مجهرية على أساس أساليب التقييم للهجرة الخلية الظهارية أثناء التئام الجرح في المختبر

Summary

هذه المخطوطة يصف كيف شق مثل الآفات على الخلايا الظهارية مثقف مونولاييرس مريح نموذج الجرح الشفاء في المختبر، مما يسمح للتصوير بواسطة [كنفوكل] أو الفحص المجهري بالليزر، والتي يمكن أن توفر جودة عالية البيانات الكمية والنوعية لدراسة سلوك الخلية والآليات المعنية بالهجرة.

Abstract

الهجرة الخلية جانب إلزامي لالتئام الجروح. إنشاء اصطناعية الجروح في نماذج حيوانية للبحث غالباً ما تكون النتائج في إجراءات تجريبية مكلفة ومعقدة، بينما يحتمل أن تفتقر إلى الدقة. الثقافة في المختبر من خطوط الخلايا الظهارية منبرا مناسباً للبحث عن سلوك الخلية المهاجرة في التئام الجروح وأثر العلاجات في هذه الخلايا. غالباً ما يتم دراسة فسيولوجيا الخلايا الظهارية في ظروف غير روافد؛ بيد هذا النهج قد لا تشبه الجرح الطبيعية شفاء الظروف. تعطيل تكامل ظهارة بالوسائل الميكانيكية يولد نموذج واقعي، ولكن يمكن أن تعوق تطبيق التقنيات الجزيئية. ونتيجة لذلك، الأمثل لدراسة الهجرة الخلية الظهارية تقنيات الفحص المجهري على أساس في المختبر. هنا نحن التفصيل طريقتين محددة والمقايسة الصفر الجرح مصطنعة والمقايسة الجبهة الهجرة المصطنعة، التي يمكن الحصول على البيانات الكمية والنوعية، على التوالي، على أداء الخلايا الظهارية المهاجرة.

Introduction

الهجرة الخلية المطلوب لالتئام الجروح، كما أنها مسؤولة عن الإغلاق النهائي للفجوة الظهارية وترميم السطح تعطلت¹. أداء الجروح الاصطناعية في نماذج حيوانية يسمح بتكرار هذه العملية المعقدة بالقرب من الظروف الفسيولوجية². ومع ذلك، غالباً ما يؤدي هذا النهج في إجراءات تجريبية مكلفة ومعقدة، التي يحتمل أن تكون تفتقر إلى الدقة لدراسة عمليات متميزة، بسبب الطبيعة المعقدة لعملية التئام الجروح.

الثقافة في المختبر من خطوط الخلايا الظهارية يوفر بديلاً مفيداً لنماذج حيوانية للبحث في الدور الذي تؤديه هذه الخلايا في التئام الجروح وآثار العلاج على سلوك الخلية المهاجرة. وكثيراً ما هو درس فسيولوجيا الخلايا الظ....

Protocol

1-اصطناعية الجرح المقايسة الصفر للدراسات الكمية

1. إعداد أحادي الطبقة الخلية
   1. العمل تحت ظروف معقمة، البذور وتنمو الخلايا الظهارية Mv1Lu أو هاكات في قوارير الثقافة باستخدام مصل تكمل المتوسطة. تحديث المتوسط مرة كل 24-48 h. بعد أن تصل الخلايا إلى التقاء 80%، فصل الخلايا باستخدام الطريقة المناسبة، أي، تريبسينيزيشن⁹.
      ملاحظة: Mv1Lu هاكات تستزرع خطوط الخلايا الظهارية المتوسطة الثقافة اللور وديميم، باستخدام على التوالي، تكملها مم 2 لتر-الجلوتامين والمحتضنة في 37 درجة مئوية مع جو التي تسيطر عليها شركة 5%₂. يجب أن جزيئي كل خط الخلية دقيق لتحديد تركيز الخلية والتوقيت المطلوب للوصول إلى كامل كونفل....

Results

الجرح اصطناعية المقايسة الصفر للدراسات الكمية: تقييم عامل نمو البشرة (لو) الترويج للهجرة:

لو محفز معروفة انتشار الخلايا الظهارية والهجرة، وبالتالي عنصر تحكم إيجابية للتحديد الكمي لتشجيع الهجرة. واستخدمت مونولاييرس خلية Mv1Lu وهاكات في فحوصات الصفر الجرح وتم الحصول على صور قبل العلاج. بعد التطعيم مع 10 نانوغرام/مل مماثلة، كانت الخلايا المحتضنة ح 19 قبل التثبيت وصور بعد العلاج. أبقى الانتشار إلى الحد أدنى من الحفاظ على ظروف المجاعة ا.......

Discussion

على الجلد أو الأغشية المخاطية التعطيل، يتم استعادة وظيفة حاجز الأعمال التي تقوم بها العديد من أنواع الخلايا، بما في ذلك الخلايا الليفية أو الخلايا الظهارية ومحصنة. مربوط، تخضع هذه الخلايا معقدة العملية التي تنطوي على المبرمج وانتشارها، والتمايز، والأهم من ذلك، تنتجها الخلايا الليفية وطلائي خلايا الهجرة، وهي المسؤولة عن ترميم الأنسجة تعطلت الآلية في نهاية المطاف، إغلاق الفجوة الظهارية السطحية^1،12 هكذا، دراسة الهجرة الخلية يساعد على دقة وصف السلوك الفسيولوجية للخلا.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
دولبيكو s معدل النسر المتوسط (DMEM)	Biowest ، Nuaillé ؛ ، فرنسا	L0102-500	اختياري 10٪ FBS ملحق
النسور الحد الأدنى من الوسط الأساسي (EMEM)	Lonza	BE12 -662F	اختياري 10٪ FBS مكمل
L-Glutamine	Lonza	BE17-605E	استخدم في 2 ملي مولار
مصل الأبقار الجنينية (FBS)	ثيرمو فيشر العلمي ، والثام ، ماساتشوستس الولايات المتحدة الأمريكية	DE17603A
تريبسين - EDTA	سيجما ألدريتش ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية	T4049	تمييع حسب الاقتضاء
Poly-L-Lysine	Sigma-Aldrich ، St لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية	P9155
ملحي ذو فوسفات Dulbecco (DPBS) (10x)	Gibco من Life Technologies	14200-067	مخفف إلى 1x
24 بئر ألواح استزراع	BD FALCON // SARSTED	734-0020
ألواح استزراع 6 آبار	SARSTEDT	83-3920
عامل نمو البشرة (EGF)	سيجما ألدريتش ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية	E9644	مستعمل 10 ng / مل
زجاج غطاء دائري	MENZEL-GL & Auml ؛ SER	MENZCB00120RA020	عمق قصير للمجال
شفرة حلاقة معززة رقم 743	مارتور (من خلال VWR)	MARO743.50
200 & micro ؛ ل نصائح ماصة الهباء الجوي المعقمة	VWR	732-0541
20 & micro; ل نصائح ماصة الهباء الجوي المعقمة	VWR	732-0528
كاميرا رقمية مقترنة بمجهر تباين الطور	Motic Spain	Moticam Camera 2300 3.0 M Pixel USB 2.0 ؛ مجهر Motic Optic AE31
متحد البؤر	ZEISS التصوير المصغر ، ألمانيا	LSM 510 META
10 سم طبق ثقافة	BD FALCON	353003
الأرنب متعدد النسيلة المضاد للجسم المضاد c-Jun	سانتا كروز للتكنولوجيا الحيوية	sc-1694	مستعمل 1:100
مضاد للأرانب IgG (ماعز متعدد النسيلة) AF 488	Invitrogen	A11008	مستخدم 1: 400
Hoechst-33258	سيجما ألدريتش ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية	14530	مستعمل 1: 1000
Alexa Fluor 594 phalloidin (في الميثانول) (أحمر)	Invitrogen	A12381	مستعمل 1: 100
مصل الأبقار ألبومين	سانتا كروز التكنولوجيا الحيوية	SC-2323
Triton X-100	Sigma-Aldrich ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية	T9284
حليب خالي الدسم	BD DIFCO	232100
ImageJ	المعاهد الوطنية للصحة ، الولايات المتحدة الأمريكية	الإصدار 1.50i
Zen LSM 510 برنامج معالجة الصور	ZEISS Microimaging ، ألمانيا	الإصدار 5.0 SP 1.1