نقدم هنا، ديدان أسطوانية ايليجانس كاينورهابديتيس كنموذج مضيف تنوعاً لدراسة التفاعل الميكروبية.
مقالة منهجية
نقدم هنا، ديدان أسطوانية ايليجانس كاينورهابديتيس كنموذج مضيف تنوعاً لدراسة التفاعل الميكروبية.
علينا أن نظهر أسلوب استخدام ايليجانس كاينورهابديتيس كمضيف نموذج لدراسة التفاعل الميكروبية. ويتم إدخال الميكروبات عن طريق النظام الغذائي يجعل الأمعاء الموقع الرئيسي للمرض. الأمعاء السلكية هيكلياً ووظيفيا يقلد أمعاء الثدييات وهو شفاف يجعلها قابلة للدراسة المجهرية للاستعمار. هنا نظهر أن مسببات الأمراض يمكن أن تسبب المرض والموت. نحن قادرون على تحديد طفرات الميكروبية التي تظهر ضراوة غيرت. يجعل استجابتها الفطرية المصانة الإجهادات الأحيائية C. ايليجانس نظاما ممتازا للتحقيق في أوجه التفاعلات المناعية الفطرية المضيف. نظهر أن تستضيف مع الطفرات في الجين أوكسيديز المزدوج لا يمكن أن تنتج الأنواع الأكسجين التفاعلية وغير قادر على مقاومة الميكروبات إهانة. كذلك ندلل على براعة المقايسة بقاء قدم بإظهار أنه يمكن استخدامه لدراسة تأثيرات مثبطات لنمو الميكروبات. كما يمكن استخدام هذا الفحص اكتشاف عوامل الفوعة الفطرية كأهداف لتطوير العوامل المضادة للفطور الرواية، فضلا عن إتاحة فرصة لمواصلة الكشف عن التفاعلات بين الميكروبات والمضيف. تصميم هذا التحليل يفسح المجال أيضا لإنتاجية عالية شاشات كل الجينوم، بينما القدرة على الديدان cryo-المحافظة لاستخدامها في المستقبل يجعل من نموذج حيوان كله جذابة وفعالة من حيث التكلفة لدراسة.
C. ايليجانس قد استخدمت ككائن نموذج قوية لأكثر من 50 عاماً. وفي الستينات، رائدة الأحياء جنوب أفريقيا سيدني برينر استخدام C. ايليجانس لدراسة تطوير الخلايا العصبية، يمهد الطريق لنسب طويلة من العلماء لدراسة الجوانب المختلفة لبيولوجيا الخلية والحيوان في الديدان الخيطية. وتشمل هذه النسب الحائزين على جائزة نوبل كريغ ميلو وأندرو النار على العمل [رني]1وروبرت هورفيتز وجون سالستون للعمل على تطوير الجهاز والمبرمج2،،من34، ومارتن تشالفي لعمله على بروتين فلوري أخضر5. على الرغم من أن هذا الكائن الحي النموذجي قد استخدمت تقليديا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
1-التحضير لديدان أسطوانية النمو المتوسطة (NGM)
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
قد سبق وصف المرضية مقايسة (الشكل 1) استخدام المبيضة و C. ايليجانس لدينا مختبر17،18 و19،مختبرات أخرى20. نبدي الانقياد لاستخدام C. ايليجانس لدراسة الفوعة المبيضة تبين أن الخلايا المبيضة هي بلعها بسرعة من الديدان، وتتراكم في التجويف المعوي تسبب الحركة أبطأ، مشوهاً الشرج المنطقة (دار) (
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
يمكن تعديل طرق المعايرة C. ايليجانس العدوى والبقاء على قيد الحياة على مدى التعرض مدى الحياة المبيضة التي وصفناها لاختبار آخر الممرض. قد السائل ثقافات أخرى من البكتيريا أو الفطريات وتتغذى على C. ايليجانس بطريقة مماثلة. بالإضافة إلى ذلك، قد تكون جزيئي التهابات المسلسل بتعريض اليرقة إلى أحد مسببات المرض أولاً كما هو موضح، ثم قم بنقل الحيوانات إلى لوحة جديدة تحتوي على مسببات المرض منفصلة بعد بلوغ سن الرشد.
أثناء إجراء هذا التحليل، من المهم إيلاء اهتمام دقيق لتوقيت. أولاً.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
وكان هذا العمل المنجز في ويدعمها معهد البوليتكنيك ورسيستر.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| أجار (حبيبات ، درجة بكتريولوجية) | منتجات Apex BioResearch | 20-248 | |
| أسلاك ألومنيوم (95٪ نقطة ، 32 مقياس) | Genesee Scientific | 59-1M32P | |
| Axiovision Zeiss المجهر المقلوب | Axiovision Zeiss | ||
| Bacto-Peptone | Fisher BioReagants | BP1420-500 | |
| C. ايليجانس سلالة Bli-3 | Caenorhabditis مركز علم الوراثة | Bli-3 (e767) CB767 | |
| كلوريد الكالسيوم | فيشر العلمي | BP51-250 | |
| الكوليسترول ، درجة سيجما ، 99٪ على الأقل | منها Sigma | C8667-25G | |
| (20 × 150 مم) | FIsherBrand | 14-961-33 | |
| مجهر التشريح (NI-150 إضاءة عالية الكثافة) | نيكون للأدوات | ||
| الإشريكية القولونية | Caenorhabditis Genetics | Center OP50 | |
| GraphPad Prism (برنامج تحليل منحنى البقاء على قيد الحياة) برنامج | GraphPad | ||
| LB Broth (Miller's) | Apex BioResearch Products | 11-120 | |
| كبريتات المغنيسيوم | فيشر Scientific | 10034-99-8 | |
| أطباق بتري متوسطة الحجم (35 × 10 مم) | فالكون | 353001 | |
| فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدة | سيجما | P0662-500G | |
| كلوريد الصوديوم | فيشر العلمي | BP358-1 | |
| فوسفات الصوديوم | فيشر العلمي | BP332-500 | |
| Wildtype C. albicans SC5314 | ATCC | SC5314 | |
| Wildtype C. elegans | مركز علم الوراثة Caenorhabditis | N2 |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن