هذا البروتوكول يوضح الخطوات المتتالية الهامة اللازمة لتقييم مدى أهمية رصد المعلمة الحيوية وعمليات إصلاح الحمض النووي في أحياء أبواغ عصيات نجحت بعد العلاج مع انخفاض ضغط البلازما بواسطة تتبع إصلاح الحمض النووي المسمى fluorescence البروتينات عن طريق الفحص المجهري [كنفوكل] حل الوقت ومسح المجهر الإلكتروني.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
التحقيق "تضر الآثار من منخفضة الضغط البلازما التعقيم" على البقاء لجراثيم Bacillus نجحت "باستخدام خلية يعيش مجهرية"
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
التعقيم البلازما بديلاً واعداً لطرق التعقيم التقليدية لأغراض رحلات الفضاء والصناعية والطبية،. تصريف الضغط المنخفض البلازما (الطب الخاص المحدود) تحتوي على مجموعة واسعة من الأنواع النشطة، والتي تؤدي إلى المنظمة الميكروبية السريع. دراسة كفاءة والآليات للتعقيم بالطب الخاص المحدود، نستخدم جراثيم الكائن اختبار نجحت عصية بسبب مقاومتهم إجراءات التعقيم التقليدية غير عادية. يصف لنا إنتاج نجحت بوغ مونولاييرس، عملية التعقيم بالضغط المنخفض البلازما في مفاعل بلازما الحث يقترن مزدوجة لتوصيف مورفولوجيا بوغ باستخدام المسح الضوئي المجهر الإلكتروني (SEM)، تحليل للإنبات ويعتبر امتداداً للجراثيم بخلية حية مجهرية. هدفا رئيسيا للأنواع البلازما المواد الجينية (DNA) وإصلاح الحمض النووي البلازما المستحثة الآفات على أحياء بوغ أمر حاسم لبقاء الكائن الحي. هنا، علينا أن ندرس قدرة إنبات جراثيم وإصلاح دور الحمض النووي أثناء الإنبات بوغ وثمرة بعد العلاج بالطب الخاص المحدود بتتبع المسمى فلوريسسينتلي الحمض النووي إصلاح البروتينات (RecA) مع حل وقت الأسفار [كنفوكل] مجهرية. تعامل وتفعيلها لإنبات مونولاييرس بوغ غير المعالجة وتصور مع مجهر مقلوب خلية يعيش [كنفوكل] مرور الوقت لمتابعة رد فعل جراثيم فردية. لدينا الملاحظات تكشف عن أن الكسر الإنبات وتعدى جراثيم يعتمد على مدة الطب الخاص المحدود-العلاج تصل إلى الحد أدنى بعد 120 س. RecA-يفب الأسفار (الأسفار الصفراء البروتين) تم اكتشاف إلا في عدد قليل من الجراثيم وتطويرها في جميع تعدى الخلايا مع ارتفاع طفيف في المعالجة بالطب الخاص المحدود جراثيم. وعلاوة على ذلك، بعض من البكتيريا النباتية المستمدة من جراثيم المعالجة بالطب الخاص المحدود وأظهرت زيادة في السيتوبلازم، وتميل إلى ليس. يمكن أن تكون الأساليب المذكورة لتحليل جراثيم فردية مثالية لدراسة الجوانب الأخرى لإنبات بوغ وثمرة.
المقدمة
هدفا رئيسيا لاستكشاف الفضاء هو البحث عن التوقيعات من أشكال الحياة والجزيئات الحيوية الأخرى الهيئات الكواكب والأقمار في نظامنا الشمسي. نقل الكائنات الدقيقة أو الجزيئات الحيوية المنشأ الأرضي للمناطق الحرجة للاستكشاف لمخاطر خاصة لتأثير التنمية وسلامة البعثات الحياة-الكشف عن هيئات الكواكب مثل المريخ وأوروبا1. فرض أنظمة صارمة على بعثات مأهولة والروبوتية إلى الكواكب الأخرى وهذه الأقمار والكويكبات والسماوية الأخرى المبادئ التوجيهية الدولية لحماية الكوكب، أنشئ بلجنة أبحاث الفضاء (كوسبار) في عام 1967، وتنظم تنظيف وتعقيم لمركبة فضائية ومكونات الأجهزة الحاسمة السابقة لإطلاق بغية القضاء على تلوث الكائنات الأرضية الدقيقة ومنع حدوث التلوث المنتقل من الإجرام ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1- نجحت عصيات بوغ إنتاج وتنقية
- إنتاج بوغ، نقل ثقافة بين عشية وضحاها 5 مل لكل سلالة نجحت باء ، تستكمل بالمضادات الحيوية المناسبة، إلى 200 مل مزدوجة قوامها سائل شافر تبوغ المتوسطة (لكل لتر مرق ز 16 المغذيات، بوكل 2 غ، 0.5 غ مجسو 4* 7 ح2س، 2 مل م 1 Ca (لا3)2، 2 مل م 0.1 الحركة2 * • 4 ح2س، 2 مل 1 مم فيسو4، الجلوكوز 50% (w/v) 2 مل18) وزراعتها مع تهوية نشطة في 37 درجة مئوية ح 72 أو حتى > 95% من الثقافة وقد سبورولاتيد. تستخدم جراثيم السلالات التالية: نجحت ب- PY79 (نوع البرية) نجحت PY79ΔrecA:: الأجسام القريبة من الأرض (نقص....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
البقاء على قيد الحياة للمعالجة بالبلازما ب-نجحت الجراثيم
استخدام العلاج البلازما للجراثيم ب-نجحت في هذه الدراسة تظهر انخفاضا في البقاء على قيد الحياة مع زيادة مدة العلاج البلازما (الشكل 2). جراثيم سلالة الإعراب عن recA-الجينات التي تنصهر فيها يفب أظهر منحنيات البقاء على قيد الحياة مماثلة لجراثيم سلالة نوع البرية، مشيراً إلى أن التعديل الوراثي له أي تأثير كبير على حيوية البكتي.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تعقيم أسطح باستخدام درجات الحرارة المنخفضة والضغط المنخفض البلازما بديلاً واعداً لإجراءات التعقيم بدلاً من التقليدية مثل العلاج بالمواد الكيميائية، الإشعاع المؤين (مثل الغازات مثل ح2س2 أو أكسيد الإيثيلين) أو الحرارة الجافة والرطبة23. توفير أساليب التعقيم العادية غالباً تعقيم فعالة، ولكن كما هي معروفة للتأثير على المواد المعالجة وتمثل خطرا محتملاً بالنسبة للمشغل. تقدم المنظمة البيولوجي السريع ومتجانسة باستخدام تركيبة من عدة مكونات مثل الأشعة فوق البنفسجية الفوتونات وا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وأعلن لا تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
يشكر المؤلفون شرودر أندريا لها المساعدة التقنية الممتازة خلال أجزاء من هذا العمل واولريش جيه نيكا لمساعدتها خلال تبادل لإطلاق النار الفيديو. كما نود أن نشكر سيمونز ألف إيل لأن التبرع السخي من سلالات Bacillus نجحت : LAS72 و LAS24. كان دعم هذا العمل في أجزاء من المنح من مؤسسة البحوث الألمانية (DFG) باكيتانتراج (بلاسماديكون باك 728) للسلطة الفلسطينية (فصيل عبد الواحد 7/3-1)، وجمهورية مقدونيا (2023 مو/2-1) ودلر منح الحياة المحطة الفضائية الدولية DLR-فو-صورة الصحافة، البرنامج RF-فو، تيلبروجرام 475 (إلى F.M.F، ومحمد، وجمهورية مقدونيا). F.M.F. أيده على منحة دكتوراه من "مدرسة بحوث علوم الحياة الفضائية هلمهولتز" (سباسيليفي) في الألماني (DLR) في كولونيا، ألمانيا، التي ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| فوهة مادتان (موديل 970-8) | Schlick | 14،404 | 230 V ، 50 هرتز ، D 4.484 / 8 ، قطر التجويف 0.8 مم |
| Luria Bertani Medium | Sigma Aldrich | 70122-100G | |
| موصلات الأنبوب | Festo | n / a | G 1/8 |
| Magnetvalve DO35-3 / 2NC-G018-230AC | بوش ريكسروث | 820005100 | |
| PLN أنبوب البولي أميد | Festo | 558206 | د = 6 مم |
| شرائح زجاجية | VWR | 48300-026 | |
| مؤقت كهربائي 550-2-C | Gefran | F000074 | 220 فولت |
| غرفة خلية أتوفلورية | Menzel ، Fisher Ref. | 3406816 | d = 25 مم ، مستديرة |
| MgSO4 * 7 H 2< / sub>O | Sigma Aldrich | 13152 | |
| Ca (NO3< / sub>) 2< / sub> | sigma Aldrich | 202967 | |
| MnCl 2< / sub > * 4 H2< / sub>O | Sigma Aldrich | 244589 | |
| FeSO4 * 7H2O< / sub> | AppliChem | 13446-34-9 | |
| جلوكوز | ميرك | 215422 | |
| KCl | سيجما ألدريتش | P9541-500G | |
| مرق المغذيات (NB) | ميرك | 105443 | |
| لوريا بيرتاني (LB) | ميرك | 110283 | |
| 96-بئر | ThermoFisher | 243656 | |
| Zeiss LSM 780 ، Axio Observer Z1 | Carl Zeiss Microscopy GmbH | n / a | |
| Leo 1530 Gemini | Carl Zeiss Microscopy GmbH | n / a | |
| ZEN 2 و ZEN lite 2012 (برنامج) | Carl Zeiss Microscopy GmbH | n / a | |
| SigmaPlot ، الإصدار 13.0 (برنامج إحصائي) | Systat GmbH ، Erkrath ، ألمانيا | n / a | |
| غرفة خلية Attofluor | Invitrogen | A7816 | |
| & micro ؛ - Dish 35 مم ، عالية Grid-500 قاع زجاجي | المرجع | نفسه 81168 |
المراجع
- Nicholson, W. L., Schuerger, A. C., Race, M. S. Migrating microbes and planetary protection. Trends Microbiol. 17, 389-392 (2009).
- COSPAR. COSPAR Planetery Protection Policy. Space Research Today, COSPAR's Information Bulletin. 193, 1-14 (2015).
- De Geyter, N., Morent, R.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
