مقالة منهجية

طريقة فعالة وبسيطة وضع ناغورني كاراباخ وخطوط الخلايا T من المرضى المصابين بالعدوى المزمنة النشطة فيروس ابشتاين-بار

DOI:

10.3791/56515

⸱

مارس 30, 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Genetic Resources Center, Institute of Genetics and Developmental Biology, Chinese Academy of Sciences, 2MOE Key Laboratory of Major Diseases in Children, National Key Discipline of Pediatrics, National Clinical Research Center for Respiratory Diseases, Beijing Key Laboratory of Pediatric Respiratory Infection Diseases, Beijing Pediatric Research Institute, Beijing Children's Hospital, Capital Medical University, 3State Key Laboratory of Molecular Developmental Biology, Institute of Genetics and Developmental Biology, Chinese Academy of Sciences

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تطوير طريقة بسيطة للحصول على استنساخ ناغورني-كاراباخ وخلية T من المرضى كايبف بكفاءة عالية وكمية صغيرة من الدم المحيطي، وجرعة منخفضة من إيل-2.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

قد وصفت عددا من الأساليب إنشاء خطوط الخلايا ناغورني كاراباخ للطن من المرضى الذين يعانون من مرض سرطان الغدد الليمفاوية أو ليمفاوية. هذه الأساليب تستخدم الخلايا المغذية، وتنقية الخلايا T أو ناغورني كاراباخ مع قدر من 10 مل دم، أو جرعة عالية من إيل-2. هذه الدراسة ويعرض طريقة جديدة مع استراتيجية قوية وبسيطة لإنشاء خطوط ناغورني-كاراباخ وخلية T باستزراع الطرفية الدم الخلايا وحيدات النوى (PBMC) مع إضافة إيل-2 البشري الماشوب (رحيل-2)، ويستخدم أقل من 2 مل دم الكامل. الخلايا يمكن أن تنتشر بسرعة في غضون أسبوعين، ويستمر لمدة أكثر من 3 أشهر. مع هذا الأسلوب، أنشئت خطوط ناغورني كاراباخ أو خلية تي 7 مع نسبة نجاح عالية. هذا الأسلوب بسيطة وموثوق بها، وينطبق على إنشاء خطوط الخلايا من المزيد من حالات سرطان الغدد الليمفاوية الخلية كايبف أو ناغورني كاراباخ/تي.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

فيروس ابشتاين-بار (EBV) في كل مكان ويصيب ليس فقط خلايا ب، ولكن أيضا تي والطبيعية الخلايا (ناغورني كاراباخ) القاتل، الذي يسبب عددا من الأمراض المرتبطة EBV ناغورني كاراباخ/تي ليمفاوية (LPD) وسرطان الغدد الليمفاوية/اللوكيميا، مثل هيموفاجوسيتيك EBV المرتبطة ليمفوهيستيوسيتوسيس و extranodal ناغورني كاراباخ/تي خلية سرطان الغدد الليمفاوية، ونوع الآنف وهيدرا فاكسينيفورمي مثل الأورام اللمفاوية العدوانية ناغورني-كاراباخ خلية اللوكيميا1،،من23. ومن بين هذه هو حادة نشطة EBV (سكايبف) الأمراض المزمنة، وهو الحادث أساسا في شرق آسيا، والذي يعتبر الآن LPD الناجم عن التوسع في الاستنساخ من المصابين EBV T أو ناغورني كاراباخ الخلايا4،5،6، 7، لكن من دون نقص المناعة الظاهر موجودة في كثرة الوحيدات العدوائيه (IM)-مثل الأعراض بما في ذلك الحمى وضخامة وتضخم العقد اللمفية والخلل في الكبد مستمر أو متكرر، فضلا عن ارتفاع EBV-الحمض النووي تحميل في الدم المحيطي8،9. المرضى الذين يعانون من كايبف سوء تشخيص10،11، والمرضية، ودور EBV غير واضح. ولذلك، الخلية الخطوط المشتقة من الأمراض المرتبطة EBV ناغورني كاراباخ/تي ليمفاوية والأورام الليمفاوية مفيدة جداً كنماذج الخلية لتوضيح إليه EBV الناجم عن انتشار الخلايا T أو ناغورني كاراباخ وعلاقتها مع ارتفاع عدد حالات سرطان الدم أو سرطان الغدد الليمفاوية.

وحتى الآن، تم إنشاء العديد من خطوط الخلايا مع تقنيات مختلفة12،،من1314،،من1516. خط خلية بشرية ناغورني-كاراباخ، ناغورني كاراباخ-يس، أنشأت من ناغورني كاراباخ الخلية اللمفاوية/اللوكيميا، استزراع يشترك مع خط خلية stromal ماوس كالتغذية، وحضور رحيل-2 بتركيز 20U كل مل15. KAI3 وكان آخر خط الخلية ناغورني كاراباخ المنشأة من سكايبف مع خط الخلية ليمفوبلاستويد الذاتي (LCL)، أو المرضى الذين يعانون من حساسية شديدة البعوض من الخلايا ب غيرت EBV، كالخلايا المغذية وإضافة لرحيل-2 في 100U/مل16. SNK6 و SNT8 مستمدة من أنسجة الورم الأنفي ناغورني كاراباخ/تي خلية سرطان الغدد الليمفاوية المرضى عن طريق إضافة جرعة عالية من رحيل-2 (700U/mL)12. مع تقنية مماثلة، وكانت الخلية SNK-1 من المرضى كايبف، مثقف من ببمك عن طريق إزالة خلايا تي ومشيراً إلى 700U/مل من رحيل-213،17. وأنشئت عن طريق إزالة خلايا CD4 + و CD8 + الخلايا18SNT13 و SNT15. حتى الآن، الأخرى خطوط الخلية خلية تي وناغورني كاراباخ من المرضى LPD EBV ناغورني كاراباخ/تي كل ما وضعت مع هذا الأسلوب19.

عيوب الأساليب القائمة المذكورة أعلاه تتضمن توظيف الخلايا المغذية، واشتراط جرعة عالية من إيل-2، والاستفادة من قدر 10 مل كل الدم، أو تنقية الخلايا NK/T، والتي صعبة للغاية في العيادة المقرر أن ضرورة التحقق من أي نوع من أنواع الخلايا أن EBV خفية يصيب قبل بداية للثقافة. كما كايبف يحدث أساسا في الأطفال في آسيا، 10 مل الدم لا يسهل الحصول عليها في جميع المناطق. في هذه الدراسة، قمنا بتطوير طريقة بسيطة جديدة مع نسبة نجاح عالية إنشاء خطوط ناغورني كاراباخ و/أو خلية T باستزراع ببمك من كايبف من المرضى باستخدام جرعة منخفضة من rhIL2 ووحدة تخزين 2 مل من الدم كله دون تغذية الخلايا. وقد أثبتت نتائج هذه الطريقة كفاءة عالية وتوفير الوقت.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأقر هذه الدراسة لجنة الأخلاقيات التابعة لمعهد علم الوراثة وعلم الأحياء التنموي، الأكاديمية الصينية للعلوم، والبروتوكول يتبع المبادئ التوجيهية المؤسسية لرفاهية الإنسان.

ملاحظة: انظر الشكل 1 لتخطيطي لسير العمل.

1-عزل ببمك من المرضى كايبف

  1. تنقية ببمك الأولية من 2 مل دم الكامل للمرضى الذين كايبف بالتدرج (مثلاً، فيكل-البلاك) الطرد المركزي اتباع إرشادات الشركة المصنعة. وبدلاً من ذلك، ذوبان الجليد PBMC cryopreserved من النتروجين السائل مع المتوسط RPMI 1640.
  2. إضافة 2 ميليلتر من تريبان الأزرق (0.4 في المائة) إلى 18 تعليق خلية ميليلتر، والانتظار لمدة 3 دقائق لوصمة عار الخلايا ونقل التعليق على لوحة العداد الخلية وقياس تركيز للخلايا والبقاء مع عداد الآلي خلية.
  3. إعداد تعليق خلية في كثافة من 2-3 × 106 خلايا/مل استكماله بالكامل المتوسطة الثقافة RPMI 1640 الذي يحتوي على 20% مصل الإنسان (الحرارة غير نشط في 56 درجة مئوية)، 2 مم ل الجلوتامين، والمضادات الحيوية (100 ميكروغرام/مل ستربتوميسين، 100 يو/مليلتر البنسلين). البذور 1 مل تعليق PBMC الواحدة وكذلك في لوحات ثقافة الخلية 24-جيدا.
  4. إضافة 150 من رحيل-2 ش كل بئر.
  5. وضع لوحات الثقافة في 5% CO2 حاضنة في 37 درجة مئوية.
  6. في اليوم 2، نلاحظ مورفولوجيا الخلايا تحت مجهر (200 X التكبير)؛ الخلايا في حالة جيدة عندما تكون مشرقة وجولة.

2-توسيع نطاق الخلايا وترقيم الخلايا قابلة للتطبيق

  1. مراقبة مورفولوجيا الخلايا تحت مجهر (200 X التكبير)، ورصد حالة نمو الخلايا بترقيم الخلايا قبل تغيير المتوسطة: إضافة 2 ميليلتر من تريبان الأزرق (0.4 في المائة) إلى 18 تعليق خلية ميليلتر، وحساب تركيز للخلايا (انظر 1-2، الشكل 2).
  2. تجاهل 500 ميليلتر من المتوسط في صفيحة 24-جيدا، وإضافة 500 ميليلتر جديدة كاملة الثقافة المتوسطة. إضافة 150U رحيل-2 كل بئر.
  3. تغيير في المتوسط مرتين في أسبوع كما هو الحال في الخطوة 2، 2.
  4. رسم منحنى نمو الخلية (الشكل 3).
  5. عندما يتجاوز تركيز خلايا قابلة للحياة 5 × 106/mL، تقسيم الخلايا إلى آبار جديدة بتركيز 1-2 × 106 خلايا/مل في كل بئر. تستغرق هذه العملية من 2-4 أسابيع.

3-خلية فينوتيبينج بالتدفق الخلوي

  1. عندما اتسع نطاق الخلايا، جمع 1 × 106 خلايا لتحديد تعمل خطوط الخلية. الطرد المركزي خلايا في 240 x ز لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة (الخلايا NK/T سوف يعجل في الجزء السفلي من الأنبوب).
  2. تجاهل المادة طافية، وتغسل الترسيب بإضافة 7 مل برنامج تلفزيوني. أجهزة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في 240 x ز في درجة حرارة الغرفة. كرر مرة واحدة.
  3. إضافة 200 ميليلتر مصل الدم البشري لكل أنبوبة ومزيج جيد واحتضان لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
  4. الطرد المركزي خلايا في ز x 240 لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. تجاهل المادة طافية وتعليق إعادة الخلايا في 1 × 106/mL مع ببسا الباردة (PBS+0.2%BSA). تقسيم الخلايا في أنابيب 5، كل أنبوبة تحتوي على خلايا5 × 10 2.
  5. خلايا أجهزة الطرد المركزي في ز x 240 لمدة 5 دقائق في 4 درجات مئوية. تجاهل المادة طافية وتعليق إعادة الخلايا مع ببسا المخزن المؤقت أو ببسا التي تحتوي على 10 ميليلتر PE (أو PE-Cy7) والمسمى 10 ميليلتر فيتك الأجسام المضادة وصمة عار مستقبلات الخلية من الخلايا T أو ناغورني كاراباخ على الجليد كما هو مبين في الشكل4. يتم استخدام الخلايا علقت مع ببسا المخزن المؤقت كعنصر سلبي.
  6. احتضان الخلايا مع الأجسام المضادة لمدة 20-30 دقيقة على الجليد في الظلام.
  7. تغسل الخلايا مرتين مع ببسا الباردة، وإعادة تعليق الخلايا مع 300 ميليلتر ببسا الباردة.
  8. تحليل النمط الظاهري الخلية مع سيتوميتير تدفق.
    1. قم بإعداد Cytometer التدفق في حالة "إنشاء ورقة العمل". إعداد قالب تجريبي مع مؤامرة دوت يعرض المبعثر إلى الأمام (FSC) مقابل الجانب مبعثر (SSC).
    2. تحميل أنبوب ايستب التحكم الأمثل الفولتية منتدى التعاون الأمني، والتعاون بين بلدان الجنوب، وتحسين قيمة العتبة منتدى التعاون الأمني لإزالة الحطام دون التداخل مع السكان خلية للفائدة. حذف كافة المعلمات فيما عدا منتدى التعاون الأمني، والتعاون بين بلدان الجنوب، فيتك، PE و PE-Cy7.
    3. أداء التعويض باستخدام عنصر التحكم ايستب وعنصر إيجابي واحد في كل مجموعة التحليل 2-لون.
    4. تحميل عينات وإنشاء CD19 مقابل الدكتور هلا، دوت CD8 CD4 و CD56 مقابل CD16 CD3 مقابل CD16 مؤامرات عرض السكان مختلفة من الخلايا.
      ملاحظة: استخدمت ببمك لأداء تعويض استخدام عنصر التحكم السلبية/ايستب ومراقبة إيجابية واحدة. واستخدمت الفلورة 2-اللون مع تدفق سيتوميتير بشكل روتيني لتحليل التعبير عن علامات السطحية. الأجسام التالية مدرجة: المضادة-هلا-الدكتور ومكافحة CD4 والمضادة-CD16 مترافق مع fluorescein isothiocyanate (فيتك)، CD8 المضادة، ومكافحة CD56، CD3 مترافق مع فيكوريثرين (PE) ومكافحة-CD19 مترافق مع PE-Cy7.

4-التوسع وتجميد الخلايا NK/تي

  1. تغيير الوسط عند اكتمال تحليل النمط الظاهري الخلية. بعناية إزالة نصف من المادة طافية وتجنب لمس الخلايا في الجزء السفلي من اللوحة. إضافة نفس الحجم من المتوسطة ثقافة جديدة تحتوي على 300 من رحيل-2 يو/مليلتر إلى لوحات الخلية.
  2. تغيير نصف المتوسط كل 3 أيام (ك 2.2) حتى الخلية مجموعات مرئية بوضوح تحت المجهر (الشكل 2). عادة ما تستغرق هذه العملية من 2-3 أسابيع.
  3. نقل الخلايا من لوحات 24-جيدا في قوارير الثقافة T25 بعد خلط آبار مختلفة من نفس النسب. مضاعفة حجم متوسط الثقافة، فإنه يتحول إلى اللون الأصفر حتى حجم المتوسط توسع إلى 10-15 مل. إضافة رهيل-2 مع تركيز 150 يو/مليلتر.
  4. تغيير متوسطة 24 ساعة قبل تجميد بعد 2-3 أسابيع المتنامية، عند الخلية كتلة يمكن ملاحظتها بالعين المجردة. قياس تركيز الخلية مع عداد خلايا.
  5. الطرد المركزي من تعليق خلية لمدة 5 دقائق في 240 x ز، وإعادة تعليق خلية بيليه في كثافة من 5-10 × 106 خلايا/مل مع الحل الأرصدة المجمدة التي تحتوي على مصل بقرى الجنين 90% و 10% ديميثيلسولفوكسيدي ([دمس]). تجميد بمعدل 1 درجة مئوية في كل دقيقة إلى-80 درجة مئوية ومن ثم نقل مباشرة إلى النتروجين السائل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بعد 3 أيام الثقافة أثناء إنشاء خطوط الخلايا والخلايا متعددة الأشكال تبدأ في الظهور (الشكل 2). بعد 7 أيام، خلايا تنمو بسرعة، كما يتم زيادة عدد وصلاحية الخلايا بمعدل مرتفع (الشكل 3). مجموعات صغيرة من الخلايا تكون واضحة للعيان بعد 10-14 يوما وتنمو، عندما يمكن أن يتجاوز تركيز الخلية 3-6 × 106. في هذه الفترة، ينبغي توسيع نطاق الخلايا بتقسيم آبار اثنان أو ثلاثة من لوحة الثقافة. حوالي شهر في وقت لاحق، مرة واحدة يبلغ عدد الخلا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد وضعت في هذا البروتوكول، تقنية جديدة لإنشاء خطوط الخلايا ناغورني كاراباخ للطن من الدم كله من المرضى كايبف. بالمقارنة مع الأساليب القائمة، والميزة الرئيسية لهذا الأسلوب هو بساطته ومتطلباتها فقط كمية صغيرة من الدم، في حين أنه يسلك بمعدل نجاح مرتفع وظروف جيدة لبقاء الخلية. وعلاوة على ذلك، يمكن إنشاء خطوط الخلايا NK/تي باستزراع PBMC دون تحديد أنواع الخلايا EBV خفية المصابة في وقت مبكر، كتحديد سوف تستهلك المزيد من الدم والوقت قبل استزراع. وبدلاً من ذلك، يمكن تحليل خطوط الخلايا ويمكن تنقية مختلفة تعمل الخلايا مع التدفق الخل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

D.Z. و X.Z. و X.C. هي المخترعين المشاركين في انتظار طلبات براءات الاختراع التي تغطي الاستخدامات المحتملة لهذا الأسلوب لإنشاء خطوط الخلايا NK/T وخطوط الخلية المحددة في هذه الدراسة. D.Z.، X.Z.، و X.C. تعلن لا تضارب المصالح المالية في هذا العمل. ويعلن الكتاب المتبقية لديهم لا تضارب المصالح المالية.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا العمل كان يؤيد مشاريع مفتاح من الأكاديمية الصينية للعلوم (كفزد-سويسري-205)، "الاستراتيجية البيولوجية موارد تكنولوجيا نظام الدعم للأكاديمية الصينية" للعلوم (كزبزكس-1 وزسب-004)، والمنح من "مؤسسة العلوم الوطنية في الصين" ( 81401640) وشنغهاي صندوق العلوم الطبيعية (14ZR1434800).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
Hu HLA-DR FITCBDالجسم المضاد ل FACS
Hu CD4 FITCBD555346الجسم المضاد ل FACS
Hu / NHP CD8 PEBD557086الجسم المضاد ل FACS
Hu CD3 PEBD555340الجسم المضاد ل FACS
Hu CD16 FITC 3G8BD555406الجسم المضاد ل FACS
Hu / NHP CD56 PE MY31BDجسم مضاد 556647لجسم مضاد FACS
hu / CD19 PE-Cy7BD560728لمصل FACS
البشري IL-2Roche11147528001
مصل بشريMRCCCC118-125
حاضنة CO2SANYO
الطرد المركزيTechcompCT6Tالطرد المركزي
أوليمبوس CKX53CKX53
عداد الخلايا الآليCountstarIC 1000لعد الخلايا
24 مجموعة ثقافة خلايا البئرCorning Incorporated3524ألواح البوليسترين
25 سم 2 قارورة ثقافة الخليةعش707001البوليسترين
FBSGibco10270مكون الخلية المتوسطة
RPMI متوسط 1640حياة22400089لوسط الخلية
L-GlutamineAmresco374مكون الخلية المتوسطة
100 × محلول البنسلين الستربتومايسين BioRoYeeBRY-2309BioRoYeeBRY-2309مكون متوسط الخلية
Ficoll paque بالإضافة إلىGE Healthcare17-1440-03للعزل المختبري للخلايا الليمفاوية
DMSOSigmaD2650لتجميد الخلايا
مقياس التدفق الخلويBDBD FACSria II
softwareBDBD FACSتحليل FACS للبرامج
560944 مجهر التنفيذية

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Cohen, J. I. Epstein-Barr virus infection. N Engl J Med. 343 (7), 481-492 (2000).
  2. Cohen, J. I., Kimura, H., Nakamura, S., Ko, Y. H., Jaffe, E. S. Epstein-Barr virus-associated lymphoproliferative disease in non-immunocompromised hosts: a status report and summary of an international meeting, 8-9 September 2008. Ann Oncol. 20 (9), 1472-1482 (2009).
  3. Oshimi, K. Progress in understanding and managing natural killer-cell malignancies. Br J Haematol. 139 (4), 532-544 (2007).
  4. Kawa, K., et al. Mosquito allergy and Epstein-Barr virus-associated T/natural killer-cell lymphoproliferative disease. Blood. 98 (10), 3173-3174 (2001).
  5. Kimura, H. Pathogenesis of chronic active Epstein-Barr virus infection: is this an infectious disease, lymphoproliferative disorder, or immunodeficiency? Rev Med Virol. 16 (4), 251-261 (2006).
  6. Kimura, H., et al. Clinical and virologic characteristics of chronic active Epstein-Barr virus infection. Blood. 98 (2), 280-286 (2001).
  7. Ohshima, K., et al. Proposed categorization of pathological states of EBV-associated T/natural killer-cell lymphoproliferative disorder (LPD) in children and young adults: overlap with chronic active EBV infection and infantile fulminant EBV T-LPD. Pathol Int. 58 (4), 209-217 (2008).
  8. Okano, M. Overview and problematic standpoints of severe chronic active Epstein-Barr virus infection syndrome. Crit Rev Oncol Hematol. 44 (3), 273-282 (2002).
  9. Straus, S. E. The chronic mononucleosis syndrome. J Infect Dis. 157 (3), 405-412 (1988).
  10. Jones, J. F., et al. T-cell lymphomas containing Epstein-Barr viral DNA in patients with chronic Epstein-Barr virus infections. N Engl J Med. 318 (12), 733-741 (1988).
  11. Kikuta, H., et al. Epstein-Barr virus genome-positive T lymphocytes in a boy with chronic active EBV infection associated with Kawasaki-like disease. Nature. 333 (6172), 455-457 (1988).
  12. Nagata, H., et al. Characterization of novel natural killer (NK)-cell and gammadelta T-cell lines established from primary lesions of nasal T/NK-cell lymphomas associated with the Epstein-Barr virus. Blood. 97 (3), 708-713 (2001).
  13. Nagata, H., et al. Presence of natural killer-cell clones with variable proliferative capacity in chronic active Epstein-Barr virus infection. Pathol Int. 51 (10), 778-785 (2001).
  14. Tabata, N., et al. Hydroa vacciniforme-like lymphomatoid papulosis in a Japanese child: a new subset. J Am Acad Dermatol. 32 (2 Pt 2), 378-381 (1995).
  15. Tsuchiyama, J., et al. Characterization of a novel human natural killer-cell line (NK-YS) established from natural killer cell lymphoma/leukemia associated with Epstein-Barr virus infection. Blood. 92 (4), 1374-1383 (1998).
  16. Tsuge, I., et al. Characterization of Epstein-Barr virus (EBV)-infected natural killer (NK) cell proliferation in patients with severe mosquito allergy; establishment of an IL-2-dependent NK-like cell line. Clin Exp Immunol. 115 (3), 385-392 (1999).
  17. Zhang, Y., et al. Common cytological and cytogenetic features of Epstein-Barr virus (EBV)-positive natural killer (NK) cells and cell lines derived from patients with nasal T/NK-cell lymphomas, chronic active EBV infection and hydroa vacciniforme-like eruptions. Br J Haematol. 121 (5), 805-814 (2003).
  18. Oyoshi, M. K., et al. Preferential expansion of Vgamma9-JgammaP/Vdelta2-Jdelta3 gammadelta T cells in nasal T-cell lymphoma and chronic active Epstein-Barr virus infection. Am J Pathol. 162 (5), 1629-1638 (2003).
  19. Imadome, K., et al. Novel mouse xenograft models reveal a critical role of CD4+ T cells in the proliferation of EBV-infected T and NK cells. PLoS Pathog. 7 (10), e1002326(2011).
  20. Shibuya, A., Nagayoshi, K., Nakamura, K., Nakauchi, H. Lymphokine requirement for the generation of natural killer cells from CD34+ hematopoietic progenitor cells. Blood. 85 (12), 3538-3546 (1995).
  21. Spits, H., Yssel, H. Cloning of Human T and Natural Killer Cells. Methods. 9 (3), 416-421 (1996).
  22. Liu, X., Xu, C., Duan, Z. A Simple Red Blood Cell Lysis Method for the Establishment of B Lymphoblastoid Cell Lines. J Vis Exp. (119), (2017).
  23. Kawabe, S., et al. Application of flow cytometric in situ hybridization assay to Epstein-Barr virus-associated T/natural killer cell lymphoproliferative diseases. Cancer Sci. 103 (8), 1481-1488 (2012).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

NK T 2

مقالات ذات صلة