Method Article

إعداد المستندة إلى الشيتوزان الهلاميات المائية القابلة للحقن وتطبيقه في ثقافة الخلية 3D

DOI:

10.3791/56253

⸱

September 29th, 2017

 ,  ,  , 
1The Key Laboratory of Bioorganic Phosphorus Chemistry & Chemical Biology (Ministry of Education), Department of Chemistry, Tsinghua University, 2Institute of Chemical Materials, China Academy of Engineering Physics

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هنا يصف لنا إعداد المستندة إلى الشيتوزان الحقن الهلاميات المائية باستخدام الكيمياء الحيوية ايمين السطحية. وترد أساليب لضبط القوة الميكانيكية المائية وتطبيقه في ثقافة الخلية 3D.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويقدم البروتوكول بطريقة سهلة وفعالة، وتنوعاً لتحضير الهلاميات المائية المستندة إلى الشيتوزان باستخدام الكيمياء الحيوية ايمين. المائية تعدها خلط حلول الشيتوزان جليكول مع جيلاتور بوليمر المركب benzaldehyde إنهاء، والهلاميات المائية يتم الحصول على كفاءة في عدة دقائق في درجة حرارة الغرفة. بنسب متفاوتة بين الشيتوزان غليكول، جيلاتور البوليمر، ومحتويات المياه، يتم الحصول على الهلاميات المائية تنوعاً مع أوقات مختلفة جيليشن وصلابة. عند تلف، يمكن استعادة المائية المظاهر ومعامل التحويل، نظراً لإمكانية الرجوع للسندات ايمين الديناميكية كروسلينكاجيس. تتيح هذه الخاصية الذاتية هيالابل المائية لأن الحقن يمكن أن تلتئم ذاتيا من القطع تقلص إلى المائية الأكبر لا يتجزأ بعد عملية الحقن. المائية أيضا متعددة تستجيب للعديد من المحفزات الحيوية النشطة بسبب حالات الموازنة المختلفة للسندات ايمين الديناميكية. وتم تأكيد هذا المائية الحيوية المتوافقة، وخلايا تنتجها الخلايا الليفية الماوس L929 كانت جزءا لا يتجزأ من الإجراءات القياسية التالية وقيمت تكاثر الخلايا بسهولة قبل عملية زراعة خلية 3D. المائية يمكن أن تقدم منهاج البحثية المختلفة حيث يتم استفادت من تقليد فسيولوجية لبيئة ثلاثية الأبعاد للخلايا القابلة لتعديل. جنبا إلى جنب مع خصائصه القابلة للحقن الذاتي هيالابل واستجابة متعددة، يمكن تطبيق الهلاميات المائية يحتمل أن تكون كشركات متعددة للأدوية والخلايا في التطبيقات الطبية الحيوية المستقبلية.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الهلاميات المائية مواد البوليمر كروسلينكيد مع كميات كبيرة من المياه وخواصها الميكانيكية لينة، وأنها قد استخدمت في العديد من التطبيقات الطبية الحيوية1،2. الهلاميات المائية يمكن أن توفر بيئة لينة ورطبة، ومشابهة جداً لمحيط الفسيولوجية للخلايا في الجسم الحي. ولذلك، أصبحت الهلاميات المائية واحدة من السقالات الأكثر شعبية لخلية 3D الثقافة3،4. مقارنة 2D بيتري طبق خلية ثقافة، ثقافة الخلية 3D متقدمة بسرعة إلى عرض مصفوفة خارج الخلية (ECM) يحاكي المكروية للخلايا للاتصال وتجميع ل أغراض الانتشار والتفرقة5. بالإضافة إلى ذلك، يمكن أن توفر الهلاميات المائية التي تتضمن البوليمرات الطبيعية المتوافقة مع الحيوية وتعزيز البيئات للخلايا تتكاثر والتفريق بين3. الهلاميات المائية المستمدة من البوليمرات الاصطناعية المفضلة لمكوناتها بسيطة وواضحة، مما يستبعد التأثيرات المعقدة مثل البروتينات الحيوانية المنشأ أو الفيروسات. بين جميع المرشحين المائية لاستزراع خلية ثلاثية الأبعاد، دائماً الهلاميات المائية التي يتم إعدادها بسهولة وتحتوي على خاصية متسقة المفضل. مرفق لضبط الخصائص المائية لتناسب الاحتياجات البحثية المختلفة بأهمية جيدا6.

نقدم لك هنا إعداد السطحية المائية المستندة إلى الشيتوزان غليكول استخدام الكيمياء ايمين الحيوي، الذي يصبح منبرا متعدد الاستخدامات المائية للخلية 3D الثقافة7. في هذا الأسلوب، تستخدم الشيتوزان غليكول الحيوية المتوافقة المعروفة جيدا وضع أطر للشبكات المائية. هي رد فعل أفرقتها الأمينية مع غليكول البولي إثيلين benzaldehyde إنهاء جيلاتور البوليمر شكل سندات ايمين الديناميكية كروسلينكاجيس من الهلاميات المائية8. يمكن أن تشكل سندات ايمين دينامية وتتحلل عكسية ومستجيب للبيئة المحيطة، تزويد الهلاميات المائية مع قابل للتعديل آليا كروسلينكيد الشبكات9،،من1011. نظراً لارتفاع المياه محتوياته، والمواد الحيوية المتوافقة، والقوة الميكانيكية للتعديل، تطبيق المائية بنجاح سقالة للخلايا L929 في الخلية 3D الثقافة12،13. البروتوكول هنا تفاصيل الإجراءات، بما في ذلك البوليمر جيلاتور التوليف وإعداد المائية، تضمين الخلية، واستزراع خلية ثلاثية الأبعاد.

المائية يظهر أيضا العديد من الميزات الأخرى بسبب لها كروسلينكاجيس ايمين الحيوية، بما في ذلك ما متعددة استجابة لمختلف المحفزات الحيوية (حمض/الرقم الهيدروجيني، بيريدكسال مشتقات فيتامين B6، غراء البروتين، إلخ)، مما يشير إلى أن المائية يمكن أن تكون التي يسببها لتتحلل تحت الظروف الفسيولوجية8. المائية أيضا هيالابل الذاتية والحقن، مما يعني المائية يمكن أن تدار عن طريق أسلوب حقن الغازية الحد أدنى وكسب ميزة في المخدرات وخلية تسليم14،15. بإضافة إضافات وظيفية أو جيلاتورس البوليمر محددة مسبقاً، المائية متوافق للحصول على خصائص محددة مثل المغناطيسية، درجة الحرارة، درجة الحموضة مستجيبة، إلخ16،17، الذي يمكن أن يفي الحصول على مجموعة واسعة من الاحتياجات من البحوث. وتكشف هذه الخصائص المائية القدرات الكامنة لتكون حقن عدة شركات للأدوية، والخلايا في المختبر و في فيفو البحوث الطبية الحيوية والتطبيقات.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تنبيه: الرجاء مراجعة صحائف بيانات السلامة المادية ذات الصلة (MSDS) قبل الاستخدام. الرجاء استخدام ممارسات السلامة المناسبة عند إجراء تجارب الكيمياء، بما في ذلك استخدام غطاء الدخان ومعدات الحماية الشخصية (سلامة النظارات، وقفازات واقية، ومعطف مختبر، إلخ). يتطلب البروتوكول قياسي خلية معالجة تقنيات (تعقيم، استرداد خلية، خلية باساجينج، تجميد الخلايا، وتلطيخ الخلايا، إلخ).

1-"إعداد الهلاميات المائية"

  1. إنهاء توليف بينزالديهيدي di فونكتيوناليزيد البولي إيثيلين غليكول (الوتد مدافع)
    1. جفاف قبل "ربط" البوليمر
      1. تزن ز 4.00 شماعة (4,000 ميغاواط، ملمول 1.00)، تحويلها إلى قاع جولة قارورة (250 مل)، وإضافة التولوين (100 مل)-
        ملاحظة: يمكن العمل من أجل تشكيل المائية أوتاد الأخرى مع الأوزان الجزيئية مختلفة لكن سوف يؤدي إلى صلابة مختلفة.
      2. الحرارة الحل ببندقية حرارة (أو لوحة الساخن حوالي 40 درجة مئوية) أقل ما يقال للمساعدة في حل جميع البوليمرات. بعد حل كافة البوليمرات، استخدام مبخر إزالة جميع المذيبات. كرر عملية جافة وحل هذا مرتين لجعل شماعة المجففة البوليمرات.
        تنبيه: وهذا ينبغي أن يجري في غطاء دخان بعناية فائقة. تولوين الاشتعال.
    2. بينزالديهيدي إنهاء رد فعل شماعة
      1. إضافة محرض المغناطيسية ورباعي هيدرو الفوران (THF، 100 مل) إلى قارورة وحل استخدام محرض شماعة. إضافة 4-كاربوكسيبينزالديهيدي (ز 0.90، 6.0 ملمول) و 4-ديميثيلامينوبيريديني (ز 0.07، 0.6 ميللي مول) تسلسلياً للحلول لحل جميع المواد الصلبة تماما.
      2. إضافة ن، ن '-ديسيكلوهيكسيلكاربودييميدي (DCC، ز 1.25، 6.0 ملمول) إلى الحل، وإضافة أنبوب تجفيف مليئة كاكل اللامائى 2 إلى قارورة. يبقى رد الفعل تحت التحريك في درجة حرارة الغرفة (~ 20 درجة مئوية) لحوالي 12 h.
    3. رد فعل بعد انتهاء عملية
      1. بتصفية المواد الصلبة البيضاء التي تم إنشاؤها في الحل بالفراغ بعد الانتهاء من رد فعل. صب الحل في البرد إثيل الاثير (500 مل) تحت إثارة يعجل بالمواد الصلبة البيضاء. جمع جميع المواد الصلبة البيضاء بواسطة عامل تصفية والجاف للمواد الصلبة في غطاء دخان.
      2. تذوب المواد الصلبة البيضاء إلى THF مرة أخرى وتصفية أي مادة صلبة بيضاء غير قابلة للذوبان وصب الحل الطازجة الباردة إثيل الاثير يعجل بالمواد الصلبة البيضاء والجافة. كرر هذه العملية مرتين إلى ثلاث مرات، ومن ثم وضع مادة صلبة بيضاء في فرن التجفيف الفراغ (20 درجة مئوية، 0.1 [مبر]) تجفيفها تماما. جمع مسحوق أبيض كالمنتج النهائي: benzaldehyde أنهى مدافع الوتد.
  2. إعداد الهلاميات المائية
    1. وزن كميات مختلفة من الوتد مدافع (0.11 ز، ملمول 0.028 ز 0.22، ملمول 0.055؛ 0.44 ز، ملمول 0.110) في أنبوب (10 مل) وإضافة المياه (5.0 مل)، واستخدام دوامة أو محرض المغناطيسي لمساعدة حل البوليمر.
    2. حل الشيتوزان غليكول (0.495 ز، 6.18 × 10 -3 ملمول) في المياه (15.0 mL) في أنبوب (50 مل)، واستخدام دوامة لبضع دقائق لمجانسة الشيتوزان الحل (3 wt %).
    3. إضافة الحل الشيتوزان غليكول (0.2 مل، 3% بالوزن) وحلول الوتد مدافع (0.2 مل) التتابع في أنبوب (2.0 mL). استخدام دوامة لخلط الحلول البلوتينيوم للنموذج الهلاميات المائية في عدة دقائق. اتبع النسب الواردة في الجدول 1 لجعل الهلاميات المائية من مختلف نقاط القوة الميكانيكية-
      ملاحظة: استخدم الأسلوب عكس أنبوب لتحديد ما إذا كانت المائية قد شكلت بالفعل-
  3. تحليلات ريولوجيا
    1. الاضطلاع بتحليلات ريولوجيا في رهيوميتير تناوب مع صفيحة فولاذية متوازية (القطر: 20 مم). لاختبار جيليشن، نشر الحل الشيتوزان غليكول (0.2 مل، 3% بالوزن) على لوحة أقل. ثم إضافة المحاليل الوتد مدافع (0.2 مل، 2% بالوزن) دروبويسي بالتساوي على سطح حل الشيتوزان وخلط مع ماصة بسرعة. انخفاض أسفل اللوحة العلوية والبدء في test.
    2. للمائية ' اختبار صلابة s، قطع المائية في دائرة (القطر: 20 مم) وقياس معامل التخزين (غ ') القيم مقابل تحليلات التردد في سلالة 1%. ز النموذجية ' القيم في راد 6.3 s − 1 وترد في الجدول 1.
      ملاحظة: الاضطلاع بتحليلات ريولوجيا هيدروجيل ح 0.5 بعد تشكيل المائية لضمان استقرار السندات دينامية المائية.
    3. للمائية ' s هيالابل الذاتي خاصية اختبار، قطع المائية لقطع وجمع القطع معا للاعطاب إلى جزء لا يتجزأ. ثم قص قطعة المائية جعل دائرة (القطر: 20 مم) ووضعه على رهيوميتير إجراء التحليل ريولوجيا.

2-3D "زراعة الخلية" في الهلاميات المائية

  1. إعداد الحلول جيليشن المائية
    1. "تزن ربط مدافع" (ز 0.44، 0.11 ميللي مول) في أنبوب عقيم (مل 4.0)، إضافة في خلية ثقافة وسائل الإعلام (ربمي-1640، 2.0 مل)، واستخدام دوامة أو محرض للمساعدة على حل البوليمر للحصول على الحل البوليمر (20% بالوزن). تحميل الحل في حقنه (10.0 mL) وتعقيم ثم أنها بتمريره من خلال مرشح بكتيريا متذكر ميكرون (0.22 ميكرومتر).
    2. تزن الشيتوزان غليكول (0.165 غ، 2.06 × 10 -3 ملمول) في أنبوب عقيم (15.0 مل)، وإضافة في خلية ثقافة وسائل الإعلام (ربمي-1640، مل 4.0)، ودوامه للمساعدة على حل البوليمر للحصول على الحل الشيتوزان غليكول (4.0 wt %). تحميل الحل في حقنه (10.0 mL) وتصفيته مع عامل تصفية بكتيريا متذكر 0.22 ميكرومتر.
  2. زراعة الخلية في الهلاميات المائية
    تنبيه: أداء كل خلية الإجراءات ذات الصلة في غطاء زراعة الأنسجة. ومن المتوقع معرفة أساسية بأسلوب تعقيم. طبق FBS، البنسلين 5% (10 مل) في بيتري المتوسطة
    1. إعداد تعليق خلية
      1. الخلايا L929 الثقافة في RPMI 1640 تستكمل مع 10% (قطرها 10 سم)، واحتضان في 37 درجة مئوية، وأول أكسيد الكربون 5% 2. تغيير في المتوسط كل يوم قبل الاستخدام.
      2. حصاد الخلايا L929 مع برنامج تلفزيوني يتضمن التربسين (0.025% w/v) ويدتا (0.01% w/v)، ثم الطرد المركزي (70 x غ، 5 دقيقة) وتعليق إعادة الخلايا في المتوسط RPMI 1640 (1.0 مل). إجراء العد الخلية استخدام العملية القياسية للمجلس عد الدم. تعليق إعادة الخلايا لضبط تركيز الخلية إلى ~ 3.75 × 10 6 خلايا/مل.
    2. تغليف خلية في الهلاميات المائية
      1. مزيج تعليق خلية L929 (0.4 مل، 3.75 × 10 6 خلايا مل -1) مع غليكول الشيتوزان الحل (0.4 mL) في أنبوب (4.0 مل) من دوامة. "الماصة؛" الحل الشيتوزان L929/غليكول (0.8 مل) في وسط صحن بتري [كنفوكل] (قطرها 2.0 سم). "الماصة؛" الحلول الوتد مدافع (0.2 مل) في الطبق نفسه، و "الماصة؛" بلطف مزيج الحل والحث على تشكيل المائية-
        ملاحظة: تقييم تشكيل هيدروجيل عن إمالة الطبق بيتري.
      2. للثقافة الخلية مباشرة، وإضافة كميات إضافية من RPMI 1640 ثقافة وسائل الإعلام (1.0 مل) على رأس المائية. وضع في الخلية المدمجة الهلاميات المائية (1.0 mL، 1.5 wt % الشيتوزان غليكول، 4.0 wt % الوتد مدافع، 1.5 × 10 6 خلايا مل -1) في حاضنة (37 درجة مئوية، 5% CO 2) وتغيير في المتوسط كل يوم. الاستعداد لتصوير الخلية في اليوم 1، 3، 5، و 7 بعد تغليف الخلية.
    3. لثقافة ما بعد خلية ثلاثية الأبعاد في الهلاميات المائية بعد الحقن، تعد الخلية تحميل المائية (1.0 مل، راجع الخطوة 2.2.2) في حقنه (10.0 مل، إبرة ز 48). بعد النماذج المائية، حقن المائية بطء في طبق بتري لتصوير [كنفوكل]. إضافة مبلغاً إضافيا قدرة وسائط الثقافة (1.0 مل) على رأس المائية وتغييره كل يوم. وضع طبق بتري في حاضنة (37 درجة مئوية، 5% CO 2) والتحضير للتصوير بعد ذلك.
      تنبيه: الرجاء التحقق ومتابعة سلامة تشغيل البروتوكول لحقنه.
  3. خلية تحليل الجدوى
    1. المراقبة [كنفوكل]
      1. شطف الهلاميات المائية مع برنامج تلفزيوني (1.0 مل) لمرتين. وصمة عار في الهلاميات المائية مع اسيتات فلوريسسين (إدارة الأغذية والعقاقير، ومل 0.5، 0.05 مغ/مل) وحلول بروبيديوم يوديد (PI، 0.5 مل، 0.08 ملغ/مل) لمدة 15 دقيقة. بعد تلطيخ، إزالة جميع المذيبات.
      2. مراقبة الهلاميات المائية استخدام مجهر [كنفوكل] تحت موجات الإثارة من 488 شمال البحر الأبيض المتوسط وشمال البحر الأبيض المتوسط لتصور لايف 543 والميت الخلايا، على التوالي. تأخذ z-أكوام من خلال كل عمق 2 ميكرومتر الهلاميات المائية للتحقق من صحة توزيع حتى للخلايا في جميع أنحاء-
        ملاحظة: إدارة الأغذية والعقاقير البقع خلايا حية بينما PI البقع الخلايا الميتة.
    2. تتحلل المائية (1.0 مل) مع حمض الخليك (HAc، v % 3، 1، 0 مل) لمدة 5 دقائق وماصة في أنبوب (مل 4.0). جمع الخلايا بالطرد المركزي (70 x غ، 5 دقيقة) وتعليق إعادة الخلايا في RPMI 1640 خلية الثقافة المتوسطة (1.0 مل). إجراء عد الخلايا باستخدام دم عد المجلس.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يتم تقديم عرض تخطيطي لهذا البروتوكول بشأن إعداد المائية واستخدامها كثقافة خلية ثلاثية الأبعاد في الشكل 1. موجز للمعلومات المائية محتويات ونسب إعدادها مع القوة الميكانيكية المختلفة في الجدول 1. المائية ذاتية هيالابلي ويعرض الممتلكات ريولوجيا صلابة المائية بمعامل التخزين مقابل الاختبار التردد في الشكل 2. ويعرض الصور [كنفوكل] الخلية وأرقام الخلية مع الأيام الثقافة في الهلاميات المائية في الشكل 3، يؤكد بقاء الخلية وتكاث...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المائية عرضت في هذا البروتوكول (الشكل 1)، عنصرين رئيسيين هما: الشيتوزان غليكول البوليمر الطبيعي وبينزالديهيدي اصطناعية أنهى البوليمر جيلاتور الوتد مدافع، التي هي على حد سواء المواد متوافق حيويا. ويرد توليف الوتد مدافع استخدام فعل تعديل خطوة واحدة. واختير شماعة الوزن الجزيئي 4,000 في هذا البروتوكول في المخاوف من الذوبان، وتعديل الكفاءة، فضلا عن صلابة المائية. تم إعداد سلسلة من الهلاميات المائية مع القوة الميكانيكية المختلفة باستخدام محتويات صلبة مختلفة ونسب الشيتوزان غليكول والوتد مدافع. تم ت...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأيد هذا البحث "الوطني العلم مؤسسة في الصين" (21474057 و 21604076).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
جليكول شيتوزانواكو للصناعات الكيماوية النقية39280-86-990٪ درجة نزع الأسيتيل
4-كربوكسي بنزالديهايدشنغهاي علاء الدين   ؛ Bio-Chem Technology Co.,LTD619-66-999٪
N, N'-dicyclohexylcarbodiimideShanghai Aladdin  Bio-Chem Technology Co.، LTD538-75-099٪
كلوريد الكالسيوم اللامائيشنغهاي علاء الدين   ؛ Bio-Chem Technology Co.، LTD10043-52-496٪
4-dimethylamiopryidineشنغهاي علاء الدين   ؛ Bio-Chem Technology Co.، LTD1122-5899٪
البولي إيثيلين جليكولالكاشف الكيميائي الصينيفارم 5254-43-799٪
Tetrahydrofuranكاشف كيميائي Sino-pharm109-99-999٪
التولوينسينو فارم الكاشف الكيميائي108-88-399٪
إيثيل إيثركاشف كيميائي سينو60-29-799٪
حمض الخليكالكاشف الكيميائي سينو فارم64-19-799٪
الكاشف الكيميائي CaCl2 اللامائيSino-pharm10043-52-499٪
ثنائي الأسيتات الفلوريسئينSigma596-09-899٪
يوديد البروبيديوم   ؛سيجما25535-16-494٪
RPMI-1640 وسائط الثقافةجيبكو
مصل الأبقار الجنينيجيبكو
التربسين-EDTAجيبكو0.25٪
PBSSolarbio0.01 M
محلول الستربتومايسين البنسلينHyclone10،000 U / mL
مقياس الريومترTAAR-G2
مجهر متحد البؤرZeiss710-3channel
L929 الخلاياATCCNCTC استنساخ 929 ؛ خلية L ، L929 ، مشتق من المبخر سلالة
L EYELAN-1100
48 إبرة قياسShanghaiZhiyu Medical Material Co.، LTD48-guage
المجهرLeicaDM3000 B
المجهر البرمجياتImaris
مسدس حراريConfuKF-5843   ؛
طبق بتريNEST
فارم

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hoffman, A. S. Hydrogels for biomedical applications. Adv. Drug. Deliver. Rev. 64, 18-23 (2012).
  2. Seliktar, D. Designing cell-compatible hydrogels for biomedical applications. Science. 336 (6085), 1124-1128 (2012).
  3. Tibbitt, M. W., Anseth, K. S. Hydrogels as extracellular matrix mimics for 3D cell culture. Biotechnol. Bioeng. 103 (4), 655-663 (2009).
  4. Sawicki, L. A., Kloxin, A. M. Light-mediated Formation and Patterning of Hydrogels for Cell Culture Applications. J. Vis. Exp. (115), (2016).
  5. Haycock, J. W. 3D cell culture: a review of current approaches and techniques. 3D Cell Culture: Methods and Protocols. , 1-15 (2011).
  6. Breslin, S., O’Driscoll, L. Three-dimensional cell culture: the missing link in drug discovery. Drug. Discov. Today. 18 (5), 240-249 (2013).
  7. Yang, B., et al. Facilely prepared inexpensive and biocompatible self-healing hydrogel: a new injectable cell therapy carrier. Polym. Chem. 3 (12), 3235-3238 (2012).
  8. Zhang, Y., Tao, L., Li, S., Wei, Y. Synthesis of multiresponsive and dynamic chitosan-based hydrogels for controlled release of bioactive molecules. Biomacromolecules. 12 (8), 2894-2901 (2011).
  9. Cao, L., et al. An injectable hydrogel formed by in situ cross-linking of glycol chitosan and multi-benzaldehyde functionalized PEG analogues for cartilage tissue engineering. J. Mater. Chem. B. 3 (7), 1268-1280 (2015).
  10. Ding, F., et al. A dynamic and self-crosslinked polysaccharide hydrogel with autonomous self-healing ability. Soft Matter. 11 (20), 3971-3976 (2015).
  11. Wei, Z., et al. Self-healing gels based on constitutional dynamic chemistry and their potential applications. Chem. Soc. Rev. 43 (23), 8114-8131 (2014).
  12. Li, Y., et al. Modulus-regulated 3D-cell proliferation in an injectable self-healing hydrogel. Colloid. Surface. B. 149, 168-173 (2017).
  13. Tseng, T. C., et al. An Injectable, Self‐Healing Hydrogel to Repair the Central Nervous System. Adv. Mater. 27 (23), 3518-3524 (2015).
  14. Yu, L., Ding, J. Injectable hydrogels as unique biomedical materials. Chem. Soc. Rev. 37 (8), 1473-1481 (2008).
  15. Yang, L., et al. Improving Tumor Chemotherapy Effect by Using an Injectable Self-healing Hydrogel as Drug Carrier. Polym. Chem. , (2017).
  16. Zhang, Y., et al. A magnetic self-healing hydrogel. Chem. Commun. 48 (74), 9305-9307 (2012).
  17. Zhang, Y., et al. Synthesis of an injectable, self-healable and dual responsive hydrogel for drug delivery and 3D cell cultivation. Polym. Chem. 8 (3), 537-534 (2017).
  18. Yang, C., Tibbitt, M. W., Basta, L., Anseth, K. S. Mechanical memory and dosing influence stem cell fate. Nat. Mater. 13 (6), 645-652 (2014).
  19. Geerligs, M., Peters, G. W., Ackermans, P. A., Oomens, C. W., Baaijens, F. Linear viscoelastic behavior of subcutaneous adipose tissue. Biorheology. 45 (6), 677-688 (2008).
  20. Banerjee, A., et al. The influence of hydrogel modulus on the proliferation and differentiation of encapsulated neural stem cells. Biomaterials. 30 (27), 4695-4699 (2009).
  21. Benoit, D. S., Schwartz, M. P., Durney, A. R., Anseth, K. S. Small functional groups for controlled differentiation of hydrogel-encapsulated human mesenchymal stem cells. Nat. Mater. 7 (10), 816-823 (2008).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Chitosan HydrogelInjectable Hydrogel3D Cell CultureSelf Healing HydrogelDynamic Imine ChemistryConfocal MicroscopyL929 CellsCell ProliferationHydrogel FormationDrug Delivery

Related Articles