مقالة منهجية

نبات مروج التحليل: تحديد وتوصيف للعقيدات الجذرية المروج محددة في الفول المشتركة

DOI:

10.3791/56140

⸱

ديسمبر 23, 2017

 ,  ,  ,  , 
1Ciencias Agrogenómicas, Escuela Nacional de Estudios Superiores Unidad León- Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM), 2Instituto de Biología, Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM), Ciudad Universitaria, Coyoacan

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مروج تعبير تحاليل ضرورية لتحسين فهم تنظيم الجينات والتعبير الزمانية المكانية للجينات المستهدفة. وهنا نقدم بروتوكول لتحديد وعزل واستنساخ مروج نبات. علاوة على ذلك، يصف لنا وصف المروج العقيدات على حدة في جذور شعر الحبة المشتركة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تسلسل المراحل الأولى من الجينات ترميز تسلسلات توصف بأنها متواليات المروج. دراسة أنماط التعبير من المروجين هامة جداً في فهم تنظيم الجينات وأنماط التعبير الزمانية المكانية للجينات المستهدفة. من ناحية أخرى، من المهم أيضا إنشاء مروج تقييم أدوات وتقنيات تحويل الوراثية التي سريعة وفعالة، واستنساخه. في هذه الدراسة، ونحن التحقيق في نمط التعبير الزمانية المكانية مروج إنشائها (نين) رهيزوبيال الخاصة بالتكافل العقيدات فاصولياء الشائع في جذور شعر المحورة وراثيا. استخدام قواعد بيانات الجينوم المصنع وأدوات التحليل التي حددناها، معزولة، واستنساخ المروج الشائع P. نين في انصهار النسخي لمراسل تشيميريك β-glucuronidase (غوس) غوس-enhanced::GFP. علاوة على ذلك، يصف هذا البروتوكول نظام التحول الوراثي في P. الشائع استخدام جذور شعر rhizogenes المتبعة التي يسببها السريع وتنوعاً. هذا النظام يولد جذور شعر سم إيه تو في 10 إلى 12 يوما بعد التحول. بعد ذلك، قمنا بتقييم التعبير الزمانية المكانية للمروج نين في جذور شعر طعمت على فترات دورية للتطعيم بعد. وتبين النتائج لدينا يصور بنشاط غوس أن المروج نين نشطة أثناء عملية نودوليشن. معا، على هذا البروتوكول يوضح كيفية تحديد وعزل واستنساخ وتميز مروج نبات في جذور شعر الحبة المشتركة. علاوة على ذلك، من السهل استخدام هذا البروتوكول في المختبرات غير المتخصصة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مروجي هي أدوات هامة البيولوجية الجزيئية التي تلعب دوراً حاسما في فهم تنظيم الجينات للفائدة. المروجين تسلسل الحمض النووي الموجود في أعلى النهر من الترجمة تسلسل بدء كودون من الجينات وأنها تحمل المعلومات التنظيمية المركزية للجينات؛ ولذلك، وصف وشرح الصحيح أمر حيوي لفهم وظيفة الجينات. اعتماداً على أنماط التعبير، تصنف المروجين المصنع التأسيسي، والأنسجة على حدة، أو الخاصة بالتنمية-المرحلة وإيندوسيبلي1. أوجه التقدم في تكنولوجيات ترانسكريبتوميك وإدخال تحسينات على النمذجة الكمبيوتر وتوفر إعداد متزايدة من تسلسل الجينوم للأنواع النباتية المختلفة قد يسرت التنبؤ على نطاق واسع بتسلسل المروج2.

من ناحية أخرى، ....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1-تحديد والعزلة، والاستنساخ من الشائع ص نين المروج

  1. تحديد تسلسل المروج للجينات للفائدة. هناك عدة قواعد بيانات الجينوم وأدوات التحليل المتاحة للنباتات مثل فيتوزومي، ونباتات انسيمبل، نكبي، إلخ بالبقول المروج الشائع ص نين (بفنين؛ واستخدمت في هذه الدراسة20Phvul.009G115800).
  2. يستخدم التصميم أوليجوس للعبارة أو التقليدية تقييد إنزيم الاستنساخ بالاعتماد على نظام مكافحة ناقلات (الشكل 1A).
    ملاحظة: معيار (25-35 شركة بريتيش بتروليوم)، كبسولة تفجير ديسالتيد العمل غرامة. ينصح متواليات اليغو عكس ذلك الجناح بين المروج والجينات.
  3. تضخيم المنطقة مروج بفنين (أو منطقة المروج من....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

والهدف من هذه الدراسة تقييم نمط التعبير الزمانية المكانية للعقيدات على حدة نين P. الشائع . للقيام بذلك، اختير 700 شركة بريتيش بتروليوم منطقة المنبع كودون الشروع في ترجمة الجين نين وصممت مجموعة من أوليجوس كما هو مبين في الشكل 1 ألف. استخدام بوليميريز عالية الدقة، يفتت المروج نين تم تضخيمها ومعزولة (الشكل 1B) والمستنسخة في pBGWFS7.0 ناقل ثنائي الوجهة (الشكل 1) من خلال نهج بوابة لتوليد.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أثناء التحليل الوظيفي للجينات، دراسة أنماط التعبير الجيني يلعب دوراً حاسما في فهم التنظيم المكاني والزماني للجينات في الجسم الحي. طريقة معروفة لدراسة أنماط التعبير الجيني لاستنساخ منطقة المروج الجين موضع الاهتمام، المنبع لمراسل الجينات مثل الجينات علامة نيون (التجارة والنقل، وطلب تقديم العروض، إلخ) أو β-جلوكورونيداسي. وهنا، اخترنا منطقة مروج الجذر العقيدات التكافل (RNS) جين معين، نين، دراسة أنماط التعبير الزمانية في P. الشائع خلال RNS. وقد تم استنساخ التسلسل المحدد المروج المنبع للصحفيين GFP::G.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيده هذا العمل جزئيا ديل المديرية العامة للشؤون التاريخ الشخصي، دجابا/بابيت-جامعة المكسيك الوطنية المستقلة (منحة لا. IN219916 M.L و IA205117 إلى م-ك. A) و y Consejo ناسيونال دي العلوم Tecnològia (منحة المجلس الوطني رقم 240614 لحركة التحرير).

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
<قوي>بادئات لمقايسة qRT-PCR
pNIN إلى الأمامCACC ATA GCT CCC CAA AAT GGT AT pNIN
عكسيCAT CTT CCT TCC ACT AAC TAA C M13
إلى الأمامGTA AAA CGA CGG CCA G
M13 عكسيCAG GAA ACA GCT ATG AC
strong>name< strong><قوي>الشركة رقم الكتالوجتعليقات
RECODES
pENTR/D-TOPO طقم استنساخInvitrogenK243520
Gateway LR Clonase II Enzyme Mix Invitrogen11791100
pBGWFS7.0 بيولوجيا الأنظمة النباتيةhttps://gateway.psb.ugent.be/vector/show/pBGWFS7/search/index/
بلاتينيوم تاك الحمض النووي بوليميرازثيرموفيشر 10966018
DNeasy Plant Mini KitQiagen69104
PureLink Quick GelExtraction Kit ThermoFisher ScientificK210012
Platinum Pfx DNA PolymeraseInvitrogen11708013
البيولوجيا الجزيئية المعتمدة AgaroseBio-Rad1613102
طلقة واحدة TOP10 بكتريا قولونيةمؤهلةC404006
NaClسيجما ألدريتشS7653
التربتونسيجما-ألدريتشT7293-250G
مستخلص الخميرةسيجما ألدريتشY1625-250G
أجار البكتريولوجيةسيجما ألدريتشA5306-1KG
كبريتات كاناميسينسيجما ألدريتش60615-25G
كبريتات سبيكتينومايسينسيجما ألدريتشPHR1441
الكحول الإيثيليسيجما ألدريتشE7023
الببتون البكتريولوجيسيجما ألدريتشP0556
كلوريدالكالسيومSigma-AldrichC1016
حمض NalidixicSigma-AldrichN8878
كبريتات المغنيسيومSigma-AldrichM7506
محلول تحميل الجلSigma-AldrichG7654
NameCompanyCatalog NumberComments< / قوي >
< قوي > المعدات < / قوي >
ThermocyclerVeriti Thermal Cycler4375786
جهاز طرد مركزيسيجماسيجما سيجما 1-14 كيلو
وحدة توثيق جلCarestreamGel Logic 212 PRO
MaxQ SHKE6000 6000 حاضنة اهتزاز - 115VACحراري علميEW-51708-70
غرفة نمو النباتMRCPGI-550RH
Horizantal Laminarair تدفق كابينةLumistellLH-120
مجهر الفلورسنتLeicaDM4500 B
مختبرات Petridish sym laboratorios90X15
Scalpel BladeFisher Scientific53223
Falcon 15 مل جهاز طرد مركزي مخروطي أنابيبفيشر العلمية14-959-53A
22 مل أنابيب زجاجيةتوماس العلمية45048-16150
< كيميائيا

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hernández-Garcia, C. M., Finer, J. J. Identification and validation of promoters and cis-actingregulatory elements. Plant Science. 217-218, 109-119 (2014).
  2. Dhanapal, A. P., Govindaraj, M.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

NIN Agrobacterium Rhizogenes GUS Phaseolus Vulgaris

مقالات ذات صلة