يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

الأزرق إيفانز أمثل البروتوكول لتقييم تسرب الأوعية الدموية في الماوس

28.4K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/57037

⸱

سبتمبر 12, 2018

 ,  ,  , 
1Cardiovascular Pulmonary Research Laboratory, University of Colorado Denver, 2Division of Pulmonary Sciences and Critical Care Medicine, University of Colorado Denver, 3Denver VA Medical Center

في هذه المقالة

ملخص

ويرد بروتوكولا اقتصادا والأمثل، وبسيطة في هذه المادة، الذي يستخدم الأسلوب صبغة زرقاء إيفانز لتقييم التسرب البلازما في الأجهزة من الفئران ففبن التي يمكن تكييفها للاستخدام في السلالات الأخرى، والأنواع، والأخرى أو الأنسجة.

الملخص

تسرب في الأوعية الدموية، أو التسرب البلازما، يحتوي على عدد من الأسباب، وقد يكون نتيجة خطيرة أو أعراض الاستجابة الالتهابية. هذه الدراسة قد تؤدي في نهاية المطاف إلى المعارف الجديدة بشأن الأسباب أو طرق جديدة لمنع أو علاج التسرب البلازما. من المهم أن الباحثين لها الأدوات المناسبة، بما في ذلك أفضل الطرق المتاحة، لدراسة التسرب البلازما. في هذه المقالة، نحن تصف بروتوكول، استخدام أسلوب صبغة زرقاء إيفانز، من أجل تقييم التسرب البلازما في الأجهزة من الفئران ففبن. هذا البروتوكول بسيط عن عمد، لكبيرة بدرجة ممكن، لكنه يوفر بيانات عالية الجودة. تم اختيار صبغ إيفانز الأزرق أساسا لأنه من السهل للمختبر متوسط لاستخدام. أننا استخدمنا هذا البروتوكول أن تقدم الأدلة وتقديم الدعم للفرضية القائلة بأن نيبريليسين الإنزيم قد تحمي المفرج ضد التسرب البلازما. ومع ذلك، قد تستخدم تجريبيا هذا البروتوكول وتكييفها بسهولة للاستخدام في سلالات أخرى من الفئران أو في الأنواع الأخرى، وفي كثير من الأعضاء أو الأنسجة، مختلف الدراسات التي قد تنطوي على العوامل الأخرى التي تعتبر مهمة في فهم أو منع أو علاج التسرب البلازما. وقد تم تحسين هذا البروتوكول على نطاق واسع وتعديل البروتوكولات القائمة، ويجمع بين الموثوقية، وسهولة الاستخدام، والاقتصاد، والتوافر العام للمواد والمعدات، مما يجعل هذا البروتوكول متفوقة للمختبر متوسط لاستخدامها في تحديد كمية التسرب البلازما من الأجهزة.

المقدمة

تسرب الأوعية الدموية في الأجهزة تشير إلى التسرب، أو تسرب لبلازما الدم من خلال الثغرات التي أنتجت في البطانة من وظيفة الأوردة الشعرية في الأجهزة. هذا التسرب البلازما أو زيادة نفاذية الأوعية الدموية، التي قد تنشأ من بعض نوع استجابة التحريضية، قد يؤدي إلى عواقب خطيرة. وبالتالي، فمن المهم أن دراسة هذه الظاهرة وأسبابها، والمغيرون، وعواقبه، ويفهم، وعلى نحو مماثل، أن المحققين لديهم جيدة الأدوات والبروتوكولات الملحقة بها لدراستها. الثغرات غشائي قد تنتج عن طريق عدد من المحفزات، ولكن عادة ما يتم إنتاجها بفعل العصبية الببتيد و/أو تاتشيكينينس على الجهاز. أحد الوسطاء طبيعيا الرئيسية لهذه العملية، مما يؤدي إلى زيادة البلازما التسرب، هو أونديكابيبتيدي تاتشيكينين نيوروبيبتيدي، فماده1.

أساليب التحقيق وقياس نفاذية الأوعية الدموية أو التسرب البلازما، التي تستخدم خاصية الربط الزلال من صبغة زرقاء إيفانز، قد وضعت، وعادة ما تكون معروفة بدقتها، البساطة، والاقتصاد، والسلامة، وقدرة على السماح تحديد التسرب البلازما من أنسجة عدة في وقت واحد، إذا كان الأمر كذلك المطلوب2،3،4،،من56،،من78،9 . هذا البروتوكول إيفانز الأزرق لتقييم التسرب البلازما في الأجهزة من الفئران ففبن يستخدم كل هذه، ولكنها تضيف بعض التعديلات الهامة التي تجعل من عموما مفيدة وقابلة للتكيف للدراسات المستقبلية، التي تشمل المختبر متوسط التي تنظم أو سوف إجراء دراسات هامة من العوامل المرتبطة بالتسرب البلازما أو نفاذية الأوعية الدموية. في هذا البروتوكول، وهو عرض فماده للفئران نمول 1/كغ، التي تقوي التسرب البلازما ب 1.5-fold. وهذا يزيد من الحساسية للبروتوكول، وأسفر عن نتائج قابلة للملاحظة ويمكن الحصول عليها بسهولة أكبر. قد تستخدم العوامل الأخرى التي تؤثر على نفاذية، مثل الببتيدات الأخرى المختلفة، والمواد الكيميائية، أو بعض أشكال الإصابة السامة، أو درس بمختبرات أخرى، كما هو مطلوب. وتستخدم حقن الوريد في هذا البروتوكول ﻹدخال الأزرق إيفانز ومضمون فالنظاميه، الأمر الذي يتطلب جراحة المحطة الطرفية. حبل الوريد الحقن5،،من710، حتى بعد النظر في التقنيات الجراحية اللازمة المحطة الطرفية، غير أسهل السيطرة ويؤدي إلى إنتاج نتائج أكثر اتساقا أكثر من دولة أخرى الحقن الوريدية، بما في ذلك الذيل الوريد الحقن4،9. على الرغم من أنه قد يكون من الممكن إيفانز الأزرق سيدلي به حقن الجيوب الوريدية الرجعية-المداري، لا مراجع في الأدب قد وجد أن استخدام هذا الأسلوب لتسليم الأزرق إيفانز. بيد أما بالنسبة لحقن الوريد الذيل، درجة عالية من الخبرة والممارسة لتكاثر إتقان هذا الأسلوب إلى حد كبير حدود استعماله لنجاح إيفانز الأزرق الحقن. وفي المقابل، أسلوب الحقن بالوريد البديلة كما هو موضح في البروتوكول، ولدينا يقدم حلاً يمكن الحصول عليها من الناحية الفنية. تنفيذ إجراء حاسما لنضح عروق الماوس، فقط بعد التضحية بالماوس perfused الأزرق إيفانز، يزيل صبغ إيفانز الأزرق الزائدة، وقد تم توحيدها في هذا البروتوكول. الأساليب المذكورة سابقا من نضح قد درست بعناية وتعديلها للحصول على الإجراء الحالي. التعديلات الأخرى الموصوفة هنا جميع الأمثل ومباشرة، وغير مكلفة.

هناك بعض القيود الهامة للأسلوب صبغة زرقاء إيفانز. على سبيل المثال، قد تمنع حساسية منخفضة في بعض الأحيان المرتبطة بهذا الأسلوب بعض الفحص الإجمالي المرضية ونسيجية إضافية من الأنسجة من إيفانز الأزرق حقن الحيوانات. ومع ذلك، هذه وغيرها من القيود التي أدت إلى تطوير طرق بديلة والنماذج التي، على الرغم من ذلك، لا تزال تستخدم إيفانز الأزرق. قياس الأزرق إيفانز بالأسفار (بدلاً من مدى البصر) التحليل الطيفي قد تزيد حساسية الأسلوب. بالإضافة إلى ذلك، وضعت الأسفار مجهرية من الأنسجة الملطخة بالأزرق إيفانز للسماح لمراقبة تسرب الأوعية الدموية في مواقع متميزة أكثر11. أيضا، كامل الجسم التصوير والمسح الحيوانات الحية سابقا حقن مع إيفانز الأزرق12 يسمح للتحقيق في تركيزات إيفانز الأزرق بطريقة مستمرة، بدلاً من واحدة خاصة باختيار وقت نقطة من التجربة. ومع ذلك، هذا الأسلوب يتطلب توافر مرافق التصوير المناسبة، وقد تكون مكلفة للغاية. تعديلات تشمل إيفانز الأزرق والمؤداة في نوع في المختبر من النموذج، كما هو الحال في خلية الثقافة أو الفرخ النموذجي تشوريوالانتويك13 (كام) أيضا قد وصف. هذه النماذج تتم مراقبتها بواسطة الأسفار والفحص المجهري إينترافيتال14 ، والسماح للتحديد الكمي للتغييرات نفاذية الأوعية الدموية على مر الزمن، ولكن قد تثير مسائل تتعلق بالنمذجة الدقيقة في فيفو الظروف وقد تكون أيضا باهظة الثمن.

وهناك أساليب أخرى لتحديد وقياس تسرب الأوعية الدموية أو النفاذية، التي لا تنطوي على إدارة إيفانز الأزرق. قد تستخدم هذه الأساليب جزيء فلوري مناسبة (مثل الزلال أو فلوريسسين)، أو جزيء المعلمة نظير مسماة أو خلاف ذلك، الحيوانات الحية (أو إلى الخلية الثقافة أو تشوريوالانتويك (كام) نماذج13، تليها غير الغازية التصوير (المسح الحيوانات الأليفة، التصوير بالرنين المغناطيسي، مجهرية إينترافيتال، ومسح الجسم بأكمله) أو بواسطة الغازية التصوير (مجهر فلوري)3،،من1215. على الرغم من أن هذه التقنيات قد توفر عددا من المزايا أكثر من غيرها إيفانز أساليب الأزرق، لديهم أيضا العيوب، التي قد تتضمن تعقيدات كبيرة، والخبرة المطلوبة، ومواردها، وارتفاع التكاليف النقدية.

نيبريليسين16 (peptidase الإنزيم NEP، المعروف أيضا CD10 أو مدام أو انكيفاليناسي) قد اقترح أن تشارك في منع التسرب البلازما، على الأقل جزئيا، من خلال التمثيل الغذائي الانزيمية والمنظمة الذاتية الجوهر ص وهكذا، في الأنسجة التي يحدث فيها بيبتيداسي الخلية السطحية NEP، قد يكون هناك تخفيف أثر فالجوهر، يفترض بنشاط بيبتيداسي NEP.

في البداية، قمنا باختبار للتسرب الناجم عن فماده البلازما استخدام هذا البروتوكول إيفانز الأزرق المعدلة، مع نوع البرية ففبن (وزن) والفئران (كو) بالضربة القاضية NEP. كان يشتبه في تورط NEP في التسرب المعقم فماده البلازما من هذه الدراسات الأولية، ونحن تصف هذه، وكذلك تجارب دور تشمل NEP في التسرب البلازما. ومع ذلك، التركيز في هذه المخطوطة ليست NEP أو دورها في التسرب البلازما، ولكن بدلاً من التسرب البلازما التجارب نفسها. النتائج NEP هي الممثل لهذا النوع من النتائج التي يمكن الحصول عليها من خلال استخدام هذا البروتوكول المعدل. وقد الأمثل الأسلوب إيفانز الأزرق لقياس التسرب البلازما وتعديلها، كما هو موضح بالتفصيل أدناه للفئران ففبن.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

وتلت جميع المبادئ الدولية والوطنية، و/أو المؤسسية من التوجيهية المطبقة لرعاية واستخدام الحيوانات (الفئران) في التجارب الموصوفة في هذه المخطوطة.

يستخدم هذا الأسلوب ففبن الفئران الكبار، الذين تتراوح أعمارهم بين 16-20 أسبوعا، تبين أن أمثل لأغراض هذه الدراسة. 1 اليوم الخطوات من 1-5 ويوم 2 تشمل الخطوات 6-7 (الشكل 1).

1-معدات التحضير

  1. تأمين إمدادات كافية من المحاقن المعقمة، والمتاح والإبر، وإذا استخدم كالمخدر الكيتامين/إكسيلازيني (على النحو الموصى به). إذا تم استخدام إيسوفلوراني كالمخدر، التحقق من خزان الأكسجين ومستوى السائل إيسوفلوراني للتأكد من أن هناك إمدادات كافية للتجربة قبل البدء. كما أن تجميع نوسيكوني التنفس الدوائر وإرفاقها بمربع التعريفي؛ إرفاق الدموع الفحم الجديدة للدوائر في التنفس. إعداد مربع التعريفي بتحول على الأكسجين، والتأكد من أن يقرأ المرحلة الثانية حوالي 50 رطل/بوصة مربعة.
  2. قم بتشغيل لوحة التدفئة إلى 37 درجة مئوية.
  3. إعداد التحقيق درجة حرارة المستقيم لعملية جراحية.

2. إعداد الماوس

وتشمل هذه الخطوة التخدير، وإزالة الشعر، وتحديد المواقع (ففبن الفئران-سن البلوغ 16-20 أسبوعا).

  1. وزن الفئران وتسجيل الأوزان.
  2. تخدير الفئران.
    1. إدارة الملكية الفكرية الكيتامين و xylazine (80-100 مغ/كغ و 7.5-16 مغ/كغ، على التوالي). ومع ذلك، من المستحسن أن تبدأ بجرعات أقل من الكيتامين و xylazine (حول 30 ملغ/كغ و 6 مغ/كغ، على التوالي).
    2. المحافظة على التخدير مع حوالي 0.1-0.25 مرات الأولى جرعات من الكيتامين/xylazine طوال عملية جراحية. الكيتامين و xylazine، مخدر (المحليون) الاختيار في هذه الدراسة خاصة، كما لوحظت أكثر من إمكانية تكرار نتائج والبقاء على قيد الحياة. يمكن الاطلاع على مخدر (المحليون) الاختيار في دراسات أخرى أن تكون مختلفة.  إذا تم استخدام إيسوفلوراني، ضع الماوس في دائرة التعريفي وقم بتشغيل إيسوفلوراني إلى 5% حتى الماوس يفقد وعيه الكامل. ثم استخدم نوسيكوني الآنف تعيين في إيسوفلوراني 1.5-2.5 في المائة طوال ما تبقى من هذا الإجراء.
  3. مراقبة الفئران كل دقيقة 2-3 برشة إصبع القدم للتأكد من ملائمة عمق التخدير.
  4. حلاقة منطقة الرقبة البطني من الماوس.
  5. ضع الماوس في وضع ضعيف على لوح مسخن. تأمين آثار أقدام واقدام من الماوس على سطح الجراحية مع الشريط.
  6. ضع مرهم المسيل للدموع الاصطناعية على العينين لمنع الجفاف أثناء الجراحة.

3-العمليات الجراحية التفاصيل

  1. جعل شق 1 سم في الرقبة حق البطني أكثر من حبل الوريد.
  2. تطبيق قطرات واحد أو اثنين من يدوكائين (1-2 ٪) في منطقة شق لإدارة الألم وتعزيز توسع الأوعية. انتظر 2 دقيقة ليدوكائين المفعول.
  3. فضح وعزل حبل الوريد الداخلي الحق عن طريق تشريح كليلة. ربط الوريد قبالة مع خياطة 4-0، وسحب بلطف نهاية السفينة مع هيموستات روسترال. قطع حفرة، استخدام مقص جيد، حوالي 3 مم أدناه أو والذيلية للتعادل، تقريبا في منتصف الطريق من خلال قطر الوريد.
  4. مارك قسطرة البولي فينيل الكهروضوئية-1 1.5 سم من النهاية وأدخله في الوريد من خلال الثقب في استخدام ديلاتور سفينة، والخيط القسطرة نهاية والذيلية للسفينة، وحوالي 1.5 سم.
  5. التعادل القسطرة بأمان داخل الجزء والذيلية من السفينة (تحت القص) مع الحرير 4-0. ربط الجزء روسترال من السفينة إلى خارج القسطرة مع نهايات فضفاض خياطة الجروح التي استخدمت لربط قبالة روسترال حبل الوريد، في الخطوة 3، 3.
  6. تك الجلد فضفاضة معا مرة أخرى حول القسطرة مع الحرير 4-0 للمساعدة في منع فقدان حرارة الجسم وجفاف الأنسجة.
  7. توصيل القسطرة بحقنه تحتوي على هيبارينيزيد المالحة (10 U/mL) وتدفق القسطرة.

4-حقن

  1. حقن قسطرة الوريد، تليها كمية صغيرة من المحلول الملحي هيبارينيزيد لمسح الخط الحل إيفانز الأزرق (50 ميكروليتر من حل 30 ملغ/مل في المحلول الملحي العادي، أونهيبارينيزيد 0.9 في المائة، أو ما يقارب 50 مغ/كغ).
  2. 2 دقيقة في وقت لاحق، حقن مادة ف (100 ميكروليتر من حل 0.3 ميكرومتر في المحلول الملحي العادي، أونهيبارينيزيد 0.9%، أو نمول 1/كجم)، تليها كمية صغيرة من المحلول الملحي هيبارينيزيد لمسح الخط. فماده تقوي التسرب بروتينات البلازما من خلال الطبقة غشائي؛ في هذا البروتوكول، فإنه يدفع بشكل روتيني زيادة قيم التسرب البلازما 1.5-fold تقريبا، مما يجعل البلازما القيم التسرب الأسهل لقياس.
  3. انتظر 18 دقيقة بعد أن يتم حقن مادة P. خلال هذا الوقت، سوف حجته الصبغة الزرقاء إيفانز وتعميمها.
  4. إنهاء هذه التجربة 18 دقيقة بعد حقن مادة ف (20 دقيقة بعد الحقن إيفانز الأزرق) بالتضحية بالماوس مع التفكك عنق الرحم. ومن المرجح أن الماوس يمكن أن مباشرة سيرفيكالي خلع، دون إعطاء أول جرعة زائدة من مخدر، أن الفأر هو على الأرجح لا يزال جيدا أنيسثيتيزيد من الجراحة. ومع ذلك، إذا لزم الأمر، جرعة زائدة من المسكنات الكيتامين/إكسيلازيني أو إيسوفلوراني، أو بينتوباربيتال قد تمنح، يليه سرطان عنق الرحم التفكك.

5-عزل الأجهزة

  1. قص فتح تجويف الصدر من الماوس والجاذبية-نتخلل (من على ارتفاع حوالي 51 سم أو 20 بوصة) بالقلب والأوعية الدموية مع 50 مل سترات الصوديوم 50 مم، 3.5 درجة الحموضة. يفترض أن يحفظ pH 3.5 ملزمة إيفانز الأزرق للزلال.
  2. المكوس الأجهزة ذات الصلة (الأنسجة) 1-5 مع مشرط تشريح (المثانةمثل الكلي، المعدة، الكبد، البنكرياس، القريبة أو البعيدة القولون، الدقاق، العفج، الجلد الجناح، آذان، الذيل، القلب والرئتين) وإزالة أي محتويات المتبقية، إذا الحالية.
  3. شطف الأجهزة في درجة حرارة الغرفة (RT) مخزنة الفوسفات المالحة (برنامج تلفزيوني؛ ز 1.44 غ2HPO4، 0.24 ز خ2PO4, 8.0 g من كلوريد الصوديوم، وز 0.20 من بوكل في 1 لتر، درجة الحموضة 7.4).
  4. لطخة الأجهزة مع الأنسجة وقطع كل جهاز في النصف، وتزن كل نصف (الرطب الأوزان، في ز).
  5. الجاف لواحد نصف الأنسجة في فرن تجفيف عند 150 درجة مئوية، في إحباط، عن ح 48.
  6. ضع الأنسجة الأخرى نصف في وحدة متسقة (تصل إلى 200 ميليلتر) من ميثلامين في [ميكروفوج] أنابيب ح 48 (وما يصل إلى 72 ساعة) لاستخراج إيفانز الأزرق.

6-قياس الأنسجة OD

  1. إزالة 50 ميليلتر من ميثلامين الأزرق-أكسب إيفانز (بعد 48-72 ح RT الحضانة) من [ميكروفوج] أنابيب ومكان في بئر واحدة للوحة البوليستيرين 96-جيدا. كن حذراً لا لنقل قطع الأنسجة جنبا إلى جنب مع ميثلامين.
  2. مكان 50 ميليلتر من ميثلامين نقية وجديدة في كل من بئرين فارغة من لوحة 96-جيدا للفراغات.
  3. قياس وتسجيل OD620 من كل بئر من لوحة 96-جيدا على قارئ لوحة امتصاص. 620 نانومتر هو امتصاص ماكس الأزرق إيفانز.

7-حساب التسرب البلازما

  1. وزن الأنسجة الجافة النصف الذي تم في الفرن ح 48.
  2. حساب نسبة وزن جاف الوزن الرطب جهاز معين من الفائدة من كل الماوس الفردية، بدءاً من الوزن الرطب لهذا النسيج نصف (التي تم الحصول عليها في الخطوة 5.4)، مقسوماً الوزن الجاف لهذا النسيج نفسه نصف (التي تم الحصول عليها في الخطوة 7، 1).
  3. حساب الوزن الجاف (في ز) الأنسجة نصف في ميثلامين بقسمة الوزن الرطب من الأنسجة النصف قبل أنه وضع في ميثلامين (التي تم الحصول عليها في الخطوة 5، 4) بواسطة الرطب: نسبة الوزن الجاف لجهاز معين للفائدة (المحسوبة في الخطوة 7، 2).
  4. حساب القيم620 OD تصحيحه . بدءاً OD620 القيمة من كل بئر تجريبية للوحة 96-جيدا (التي تحتوي على ميثلامين الأزرق-أكسب إيفانز من كل الأنسجة، والتي تم الحصول عليها في الخطوة 6.3)، طرح فارغ جيدا قيمة620 OD (يعني OD620 قيمة OD بئرين المحتوية على ميثلامين نقية، أعدت في الخطوة 6، 2،620 القيم التي تم الحصول عليها في الخطوة 6.3) من كل قيمة تجريبية.
  5. حساب قيمة التسرب البلازما بقسمة OD المصوبة620 (المحسوبة في الخطوة 7، 4) الوزن الجاف للأنسجة نصف في ميثلامين (المحسوبة في الخطوة 7، 3). وستكون وحدات بلازما التسرب OD620/g الوزن الجاف.
  6. تحليل البيانات وصريح كالمتوسط ± "sem. إحصائيا" مقارنة مجموعات اختبار t أو تحليل التباين أحادي الاتجاه واختبار متعددة-مقارنة في Scheffé (lycofs01.lycoming.edu)، حسب الاقتضاء.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

في الشكل 1، تخطيطي للإجراء الذي يظهر، التي تم العثور عليها لتؤدي القيم التسرب البلازما المستحثة فماده موثوقة ومتسقة من الأجهزة للفئران ففبن. هذا الإجراء عادة ما يستغرق يومين عمل، مفصولة بواسطة مالا يقل عن 48 ساعة وقت الانتظار. فمن الممكن انتشرت حتى أكثر من ذلك، إذا كان يتم ذلك دائماً لجميع التجارب بالمقارنة. على سبيل المثال، بعد أن يتم عزل الأجهزة في اليوم 1، الأجهزة يمكن فلاش المجمدة في النتروجين السائل وتخزينه في-80 درجة مئوية؛ بعد ذوبان الجليد بعناية الأجه...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

كما نوقش أعلاه، دراسة التسرب البلازما قد تؤدي في نهاية المطاف إلى المعارف الجديدة بشأن الأسباب أو طرق جديدة لمنع أو علاج التسرب البلازما. الاستخدام الناجح لبروتوكول التسرب البلازما (أعلاه)، باستخدام صبغة زرقاء إيفانز، قد تجلى في المخطوطة الحالية. على الرغم من أن البيانات أظهرت مرة أخرى الفرضية القائلة بأن NEP قد تحمي المفرج ضد التسرب البلازما، هدف ثانوي في الوقت الحاضر، مع الهدف الأساسي ويجري تقديم بروتوكولا أمثل الذي قد يمكن استخدامها بسهولة في المختبر متوسط دراسة في المستقبل من التسرب البلازما. بروتوكول أفادت هذه الوثي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

الكتاب أود أن أشكر أندي بوكزوبوت والدكتور ميكو يشيشينسكي على مساعدتها القيمة والتحرير إلى هذه المخطوطة.  تدعمها المنح الواردة من قلب الوطنية والرئة والدم معهد (نهلبي RO1 HL078929، HL014985 اندستريز و RO3 HL095439) وإدارة لشؤون المحاربين القدماء (استعراض الجدارة).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
الأيزوفلورانالبيطري واحد200-070مخدر مستنشق
Vet One200-055مخدر عن طريق الحقن
زيلازينمختبرات لويد139-236مخدر عن طريق الحقن
(10،3 و 1 سم مكعب)Becton Dickinson309604 ، 309657 ، 309659
الإبر (20G1،23G1 & 26G1 / 2)Becton ديكنسون305178 ، 305193 ، 305111
غرفة تحريض الأيزوفلورانVetEquip941443
1 لتر دوائر التنفس المخروطية   ؛VetEquipRC2تحكم دائرة القوارض 2
خزان أكسجينAirgasUN 1072طبية 100٪
CWE Inc.TC-1000جهاز التحكم في درجة الحرارة
مسبار درجة حرارة المستقيمCWE Inc.10-09012الماوس
(للقوارض)OhausCS 2000
أدوات جراحية - مقصأدوات العلوم الدقيقة15000-00Vannas Spring مقص 3 مم شفرة مستقيمة (أوعية القطع)   ؛  
الأدوات الجراحية - ملقطأدوات العلوم الدقيقة11151-10ملقط Graefe فائق النعومة (عزل أوعية الفأر)
الأدوات الجراحية - مرقئأدوات العلوم الدقيقة13009-12مرقئ البعوض هالستيد (تشريح حاد ، عقد الأنسجة)
الأدوات الجراحية - برامج الخياطةأدوات العلوم الدقيقة12502-12محركات خياطة أولسن هيغار (خياطة)
أدوات جراحية - ملقطغرامة أدوات العلوم11627-12ملقط التمساح Adson-Brown (خياطة الإمساك بالأنسجة ، الفئران)
الأدوات الجراحية - مقصالعلوم الدقيقة14110-15مقص مايو القاسي 15 سم (الجراحة ، التشريح ، العظام ، الفئران)
الأدوات الجراحية - ملقطأدوات العلوم الدقيقة18025-10ملقط ربط خياطة (يستخدم في ميلار كات)
أدوات جراحية - مقصأدوات العلوم الدقيقة14078-10مقص Lexer Baby مستقيم (جراحة ، فأر)
أدوات جراحية - ملقطأدوات العلوم الدقيقة11254-20Dumont # 5 ملقط رفيع الرأس (أوعية الفئران ، التشريح)
أدوات جراحية - مقصالعلوم الدقيقة14082-09مقص تشريح 12 مم (جراحة ، فأر الفئران)
أدوات جراحية - ملقطأدوات العلوم الدقيقة11051-10 10سم ملقط Graefe (إمساك الأنسجة ، فأر الفئران)
الأدوات الجراحية - ملقطأدوات العلوم الدقيقة11251-35ملقط دومون 5/45 (مقدمة للأوعية)
أدوات جراحية - ضاغطاتأدوات العلوم الدقيقة17012-11ضاعون Weitlaner 2/3 أسنان (جراحية للفئران)
أدوات جراحية - ملقطأدوات العلوم الدقيقة11294-00Dumont # 4 ملقط (فئران عزل الأوعية الدموية ، الفئران)
الأدوات الجراحية - ملقطغرامة أدوات العلوم11297-00ملقط دومون # 7 (إمساك الأنسجة ، تشريح)
الأدوات الجراحية - مقصالعلوم الدقيقة14058-11مقص قزحية مقص (تشريح الفأر ، العظام)
الأدوات الجراحية - ملقطأدوات العلوم الدقيقة11009-13ملقط Semken مسنن ، منحني (إمساك الأنسجة ، فأر الفأر)
الأدوات الجراحية - مرقئأدوات العلوم الدقيقة13003-10هارتمان المرقئ المنحني (تشريح حاد ، عقد الأنسجة)
الأدوات الجراحية - ملقطأدوات العلوم الدقيقة11006-12ملقط Adson المسنن (إمساك الأنسجة)
كليبرزشريط OsterA5
Fisherbrand159015G
مرهم دموع اصطناعيAkorn Inc13985-600-03
ليدوكائينهوسبيرا0409-4277-012٪
قسطرة بولي فينيلTygonPV-1
إيفانز الأزرقسيجما ألدريتشE2129
مادة PBachem H-1890
الهيبارينساجنج المستحضرات الصيدلانية25201-400-101000 U / ml
محلول ملحيHospira0409-7138-090.9٪ كلوريد الصوديوم
فينوباربيتال   ؛Vortech0298-9373-68
سترات الصوديومفيشر ScientificBP327-1
PBSSigma AldrichP4417-50TAB 
Kimwipes للنشاففيشر Scientific06-666A
فورماميدSigma Aldrich47670
microbalanceدنفر InstrumentAPX-60
أنابيب microfugeفيشر Scientific07-200-534
البوليسترين 96 لوحة الامتصاص351172Becton Dickenson
القارئBioTekSynergy 2
المواد الهلامية بولي أكريلاميدBio-Rad3450014 
معيار الوزن الجزيئيللبروتين Bio-Rad1610374
Protran المدعوم من النيتروسليلوزAmersham (GE)10600015
صندوق هلامBio-Rad1658005
تريسفيشر ScientificBP152-1
Tween20Sigma AldrichP-1379
كلوريد الصوديومفيشر الأجسام المضادةالعلمية S271-1
NEP  R & D SystemsAF1182
doxycycline chowTeklad (HARLAN)TD.130750 
الفئران من النوع البري FVB / NJالثانوي جاكسون001800
(الماعز المضاد للأرانب)ZyMed81-6120
حل ECL - فيلم Western Lightening PlusPerkinElmerNEL104001EA
Pierce34091
مخدر كيتامين حقن وحدة وسادة تدفئة توازن أدوات أدوات أدوات قابلة للحقن متعددة النسيلة الأولية الجسم المضاد

المراجع

  1. Snijdelaar, D. G., Dirksen, R., Slappendel, R., Crul, B. J. Substance P. Eur J Pain. 4 (2), 121-135 (2000).
  2. Rubinstein, I., Iwamoto, I., Ueki, I. F., Borson, D. B., Nadel, J. A. Recombinant neutral endopeptidase attenuates substance P-induced plasma extravasation in the guinea pig skin. Int Arch Allergy Appl Immunol. 91 (3), 232-238 (1990).
  3. Szabo, A., Menger, M. D., Boros, M. Microvascular and epithelial permeability measurements in laboratory animals. Microsurgery. 26 (1), 50-53 (2006).
  4. Radu, M., Chernoff, J. An in vivo assay to test blood vessel permeability. J Vis Exp. (73), e50062(2013).
  5. Moitra, J., Sammani, S., Garcia, J. G. Re-evaluation of Evans Blue dye as a marker of albumin clearance in murine models of acute lung injury. Transl Res. 150 (4), 253-265 (2007).
  6. Figini, M., et al. Substance P and bradykinin stimulate plasma extravasation in the mouse gastrointestinal tract and pancreas. Am J Physiol. 272 (4), Pt 1 785-793 (1997).
  7. Awad, A. S., et al. Selective sphingosine 1-phosphate 1 receptor activation reduces ischemia-reperfusion injury in mouse kidney. Am J Physiol Renal Physiol. 290 (6), 1516-1524 (2006).
  8. Lu, B., et al. The control of microvascular permeability and blood pressure by neutral endopeptidase. Nat Med. 3 (8), 904-907 (1997).
  9. Gendron, G., Simard, B., Gobeil, F., Sirois, P., D'Orleans-Juste, P., Regoli, D. Human urotensin-II enhances plasma extravasation in specific vascular districts in Wistar rats. Can J Physiol Pharmacol. 82 (1), 16-21 (2004).
  10. Xu, Q., Qaum, T., Adamis, A. P. Sensitive blood-retinal barrier breakdown quantitation using Evans blue. Invest Ophthalmol Vis Sci. 42 (3), 789-794 (2001).
  11. Saria, A., Lundberg, J. M. Evans blue fluorescence: quantitative and morphological evaluation of vascular permeability in animal tissues. J Neurosci Methods. 8 (1), 41-49 (1983).
  12. Fricke, I. B., et al. In vivo bioluminescence imaging of neurogenesis - the role of the blood brain barrier in an experimental model of Parkinson's disease. Eur J Neurosci. 45 (7), 975-986 (2017).
  13. Pink, D. B., Schulte, W., Parseghian, M. H., Zijlstra, A., Lewis, J. D. Real-time visualization and quantitation of vascular permeability in vivo: implications for drug delivery. PLoS One. 7 (3), 33760(2012).
  14. Jain, R. K., Munn, L. L., Fukumura, D. Dissecting tumour pathophysiology using intravital microscopy. Nat Rev Cancer. 2 (4), 266-276 (2002).
  15. Vandoorne, K., Addadi, Y., Neeman, M. Visualizing vascular permeability and lymphatic drainage using labeled serum albumin. Angiogenesis. 13 (2), 75-85 (2010).
  16. Turner, A. J., Nalivaeva, N. N. Proteinase dysbalance in pathology: the neprilysin (NEP) and angiotensin-converting enzyme (ACE) families. Cell Mol Biol (Noisy-le-grand). 52 (4), 40-48 (2006).
  17. Lu, B., Gerard, N. P., Kolakowski, L. F., Finco, O., Carroll, M. C., Gerard, C. Neutral endopeptidase modulates septic shock. Ann N Y Acad Sci. 780, Mar 22 156-163 (1996).
  18. Dempsey, E. C., et al. Neprilysin null mice develop exaggerated pulmonary vascular remodeling in response to chronic hypoxia. Am J Pathol. 174 (3), 782-796 (2009).
  19. Karoor, V., Oka, M., Walchak, S. J., Hersh, L. B., Miller, Y. E., Dempsey, E. C. Neprilysin regulates pulmonary artery smooth muscle cell phenotype through a platelet-derived growth factor receptor-dependent mechanism. Hypertension. 61 (4), 921-930 (2013).
  20. Chu, P., Arber, D. A. Paraffin-section detection of CD10 in 505 nonhematopoietic neoplasms. Frequent expression in renal cell carcinoma and endometrial stromal sarcoma. Am J Clin Pathol. 113 (3), 374-382 (2000).
  21. Bircan, S., Candir, O., Kapucuoglu, N., Serel, T. A., Ciris, M., Karahan, N. CD10 expression in urothelial bladder carcinomas: a pilot study. Urol Int. 77 (2), 107-113 (2006).
  22. Koiso, K., Akaza, H., Ohtani, M., Miyanaga, N., Aoyagi, K. A new tumor marker for bladder cancer. Int J Urol. 1 (1), 33-36 (1994).
  23. Wick, M. J., et al. Protection against vascular leak in neprilysin transgenic mice with complex overexpression pattern. Transgenic Res. 25 (6), 773-784 (2016).
  24. Natah, S. S., Srinivasan, S., Pittman, Q., Zhao, Z., Dunn, J. F. Effects of acute hypoxia and hyperthermia on the permeability of the blood-brain barrier in adult rats. J Appl Physiol. 107 (4), (1985) 1348-1356 (2009).
  25. Scholzen, T. E., et al. Neutral endopeptidase terminates substance P-induced inflammation in allergic contact dermatitis. J Immunol. 166 (2), 1285-1291 (2001).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

P
الأزرق إيفانز أمثل البروتوكول لتقييم تسرب الأوعية الدموية في الماوس
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.