مقالة منهجية

تحسين بروتوكول إيمونوبريسيبيتيشن الكروماتين من الماوس الهيكل العظمى والعضلات

DOI:

10.3791/56504

⸱

نوفمبر 6, 2017

 ,  ,  , 
1Department of Functional Genomics and Cancer, Institut de Génétique et de Biologie Moléculaire et Cellulaire

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويرد بروتوكول رواية تحضيرا للونين من الماوس الكبار الهيكل العظمى والعضلات تتكيف مع دراسة تنظيم الجينات في ألياف العضلات التي إيمونوبريسيبيتيشن الكروماتين.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف لنا بروتوكولا كفاءة واستنساخه لإعداد الكروماتين من الماوس الكبار الهيكل العظمى والعضلات، أنسجة بدنيا مقاومة ذات محتوى العالي من البروتينات الهيكلية. العضلات تشريح أطرافهم من الفئران الكبار تتعطل جسديا هوموجينيسيشن الميكانيكية، أو مزيج من تنميق ودونسينج، في مخزن ناقص التوتر قبل التثبيت فورمالدهايد الخلية ليستي. هي تنقية الأنوية الثابتة بزيادة دورات هوموجينيسيشن الميكانيكية أو دونسينج وتصفيات متتابعة لإزالة الحطام خلية. يمكن سونيكاتيد الأنوية المنقي فورا أو في مرحلة لاحقة بعد تجميد. يمكن أن يكون سونيكاتيد الكروماتين كفاءة ويتم الحصول على مناسبة للتجارب إيمونوبريسيبيتيشن الكروماتين، كما يتضح من التشكيلات الجانبية لعوامل النسخ ورنا بوليميراز الثاني التعديلات التساهمية هيستون. ربط أحداث الكشف عن استخدام الكروماتين التي أعدت بموجب هذا البروتوكول أساسا تلك التي تحدث في نواة الألياف العضلية وعلى الرغم من وجود الكروماتين من السواتل الأخرى المرتبطة بالألياف والخلايا البطانية. ولذلك هذا البروتوكول تكييف لدراسة تنظيم الجينات في الهيكل العظمى والعضلات الماوس الكبار.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

إيمونوبريسيبيتيشن الكروماتين (رقاقة) بالإضافة إلى كمية البلمرة المتسلسل (qPCR) وإنتاجية عالية التسلسل (الرقائق-seq) أصبحت أساليب الاختيار لدراسة النسخ وجينيه تنظيم التعبير الجيني في أنسجة مختلفة وأنواع الخلايا1. يسمح هذا الأسلوب على نطاق الجينوم التنميط التعديلات التساهمية الكروماتين، وشغل البديل هيستون والنسخ عامل ملزم2،3.

في حين أداء رقاقة من الخلايا المزروعة بشكل جيد، يبقى رقاقة من أنسجة الثدييات أكثر تحديا. إعداد الكروماتين لرقاقة ينطوي على العديد من الخطوات الهامة التي تحتاج إلى أن يكون الأمثل لكل نوع من أنواع الخلايا والأنسجة. يمكن إعداد الكروماتين من ليساتيس الخلوية للخلايا المزروعة أو تنقية التالية على نويات. في حالة أنسجة الثدييات، تحلل تتسم بالكفاءة، وتثبيت فورمالدهايد، وتنقية نويات ضرورية بغية ضمان استرداد الأمثل الكروماتين. وعلاوة على ذلك، واختيار ما إذا كنت تريد إصلاح الأنوية قبل أو بعد تنقية قد يتحدد تجريبيا. على الرغم من هذه العقبات، تم بنجاح أداء رقاقة من الأنسجة مثل الكبد أو الخصية، أو الدماغ4،،من56. في حالة الهيكل العظمى والعضلات، تعطيل هذه الأنسجة مقاومة جسديا، الذي يسلك محتوى العالي من البروتينات الهيكلية، وعزله عن نويات يشكل تحديا كبيرا. ونظرا لهذه الخصوصية، البروتوكولات الأمثل للأنسجة الأخرى لا تعطي نتائج مرضية لعضلات الهيكل العظمى.

هنا يصف لنا وضع بروتوكول لعزل الكروماتين الصف شريحة من أنسجة العضلات الهيكلية الماوس ينطوي فعلياً تعطيل الأنسجة، والفورمالديهايد التثبيت، ومن ثم عزل نوى و sonication. وتجلى كفاءة هذا الأسلوب لإعداد الكروماتين مناسبة لشريحة من هذا النسيج أداء رقاقة--قبكر والرقائق-seq لمختلف عوامل النسخ ورنا بوليميراز الثاني التعديلات التساهمية هيستون7.

هذا الأسلوب الجديد أسرع بكثير من بروتوكول سبق الإبلاغ عنها8 تضم طويلة كولاجيناز الهضم الخطوات خلال هذه الفترة، التغييرات في أقلمة الجينوم من عوامل النسخ وقد تجري تعديلات في التعبير الجيني. أن السرعة التي تعزل الأنوية وثابت يجعل الأسلوب الموصوفة هنا جاذبية خاصة لإعداد الكروماتين الذي يلتقط أكثر أمانة الدولة شغله الجينومية الأصلي. وعلاوة على ذلك، على الرغم من أن أساليب أخرى لاستخراج الكروماتين العزلة أو البروتين من أنسجة العضلات وقد تم وصف8،،من910 وتستخدم لإجراء التجارب على رقاقة--قبكر على الجينات المحددة، لا رقاقة-seq تم الإبلاغ عن البيانات باستخدام لهم. الطريقة التي ذكرت هنا وهي مناسبة لتعديل هيستون وعامل النسخ seq رقاقة، ومن ثم ينبغي أن تكون أيضا مناسبة ج 3/4 أو الائتلاف الكروماتين تكيف التقاط التطبيقات.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأبقى الفئران وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية المتعلقة برعاية واستخدام الحيوانات المختبرية، ووفقا "المبادئ التوجيهية الوطنية لرعاية الحيوان" (المفوضية الأوروبية التوجيه رقم 86/609/أوروبا الوسطى والشرقية؛ الفرنسية مرسوم no.87-848). وافق جميع الإجراءات لجنة الأخلاقيات الوطنية الفرنسية-

1-"عزل أنسجة العضلات"

ماوس
  1. تضحية واحدة 6 الكبار إلى عمرها 8 أسبوع من التفكك عنق الرحم. ستيرليسي أطرافهم بدهن أنه مع الإيثانول 70% وتشريح العضلات أطرافهم هند (الفخذ الساق، Anterior الظنبوبي،) باستخدام نقطة غرامة مقص وملقط.
    ملاحظة: ينبغي أن تسفر عن ماوس واحد حوالي 500 ملغ أنسجة.
  2. فرم العضلات في أنبوب اختبار 2 مل يحتوي على 1 مل من المخزن المؤقت ناقص التوتر المثلج إعداد صغيرة متجانسة (< 2-3 مم 3) القطع باستخدام مقص بشكل جيد وترك الأنبوب تهز على المحرض أعلى مقاعد البدلاء عند 4 درجة مئوية للحد الأدنى 5-10

2. تحلل أنسجة

ملاحظة: يرجى الرجوع إلى الجدول 1 لكل المخزن المؤقت التراكيب-

  1. نقل هوموجيناتي إلى أنبوب أسفل جولة 14 مل وريسوسبيند في 5 مل الباردة ناقص التوتر المخزن المؤقت (خالية من يدتا مثبط البروتياز كوكتيل وبمسف)-
    1. هوموجينيسي النسيج العضلي المفروم باستخدام دونسي فضفاضة (20-30 السكتات الدماغية داخل 3 دقائق) أو أنسجة ميكانيكية الخالطون ل 15-30 s في أنابيب أسفل الجولة 14 مل.
      ملاحظة: يمكن تقييم كفاءة تحلل في هذه المرحلة من خلال الفحص المجهري الخفيفة، وإذا لزم الأمر، يمكن أن يؤديها تعطل إضافية.
  2. نقل هوموجيناتي إلى أنابيب 15 مل وملء وحدة التخزين إلى 10 مل باستخدام المخزن المؤقت ناقص التوتر الباردة. إصلاح هوموجيناتي كما هو موضح أدناه قبل المتابعة مع الماوس المقبل.

3. تثبيت

  1. إضافة فورمالدهايد بتركيز 1% النهائي ويهز لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة-
  2. إضافة جليكاين إلى تركيز نهائي من 0.125 M في كل أنبوبة لإيقاف التثبيت ويهز لمدة 5-10 دقائق في درجة حرارة الغرفة-

4. إعداد نواة

ملاحظة: يرجى الرجوع إلى الجدول 1 لكل المخزن المؤقت التراكيب-

  1. هوموجينيسي استخدام ليستي ثابت دونس فضفاضة (5-10 السكتات الدماغية).
    1. نقل إلى أنبوب 15 مل وأجهزة الطرد المركزي في 1,000 س ز لمدة 5 دقائق عند 4 درجة مئوية للحصول على نوى والحطام الخلوية.
  2. إزالة المادة طافية وريسوسبيند بيليه في المخزن المؤقت ناقص التوتر الطازجة 5 مل. تصفية من خلال مصفاة خلية 70 ميكرومتر في أنبوب 50 مل. إعادة تصفية فيلتراتي من خلال مصفاة خلية 40 ميكرومتر.
    3. نقل
  3. فيلتراتي إلى أنبوب 15 مل وأجهزة الطرد المركزي في 1,000 س ز لمدة 5 دقائق عند درجة 4 مئوية للحصول على بيليه النووية.
    ملاحظة: في هذه المرحلة، النواة يمكن أن سونيكاتيد فورا، أو انجذاب مجمدة بيليه جافة في النتروجين السائل وتخزينه في-80 درجة مئوية.

5. سونيكيشن

  1. تقييم حجم بيليه النووية (حوالي 50 ميليلتر هوموجينيسيشن الميكانيكية ودونس) وريسوسبيند أنه في المخزن المؤقت سونيكيشن تصل إلى 3 إلى 4 مرات من حجم النووية معبأة و sonicate لمدة 10-15 دقيقة في 4 درجات مئوية باستخدام سونيكاتور .
    ملاحظة: الكروماتين يمكن تحليلها فورا كما هو موضح أدناه (6) أو المجمدة والمخزنة في-80 درجة مئوية.

6. تقييم "حجم جزء الكروماتين" عقب سونيكاتيون

ملاحظة: يرجى الرجوع إلى الجدول 1 لكل المخزن المؤقت التراكيب-

  1. دي-التشعب، تأخذ 30 ميليلتر من الكروماتين في أنبوب اختبار 1.5 مل وإضافة 20 ميليلتر م 5 كلوريد الصوديوم. إكمال وحدة التخزين إلى 500 ميليلتر واحتضان عند 65 درجة مئوية بين عشية وضحاها.
    1. في اليوم التالي، تنفيذ علاج مع البروتيناز 1 ميليلتر ك (20 ملغ/مل الأسهم)، 10 ميليلتر م 2 تريس الأس الهيدروجيني 6.8، و 10 ميليلتر يدتا 0.5 M ح 1 في 42 ° C. إجراء فينول-كلوروفورم/كلوروفورم الاستخراج ويعجل بالحمض النووي مع حجم 1 من أسيتات الصوديوم ه (م 3) ووحدات التخزين 2 الإيثانول 100% ح واحد في-80 درجة مئوية، أو بين عشية وضحاها في-20 درجة مئوية.
  2. بيليه الحمض النووي باستخدام الطرد المركزي في 13,500 س ز لصب المادة طافية 15 دقيقة ويغسل بيليه جيدا بالبرد 70% إيثانول والطرد المركزي مرة أخرى لأدنى 5 صب المادة طافية وأيردري بيليه.
  3. ريسوسبيند بيليه في وحدة التخزين الأصلية (30 ميليلتر) من المخزن المؤقت للشركة المصرية للاتصالات. قياس تركيز الحمض في جهاز المطياف الضوئي بامتصاص في 260 نيوتن متر/280 نانومتر. "الماصة؛" 500 1,000 نانوغرام من الحمض النووي جنبا إلى جنب مع سلم حجم الحمض النووي في ممرات منفصلة من 1.5% [اغروس] هلام وإجراء التفريد لتقييم حجم جزء من الكروماتين-
    ملاحظة: يجب أن يكون حجم الجزء بين 200-500 قاعدة أزواج، وينبغي أن يكون هناك لا أجزاء الوزن الجزيئي عالية يمكن كشفها المقابلة لغير-أو سيئة-تجزئة الحمض النووي. إذا لزم الأمر، الحل الكروماتين (الخطوة 5) يمكن إعادة سونيكاتيد لوقت أطول وثم إعادة تحليلها كما هو موضح أعلاه حتى يتم الحصول على الحجم الأمثل-

7. إيمونوبريسيبيتيشن الكروماتين (رقاقة)

ملاحظة: يرجى الرجوع إلى الجدول 1 لكل المخزن المؤقت التراكيب-

  1. كتلة ز البروتين الخرز سيفاروسي من اليقوتينج 1 مل الطين 50% في الإيثانول. بيليه الخرز بالطرد المركزي في ز 400 x لمدة 1 دقيقة في benchtop الطرد المركزي وتغسل مع 1 مل من الشركة المصرية للاتصالات المخزن المؤقت لأجهزة الطرد المركزي في 400 x ز وكرر واشنطن
    1. بعد الطرد المركزي الثاني، وإعادة تعليق في 1 مل من المخزن المؤقت لتمييع رقاقة مع 25 ميليلتر لجيش صرب البوسنة (الأسهم 20 ملغ/مل) وميليلتر 20 خميرة الحمض الريبي النووي النقال (الأسهم 10 ملغ/مل). كتلة الخرز على الأقل 2 ساعة قبل استخدامها بالتناوب (40-60 لفة في الدقيقة) في 4 ° C.
    2. تمييع 50 ميكروغرام من الكروماتين (الخطوة 5) 8 إلى 10 مرات استخدام رقاقة تمييع المخزن المؤقت. إضافة 50 ميليلتر من الملاط حبة المحظورة واحتضانها ح 2 (40-60 لفة في الدقيقة) بالتناوب في 4 ° جيم أجهزة الطرد المركزي في 400 غرام x عند 4 درجة مئوية الحصول على الكروماتين المجازين وتحويلها إلى أنبوب جديد.
  2. إيمونوبريسيبيتيشن، إضافة المقدار المناسب من جسم الأولية (مثلاً، 1-2 ميكروغرام كل 10 ميكروغرام من الكروماتين) واحتضان بين عشية وضحاها بالتناوب في 4 ° C.
    ملاحظة: المبلغ الأمثل لجسم قد أوصت به المورد أو يمكن تحديده تجريبيا من خلال أداء رقاقة--قبكر مع كميات مختلفة من جسم حتى يلاحظ التخصيب الأمثل. كما سيفاروسي "ز البروتين" يمكن الاستعاضة سيفاروسي البروتين بحسب النوع الفرعي للأجسام المضادة المستخدمة.
  3. إضافة الخرز الممنوعة في اليوم التالي واحتضانها ح 1 مع التناوب (40-60 لفة في الدقيقة) في 4 ° جيم أجهزة الطرد المركزي في 400 غ س ل 20-30 s بيليه الخرز وإزالة المادة طافية، والبدء الرقاقة يغسل.
  4. رقاقة يغسل: أداء يغسل التالية مع المخازن المؤقتة: مرة واحدة مع "منخفضة الملح المخزن المؤقت"، ومن ثم مرتين مع "المخزن المؤقت الملح عالية"، مرتين مع ليكل المخزن المؤقت، وأخيراً مرتين مع "المخزن المؤقت للشركة المصرية للاتصالات".
    1. أداء كل غسل لمدة 10 دقيقة مع التناوب (40-60 لفة في الدقيقة) عند 4 درجة مئوية وبيليه الخرز بين كل غسل بالطرد المركزي في 400 غ س ل s 20-30 في الطرد مركزي أعلى مقاعد البدلاء.
  5. شطف، إزالة الغسيل الأخير وريسوسبيند الخرز في 250 ميليلتر شطف العازلة (طازج) لمدة 15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة بينما تهز.
  6. الطرد المركزي في 400 × ز وجمع النذرة في أنبوب جديد. إجراء هذه الخطوة مرتين ثم دي-التشعب النذرة بين عشية وضحاها مع 20 ميليلتر كلوريد الصوديوم 5 م وألف رناسي 1 ميليلتر (10 مغ/مل)، تعامل مع بروتيناز ك، والفينول-كلوروفورم/كلوروفورم إكسترالقانون كما هو الحال في الخطوة 6.
  7. ريسوسبيند في 50 ميليلتر من المخزن المؤقت للشركة المصرية للاتصالات واستخدام مختبرين لرقاقة qPCR وفقا للبروتوكولات القياسية 15 للتحقق من جودة الرقاقة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لعزل النوى، أجرينا الميكانيكية تجانس النسيج العضلي تشريح ومفروم ل s أما 15 أو 45، في دورة في الدقيقة 18,000 و 22,000 (انظر الجدول للمواد). في جميع الأحوال، يمكن فصل النوى عن الحطام الأنسجة، ولكن كان العائد الأمثل باستخدام سرعة أقل (الشكل 1 أ-ب). ويمكن أيضا إعداد الأنوية دونسينج لمدة 3-5 دقيقة (الشكل 1A، والمعطيات غير معروضة)، ولكن التجانس الميكانيكية هو الأسلوب المفضل، كما يمكن تحقيق غلال الأمثل ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هنا يصف لنا بروتوكول رواية لإعداد الكروماتين من الماوس الكبار عضلات الهيكل العظمى، وتبين أن هذا الكروماتين مناسبة لإجراء التجارب على رقاقة التي كشف ملزم عامل النسخ والتعديلات التساهمية هستون في الأنوية الألياف العضلية. ويشمل هذا البروتوكول عدة خطوات حاسمة. الأول هو اختلال الأنسجة التي يمكن أن يؤديها دونس أو بالقص الميكانيكية. القص الميكانيكية أسرع وأكثر قابل لإعادة الإنتاج، وذلك هو الأسلوب المفضل. ومع ذلك، في حالة توفر لا جهاز مناسب، تعطل يمكن أيضا أن يؤديها دونسينج، حيث يوصي بتقييم كفاءة تحلل تحت المجهر قبل المتابعة إلى...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب يعلن أن لديهم لا تضارب المصالح المالية.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ونحن نشكر جميع موظفي مرفق تسلسل الإنتاجية العالية إيجبمك، عضو في اتحاد "فرنسا Génomique" (ANR10-إينبس-09-08) وجميع الخدمات العامة إيجبمك وبخاصة موظفي مرفق الحيوان إيجبمك. كان يؤيد هذا العمل من المنح المقدمة من يزار، في INSERM، فؤاد، الرابطة الوطنية جنيه مكافحة السرطان، الصندوق من خلال وكالة الاستخبارات الوطنية في إطار برنامج يشرف دعفينير المسمى ANR-10-معرض أيدكس-0002-02، لابيكس ANR إينرت-10-معرض أيدكس-0001-02 الدولة الفرنسية ANR-AR2GR-16-CE11-009-01. وكان الممولين أي دور في تصميم الدراسة أو جمع البيانات والتحليل، وقرار نشر أو إعداد المخطوطة. أيده S.J جنيه الرابطة الوطنية مكافحة السرطان، و ANR-AR2GR-16-CE11-009-01، و V.U بوزارة التعليم et de la البحوث. هو معرف 'équipe labellisée' من الرابطة الوطنية جنيه مكافحة السرطان.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
T 25 الرقمي ULTRA-TURRAXT 18 ULTRA-TURRAX0009022800
PMSFSIGMA-ALDRICH CHIMIE SARLP7626-25G
كوكتيل مثبط البروتين-EDTA FreeRoche Diagnostics11873580001
البروتين G حبات SepharoseSIGMA-ALDRICH CHIMIEP-3296
Proteinase KSIGMA-ALDRICH CHIMIEP-2308
مصافي الخلايا 70umCorning BV431751
مصافي الخلايا 40umCorning BV352340
الفورمالديهايد EM الصفEuromedex15710-S
Rnase AFischer Scientific12091039
الفينول: الكلوروفورم: كحول الأيزواميل 25:24: 1SIGMA-ALDRICH CHIMIEP3803
BSASIGMA-ALDRICH CHIMIEB4287-25G
خميرة tRNASIGMA-ALDRICH CHIMIER5636
Glycogen BlueAMIBIONAM9516
Pol II ChIP الأجسام المضادةسانتا كروزSC-9001
H3K27ac ChIP الجسمالمضاد النشط39133
Tead4 ChIP الأجسام المضادةأفيفا أنظمة بيولوجيا(ARP38276_P050)
IGEPALSIGMA-ALDRICH CHIMIEI-3021
E220 التركيز على الموجات فوق الصوتيةCovaris E220
NameCompanyCatalog NumberComments
Additional items
مقص
فضفاض Dounce
15 مل و 50 مل أنابيب
14 مل أنابيب
1.5 مل و 2 مل أنابيب
70 & mu ؛ م و 40 مو ؛ مصافي الخلايا m (كورنينج)
صقرالقاع المستديرةEppendorf

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Johnson, D. S., Mortazavi, A., Myers, R. M., Wold, B. Genome-wide mapping of in vivo protein-DNA interactions. Science. 316 (5830), 1497-1502 (2007).
  2. Furey, T. S. ChIP-seq and beyond: new and improved methodologies to detect and characterize protein-DNA interactions. Nat Rev Genet. 13 (12), 840-852 (2012).
  3. Wade, J. T. Mapping Transcription Regulatory Networks with ChIP-seq and RNA-seq. Adv Exp Med Biol. 883, 119-134 (2015).
  4. Alpern, D., et al. TAF4, a subunit of transcription factor II D, directs promoter occupancy of nuclear receptor HNF4A during post-natal hepatocyte differentiation. Elife. 3, e03613(2014).
  5. Martianov, I., et al. Cell-specific occupancy of an extended repertoire of CREM and CREB binding loci in male germ cells. BMC Genomics. 11, 530(2010).
  6. Achour, M., et al. Neuronal identity genes regulated by super-enhancers are preferentially down-regulated in the striatum of Huntington's disease mice. Hum Mol Genet. 24 (12), 3481-3496 (2015).
  7. Joshi, S., et al. TEAD transcription factors are required for normal primary myoblast differentiation in vitro and muscle regeneration in vivo. PLoS Genet. 13 (2), e1006600(2017).
  8. Ohkawa, Y., Mallappa, C., Dacwag-Vallaster, C. S., Imbalzano, A. N. Myogenesis: Methods and protocols. DiMario, J. 798, Springer Science+Business Media LLC. 517-531 (2012).
  9. Dimauro, I., Pearson, T., Caporossi, D., Jackson, M. J. A simple protocol for the subcellular fractionation of skeletal muscle cells and tissue. BMC Res Notes. 5, 513(2012).
  10. Thomas, J. L., et al. PAK1 and CtBP1 Regulate the Coupling of Neuronal Activity to Muscle Chromatin and Gene Expression. Mol Cell Biol. 35 (24), 4110-4120 (2015).
  11. Kuo, T., et al. Genome-wide analysis of glucocorticoid receptor-binding sites in myotubes identifies gene networks modulating insulin signaling. Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (28), 11160-11165 (2012).
  12. Whyte, W. A., et al. Master transcription factors and mediator establish super-enhancers at key cell identity genes. Cell. 153 (2), 307-319 (2013).
  13. Benhaddou, A., Keime, C., Ye, T., Morlon, A., Michel, I., Jost, B., Mengus, G., Davidson, I. Transcription factor TEAD4 regulates expression of myogenin and the unfolded protein response genes during C2C12 cell differentiation. Cell Death and Differentiation. 19 (2), 220-231 (2011).
  14. Cowling, B. S., et al. Reducing dynamin 2 expression rescues X-linked centronuclear myopathy. J Clin Invest. 124 (3), 1350-1363 (2014).
  15. Thermo Fisher Scientific. ChIP Analysis. , Available from: https://www.thermofisher.com/fr/fr/home/life-science/epigenetics-noncoding-rna-research/chromatin-remodeling/chromatin-immunoprecipitation-chip/chip-analysis.html (2017).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

DNA ChIP Sequencing

مقالات ذات صلة