اختﻻق الواجهات الزجاجية الجودة البصرية لدراسة الانصهار بلعم

James J. Faust; Wayne Christenson; Kyle Doudrick; John Heddleston; Teng-Leong Chew; Marko Lampe; Arnat Balabiyev; Robert Ros; Tatiana P. Ugarova

doi:10.3791/56866

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

اختﻻق الواجهات الزجاجية الجودة البصرية لدراسة الانصهار بلعم

6.8K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/56866

⸱

مارس 14, 2018

James J. Faust¹^,² , Wayne Christenson³^,⁴^,⁵ , Kyle Doudrick⁶ , John Heddleston⁷ , Teng-Leong Chew⁷ , Marko Lampe⁸ , Arnat Balabiyev¹^,² , Robert Ros³^,⁴^,⁵ , Tatiana P. Ugarova¹^,²

¹Center for Metabolic and Vascular Biology, Mayo Clinic, ²Molecular and Cellular Biosciences, School of Life Sciences, Arizona State University, ³Department of Physics, Arizona State University, ⁴Center for Biological Physics, Arizona State University, ⁵Biodesign Institute, Arizona State University, ⁶Department of Civil and Environmental Engineering and Earth Sciences, University of Notre Dame, ⁷Advanced Imaging Center, HHMI Janelia Research Campus, ⁸Advanced Light Microscopy Facility, European Molecular Biology Laboratory

في هذه المقالة

ملخص

ويصف هذا البروتوكول تلفيق الواجهات الزجاجية الجودة البصرية تمتز مع المركبات المحتوية على المواد الهيدروكربونية سلسلة طويلة التي يمكن استخدامها لرصد الانصهار بلعم من العينات الحية وتمكن مجهرية فائقة القرار العينات الثابتة .

الملخص

وقد تم تحدي تصور تشكيل الخلايا العملاقة مولتينوكليتيد (مجكس) من العينات الحية يرجع ذلك إلى حقيقة أن يعيش أكثر من تقنيات التصوير تتطلب نشر الضوء من خلال الزجاج، ولكن على الزجاج بلعم فيوجن حدث نادر. ويقدم هذا البروتوكول تلفيق العديد من الواجهات الزجاجية الجودة البصرية حيث يتحول امتزاز المركبات المحتوية على المواد الهيدروكربونية سلسلة طويلة الزجاج في سطح فوسوجينيك. أولاً، يتم وصف إعداد الأسطح الزجاجية النظيفة كابتداء من المواد لتعديل السطح. ثانيا، ينص طريقة امتزاز المركبات المحتوية على المواد الهيدروكربونية سلسلة طويلة لتحويل الزجاج غير فوسوجينيك إلى الركازة فوسوجينيك. وثالثاً، يصف هذا البروتوكول تلفيق ميكروباتيرنس السطحية التي تشجع على درجة عالية من الرقابة الزمانية المكانية على تشكيل MGC. وأخيراً، يرد اختﻻق الأطباق أسفل الزجاج. وترد أمثلة لاستخدام هذا النظام الخلايا في المختبر كنموذج لدراسة الانصهار بلعم وتشكيل MGC.

المقدمة

ويرافق تشكيل مجكس عددا من الحالات المرضية في جسم الإنسان المتميز بالتهاب مزمن¹. وقد أظهرت الدراسات القليلة من المستغرب على الرغم من الاتفاق الذي مونونوكليتيد الضامة الصمامات على شكل مجكس²، الانصهار في سياق مع المعيشة العينات³^،⁴. هذا سبب الأسطح الزجاجية النظيفة المطلوبة لمعظم تقنيات التصوير لا تعزز الانصهار بلعم عندما فعل السيتوكينات الالتهابية⁵. في الواقع، إذا كان الزجاج نظيفة كركيزة للانصهار بلعم، ثم منخفضة للأهداف المتوسطة التكبير (أي، 10-20 X) وأكثر من 15 ح المستمر غالباً ما مطلوبة تصوير الاحتفال بحدث واحد انصهار.