الهواء العيوب والأضرار متني الرئة مماثلة لتلك التي للتحقيقات السابقة30،،من3132. تمديد البروتوكول عمر الفاروق للفئران الإناث في هذه الدراسة، واستنسخت بنجاح انتفاخ الرئة في الفئران الذكور في أعمالنا السابقة الدراسات31،،من3032. لأن انخفض معدل وفيات هذا المرض لدى الرجال ولكن زادت في النساء في العديد من البلدان33، نموذج هذا المرض في الإناث يلزم دراسة الآليات وتطوير الأساليب العلاجية للمرضى الإناث في هذا المرض. إمكانية تطبيق نموذج عمر الفاروق للجنسين جميع يضفي مزيدا من الدعم لاستخدامه كنموذج هذا المرض.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

ملاحظة: تم إنشاء نموذج "عمر الفاروق" والمستخدمة في البحث عنها سابقا 30 ، ، من 31 32. وقد أقر جميع التجارب على الحيوانات "رعاية الحيوان المؤسسية" واستخدام اللجنة (إياكوك) من جامعة جياوتونغ بشانغهاى.

1-الفئران

مرفق
  1. البيت خالية من مسببات الأمراض، 7-9 أسبوع من الفئران بالب/ج الإناث في أقفاص التهوية الفردية في حيوان تحت التحكم درجة الحرارة (20 درجة مئوية) ورطوبة (40-60 في المائة). توفير 12 ح الضوء ودورة الظلام ح 12 في المرفق. توفير الغذاء والمياه libitum الإعلانية.

2. الأوزون أو التعرض للهواء

  1. توليد الأوزون مع مولد كهربائي في مربع اكريليك (مثل بيرسبيكس) ختم. ضربة جوية الخروج من مربع باستخدام منفاخ هواء صغيرة من خلال أنبوب تنفيس هواء متصل داخل وخارج منطقة الجزاء. رصد تركيز الأوزون في المربع باستخدام مسبار الأوزون. انتظر حتى يصل تركيز الأوزون في المربع إلى أجزاء 2.5 لكل مليون (ppm).
    ملاحظة: مسبار الأوزون يمكن تبديل مولد الأوزون تلقائياً أو إيقاف تشغيله، ويمكن المحافظة على مستوى الأوزون في المربع في 2.5 جزء في المليون-
  2. وضع الفئران في المربع عند مستوى الأوزون تصل إلى 2.5 جزء في المليون. تبقى الفئران في مربع ح 3 في كل مرة تعرضها للأوزون-
    ملاحظة: المربع يمكن الاحتفاظ بمستوى الأوزون من 2.5 جزء في المليون خلال ح 3 عن طريق التحول مولد الأوزون تلقائياً أو إيقاف تشغيله، وتهب CO 2 التي ينتجها الفئران من خارج منطقة الجزاء.
  3. إعطاء اثنين من التعرض الأوزون (كل التعرض الدائم ح 3) أسبوعيا (مرة كل 3 أيام) لمدة 7 أسابيع؛ وفضح الفئران السيطرة الهواء في نفس الوقت وفي نفس الفترة-

3. الصغير-المقطعي

  1. في نهاية الأسبوع 7، تخدير الفئران بحقن داخل ناتريكوم بيلتوباربيتالوم (1%، 0.6-0.8 مل/100 غرام) تعديل الجرعة وفقا للحالات الفردية لمعرفة أن الماوس لا الاستجابة إلى رشة تو. مراقبة والاحتفاظ الماوس في وتيرة التنفس مطرد؛ وتأكد من وجود لا التماسات طوعية أثناء الإجراءات.
  2. مكان الفئران أنيسثيتيزيد في الدائرة حسابها الصغرى التصوير المقطعي (µCT)-
    3. معايرة
  3. µCT استخدام البروتوكول القياسي والشركة المصنعة ' تعليمات s. تعيين أنبوب الأشعة السينية في 50 كيلو فولت والتيار في 450 µA.
    ملاحظة: كل الأشعة السينية وكاشف الدوران حول الفئران.
  4. إجراء تحليل µCT بالحصول على إسقاطات 515 مع حجم بكسل فعالة 0.092 ملم، ووقت تعرض من 300 مرض التصلب العصبي المتعدد لشريحة واحدة، وسمك شريحة ملم 0.093.
    5. إعادة
  5. في الرئة مع الصور المكتسبة باستخدام برمجيات. ضبط سطوع الصورة الرمادية بتعيين الحد الأدنى والحد الأقصى للدرجات الرمادية في وحدات هاونسفيلد-550 و-750، على التوالي.
    ملاحظة: البرنامج تلقائياً حساب حجم حمة الرئة وال 34 ، منطقة منخفضة التوهين (LAA) 35-
  6. لحساب النسبة مئوية LAA (LAA %) بقسمة حجم LAA بحجم إجمالي الرئة.

4. "اختبار حلقة مفرغة"

  1. إعطاء اختبار الفئران التكيف بسرعة 10 م/دقيقة لمدة 10 دقيقة على آلة المطحنة قيد التشغيل. ملاحظة: الكهرباء دائماً قبالة عندما يجري الإجراء.
  2. إدارة اختبار التعب للفئران.
    1. الاحماء الفئران بسرعة 10 م/دقيقة للحد الأدنى 5
    2. زيادة السرعة إلى 15 متر/دقيقة لدقيقة 10
    3. زيادة كثافة ممارسة: زيادة السرعة من 5 م/دقيقة، بدءاً من 20 مترا في الدقيقة، كل 30 دقيقة حتى الفئران لا يمكن الاستمرار في تشغيل 36-
  3. تسجيل إجمالي قيد التشغيل عن بعد وإدارة الوقت كالتعب المسافة والوقت التعب، على التوالي.

5. "قياسات وظيفة الرئة"

  1. تخدير الفئران بحقن داخل ناتريكوم بيلتوباربيتالوم (1%، 0.6-0.8 مل/100 غرام) تعديل الجرعة وفقا للحالات الفردية لمعرفة أن الماوس لا لا تستجيب لقرصة أخمص القدمين والانتظار حتى الفئران حافظت على التنفس العفوي. مراقبة والاحتفاظ الماوس في وتيرة التنفس مطرد؛ وتأكد من وجود لا التماسات طوعية أثناء الإجراءات.
  2. تراتشيوستوميزي الفئران بعناية ووضعها في بليثيسموجراف جسم متصل بجهاز التنفس الصناعي تسيطر عليها الكمبيوتر.
    ملاحظة: يتم التحكم في التهوية عبر صمام الموقع بروكسيمالي إلى أنبوب داخل الرغامى. يوفر الإعداد مختلف المناورات شبه التلقائي، بما في ذلك مناورة حجم الضغط شبه ثابتة والمناورة لحجم التدفق السريع-
  3. فرض معدل التنفس تواتر 150 نفسا بالدقيقة للماوس أنيسثيتيزيد عن طريق التهوية تسيطر عليها الضغط حتى نمط التنفس عادية ويتم الحصول على الصلاحية الكاملة في كل دورة من دورات التنفس.
  4. إجراء المناورة حجم الضغط شبه ثابت مع الجهاز باستخدام الضغوط السلبية التي ولدت في بليثيسموجراف-
  5. إجراء المناورة حجم التدفق السريع داخل الحلقات حجم الضغط شبه ثابت لتسجيل في تطعيما و FEV. انتفاخ الرئة إلى + 30 سم ح 2 س، وفورا بعد ذلك بتوصيله إلى ضغط سلبي للغاية فرض انتهاء الصلاحية حتى تصبح وحدة التخزين المتبقية في سجل سين-30 سم ح 2 FEV في 25 الأولى و 50 و 75 مللي من زفير (FEV 25 ، FEV 50، و 75 من FEV، على التوالي). رفض هذه المناورات دون الحد الأمثل. لكل اختبار مع كل واحدة بالماوس، القيام بالحد أدنى من ثلاث مناورات مقبولة للحصول على وسيلة موثوقة لجميع المعلمات العددية.

6. جمع بالف

  1. عقب التخدير الطرفي مع ناتريكوم بيلتوباربيتالوم ((1%، 1.8-2.4 مل/100 غرام) تعديل الجرعة وفقا للحالات الفردية لمعرفة أن الماوس عدم الاستجابة إلى رشة أخمص القدمين وتفقد التنفس)، الغسل الفئران مع 2 مل من برنامج تلفزيوني عن طريق أنبوب داخل الرغامى مم 1 واسترداد ثم بالف 10-
  2. تجمع مختبرين الغسل المستردة والطرد المركزي لهم في 4 درجات مئوية و 250 g x للحد الأدنى 10
  3. جمع المادة طافية للاستخدام الفوري، وتخزين ما تبقى في-80 درجة مئوية أو سائل النيتروجين.
  4. حساب إجمالي عدد الخلايا باستخدام هيموسيتوميتير.
  5. ريسوسبيند بيليه الخلية في برنامج تلفزيوني وثم زيادة ونقصان (1,400 س ز، 6 دقيقة) 250 ميليلتر الخلايا حراكه على الشرائح باستخدام أجهزة الطرد مركزي في الزيادة ونقصان شريحة.
  6. "رأيت تطبيق" التلوين للخلايا على الشرائح وفقا للشركة المصنعة ' بروتوكول s-
  7. عد الخلايا 200 كل الماوس؛ وتحديد الخلايا الضامة أو العَدلات، وفقا مورفولوجية القياسية، تحت 400 X التكبير؛ وحساب هذه الأرقام-

7. أخذ عينات الدم القلب

  1. جمع الدم عن طريق ثقب القلب وتحميله إلى 1.5 مل أنابيب، وإبقائه على الجليد للحد الأدنى 30
  2. الطرد المركزي عينات الدم لمدة 5 دقائق في 000 2 × ز و 4 درجة مئوية.
  3. نقل المادة طافية (المصل) إلى أنبوب جديد وتخزينها في-80 درجة مئوية أو سائل النيتروجين.
  4. إعداد المصل لايل-1β، إيل-10، واختبارات الكشف عن تنف-α باستخدام مجموعات أليسا كل منهما.

8. تحليل شكلي الرئة

  1. تشريح الرئتين وتراتشياس من الفئران.
    1. بوضع كل الماوس يوثانيزيد على لوحة العمليات جراحية مباشرة بعد تضحية.
    2. تشريح بعيداً في بلاتيسما وعضلات القصبة الهوائية الأمامية لتصور والوصول إلى حلقات الرغامى.
      3. تجويف
    3. مفتوحة حتى الصدر. تشريح الرئتين والقصبة الهوائية، ولكن لا تفصل القلب من الرئتين.
  2. توصيل القسطرة داخل الرغامى بحقنه تحتوي على بارافورمالدهيد 4% عن طريق أنبوب البولي إيثيلين PE90-
    تنبيه: بارافورمالدهيد السامة. ارتداء قفازات ونظارات السلامة واستخدام الحل داخل غطاء دخان.
  3. انتفاخ الرئة تماما استخدام بارافورمالدهيد 4% (10 قطرات، ~ 200 ميليلتر) عن طريق القسطرة داخل الرغامى. إزالة القلب بعد انتهاء التضخم.
  4. المحافظة على الرئة في أنبوب 15 مل تحتوي على 10 مل بارافورمالدهيد 4% على الأقل 4 حاء
    5. تضمين
  5. في الرئة في البارافين. الحصول على الأقسام 5-ميكرومتر بكتلة البارافين تمزيقها مع مبضع دوارة. خلال تمزيقها، يعرض الحد الأقصى للمساحة السطحية لانسجة الرئة داخل منطقة الشعب الهوائية شجرة-
  6. لتحليل شكلي، أداء الهيماتوكسيلين وويوزين (ح & ه) تلطيخ في المقاطع.
  7. صورة الأقسام مع مجهر تستقيم مشرق الميدان (الهدف العدسة، 20 X؛ وقت التعرض، 1.667 ms).
    8. وقد
  8. اثنين من المحققين أعمى لبروتوكول العلاج عد المقاطع النسيجي بشكل مستقل. استخدام التقاطع الخطي يعني (ل م) كمعلمة لقياس مسافة الجدار الحاجز بين السنخية. تحديد ل م باستخدام الخطوات التالية:
    1. فتح صور المقاطع في Photoshop، ورسم شبكة شبيكة الشعر على الصورة مع مكم 550 خمس خطوط طويلة.
    2. عدد من الحويصلات الهوائية عبر خط الشبكة.
      3. حساب
    3. ل م بتقسيم طول خط الشبكة على عدد من الحويصلات الهوائية. للتحديد الكمي، صورة خمسة أقسام للماوس. الحصول على صور عشرة من كل قسم (صورة واحدة في كل حقل) وتقييم عشوائياً. أثناء تحديد الحقل، تجنب حقول الخطوط الجوية والسفن بنقل حقل واحد المقبلة أو في اتجاه آخر-
      ملاحظة: يتم عرض البيانات ك ± يعني S.E.M. اختبار t المزدوجة الأمم المتحدة أجريت للمقارنة بين الفئران المعرضة للهواء والفئران المعرضة للأوزون. واستخدمت الحيوانات ثلاثة من كل مجموعة لحساب الفرق كبير. فقيمه < 0.05 اعتبرت هامة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

يتم عرض أمثلة للصور µCT ثلاثية الأبعاد لكل مجموعة في الشكل 1. الفئران المعرضة للأوزون كانت وحدة تخزين إجمالي الرئة أكبر بشكل ملحوظ (الشكل 1وب) و LAA % (الشكل 1ج) عما الفئران المعرضة للهواء عنصر التحكم. وظل حجم الرئة و LAA % مرتفعة بعد ستة أسابيع من التعرض للأوزون31،32. وتمثل النمط الظاهري انت...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

في هذه الدراسة، نقدم وسيلة موثوق بها لتوليد نموذج جديد لهذا المرض. مقارنة بنماذج أخرى (أي لبس أو نماذج معدات الوقاية الشخصية)، وهذا نموذج عمر الفاروق يجمل العملية المرضية لمرضى هذا المرض. نظراً لأن دخان السجائر المواد الخطرة الرئيسية التي تسبب هذا المرض في البشر المرضى40، يظل النموذج CS41،من طراز هذا المرض الأكثر شعبية42. ومع ذلك، يتطلب النموذج CS ص 3 إلى 12 شهرا & مد الفترة للعقاقير الجديدة. بالمقارنة مع طراز CS، نموذج عمر ال...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

Z.W.S. وقد بالموظفين الحاليين وأصحاب الأسهم الخيار مجموعة الطب الحيوي الخلوية (ناسداك: كبمج). تعلن مؤلفين آخرين أن لديهم لا تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

المؤلفون يود أن يعرب عن امتنانه للسيد تشين بويين (مركز السريرية الصحة العامة شانغهاي) للمساعدة التقنية بشأن تقييم µCT في هذا البروتوكول.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

تم استخدام
قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
الفئران BALB / cSlac Laboratory Animal ، شنغهاي ، الصينN / Aأنثى الفئران BALB / c البالغة من العمر 7 إلى 9 أسابيع في هذه الدراسة.
أقفاص فردية جيدة التهويةسوهانغ ، شنغهاي ، الصينرقم الموديل: MU64S7تم استخدام الأقفاص لإيواء الفئران في منشأة.
ختم صندوق البرسبيكسسوهانغ ، شنغهاي ، الصينN / Aتم استخدام الصندوق لاحتواء مولد الأوزون. تعرضت الفئران للأوزون داخل الصندوق.
مولد كهربائيSander Ozoniser ، Uetze-Eltze ، ألمانياموديل 500   ؛تم استخدام الجهاز لتوليد الأوزون.
مسبار الأوزونATi Technologies ، Ashton-U-Lyne ، مانشستر الكبرى ، المملكة المتحدةOzone 300تم استخدام الجهاز لمراقبة توليد الأوزون والتحكم فيه.
Pelltobarbitalum natricumSigma ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكيةP3761تم تخدير الفئران عن طريق الحقن داخل الصفاق من pelltobarbitalum natricum.
التصوير المقطعي المحوسب الدقيقGE Healthcare ، لندن ، أونتاريو ، كنداRS0800639-0075تم استخدام هذا الجهاز للحصول على صور للرئة.
مايكرو فيو 2.01 برنامج ABAجنرال إلكتريك للرعاية الصحية, لندن, أونتاريو, كندامايكرو فيو 2.01 تم استخدام هذا الجهاز لإعادة بناء الرئة وتحليل الحجم ، LAA للرئة.
آلة جهاز المشي دوانشي ، هانغتشو ، تشجيانغ ، الصينDSPT-208كان هذا الجهاز بالدولار الأمريكي لاختبار التعب.
تضخم الجسمeSpira™ نظام المناورة القسرية ، EMMS ، إدنبرة ، المملكة المتحدةنظام المناورة القسريةتم استخدام هذا الجهاز لاختبار وظيفة قياس التنفس الرئوي.
جهاز التنفس الصناعيeSpira™ نظام المناورة القسرية ، EMMS ، إدنبرة ، المملكة المتحدةنظام المناورة القسريةتم استخدام هذا الجهاز لاختبار وظيفة قياس التنفس الرئوي.
جهاز طرد مركزي دوارمنزلق Denville Scientific ، هوليستون ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكيةC1183   ؛تم استخدامه لتدوير خلايا BALF على الشرائح.
رايت تلينينغهانهونج ، شنغهاي ، الصينRE04000054  تم استخدامه لتلطيخ البلاعم والعدلات في BALF المعلق.
مقياس الدمهوسر العلمي ، هورشام ، بنسلفانيا ، الولايات المتحدة الأمريكية4000تم استخدامه لعد الخلايا.
IL-1 وبيتا.أبكام ، كامبريدج ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكيةab100704تم استخدامها لاختبار العوامل ذات الصلة في المصل.
IL-10Abcam ، كامبريدج ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكيةab46103تم استخدامها لاختبار العوامل ذات الصلة في المصل.
TNF- & ألفا;أبكام ، كامبريدج ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكيةab100747تم استخدامها لاختبار العوامل المعنية في المصل.
بارافورمالدهايد سيجما ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكيةP6148تم تضخيم الرئة بنسبة 4٪ بارافورمالدهايد.
البارافينهوالينج ، شنغهاي ، الصين56 #تم استخدامه لتضمين الرئة.
الروتاري ميكروتوملايكا ، ويتزلار ،   ؛ هسن ، ألمانياRM2255تم استخدامه لتقسيم الرئة.
Hgaematoxylin و Eosin (H& ه) حل تلطيخSolarbio ، بكين ، الصينG1120H& تم إجراء تلطيخ E للتحليل المورفومتري.
مجهر الحقل الساطع المستقيمأوليمبوس ، سنتر فالي ، بنسلفانيا ، الولايات المتحدة الأمريكيةCX41تم استخدامه لتصوير H & amp E تلطيخ الشرائح.
أدوبي فوتوشوب 12أدوبي ، سان خوسيه ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكيةأدوبي فوتوشوب 12تم استخدامه لحساب عدد الحويصلات الهوائية على H& ه صور ملطخة.
GraphPad prism 5Graphpad Software Inc. ، سان دييغو ، كاليفورنيامنشور GraphPad 5تم استخدامه لتحليل البيانات وإنتاج الأرقام.

المراجع

  1. Lozano, R., et al. Global and regional mortality from 235 causes of death for 20 age groups in 1990 and 2010: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2010. Lancet. 380, 2095-2128 (2012).
  2. Chapman, K. R., et al. Epidemiology and costs of chronic obstructive pulmonary disease. Eur Respir J. 27, 188-207 (2006).
  3. Afonso, A. S., Verhamme, K. M., Sturkenboom, M. C., Brusselle, G. G. COPD in the general population: prevalence, incidence and survival. Respir Med. 105, 1872-1884 (2011).
  4. Rabe, K. F., et al. Global strategy for the diagnosis, management, and prevention of chronic obstructive pulmonary disease: GOLD executive summary. Am J Respir Crit Care Med. 176, 532-555 (2007).
  5. Ogata-Suetsugu, S., et al. Amphiregulin suppresses epithelial cell apoptosis in lipopolysaccharide-induced lung injury in mice. Biochem Biophys Res Communi. 484, 422-428 (2017).
  6. Oliveira, M. V., et al. Characterization of a Mouse Model of Emphysema Induced by Multiple Instillations of Low-Dose Elastase. Front Physiol. 7, 457(2016).
  7. Vernooy, J. H., Dentener, M. A., van Suylen, R. J., Buurman, W. A., Wouters, E. F. Long-term intratracheal lipopolysaccharide exposure in mice results in chronic lung inflammation and persistent pathology. Am J Respir Cell Mol Biol. 26, 152-159 (2002).
  8. Birrell, M. A., et al. Role of matrix metalloproteinases in the inflammatory response in human airway cell-based assays and in rodent models of airway disease. J Pharm Exp Ther. 318, 741-750 (2006).
  9. Gamze, K., et al. Effect of bosentan on the production of proinflammatory cytokines in a rat model of emphysema. Exp Mol Med. 39, 614-620 (2007).
  10. Vanoirbeek, J. A., et al. Noninvasive and invasive pulmonary function in mouse models of obstructive and restrictive respiratory diseases. Am J Respir Cell Mol Biol. 42, 96-104 (2010).
  11. Wright, J. L., Cosio, M., Churg, A. Animal models of chronic obstructive pulmonary disease. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 295, 1-15 (2008).
  12. Huh, J. W., et al. Bone marrow cells repair cigarette smoke-induced emphysema in rats. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 301, 255-266 (2011).
  13. Schweitzer, K. S., et al. Adipose stem cell treatment in mice attenuates lung and systemic injury induced by cigarette smoking. Am J Respir Crit Care Med. 183, 215-225 (2011).
  14. Guan, X. J., et al. Mesenchymal stem cells protect cigarette smoke-damaged lung and pulmonary function partly via VEGF-VEGF receptors. J Cell Biochem. 114, 323-335 (2013).
  15. Gu, W., et al. Mesenchymal stem cells alleviate airway inflammation and emphysema in COPD through down-regulation of cyclooxygenase-2 via p38 and ERK MAPK pathways. Sci Rep. 5, 8733(2015).
  16. Cordasco, E. M., VanOrdstrand, H. S. Air pollution and COPD. Postgrad Med. 62, 124-127 (1977).
  17. Berend, N. Contribution of air pollution to COPD and small airway dysfunction. Respirology. 21, 237-244 (2016).
  18. DeVries, R., Kriebel, D., Sama, S. Outdoor Air Pollution and COPD-Related Emergency Department Visits, Hospital Admissions, and Mortality: A Meta-Analysis. COPD. 14 (1), 113-121 (2016).
  19. Penha, P. D., Amaral, L., Werthamer, S. Ozone air pollutants and lung damage. IMS Ind Med Surg. 41, 17-20 (1972).
  20. Stern, B. R., et al. Air pollution and childhood respiratory health: exposure to sulfate and ozone in 10 Canadian rural communities. Environ Res. 66, 125-142 (1994).
  21. Tager, I. B., et al. Chronic exposure to ambient ozone and lung function in young adults. Epidemiology. 16, 751-759 (2005).
  22. Romieu, I., Castro-Giner, F., Kunzli, N., Sunyer, J. Air pollution, oxidative stress and dietary supplementation: a review. Eur Respir J. 31, 179-197 (2008).
  23. Hemming, J. M., et al. Environmental Pollutant Ozone Causes Damage to Lung Surfactant Protein B (SP-B). Biochemistry. 54, 5185-5197 (2015).
  24. Chu, H., et al. Comparison of lung damage in mice exposed to black carbon particles and ozone-oxidized black carbon particles. Sci Total Environ. 573, 303-312 (2016).
  25. Jin, M., et al. MAP4K4 deficiency in CD4(+) T cells aggravates lung damage induced by ozone-oxidized black carbon particles. Environ Toxicol Pharmacol. 46, 246-254 (2016).
  26. Brusselle, G. G., Joos, G. F., Bracke, K. R. New insights into the immunology of chronic obstructive pulmonary disease. Lancet. 378, 1015-1026 (2011).
  27. Valavanidis, A., Vlachogianni, T., Fiotakis, K., Loridas, S. Pulmonary oxidative stress, inflammation and cancer: respirable particulate matter, fibrous dusts and ozone as major causes of lung carcinogenesis through reactive oxygen species mechanisms. Int J Environ Res Public Health. 10, 3886-3907 (2013).
  28. Medina-Ramon, M., Zanobetti, A., Schwartz, J. The effect of ozone and PM10 on hospital admissions for pneumonia and chronic obstructive pulmonary disease: a national multicity study. Am J Epidemiol. 163, 579-588 (2006).
  29. Lee, I. M., Tsai, S. S., Chang, C. C., Ho, C. K., Yang, C. Y. Air pollution and hospital admissions for chronic obstructive pulmonary disease in a tropical city: Kaohsiung, Taiwan. Inha Toxicol. 19, 393-398 (2007).
  30. Triantaphyllopoulos, K., et al. A model of chronic inflammation and pulmonary emphysema after multiple ozone exposures in mice. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 300, 691-700 (2011).
  31. Li, F., et al. Effects of N-acetylcysteine in ozone-induced chronic obstructive pulmonary disease model. PLoS ONE. 8, e80782(2013).
  32. Li, F., et al. Hydrogen Sulfide Prevents and Partially Reverses Ozone-Induced Features of Lung Inflammation and Emphysema in Mice. Am J Respir Cell Mol Biol. 55, 72-81 (2016).
  33. Rycroft, C. E., Heyes, A., Lanza, L., Becker, K. Epidemiology of chronic obstructive pulmonary disease: a literature review. Int J Chron Obstruct Pulmon Dis. 7, 457-494 (2012).
  34. Washko, G. R., et al. Airway wall attenuation: a biomarker of airway disease in subjects with COPD. J Appl Physiol. 107, 185-191 (2009).
  35. Yamashiro, T., et al. Quantitative assessment of bronchial wall attenuation with thin-section CT: An indicator of airflow limitation in chronic obstructive pulmonary disease. AJR Am J Roentgenol. 195, 363-369 (2010).
  36. Tang, X., et al. Arctigenin efficiently enhanced sedentary mice treadmill endurance. PLoS ONE. 6, e24224(2011).
  37. Schmidt, G. A., et al. Official Executive Summary of an American Thoracic Society/American College of Chest Physicians Clinical Practice Guideline: Liberation from Mechanical Ventilation in Critically Ill Adults. Am J Respir Crit Care Med. 195, 115-119 (2017).
  38. ATS Committee on Proficiency Standards for Clinical Pulmonary Function Laboratories. ATS statement: guidelines for the six-minute walk test. Am J Respir Crit Care Med. 166, 111-117 (2002).
  39. Shigemura, N., et al. Autologous transplantation of adipose tissue-derived stromal cells ameliorates pulmonary emphysema. Am J Transplant. 6, 2592-2600 (2006).
  40. Bchir, S., et al. Concomitant elevations of MMP-9, NGAL, proMMP-9/NGAL and neutrophil elastase in serum of smokers with chronic obstructive pulmonary disease. J Cell Mol Med. , 1-12 (2016).
  41. Fricker, M., Deane, A., Hansbro, P. M. Animal models of chronic obstructive pulmonary disease. Expert Opin Drug Discov. 9, 629-645 (2014).
  42. Perez-Rial, S., Giron-Martinez, A., Peces-Barba, G. Animal models of chronic obstructive pulmonary disease. Arch Bronconeumol. 51, 121-127 (2015).
  43. Antunes, M. A., et al. Effects of different mesenchymal stromal cell sources and delivery routes in experimental emphysema. Respir Res. 15, 118(2014).
  44. Celli, B. R., MacNee, W., Force, A. E. T. Standards for the diagnosis and treatment of patients with COPD: a summary of the ATS/ERS position paper. Eur Respir J. 23, 932-946 (2004).
  45. U.S. Preventive Services Task Force. Screening for chronic obstructive pulmonary disease using spirometry: U.S. Preventive Services Task Force recommendation statement. Ann Intern Med. 148, 529-534 (2008).
  46. Ward, R. E., et al. Design considerations of CareWindows, a Windows 3.0-based graphical front end to a Medical Information Management System using a pass-through-requester architecture. Proc Annu Symp Comput Appl Med Care. , 564-568 (1991).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

جيل طراز انسداد الشعب الهوائية المزمن في الفئران بالتعرض للأوزون المتكررة
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.