يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

مركز الجامعة-جبل وتلطيخ نبات زهرة الأجهزة وسيليكويس

17.3K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/56441

⸱

أبريل 12, 2018

 ,  ,  , 
1Department of Plant and Microbial Biology, Zurich-Basel Plant Science Center, University of Zurich

في هذه المقالة

ملخص

في هذا البروتوكول، نحن تصف التقنيات لتشريح سليم من نبات الزهور وسيليكويس، بعض تقنيات مسح الأساسية، وتحديد تلطيخ إجراءات الملاحظات جبل كل الهياكل الإنجابية.

الملخص

سبب أدواته الهائلة للدراسات الوراثية الجزيئية، أعطيت التمويل واحدة من أبرز الأنواع النموذجية في علم الأحياء النباتية، وخاصة في مصنع بيولوجيا التناسل. إلا أن المصنع مورفولوجية، تشريحية، وتحليلات ultrastructural تقليديا تنطوي التضمين مضيعة للوقت وتمزيقها الإجراءات الميدانية مشرق والمسح الضوئي والميكروسكوب الإلكتروني. التقدم الذي أحرز مؤخرا في الأسفار [كنفوكل] مجهرية وتحليلات مجهرية الدولة من الفن ثلاثي الأبعاد للحاسوب والتحسين المتواصل للتقنيات الجزيئية لاستخدامها على الحد الأدنى من المعالجة جبل كل العينات، قد أدى إلى زيادة طلب على تطوير تقنيات معالجة عينة تتسم بالكفاءة والحد الأدنى. في هذا البروتوكول، يمكننا وصف تقنيات بشكل صحيح تشريح نبات الزهور وسيليكويس، الأساسية تبادل التقنيات، وبعض إجراءات المصبوغة للجامعة-جبل الملاحظات لهياكل الإنجابية.

المقدمة

الزهور هي من بين أهم تعريف الأجهزة من كاسيات البذور. النباتات المزهرة ظهرت قبل حوالي 90 مليون سنة1، وتنوعاً بسرعة أن مظهرها السريع وصفت بأنها "لغزا بغيضة" تشارلز داروين2. وتتنوع مصالح الباحثين المصنع في تنمية الزهور. بعض البحوث قد ركزت على فهم أصل تطوري الزهرة ككل، أو تطور الخصائص التشريحية وهيكلية ووظيفية محددة من الزهور3،،من45،6 . التباين العالي في شكل الأزهار والهيكل، فضلا عن طرق التكاثر الجنسي والتكاثر اللاجنسي الاعتماد عليها، جعل الزهرة بنية معقدة للغاية. وقد أدى هذا إلى جهود متنوعة لوصف السمات الهيكلية والتشريح أجهزة الأزهار، واستخدام تقنيات تقنيين الإلكترون والضوء التي يمكن أن تكون جنبا إلى جنب مع التحقيقات الجينية والجزيئية7. وعلاوة على ذلك، كمصدر للفواكه والبذور والزهور من الأهمية بالنسبة للتغذية البشرية والحيوانية. ولذلك، وصف وضع الزهور والفواكه آثار العديد من البحوث التطبيقية، بما في ذلك الأمن الغذائي سكان بشرية المتزايدة واستراتيجيات الحفاظ على البيئة في إطار بيئة متغيرة8 , 9 , 10.

التنمية الزهرة في نبات يبدأ التعريفي زهرة وتحويل أرض الخضري إلى أرض نورات (مجموعة من الزهور). وتبدأ بريمورديا زهرة جانبياً في الجناح من أرض نورات11. بريمورديا جهاز الأزهار تشكل تدريجيا في جدلات متحدة المركز من الخارج إلى مركز الزهرة، وتتحول في نهاية المطاف إلى كاسية، تلات، والاسدية، وكاربيلس7. هذه الأجهزة الأزهار تحقيق الحماية التغذوية، متميزة، والوظيفية (مثلاً، جذب الملقحات) أدوار في الأنواع النباتية المختلفة، مع الأعضاء الجنسية استدامة تنمية جاميتوفيتيس الذكور والإناث، على التوالي12 , 13. جاميتوفيتيس، بدوره، تميز كل زوج من الذكور (الحيوانات المنوية) والإناث الجاميطات (البويضة والخلية المركزية)، التي توحد عند ضعف الإخصاب لتشكيل الجيل القادم واقحه والسويداء الأولية، دعم الأنسجة الطرفية التنمية الجنين14،15. تطوير الفواكه والبذور دعم نمو ونضج، والمحافظة على الجنين، وفي نهاية المطاف، التشتت. وقد أجريت بحوث مستفيضة لتوصيف وضع الزهور والجنين في الأنواع النباتية المتنوعة، لا سيما في الأنواع النموذجية التي أعطيت7،،من1617.

استندت تحليلات مجهرية المبكر للتنمية زهرة تجهيز العينة مضيعة للوقت ومراقبة تقنيات مثل البارافين أو الراتنج التضمين وتمزيقها، جنبا إلى جنب مع الضوء أو المجهر الإلكتروني. وكثيراً ما استخدمت هذه التقنيات المجهرية التقليدية في تركيبة مع التحقيقات الجينية الجزيئية، مثل تحليلات تقنيين من طفرات، وإضفاء الطابع المحلي على الجيش الملكي النيبالي بالتهجين في الموقع ، أو المناعية-الكشف عن البروتينات. وادي التقدم الذي أحرز مؤخرا في الفحص المجهري الأسفار واسع المجال و [كنفوكل]، في تحليلات للدولة من أحدث صورة الحاسوب ثلاثي الأبعاد، والتحسين المتواصل للأساليب الجزيئية التي يمكن استخدامها في معالجة الحد الأدنى الجامع-جبل العينات، بحاجة إلى نموذج الكفاءة والحد الأدنى من تقنيات المعالجة قابلة تفضيلي للتحليلات الكمية. في السنوات الأخيرة، أحرز تقدم كبير في تطوير تقنيات مسح على عينة حيوانية الجامعة-جبل. أنها تجعل العينة شفافة أما باستخدام الكواشف المستندة اليوريا أو السكر مائي (مثلاً، مقياس، سيدب، مكعب)18،،من1920، أو بشكل انتقائي إزالة الدهون (باستخدام مواد التنظيف الحزب الديمقراطي الصربي) بعد تضمين عينات في الهلاميات المائية مستقرة؛ إزالة الدهون يمكن تحقيقه أما عن طريق نشر السلبي (مثلاً، تعديل الوضوح البروتوكول21،22من الميثاق-بارس-دواليب) أو بنشاط بالتفريد (الأصلي الوضوح البروتوكول23 و24من قانون-المعزوفة). وبتشجيع من هذا التقدم السريع، ظهرت بعض التقنيات المشتقة أيضا للاستخدام في المصانع.

في هذه الورقة أساليب تركز على نموذج نبات، يصف لنا إجراء تشريح سليم براعم الزهور، والزهور، وسيليكويس الشباب، وتطهير الجامعة-جبل عينات لتلطيخ المتنوعة وإجراءات المراقبة باستخدام الكلاسيكية أو أسلوب تطهير القائم على الحزب الديمقراطي الصربي مؤخرا. وترد أمثلة للنشا، كلوس، وتلطيخ الكروماتين. على الرغم من أن قد تحتاج هذه الإجراءات إلى مزيد من التحسينات والتعديلات المدخلة عند استخدامها مع الأنواع الأخرى، ونأمل أنهم سوف يمهد لإجراء المزيد من البحوث حول هذه الأساليب بسيطة ولكن الهامة التي هي نقطة انطلاق للعديد من مشاريع البحوث.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1-زهرة وتثبيت خردلة

  1. سيليكويس من النباتات والزهور الحصاد متزامنة في افتتاح أول زهرة.
    ملاحظة: في ظل الظروف التجريبية المستخدمة هنا، تبدأ النباتات المزهرة حوالي 21 يوما بعد زرع ألواح Murashige سكوغ (مللي ثانية) إلى التربة. بذور هي طبقات لمدة 3 – 4 أيام في 4 درجات مئوية ونامي/نمت على ألواح مرض التصلب العصبي المتعدد في ضوء 22 درجة مئوية/16 ح و 18 درجة مئوية/8 ح الظلام لمدة 8 إلى 10 أيام قبل زراعة الشتلات في التربة الغنية بالمغذيات في الأواني يحتفظ بنفس الشروط (الشكل 1). عدد replicates يعتمد على إجراء بحوث محددة الهدف، ولكن ينصح بالحد ني إينفلوريسسينسيس 5 (من 5 محطات فردية) لكل معاملة. إذا كانت الزهور هي وحدة تجريبية، يوصي بالحد ني زهور 10 كل تكرار.
  2. قطع إينفلوريسسينسيس أو الزهور (الشكل 1E-ح) باستخدام مقص صغير (مثلاً، مقص الأظافر) ووضعها مباشرة في أنبوب ميكروسينتريفوجي (لتثبيت نورات/زهرة واحدة) أو أنبوب مخروطي (لتثبيتات الجماعية) تتضمن حديثا أدلى في كارني، وحمض الخليك/الميثانول، أو نسيجية FPA50 (اعتماداً على التطبيق، انظر أدناه) على الجليد.
    ملاحظة: العينات ينبغي أن يكون تماما غارقة في مثبت.
  3. ترك الأنسجة داخل مثبت على 4 (ح) بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية.
    ملاحظة: تسلل فراغ يمكن أن تستخدم لتسريع اختراق مثبت الأنسجة، ولكن هذا قد يكون ضاراً للحفاظ على بنية الأنسجة. المؤلفين لا تنفذ تسلل الفراغ.
  4. إزالة مثبت وإضافة الإيثانول 70% ما يكفي لتغطية العينات، وإعادتها إلى 4 درجات مئوية على الأقل 24 ساعة؛ عينات البقاء إلى أجل غير مسمى في هذا الحل. بعد إزالة الإيثانول، الشروع فورا في الخطوة التالية؛ أما التشريح، أو إزالة مخزونات النشر الاستراتيجي.

2-التشريح تحت ستيريوميكروسكوبي

  1. وضع طازجة الإيثانول 70% في الزجاج صانع يشاهد توضع على طبق بيتري صغيرة للدعم.
  2. نورات/الزهرة/خردلة في هذا المكان طازجة مثبت وتشريح تحت ستيريوميكروسكوبي استخدام الملقط وحقنه بإبرة.
    1. استخدام الزجاج صانع يشاهد أو الأجهزة المماثلة التي تسمح العينات لتكون مغطاة تماما مع الإيثانول (مستحسن) التشريح إينفلوريسسينسيس، وتمزق الأجهزة الزهور للزهور الناضجة (كاسية تلات ويمكن السداة تكون تشريح في هذه المرحلة ) لتجنب خطر جفاف العينات.
  3. تشريح سيليكويس وبراعم الزهور الصغيرة على شريحة كما هو موضح أدناه.
    1. جانبا زجاج لصانع يشاهد مع العينات المجهزة مسبقاً، واستخدام شريحة عادية للتشريح النهائي.
    2. نقل عينة الفائدة للشريحة وإضافة 10 ميليلتر من جديد 70% إيثانول. العمل بسرعة على التشريح النهائي وإضافة 10 ميليلتر من الإيثانول، إذا لزم الأمر، للحفاظ على العينة رطبة دون السائل المفرط.
    3. للحصول على الإفراج عن حبوب اللقاح من الأسدية، راجع الخطوة 5، 1. لتشريح carpels والبويضات، اتبع الإجراء الموضح في الشكل 2. ينطبق هذا الإجراء على جميع مراحل تنمية الكربلة، بما في ذلك مرحلة تنمية سيليكويس الأخضر.
      ملاحظة: لا تقم بإضافة الإيثانول إذا لم يكن هناك كافية الإيثانول المرحل من نقل العينات؛ تشريح عينات صغيرة جداً أسهل بكثير في كمية صغيرة من السائل. تبقى فقط الأجهزة للفائدة (كاسية أو تلات، الأسدية، كاربيلس، والبويضات، بذور أو حبوب اللقاح) دائماً على الشريحة. وسيكفل هذا الإجراء سماكة موحدة بين الشرائح وساترة، المقابلة لسمك الجهاز قيد الدراسة، مما أدى إلى تجانس أعلى، وهكذا الكفاءة للفحص المجهري (عدد أكبر من العينات المستهدفة في نفس المستوى البؤري).
  4. استخدام قطعة صغيرة من ورق نشاف لامتصاص وإزالة الإيثانول قدر الإمكان. بسرعة المضي قدما إلى الخطوة التالية (القسم 3 أو 4 أو 6) قبل يجفف عينة بها.

3-كلورال هيدرات على أساس المقاصة وتلطيخ المقاصة المجمعة

ملاحظة: يتم الحصول على أفضل النتائج للمقاصة على أساس كلورال هيدرات مع FPA50 الثابتة المادية.

  1. 20 مكان ميليلتر لمسح الحل (كلورال هيدرات/والغليسيرول، تعديل المتوسط في هوير أو 4 في هير ايكي-4 الحلول هير) على الشريحة الحاملة للعينة. استخدام زوج من الحقن بالإبر، وقالت بوضع العينات عند الاقتضاء عن طريق تقليل المسافة بينها، وعكس تلك التي تواجه فيها الجهاز للفائدة إلى الأسفل. قم بإزالة أي فقاعة هواء المتبقية باستخدام الإبرة.
  2. انخفاض ساترة جانبية بلطف وضعه، الضغط بلطف جداً، والانتظار حتى الحل المقاصة يملأ المساحة بين. إضافة حل إزالة الحد الأدنى، إذا لزم الأمر، لملء المساحة الكاملة تحت ساترة.
  3. ضع الشريحة على حامل شرائح واتركه تحت غطاء الدخان. متابعة الملاحظات المجهرية بعد على الأقل 4 ح وخلال 4-5 أيام التالية.

4-الجمع بين ألكسندر تلطيخ وتطهير هير في 4 أنثيرس

ملاحظة: يستند الأصلي للبروتوكول ألكسندر الإفراج عن حبوب اللقاح على الشريحة قبل التلوين. كفاءة وأكثر إفادة، تعديل ألكسندر تلطيخ والتخليص الداخلي هو تلطيخ من حبوب اللقاح الناضجة داخل anthers ناضجة ولكن غير ديهيسسينت.

  1. اختر براعم الزهور الطازجة المحصودة التي على وشك فتح مع أنثيرس غير ديهيسسينت.
    ملاحظة: لا تأخذ الشابة زهرة براعم لأن ألكسندر تلطيخ المقصود لحبوب اللقاح الناضجة وعدم كفاءة وصمة حبوب اللقاح غير ناضجة. ويوصي بحد أدنى زهور 5 كل معاملة حصادها من نباتات مختلفة وإينفلوريسسينسيس.
  2. إعداد لوحة 96-جيدا مع حل ألكسندر كافية لغمر برعم زهرة. كشف أنثيرس عن طريق إزالة كاسية وتلات وتزج بها في حل ألكسندر. تبقى العينات تحت غطاء الدخان ح 1 – 3.
  3. استبدال الحل ألكسندر مع الحل هير في 4 ومكان لوحة متعددة جيدا مرة أخرى تحت غطاء الدخان لحضانة بين عشية وضحاها.
  4. استخدام الملقط، تحرك بلطف تطهير براعم الزهور إلى شريحة جديدة. منذ قد تحدث بعض المرحل من حل ألكسندر، استخدام ورقة نشاف لإزالة الحل المقاصة قدر الإمكان.
  5. تشريح والاسدية، وإزالة جميع الأنسجة الأخرى. اتبع الخطوات الموجودة في القسم 3 استخدام هير للحل 4.

5-إزالة اكسين من حبوب اللقاح

ملاحظة: نوصي باستخدام مثبت في كارني لتلطيخ DAPI.

  1. اتبع إجراءات التثبيت وتشريح المبينة في القسمين 1 و 2. الآن، واحدة يجب أن يكون واحد للعديد من الأسدية على الشريحة ضمن الحد أدنى من الإيثانول 70%.
  2. استخدام ورقة نشاف لإزالة الزائدة الإيثانول، وإضافة 5-10 ميليلتر لحل DAPI. باستخدام اثنين من الحقن بالإبر، الإفراج عن حبوب اللقاح داخل ذلك كمية صغيرة من الحل (مثلاً، استخدام حقنه واحدة شل في السداة وأخرى للإفراج عن حبوب اللقاح). إضافة آخر ميليلتر 5 من DAPI إذا كان الحل الذي يجف.
  3. إزالة جميع الأنقاض من السداة خطوة حاسمة، مثل أن تترك بين الشريحة وساترة حبوب اللقاح فقط.
  4. ضع ساترة على الشريحة الحاملة للعينة بتخفيض من جانبية وإضافة الحد الأدنى من حل DAPI المطلوبة لملء الفراغ. مكان سبابة على ساترة، ودون السحق أيضا الكثير مما جعل سريعة، وطيد، وانزلاق حركة قصيرة.
    ملاحظة: لقياس القوة اللازمة، والسعة لحركة انزلاق، هذه الخطوة ينبغي أن يمارس عدة مرات، التحقق من النتائج في كل مرة تحت المجهر.
  5. إضافة حل DAPI إذا لزم الأمر وتحسين مكان الشريحة في مربع رطبة في الظلام عند 4 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة إلى حاء 1 المضي قدما لمراقبة العينات تحت الأسفار واسع المجال أو مجهرية [كنفوكل] داخل 24 حاء في محاولة للجمع بين هذا الإجراء مع المقاصة للتحقق ما إذا كانت زيادة مخزونات النشر الاستراتيجي ويمكن الحصول على الإدلاء بالبيانات.

6-الصوديوم دوديسيل كبريتات (SDS) مسح

ملاحظة: اعتماداً على جهاز الأزهار يتم تحليلها، وعلى مهارات الباحث تشريح العينات لينة جداً وصغيرة، معاملة مخزونات النشر الاستراتيجي يمكن القيام أما قبل (للباحثين ذوي الخبرة) أو بعد التشريح خطوة (لأقل من ذوي الخبرة الباحثين) في حمض الخليك الميثانول الثابتة المادية.

  1. استخدام الزجاج صانع مشاهدة شريحة مقعرة أو أنبوب ميكروسينتريفوجي لاحتضان تشريح أو غير تشريح عينات في مخزونات النشر الاستراتيجي 1% وحل ن هيدروكسيد الصوديوم 0.2 بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة.
  2. التعامل مع الرعاية لأن العينة لينة جداً وله مظهر شفافة. يشطف عدة مرات بالماء.
    ملاحظة: قد تؤدي مخلفات حل الحزب الديمقراطي الصربي لهطول الأمطار عند إضافة حل المصبوغة، مثلاً، انيلين الأزرق.
  3. لعينات غير تشريح، اتبع الإجراء التشريح هو موضح في القسم 2، باستخدام المياه بدلاً من الإيثانول 70%. بعد تشريح الأنسجة المرجوة، لإزالة أي بقايا والحطام، وأي فائض المياه مع ورقة نشاف، ثم إضافة 20 – 40 ميليلتر من حل المصبوغة، والمضي في الخطوة 6، 5.
  4. لعينات تشريح، بعناية نقل العينة من الحل الغسيل ووضعه على شريحة نظيفة، وإضافة 20 – 40 ميليلتر من حل المصبوغة.
  5. بلطف ضع ساترة على الشريحة عن طريق خفض من جانبية. الحرص على عدم الاسكواش الإعداد. مكان أي رقيقة فاصل بين الشريحة وساترة في أركانه (مثلاً، الشريط أو ساترة مكسورة)، إذا كانت الأنسجة الناعمة جداً، ترك مساحة مثل الدائرة بين الشرائح وساترة، مثل أن لا سحق ساترة العينة.
  6. ضع كافة الشرائح داخل مربع رطبة وتغطية ذلك مع رقائق الألومنيوم، ووضعه في 4 درجات مئوية على الأقل 1 حاء المضي قدما لمراقبة العينة باستخدام ويديفيلد fluorescence أو مجهرية [كنفوكل] داخل ح 24.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

نبات ينتمي إلى أسرة براسيكاسيا، إذ تضع inflorescences مع المخنثين الزهور مرتبة في كوريمب (الشكل 1). وقد كل زهرة كاسية أربعة وتلات أربع وست الأسدية (أربعة منذ فترة طويلة وقصيرة اثنين) ومن متاع سينكاربوس تتكون من اثنين carpels تنصهر خلقية (الشكل 1-واو-ح) مرتبة في أربع جدلات متحدة المركز25،26. وقد أعطيت تينوينوسيلاتي، أنتروبوس البويضات مرتب...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

وجود العديد من براعم الزهور داخل نورات واحدة من نبات، التي تغطي جميع مراحل نمو الزهرة، يوفر فرصة فريدة من نوعها لدراسات تهدف إلى وصف تأثير علاج أو ميزة الإنمائية في الوقت نفسه عبر مراحل مختلفة من التنمية زهرة. نقطة مرجعية جيدة بين مختلف النباتات الفردية هو افتتاح أول زهرة نورات الرئيسي. يتم التعامل مع مصانع في مثل هذه طريقة أن تتم مزامنة المزهرة قدر ممكن (مثلاً، 3 – 4 أيام النظام الطبقي عند 4 درجة مئوية يزيد من إنبات البذور متزامن ومن ثم أكثر حتى المزهرة)، والنباتات التي فتح بها أول زهرة في نفس اليوم فق...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

هذا العمل كان تدعمها جامعة زيوريخ، على الانبعاث ماري كوري منحة (منح لا. TransEpigen-254797 إلى هجري)، "منحة متقدمة" "مجلس البحوث الأوروبي" (منحة لا. MEDEA-250358 بعنوان)، ومشروع بحوث وتطوير التكنولوجيا (منح مكان لعنوان) من SystemsX.ch، "المبادرة السويسرية" في "بيولوجيا الأنظمة".

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
<قوي > الكواشف والمواد < / قوي >
الإيثانولشارلاوET00102500
حمض الخليكApplichemA3686،2500100٪ بيولوجيا جزيئية الصف
حمض الخليك الجليديسيجما ألدريتش320099البيولوجيا الجزيئية الصف
الميثانولشارلاوME03062500
محلول الفورمالديهايدسيجما ألدريتشF1635
حمض البروبيونيكسيجما ألدريتش81910-250 مل
هيدرات الكلورالسيجما ألدريتش15307
الجلسرينروث3783.1
الصمغ العربيفلوكا51198
حمض اللاكتيكفلوكا69773
الفينولسيجما ألدريتش77607-250 ملاستخدمنا الفينول السائل (استخدم الكثافة للعثور على الحجم المطلوب للحل الخاص بك)
زيت القرنفلسيجما ألدريتشC8392-100ML
زيلينروث4436.1
اليودفلوكا57665
يوديد البوتاسيومميرك5043
الملكيت الأخضرفلوكا63160
حمض الفوشينفلوكا84600
البرتقال جيسيجما7252
كبريتات دوديسيل الصوديومسيجما ألدريتشL3771البيولوجيا الجزيئية درجة
هيدروكسيد الصوديومسيجما ألدريتش71690
ثنائي فوسفات الهيدروجين الصوديومApplichemA1047،1000
فوسفات الصوديوم ثنائي القاعدةسيجما ألدريتشS9763-1KG
فوسفات البوتاسيومسيجما ألدريتش04347
EDTAApplichemA2937،1000
CalcofluorSigmaF6259منير الفلورسنت 28
AuramineChroma10120
DAPISigmaD9542
Triton-X-100SigmaT8787
أنيلين أزرقميرك1275
MS متوسطةكارولينا19-57030
الركيزة الغنية بالمغذياتEinheitserdeED73
زجاجلا توجد علامة تجارية محددة
15 مل أنابيب الطرد المركزي الصقرVWR62406-200
ملقط دوموندملقط Actimed0208-5SPSF-PS
DUMONT BIOLOGY0108-5
حقنةBDBD Plastipak 3000131 مل
إبرة تحضيرBDBD Microlance 304000
شرائح مجهرThermo Scientific10143562CEمقطوعة
CoverslipsThermo ScientificDV40008
صندوقصندوق بلاستيكي به منشفة ورقية مبللة ودعامات منزلقة داخلية
<قوية>الاسم<قوي>الشركة رقم الكتالوجتعليقات
Solutions
Fixatives
كارنوي (مزارع) المثبتالإيثانول المطلق: حمض الخليك الجليدي ، 3: 1 (مل: مل)
الميثانول / حمض50٪ (v / v) ميثانول ، 10٪ (v / v) حمض الخليك الجليدي في الماء منزوع الأيونات
FPA50الفورمالين المثبت ، حمض البروبيونيك ، 50٪ إيثانول ؛ 5: 5:90 (مل: مل: مل)
هيدرات الكلورال / الجلسرينهيدرات الكلورال: الجلسرين: الماء ، 8: 1: 2 (جم: مل: مل). يمكن استخدامها في جميع مراحل نمو الأزهار ولتطوير السيليك باستخدام الفحص المجهري DIC. أفضل مثبت هو صمغ هوير
المعدل7.5 جم ، هيدرات الكلورال 100 جم ، الجلسرين 5 مل ، الماء 30 مل. يمكن استخدامها في جميع مراحل نمو الأزهار ولتطوير السيليك باستخدام الفحص المجهري DIC. أفضل مثبت هو FPA50
Herr's 4 & frac12 القائمحمض اللاكتيك ، هيدرات الكلور ، بلورات الفينول ، زيت القرنفل ، الزيلين ؛ 2: 2: 2: 2: 1 ، بالوزن. يمكن استخدامه في جميع مراحل نمو الأزهار (خاصة لتطوير السداة) ولتطوير السيليك باستخدام الفحص المجهري DIC. أفضل مثبت هو
SDS / NaOHالفورمالين ، قم بتخفيف محلول مخزون SDS و NaOH إلى 1٪ SDS / 0.2 N NaOH (تخفيف 10x). لجميع مراحل نمو الزهور والسيليك. أفضل مثبت هو مثبت حمض الميثانو / الخليك. يمكن أيضا استخدام المثبتين الآخرين. يمكن دمجه مع محلول تلطيخ الكالفلور والأورامين وDAPI والأنيلين الأزرق.
مخزون SDS10٪ (وزن / حجم) كبريتات دوديسيل الصوديوم. قم بإذابة 10 جم من كبريتات دوديسيل الصوديوم في 80 مل من الماء منزوع الأيونات واصنع ما يصل إلى 100 مل بالماء منزوع الأيونات.
مخزون هيدروكسيد الصوديوم2 محلول هيدروكسيد الصوديوم 2 نيسرويدموم: قم بإذابة 4 جم من هيدروكسيد الصوديوم في 40 مل من الماء منزوع الأيونات وصنع ما يصل إلى 100 مل بالماء منزوع الأيونات
< قوي > محاليل المقاصة والتلوين المدمجة < / قوي >
Herr's IKI-4 & frac12 ؛إلى معيار 4 & frac12 ؛ (9 جم في المجموع) إضافة: 100 ملليجرام يود ، 500 ملليجرام يوديد البوتاسيوم. يمكن استخدام محلول المقاصة هذا لجميع مراحل نمو الأزهار ولتطوير السيليك ، إما لزيادة التباين أو لتوصيف ديناميكيات النشا. استخدم FPA50 للتحليل الهيكلي ومثبت Carnoy لتحليل النشا الكمي.
ألكسندر تلطيخالإيثانول 95٪ 10 مل ، الملكيت الأخضر (1٪ في 95٪ EtOH) 1 مل ، حمض الفوشين (1٪ في ddH2O) 5 مل ، البرتقال G (1٪ في ddH2O) 0.5 مل ، الفينول 5 جم ، هيدرات الكلور 5 جم ، حمض الخليك الجليدي 2 مل ، الجلسرين 25 مل . هذا المقاصة / تلطيخ وحده أو بالاشتراك مع Herr's 4 & frac12 ؛ يمكن استخدام المحلول لتقييم إجهاض حبوب اللقاح في الأزهار ذات حبوب اللقاح الناضجة وثلاثية الخلايا. يتم استخدامه على مواد غير ثابتة حديثا.
<قوي > محاليل تلطيخ < / قوي >
محلولالكالكوفلور Calcofluor 0.007٪ في الماء (جم: مل). تستخدم في الأصل كمنير بصري. يمكن استخدامه لتلوين السليلوز والسكريات الكربوكسية والكالوز في جدران الخلايا. كثيرا ما تستخدم لتلطيخ حبوب اللقاح. يمكن استخدام جميع المثبتات الثلاثة مع هذا الحل.
أورامينأورامين 0.01٪ في الماء (جم: مل). يمكن استخدام صبغة الفلورسنت المحبة للدهون هذه لتلوين البشرة ، والكوتين ، والإكسين وغيرها. يمكن استخدام جميع المثبتات الثلاثة مع هذا المحلول
Calcofluor-Auramineمحلول Auramine: محلول Calcofluor ، 3: 1. يمكن استخدامها لتلوين مشترك بكلا الحلين. يمكن فحص النسب الأخرى مع الحفاظ على نسبة أقل من الكالكوفلور فيما يتعلق بالأورامين.
محلولDAPI 0.4 ميكروغرام / مل ، 0.1 M مخزن فوسفات الصوديوم (درجة الحموضة 7) ، 0.1٪ Triton-X-100 ، 1 ملي مولار EDTA. يمكن استخدام هذا المحلول لتلوين انتشار الكروموسوم أثناء الانقسام الاختزالي عند الذكور والإناث ، ونواة الخلايا في أي نسيج. كثيرا ما تستخدم لدراسة تطور حبوب اللقاح. كارنوي وحمض الميثانول / الخليك هي أفضل المثبتات لهذا المحلول. قد تتداخل المثبتات القائمة على الفورمالديهايد مثل FPA50 مع التلوين. الإثارة في الأشعة فوق البنفسجية والانبعاث الأقصى حوالي 461 نانومتر.
مخزن فوسفات الصوديوم (0.1 م)مستقبلات البروتون: 0.2 م Na2HPO4 ، المتبرع بالبروتون: 0.2 M NaH2PO4 ، نسبة المتبرع بالبروتون / مستقبلات البروتون: 1.364 (لدرجة الحموضة 7) محلول
أنيلين أزرق0.1٪ (وزن / حجم) أنيلين أزرق ، 108 ملي K3PO4 (درجة الحموضة 11) ، 2٪ جلسرين. يمكن استخدام هذا المحلول لتلوين الكالوز والسليلوز في العديد من مراحل التطور (مثل ترسب الكالوز في الذكور والإناث ، وسدادات الكالوز في أنابيب حبوب اللقاح). الإثارة في الأشعة فوق البنفسجية والانبعاث الأقصى حوالي 455. يمكن أيضا أن تكون متحمسة عند 514 نانومتر مع انبعاث باللون الأحمر لتلوين محتوى الخلية.
السام صانع الساعات حواف رطب مثبت الأسيتيك <قوي > محاليل المقاصة < / قوي> القائم على الفورمالين على الفورمالين ؛ سائل التطهير حل FPA50 القائم على محلول محلول محلول خليط DAPI

المراجع

  1. Crane, P. R., Friis, E. M., Pedersen, K. R. The origin and early diversification of angiosperms. Nature. 374 (6517), 27-33 (1995).
  2. Friedman, W. E. The meaning of Darwin's 'abominable mystery'. Am J Bot. 96 (1), 5-21 (2009).
  3. Sun, G., Dilcher, D. L., Zheng, S., Zhou, Z. In search of the first flower: A Jurassic angiosperm, Archaefructus, from Northeast China. Science. 282 (5394), 1692-1695 (1998).
  4. Mulcahy, D. L. The rise of the angiosperms: a genecological factor. Science. 206 (4414), 20-23 (1979).
  5. Friedman, W. E., Moore, R. C., Purugganan, M. D. The evolution of plant development. Am J Bot. 91 (10), 1726-1741 (2004).
  6. Endress, P. K. Angiosperm floral evolution: morphological developmental framework. Advances in botanical research Volume 44: Developmental genetics of the flower. Soltis, D., Soltis, P., Leebens-Mack, J. , Academic Press. 1-61 (2006).
  7. Alvarez-Buylla, E. R., et al. Flower development. Arabidopsis Book. 8, 30127(2010).
  8. Beddington, J. Food security: contributions from science to a new and greener revolution. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 365 (1537), 61-71 (2010).
  9. Godfray, H. C., et al. Food security: The challenge of feeding 9 billion people. Science. 327 (5967), 812-818 (2010).
  10. Burkle, L. A., Alarcón, R. The future of plant-pollinator diversity: understanding interaction networks across time, space, and global change. Am J Bot. 98 (3), 528-538 (2011).
  11. Meyerowitz, E. M., et al. A genetic and molecular model for flower development in Arabidopsis thaliana. Dev Suppl. 1, 157-167 (1991).
  12. Hafidh, S., Fíla, J., Honys, D. Male gametophyte development and function in angiosperms: a general concept. Plant Reprod. 29 (1-2), 31-51 (2016).
  13. Schmidt, A., Schmid, M. W., Grossniklaus, U. Plant germline formation: common concepts and developmental flexibility in sexual and asexual reproduction. Development. 142 (2), 229-241 (2015).
  14. Sprunck, S., Dresselhaus, T. Three cell fusions during double fertilization. Cell. 161 (4), 708-709 (2015).
  15. Dresselhaus, T., Sprunck, S., Wessel, G. M. Fertilization mechanisms in flowering plants. Curr Biol. 26 (3), R125-R139 (2016).
  16. Smyth, D. R., Bowman, J. L., Meyerowitz, E. M. Early flower development in Arabidopsis. Plant Cell. 2 (8), 755-767 (1990).
  17. Roeder, A. H., Yanofsky, M. F. Fruit development in Arabidopsis. Arabidopsis Book. 4, e0075(2006).
  18. Hama, H., et al. Scale, a chemical approach for fluorescence imaging and reconstruction of transparent mouse brain. Nat Neurosci. 14 (11), 1481-1488 (2011).
  19. Ke, M. -T., Fujimoto, S., Imai, T. SeeDB. a simple and morphology-preserving optical clearing agent for neuronal circuit reconstruction. Nat Neurosci. 16 (8), 1154-1161 (2013).
  20. Susaki, E. A., et al. Whole-brain imaging with single-cell resolution using chemical cocktails and computational analysis. Cell. 157 (3), 726-739 (2014).
  21. Tomer, R., Ye, L., Hsueh, B., Deisseroth, K. Advanced CLARITY for rapid and high-resolution imaging of intact tissues. Nat Protoc. 9 (7), 1682-1697 (2014).
  22. Yang, B., et al. Single-cell phenotyping within transparent intact tissue through whole-body clearing. Cell. 158 (4), 945-958 (2014).
  23. Chung, K., Deisseroth, K. CLARITY for mapping the nervous system. Nat Methods. 10 (6), 508-513 (2013).
  24. Lee, E., et al. ACT-PRESTO: rapid and consistent tissue clearing and labeling method for 3-dimensional (3D) imaging. Sci Rep. 6, 18631(2016).
  25. Endress, P. K. Evolution and floral diversity: the phylogenetic surroundings of Arabidopsis and Antirrhinum. Int J Plant Sci. 153 (3, Part 2), S106-S122 (1992).
  26. Reyes-Olalde, J. I., Zuñiga-Mayo, V. M., Chávez Montes, R. A., Marsch-Martínez, N., de Folter, S. Inside the gynoecium: at the carpel margin. Trends Plant Sci. 18 (11), 644-655 (2013).
  27. Hill, J. P., Lord, E. M. Floral development in Arabidopsis thaliana: a comparison of the wild type and the homeotic pistillata mutant. Can J Bot. 67 (10), 2922-2936 (1989).
  28. Sessions, R. A., Zambryski, P. C. Arabidopsis gynoecium structure in the wild type and in ettin mutants. Development. 121 (5), 1519-1532 (1995).
  29. Schneitz, K., Hülskamp, M., Pruitt, R. E. Wild-type ovule development in Arabidopsis thaliana: a light microscope study of cleared whole-mount tissue. Plant J. 7 (5), 731-749 (1995).
  30. Sundberg, E., Ferrándiz, C. Gynoecium patterning in Arabidopsis: a basic plan behind a complex structure. Annual Plant Reviews Volume 38: Fruit Development and Seed Dispersal. Østergaard, L. , Wiley-Blackwell. Oxford, UK. 35-69 (2009).
  31. Meinke, D. W. 10 seed development in Arabidopsis thaliana. Cold Spring Harbor Monograph Archive. 27, 253-295 (1994).
  32. Weigel, D., Glazebrook, J. Arabidopsis: a laboratory manual. , Cold Spring Harbour Laboratory Press. Cold Spring Harbour, N.Y. (2002).
  33. Herr, J. M. A new clearing-squash technique for the study of ovule development in angiosperms. Am J Bot. 58 (8), 785-790 (1971).
  34. Alexander, M. P. A versatile stain for pollen fungi, yeast and bacteria. Stain Technol. 55 (1), 13-18 (1980).
  35. Herr, J. M. Jr Applications of a new clearing technique for the investigation of vascular plant morphology. J Elisha Mitchell Sci Soc Chapel Hill N C. 88 (3), 137-143 (1972).
  36. Herr, J. M. Clearing techniques for the study of vascular plant tissues in whole structures and thick sections. Tested studies for laboratory teaching. Proceedings of the Fifth Workshop/Conference of the Association for Biology Laboratory Education (ABLE). Goldman, C. A., Hauta, P. L., O'Donnell, M. A., Andrews, S. E., van der Heiden, R. 5, Toronto, Ontario, Canada. 63-84 (1993).
  37. Colcombet, J., Boisson-Dernier, A., Ros-Palau, R., Vera, C. E., Schroeder, J. I. Arabidopsis somatic embryogenesis receptor kinases1 and 2 are essential for tapetum development and microspore maturation. Plant Cell. 17 (12), 3350-3361 (2005).
  38. Heslop-Harrison, J., Heslop-Harrison, Y., Shivanna, K. R. The evaluation of pollen quality and a further appraisal of the fluorochromatic (FCR) test procedure. Theor Appl Genet. 67 (4), 367-379 (1984).
  39. Stone, J. L., Thomson, J. D., Dent-Acosta, S. J. Assessment of pollen viability in handpollination experiments: A review. Amer J Bot. 82 (9), 1186-1197 (1995).
  40. Dafni, A., Firmage, D. Pollen viability and longevity: practical, ecological and evolutionary implications. Plant Syst Evol. 222 (1-4), 113-132 (2000).
  41. Lora, J., Testillano, P. S., Risueño, M. C., Hormaza, J. I., Herrero, M. Pollen development in Annona cherimola Mill. (Annonaceae). Implications for the evolution of aggregated pollen. BMC Plant Biol. 9, 129(2009).
  42. Ross, K. J., Fransz, P., Jones, G. H. A light microscopic atlas of meiosis in Arabidopsis thaliana. Chromosome Res. 4 (7), 507-516 (1996).
  43. Park, S. K., Howden, R., Twell, D. The Arabidopsis thaliana gametophytic mutation gemini pollen1 disrupts microspore polarity, division asymmetry and pollen cell fate. Development. 125 (19), 3789-3799 (1998).
  44. Haseloff, J. Old botanical techniques for new microscopes. BioTechniques. 34 (6), 1174-1182 (2003).
  45. Truernit, E., et al. High-resolution whole-mount imaging of three-dimensional tissue organization and gene expression enables the study of phloem development and structure in Arabidopsis. Plant Cell. 20 (6), 1494-1503 (2008).
  46. Hedhly, A., et al. Starch turnover and metabolism during flower and early embryo development. Plant Physiol. 172 (4), 2388-2402 (2016).
  47. Crane, C. F., Carman, J. G. Mechanisms of apomixis in Elymus rectisetus from eastern Australia and New Zealand. Am J Bot. 74 (4), 477-496 (1987).
  48. Young, B. A., Sherwood, R. T., Bashaw, E. C. Cleared-pistil and thick-sectioning techniques for detecting aposporous apomixis in grasses. Can J Bot. 57 (15), 1668-1672 (1979).
  49. Kurihara, D., Mizuta, Y., Sato, Y., Higashiyama, T. ClearSee: a rapid optical clearing reagent for whole-plant fluorescence imaging. Development. 142, 4168-4179 (2015).
  50. Warner, C. A., et al. An optical clearing technique for plant tissues allowing deep imaging and compatible with Fluorescence Microscopy. Plant Phys. 166, 1684-1687 (2014).
  51. Hasegawa, J., Sakamoto, Y., Nakagami, S., Aida, M., Sawa, S., Matsunaga, S. Three-dimensional imaging of plant organs using a simple and rapid transparency technique. Plant Cell Physiol. 57 (3), 462-472 (2016).
  52. Musielak, T. J., Slane, D., Liebig, C., Bayer, M. A Versatile Optical Clearing Protocol for Deep Tissue Imaging of Fluorescent Proteins in Arabidopsis thaliana. PLoS ONE. 11 (8), e0161107(2016).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

Arabidopsis SDS DAPI
مركز الجامعة-جبل وتلطيخ نبات زهرة الأجهزة وسيليكويس
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.