في هذه الدراسة، نقدم إجراءات سهلة وفعالة لتقييم اضطراب حاجز الدم في الدماغ تحت ظروف الأعصاب. ولتحقيق هدفنا، نحن غرست عالية الوزن الجزيئي fluorescein isothiocyanate المسمى (فيتك)-الزلال في الماوس حبل الوريد وتقييمها التسرب إلى حمة الدماغ بالفحص المجهري الأسفار.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تقييم نفاذية حاجز الدم في الدماغ بالتسريب الوريدي الزلال المسمى فيتك في نموذج ماوس لأمراض الأعصاب
في هذه المقالة
إشعار تصحيح
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
ملخص
الملخص
الإخلال بسلامة حاجز الدم في الدماغ (BBB) سمة مشتركة لمختلف الأمراض العصبية والأعصاب. على الرغم من أن التفاعل بين القلق BBB التوازن والآلية المرضية لاضطرابات الدماغ يحتاج إلى مزيد من التحقيق، تطوير والتحقق من صحة إجراءات موثوقة لدقة الكشف عن التعديلات BBB قد تكون حاسمة وتمثل أداة مفيدة للتنبؤ باحتمال المرض تستهدف التقدم وتطوير استراتيجيات علاجية.
نقدم هنا، إجراءات سهلة وفعالة لتقييم BBB التسرب في حالة حدوث مثل هذا في نموذج ماوس الإكلينيكية لمرض هنتنغتون، فيها عيوب في نفاذية BBB قابلة للاكتشاف وضوح بريكوسيوسلي في الأعصاب هذا المرض. على وجه التحديد، ارتفاع الوزن الجزيئي fluorescein isothiocyanate المسمى (فيتك)-الزلال، التي قادرة على عبور BBB فقط عندما يكون هذا الأخير البصر، التي غرست حادة في الوريد ماوس وتوزيعها في مناطق الأوعية الدموية أو متني ثم تحددها مجهرية الأسفار.
تراكم الزلال الفلورية الخضراء في حمة الدماغ يعمل كمؤشر الشاذة BBB النفاذية، وعندما كوانتيتاتيد باستخدام برامج معالجة "الصورة ي"، يتم الإعلام عن "كثافة الفلورية الخضراء".
المقدمة
التوازن داخل الجهاز العصبي المركزي (CNS) شرط أساسي للاتصال السليم ووظيفة الخلايا العصبية. حمة الجهاز العصبي المركزي هو محكم أغلقت من الهامش ببطانية حاجز الدم في الدماغ (بي بي بي)، الذي يمثل الواجهة بين مجرى الدم المحيطي والدماغ، وتلعب دوراً محوريا في عبر الحديث بين هاتين المنطقتين1 ،2. BBB معقدة ودينامية بنية ثلاثية الأبعاد تتألف أساسا من السفينة الصغيرة غشائي الخلايا المتخصصة (ECs) مرتبطة ببعضها البعض عن طريق المجمعات هالة بين الخلايا-تقاطعات ضيق (TJs)-وهو محاط بيريسيتيس، العصبية النهايات و astrocyte القدم العمليات1،2.
في ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وافق جميع الإجراءات على الحيوانات إيرككس الحيوانات نيوروميد رعاية المجلس استعراض ومن جانب " Istituto Superiore دي الصحة " (رقم تصريح: 1163/2015-العلاقات العامة)، ووفقا للمبادئ التوجيهية للاتحاد الأوروبي التوجيه 2010 /63/الاتحاد الأوروبي للتجارب على الحيوانات-
1. إعداد الحل الزلال فيتك بالحقن في الوريد
ملاحظة: جميع التجارب كانت الرقابة تتم في بيان الفئران HD R6/2 (11-أسبوع من العمر) وفي سن والمطابقة بين الجنسين البرية من نوع (WT) ليتيرماتيس.
- حل فيتك الزلال مسحوق (انظر الجدول للمواد) في الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) في 10 ملغ/مل.
ملاحظة: لتحقيق أفضل النتائج، وهذا ينبغي إع....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
الخطر السليم ضخ فيتك الزلال في نتائج حبل الوريد في التسرب التتبع الفلورية الخضراء من مجرى الدم إلى بارينتشيماوهين الدماغ BBB6. في ظل الظروف الفسيولوجية، توزيع الزلال الفلورسنت التي غرست مقيد إلى داخل الأوعية الدموية في الدماغ ولا توجد إشارة في حمة ارتشاح المحيطة بها منطقة و/أو الدماغ قابلاً للاكتشاف (الشكل 1A، ميكروجرافس على أعلى). على العكس من ذلك، عندما BBB للخطر في ظل الظروف المرضية العصبية، الزلال فيتك يظهر نمط fluorescence منتشر ع.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الأسلوب الذي يصف لنا هنا أساسا مفيداً للكشف عن التسرب BBB ظروف مرض المخ. الخلل بي بي بي يكتسب اهتماما كسمة مشتركة من اضطرابات عصبية متنوعة4. كنا سابقا هذا النهج لوصف الاختلال المبكر BBB السلامة في طراز ماوس من مرض الأعصاب نادرة مثل HD6.
يأخذ هذا الأسلوب ميزة البساطة النسبية وفعالية الإجراء، الذي يقدم نتائج دقيقة وموثوق بها. أنه يمثل أداة لبحث السريري حساسة للغاية ومفيد للسرعة والفورية ويقدم في تقييم BBB تعطل نوعيا بالتصور البسيط الفلورية الخضراء .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب قد لا يوجد تضارب في الكشف عن
شكر وتقدير
هذا العمل كان يدعمها "مؤسسة نيوروميد" وتموله وزارة الصحة "كورينتي ريشيركا" إلى عين الإيطالية
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| الألبومين والفلوريسين إيزوثيوسيانات conjiugate | SIGMA | A9771-100MG | |
| pAb المضادة لللامينين | Novus Biologicals | NB300-144 | |
| CY3 المضادة للأرانب المصنوعة في الماعز | MILLIPORE | AP132 | |
| SUPERFROST PLUS | غطاء J1800AMNZ | علمي حراري | |
| 24 × 50 مم | حراري علمي (DIAPATH) | 61050 | |
| مركب Kilik Optimal Cutting Temperature (OCT) | Bio Optica | 05-9801 | |
| VECTASHIELD Mounting Media | VECTOR | H-1500 | وسائط التركيب مع DAPI |
| iNSu / الأنسولين الخفيف حقنة يمكن التخلص | منها RAYS Health & INS1ML26G13 | ||
| 30G 1/2 " | BD Microlance | 304000 | إبرة للأنسولين |
| مقبض مشرط | FST91003-12 | ||
| # 22 مشرط يمكن التخلص | FST | 10022-00 | |
| مقص سوسن فاين 10.5 سم | FST | 14094-11 | |
| ملقط دومون # 5745 45 درجة ؛ 0.10 × 0.06 مم | FST | 11251-35 | |
| ملقط Graefe 10 سم | FST | 11051-10 | |
| ملقط دومون # 5 0.1 × 0.06 مم | FST | 11251-20 | |
| التصحيح الطبي | Medicalis | 34788 | |
| ستارة منشفة معقمة يمكن التخلص | Dispotech | TVO50VE | |
| مجهر مجني | نيكون | SMZ 745 T | |
| بصرية LED (C-FLED2) | NIKON | 1003167 | Optical Illuminator ل Microscope Eclipse |
| Ni-U المجهر | نيكون | 932162 | مجهر epifluorescence |
| كاميرا رقمية | نيكون | DS-Ri2 | كاميرا مجهر |
| Intenslight | نيكون | C-HGFI | مجهر |
| مصباح NIS-Elements 64 بت | نيكون | AR 4.40.00 | تحليل البرمجيات |
| الحلاقة الكهربائية | Gemei | GM-3007 |
المراجع
- Obermeier, B., Verma, A., Ransohoff, R. M. The blood-brain barrier. Handb Clin Neurol. 133, 39-59 (2016).
- Serlin, Y., Shelef, I., Knyazer, B., Friedman, A. Anatomy and physiology of the blood-brain barrier. Semin Cell Dev Biol. 38, 2-6 (2015).
- Moretti, R., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
تصحيح
Formal Correction: Erratum: Assessment of Blood-brain Barrier Permeability by Intravenous Infusion of FITC-labeled Albumin in a Mouse Model of Neurodegenerative Disease
Posted by JoVE Editors on 11/10/2017. Citeable Link.
An erratum was issued for: Assessment of Blood-brain Barrier Permeability by Intravenous Infusion of FITC-labeled Albumin in a Mouse Model of Neurodegenerative Disease. One of the author's names was corrected from:
Maglione Vittorio
to:
Vittorio Maglione
استكشف المزيد من المقالات
