تتالي الانزيمية ردود لتوليف الكحوليات الأمينية مراوان L-يسين

ملخص

الكحوليات الأمينية مراوان جزيئات تنوعاً للاستخدام السقالات في التوليف العضوي. بدءاً من L-يسين، نحن توليف الكحوليات الأمينية بفعل تتالي الانزيمية الجمع بين أكسدة دياستيريوسيليكتيفي ح ج تحفزها ديوكسيجيناسي متبوعاً بانشقاق مجموعة حمض الكربوكسيلية الأحماض الأمينية هيدروكسيل المقابلة من ديكاربوكسيلاسي.

الملخص

الكحوليات الأمينية مركبات تنوعاً مع طائفة واسعة من التطبيقات. على سبيل المثال، فقد استخدمت مراوان السقالات في التوليف العضوي. على توليف بالكيمياء العضوية التقليدية وغالباً ما يتطلب عمليات التوليف متعددة خطوة شاقة، مع صعوبة السيطرة على نتائج الخبراء. نقدم بروتوكول انزيماتيكالي سينثيتيزي الكحوليات الأمينية بدءاً من L-يسين متاحة بسهولة في 48 ساعة. هذا البروتوكول ويجمع بين اثنين من التفاعلات الكيميائية التي يصعب جداً القيام بتجميع العضوية التقليدية. في أول خطوة ريدجو-ودياستيريوسيليكتيفي أكسدة السندات ح ج اونكتيفتد ليسين هو الجانب-سلسلة تحفزها ديوكسيجيناسي؛ أكسدة ريدجو ودياستيريوسيليكتيفي ثانية تحفزها ديوكسيجيناسي ريجيوديفيرجينت يمكن أن يؤدي إلى تشكيل 1، 2-ديولس. في الخطوة الأخيرة، هو المشقوق كاربوكسيليك مجموعة الحمض الأميني ألفا من ديكاربوكسيلاسي pyridoxal-فوسفات (حزب العمال التقدمي) (DC). هذه الخطوة ديكاربوكسيلاتيفي يؤثر فقط على الكربون ألفا من الأحماض الأمينية، الاحتفاظ بمركز ستيريوجينيك هيدروكسي استبداله في وضع بيتا/غاما. ولذلك يتم إثراء الكحوليات الأمينية الناتجة بصريا. البروتوكول تم تطبيقها بنجاح على توليف سيميبريباراتيفي-مقياس للكحوليات الأمينية الأربعة. رصد ردود الفعل التي أجرى بها كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء ([هبلك]) بعد derivatization 1-مخفضات-2، 4-دينيتروبينزيني. تنقية مباشرة باستخراج المرحلة الصلبة (SPE) أتاحت الكحوليات الأمينية مع المحاصيل ممتازة (93 في المائة إلى > 95%).

المقدمة

على الرغم من المزايا التي تتيحها بيوكاتاليسيس، تكامل الخطوات بيوكاتاليتيك في المسارات الاصطناعية أو مجموع طرق بيوكاتاليتيك يظل معظمها يقتصر على القرارات الحركية الانزيمية. تستخدم هذه الطرق على نطاق واسع كخطوة أولى في توليف الكيماوي الانزيمية غير متماثلة، ولكن بيوكاتاليسيس يوفر العديد من الإمكانيات أكثر في المجموعة الوظيفية إينتيركونفيرسيونس مع ستيريوسيليكتيفيتي عالية^1،2،3 . وعلاوة على ذلك، كردود فعل بيوكاتاليتيك تجري في ظروف مماثلة، أنه من الممكن ولذلك القيام بسلسلة من ردود الفعل في وعاء واحد أزياء^4،5.

البروتوكول

1-إعداد إنزيم

1. ويعرب وتنقية البروتينات كما هو موضح سابقا²⁶.
   ملاحظة: تم الحصول على البروتينات المؤتلف مع التركيزات النهائية التالية: αKAO من أسيديفيلا كاتينوليسبورا، معرف أونيبروتكب: C7QJ42 (KDO1)، 1.35 مغ/مل؛ ΑKAO من بينينسيس جيم، معرف أونيبروتكب: C7PLM6 (KDO2)، 2.29 مغ/مل؛ وحدات تحكم المجال Dc--حزب العمال التقدمي من س. روميرانتيوم، معرف أونيبروتكب: O50657 (_سروممن أقل البلدان نمواً)، استخراج الخلية الحرة مع إنزيم المجموع في 12.44 مغ/مل؛ حزب العمال التقدمي-العاصمة من بينينسيس جيم، معرف أونيبروتكب: C7PLM7 (DC_Cpin)، 2.62 ملغ/مل.

2-إعداد الحلول

....

النتائج

أبلغنا سابقا التوليف من مونو-ودي-هيدروكسي-L-ليسينيس من دياستيريوسيليكتيفي هيدروكسيليشن الانزيمية تحفزها ديوكسيجيناسيس الحديد (II)/αKAO الأسرة (الشكل 1)¹⁶. لتحسين بروتوكول كامل الشلالات المعروضة هنا، التي تجمع بين واحد أو اثنين من الخطوات hydroxylation تحفزها αKAO تليها خطوة إزالة تحفزها حزب العمال التقدمي-DC، تم تعديل شروط رد فعل لتلبية متطلبات كل التفاعلات الانزيمية. لقد بدأنا بالتحقيق في أنشطة اثنين من وحدات تحكم المجال Dc، وأقل البل.......

المناقشة

مراوان الكحوليات الأمينية ومشتقاتها لديها مجموعة واسعة من التطبيقات، من المساعدين مراوان للتوليف العضوي للعلاج بالأدوية. التوليف متعددة الخطوات لإنتاج الكحوليات الأمينية بتوليف العضوية التقليدية عديدة، ولكن قد لا تكون دائماً فعالة بسبب الخطوات مملة الحماية/deprotection جنبا إلى جنب مع عنصر تحكم حساسة الفراغية¹⁶. اتباع نهج بيوكاتاليتيك يوزع مع خطوات الحماية/deprotection وهي عادة ما تكون شديدة تراكما أحيائياً فراغي النوعية يمثل بديلاً جيدا.

الأعمال السابقة عنها توليف كحول.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
هيبس	سيجما ألدريتش	H3375
L-ليسين هيدروكلوريد	سيجما ألدريتش	L5626
(5S< / em>) -hydroxy-L-lysine	Sigma Aldrich	GPS NONH	Out sourcing
&alpha - حمض الكيتوجلوتاريك	سيجما ألدريتش	75892
أسكوربات الصوديوم	سيجما ألدريتش	A7631
حديد الأمونيوم (II) كبريتات سداسي هيدرات	أكروس	201370250
فوسفات البيريدوكسال (PLP)	سيجما ألدريتش	82870
3،4-dimercaptobutane-1،2-diol (DTT)	Sigma Aldrich	D0632
1-fluoro-2،4-dinitrobenzene (DNFB)	Sigma Aldrich	D1529
Ethanol	VWR	20825.290
صوديوم كربونات الهيدروجين	Sigma Aldrich	71631
HCl 37٪	Sigma Aldrich	435570
HCl 0.1M	Fluka	35335
Acetonitrile HiPerSolv CHROMANORM ل LC-MS	VWR	83640.320
2،2-حمض ثلاثي فلورو أسيتيك	VWR	153112E
الأمونيا 28٪	VWR	21182.294
الميثانول HiPerSolv CHROMANORM ل LC-MS	VWR	83638.32
حمض الفورميك	أكروس	270480010
حمض الفوسفوريك 85٪	أكروس	201145000
أكسيد الديوتيريوم	أكروس	320،710،075
هيدروكسيد الصوديوم	سيجما ألدريتش	S5881
C18 عمود HPLC	Phenomenex	00F-4601-Y0
نظام Accela UHPLC	كاشف المساعد
Accela	مرشحات حقنة ThermoFisher Scientific
4 مم - 0،22 وميكرو ؛ م - PVDF	Merck	SLGVR04NL
حقنة توبركولين ذات الاستخدام الواحد مع تخرج مل ، طرف لور	VWR	HSWA5010.200V0
راتنج تبادل كاتيون 100-200 & nbsp ؛ شبكة	Sigma Aldrich	217506
خرطوشة استخراج الطور الصلب للتبادل الكاتيوني المختلط 6 مل	المياه	186000776
مشعب الاستخراج	المياه	WAT200609
المبخر الدوار	B & uuml ؛ تشي	531-0103
مجفف المياه ألفا 1-2 LDplus	Christ	L083302
Micropipette 20 & micro ؛ L	Eppendorf	3121000031
ماصة دقيقة 100 & مايكرو; L	Eppendorf	3121000074
Micropipette 500 & micro; L	Eppendorf	3121000112
Micropipette 1000 & micro; L	Eppendorf	3121000120
مطياف 300 ميجاهرتز	Bruker
2 مل أنبوب دقيق	CLEARLine	CL20.002.0500
50 مل أنبوب طرد مركزي مخروطي القاع	Fischer Scientific	05-539-8
25 مل قارورة مستديرة القاع 14/23	Fischer Scientific	10353331
100 مل قارورة مستديرة القاع 29/32	11786183 فيشر العلمي

الشخصي الرقمي ThermoFisher Scientific 250 مل قارورة دائرية القاع 29/32 فيشر 11786183 العلمي 250 مل قارورة إرلينماير فيشربراند 15496143