مقالة منهجية

طريقة بسيطة وفعالة في فيفو التلاعب بالجينات الخاصة بالقلب بالحقن إينتراميوكارديال في الفئران

DOI:

10.3791/57074

⸱

أبريل 16, 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Cardiology, The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College, 2Department of Cardiology, Ren Ji Hospital, School of Medicine, Shanghai Jiao Tong University

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نقدم هنا بروتوكولا للتلاعب بالجينات الخاصة بالقلب في الفئران. تحت التخدير، تم تجسيدها في قلوب الماوس عبر الفضاء ربية الرابعة. وفي وقت لاحق، غدية تم حقن جينات محددة الترميز مع حقنه في عضلة القلب، تليها قياس التعبير البروتين عن طريق التصوير في فيفو والغربية لطخة تحليل.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

إلى حد كبير تحفيز التلاعب بالجينات على وجه التحديد في القلب التحقيق باثوميتشانيسمس أمراض القلب وإمكاناتها العلاجية. ويتحقق في فيفو إيصال الجينات الخاصة بالقلب عادة بالتسليم أما منهجية أو المحلية. حقن الجهازية عن طريق الوريد الذيل سهل وفعال في معالجة التعبير الجيني القلب باستخدام الفيروسات المرتبطة بالغدة المؤتلف 9 (AAV9). بيد أن هذا الأسلوب يتطلب كمية عالية نسبيا من ناقلات لكفاءة توصيل، وقد ينتج عن توصيل الجهاز nontarget الجينات. وهنا يصف لنا طريقة بسيطة وفعالة، وتوفير الوقت لحقن إينتراميوكارديال في فيفو التلاعب بالجينات الخاصة بالقلب في الفئران. تحت التخدير (بدون تهوية)، تم تشريح العضلات الرئيسية والثانوية صدري صراحة، وتعرضت قلب الماوس بسرعة بتخريج اليدوي من خلال شق صغير في الفضاء ربية الرابعة. وفي وقت لاحق، تم حقن إتش ترميز لوسيفراس (لوك) ومستقبلات فيتامين (د) (لزاما)، أو دبوس الشعر القصير الحمض النووي الريبي (شرنا) استهداف لزاما، مع حقنه هاملتون في عضلة القلب. اللاحقة في فيفو تصوير أثبتت أن لوسيفراس كان أوفيريكسبريسيد بنجاح على وجه التحديد في القلب. وعلاوة على ذلك، أكد تحليل لطخة غربية overexpression ناجحة أو إسكات لزاما في قلب الماوس. متى يتقن، يمكن استخدام هذا الأسلوب للتلاعب بالجينات، فضلا عن حقن الخلايا أو مواد أخرى مثل نانوجيلس في قلب الماوس.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أمراض القلب هي السبب الرئيسي للاعتلال والوفيات في جميع أنحاء العالم1،2. عدم وجود استراتيجيات علاجية فعالة لأمراض القلب تهدد الحياة بما في ذلك احتشاء عضلة القلب وفشل القلب يجذب استكشاف مكثفة من باثوميتشانيسمس الأساسية، وتحديد الخيارات العلاجية رواية3. لهذه الاستكشافات العلمية، هو التلاعب بالجينات الخاصة بالقلب المستخدمة على نطاق واسع4،5. التلاعب بالجينات القلب يمكن أن يتحقق عن طريق تحرير الجينوم باستخدام نوكلاس المستجيب مثل المنشط النسخ قوية (TALEN) وتجمع بانتظام إينتيرسباسيد يكرر المتناوب قصيرة (كريسبر)/كريسبر المرتبطة البروتين 9 (Cas9) الأدوات، أو عن طريق تسليم المواد الوراثية خارج الرحم (مثلاً، نواقل فيروس يحمل جينات ترميز البروتينات للفائدة)6. على الرغم من تحرير الجينوم تسمح التعديلات الجينوم الدقيقة والزمانية المكانية في الفئران الحية، إلا أنها لا تزال الناحية العملية تستغرق وقتاً طويلاً وتتطلب عمالة مكثفة6. وبدلاً من ذلك، إجراء معالجة الجينات الخاصة بالقلب بناقل الفيروس أو التدخل الصغيرة تسليم مجمع الجيش الملكي النيبالي (siRNA) يتم بصورة روتينية6.

ويتحقق تسليم ناقل الفيروس إلى قلب الماوس الكبار باستراتيجيتين تقريبا: حقن النظمية أو المحلية. حقن النظمية للنمط المصلي المسيطر كارديوتروبيك من آفس مثل AAV9 موسع ل التلاعب بالجينات محددة القلب7. ومع ذلك، هذا الأسلوب يتطلب كمية عالية نسبيا من ناقلات اللازمة لتوصيل تتسم بالكفاءة، والتعبير الجيني، وقد يؤدي مهمة توصيل أجهزة nontarget مثل العضلات و الكبد7. حقن الفيروسات المحلي يتحقق عن طريق الحقن إينتراميوكارديال أو الولادة إينتراكوروناري7. تسليم إينتراكوروناري يؤدي إلى توزيع أكثر توازناً للفيروس داخل القلب مقارنة بحقن إينتراميوكارديال. عيوب هذا الأسلوب غير الغسيل السريع خارجاً من النواقل الفيروسية إلى الدوران الجهازي وتوصيل في أجهزة nontarget8, ومتطلباتها من الأجهزة لقياس الضغط أثناء العملية. في المقابل، تمكن حقن إينتراميوكارديال أفضل الاحتفاظ بالفيروس في عضلة القلب فضلا عن تسليم موقع معين، ولكن فشل لتوزيعها بالتساوي الفيروسية ناقلات7. للحيوانات الصغيرة، يتم تسليم إينتراكوروناري صعبة من الناحية الفنية لإجراء، بينما الجهازية AAV9 حقن وحقن إينتراميوكارديال هي أكثر شيوعاً تمارس4،،من57. على الرغم من أن حقن النظامية من السهل القيام، يتطلب التهوية الميكانيكية و thoracotomy حقن إينتراميوكارديال التقليدية يسبب تلف الأنسجة واسعة النطاق، وتستغرق وقتاً طويلاً.

وفي هذا التقرير، وصفت لنا طريقة سهلة، وتوفير الوقت، وذات كفاءة عالية لحقن إينتراميوكارديال. تم حقن إتش ترميز لوسيفراس ولزاما، أو شرنا استهداف لزاما، للتلاعب بالجينات القلب. متى يتقن، يمكن استخدام هذا الأسلوب للتلاعب بالجينات، فضلا عن حقن الخلايا أو غيرها من المواد في قلب الماوس.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

جميع التجارب على الحيوانات نفذت وفقا للمبادئ "التوجيهية الوطنية للمعاهد الصحية" على "استخدام الحيوانات المختبرية"، وقد وافقت "لجنة الأخلاقيات الحيوان" للمعهد. واستخدمت لجميع التجارب الفئران الذكور C57BL/6J (الذين تتراوح أعمارهم بين 8-10 أسابيع). تم إيواء الفئران تحت ظروف خالية من العوامل الممرضة في 24 درجة مئوية ± 4 درجة مئوية، وتحت 12-ح دورة الضوء/الظلام، مع حرية الوصول إلى المياه والغذاء.

1-إعداد حل إتش

  1. عند الوصول للحل إتش المنقي، تخزين الحل في ثلاجة-80 درجة مئوية.
    ملاحظة: أجريت حقن إتش في الفئران قادرة على البقاء. أن تكفل العقم ناقل إتش إتش (لوسيفراس الترميز أو لزاما شرنا استهداف لزاما) أعدت وتنقية تجارياً9،10.
  2. في يوم العملية، إخراج الحل إتش المنقي (3 × 1010 البلاك تشكيل وحدات [بفو]/mL) من الثلاجة-80 درجة مئوية، وذوبان الجليد إتش ناقلات الحل على الجليد.
  3. وضع على فاسيماسك وقفازات معقمة والعقيمة بثوب.
  4. إعداد 50-ميليلتر حقنه هاملتون الذي قد تم تعقيمها قبل العملية اليوم.
    ملاحظة: كان للتعقيم، والمحاقن هاملتون ملفوفة في شاش ووضعها في معقم ضغط ارتفاع درجة حرارة/عالية. تم اختيار طريقة "التعقيم الصلبة" وبدأ بالتعقيم بالضغط على زر "ابدأ".
  5. بعد ذوبان الجليد كاملة من الحل إتش المنقي، رش الأنبوبة التي تحتوي على الحل إتش مع الإيثانول 75%، ونقل الحل إتش إلى غطاء معقم الاندفاق الصفحي.
  6. في غطاء معقم الاندفاق الصفحي، نضح 50 ميليلتر إتش الحل باستخدام المحاقن هاملتون دون إبرة، تليها مرفق إبرة ز 30 للمحاقن هاملتون.
  7. عقد المحاقن مع 30 جرام الإبرة إلى الأعلى، ودفع المكبس للمحاقن بلطف حتى يتم شغل الإبرة مع الحل إتش (مؤكدة بظهور قطرات الحل الأول من طرف الإبرة).
    ملاحظة: يستغرق حوالي 45 ميليلتر حل لشغل الإبرة 30 غرام، حتى الآن تقريبا لا يوجد حل غير مرئية في المحاقن.
  8. استخدام المحاقن استعداد أعلاه لنضح آخر 30 ميليلتر إتش الحل بعناية، ووضع المحاقن توج فضفاضة على الجليد للاستخدام اللاحق.

2-التخدير وإعداد المنطوق

  1. إضافة 20 مل إيسوفلوراني إلى المبخر isoflurane، والاتصال المرذاذ isoflurane دبابة الأوكسجين.
  2. فتح الصمام والأكسجين واسمحوا تدفق من خزان الأوكسجين إلى المبخر إيسوفلوراني. الحفاظ على معدل تدفق الأكسجين في 2 لتر في الدقيقة عن طريق جهاز تدفق أكسجين في المبخر إيسوفلوراني.
  3. حمل التخدير الماوس مع إيسوفلوراني 4 ٪ في الأكسجين 100% (2 لتر في الدقيقة) لمدة 2 دقيقة في قفص بلاستيكية متصلة المبخر إيسوفلوراني.
  4. تأخذ بها الماوس أنيسثيتيزيد من القفص البلاستيك، وتأمينه على منصة بلاستيكية في موقف المعرضة في غطاء معقم الاندفاق الصفحي والمحافظة على التخدير مع إيسوفلوراني 2% في الأكسجين 100% (2 لتر في الدقيقة) عن طريق مخروط الآنف.
  5. تأكيد التخدير الكافي بسبب عدم استجابة قرصه أخمص القدمين.
  6. تطبيق كريم العيون العقيمة لكل عين لحماية القرنيات من التجفيف.
  7. يحلق في الصدر والجزء العلوي من البطن. تطبيق كريم مزيل الشعر المتاحة تجارياً إلى موقع حلق لإزالة الحد الأدنى 1 كريم مزيل الشعر وتبقى الفراء مع جاوزيس الرطب.
  8. تعقيم موقع الجراحية (الجزء السفلي الأيسر من الصدر) مع دعك 3 من اليود-الكلورهيكسيدين أساس مطهر (مثل انتويوديني). تغطية الموقع الجراحي مع ثني عقيمة.

3-إينتراميوكارديال حقن إتش في قلب الماوس

  1. خلع القفازات ووضع على زوج جديد من القفازات المعقمة.
  2. تعقيم الملقط، هيموستات الصغرى-البعوض، وزوج من مقص الجراحة، وحامل إبرة في اليوم السابق للعملية في ارتفاع درجة الحرارة/عالية الضغط المطهر (انظر الملاحظة الخطوة 1، 4).
  3. جعل شق جلد 0.5 سم على طول الخط الذي يربط بين الرهابه والإبطين. صراحة تشريح الصدرية الرئيسية والعضلات طفيفة صدري بالملقط وهيموستات الصغرى-البعوض.
  4. كشف المساحات ربية بتراجعه الصدرية الرئيسية والعضلات طفيفة صدري. بيرس من خلال وفتح الفضاء ربية الرابعة (أو الفضاء ربية أوسع بالمراقبة) مع هيموستات الصغرى-البعوض.
  5. دفع القلب اتجاه الشق تخريج القلب بسبابة اليد غير المهيمنة بالضغط بلطف على الجانب الأيمن من جدار الصدر.
  6. تأمين بلطف قلب الخارجية مع السبابة والإبهام من اليد غير المهيمنة.
  7. ضخ ما مجموعة 30 ميليلتر إتش الحل في عضلة القلب البطين الأيسر في ثلاثة مواقع (الجدار البطني والظهريه والجانبي من البطين الأيسر) عن طريق حقنه هاملتون مليئة إتش (الشكل 1) مع اليد المسيطرة.
  8. بعد انتهاء حقن، فورا مكان القلب العودة إلى الحيز الوعائي.
  9. إخلاء الهواء في الحيز الوعائي يدوياً عن طريق الضغط بلطف على جدار الصدر تجاه موقع شق الجلد.
    ملاحظة: يمكن أن يدل الإجلاء الجوي الناجحة التي ترفرف الصدرية الكبرى وصدري العضلات الثانوية الناجمة عن الهواء المطرود.
  10. إغلاق الجلد بخياطة مفرش الأفقي مع خياطة حرير 5-0.
    ملاحظة: الصدرية الكبرى وصدري عضلات بسيطة ينبغي أن لا تكون خياطة، نظراً لأنها هي فقط صراحة تشريح وهياكلها تشريحية سليمة طوال العملية.

4-بعد عملية إدارة

  1. إدارة البوبرينورفين (3 مغ/كغ) مرتين يوميا عن طريق الحقن تحت الجلد لتخفيف الألم بعد العمليات الجراحية عن 48 ساعة الأولى بعد العملية11.
  2. بعد العملية مباشرة الحفاظ على الفئران على لوحة حرارة (37 درجة مئوية) حتى شُفي تماما. ضع الماوس مرة أخرى إلى القفص بعد أن يتعافى تماما.
  3. تعقيم تستخدم هاملتون حقنه وابرة حقنه ز 30 في معقم ضغط ارتفاع درجة حرارة/عالية (انظر الملاحظة الخطوة 1، 4). جمع ز 30 حقنه إبرة معقمة في حاوية الأدوات الحادة.

5. في فيفو تصوير لقياس التعبير لوسيفراس القلب

  1. في يوم 5 بعد حقن إتش، تعد حلاً أسهم جديدة من لوسيفرين في 15 ملغ/مل في الفوسفات مخزنة المالحة دولبيكو (دببس). تصفية الحل عن طريق فلتر 0.2 ميكرون.
  2. داخل بيريتونيلي حقن الفئران مستيقظا مع الحل لوسيفرين في 150 مغ/كغ من وزن الجسم.
  3. قم بتشغيل نظام التصوير.
  4. بعد الاختبار الذاتي لنظام التصوير التلقائي، حدد وضع التصوير ك "الإنارة"، وجعل الإعدادات التالية: التعرض: السيارات؛ Binning: 8؛ FStop: 1؛ الإثارة: الكتلة؛ الانبعاثات: مفتوحة.
  5. في 10 دقيقة بعد حقن لوسيفرين، تخدير الفئران بحقن كلورال هيدرات (300 ملغ/كغ من وزن الجسم). تأكيد التخدير الكافي بسبب عدم استجابة قرصه أخمص القدمين.
  6. تأمين الفئران أنيسثيتيزيد في مرحلة تصوير ساخنة في الموقف الذي عرضه، مع الصدر موجهة نحو الكاميرا.
  7. جمع الصور (صورة 1 لكل الماوس) وقياس كثافة الإشارات عن طريق رسم المناطق قياس دائرية متطابقة للفائدة (ROI) حول الصدر.
  8. بعد مجموعة الصور والتضحية الفئران وجمع الأنسجة كما هو مذكور في المقطع التالي.

6-حصاد الأنسجة

  1. في نقاط زمنية مختلفة بعد حقن الفيروس (الشكل 1B)، تخدير الفئران مع إيسوفلوراني 4 ٪، والحفاظ على التخدير مع إيسوفلوراني 2% عن طريق مخروط الآنف، وتأمينه على منصة بلاستيكية في موقف المعرضة.
  2. تجعل من شق البطني خط الوسط في الرقبة الأمامية. كشف الشريان السباتي المشترك الحق بسحب العضلات أوموهيويد والترقويه.
  3. التضحية الفئران ترانسيكتينج الشريان السباتي المشترك الحق وتذكية.
  4. تجعل من شق البطني خط الوسط في البطن. قطع الأضلاع من كلا الجانبين من القفص الصدري على طول الخط الكتفي، وقطاع الحجاب الحاجز.
  5. كشف القلب عن طريق رفع في الرهابه. العثور على الشريان الاورطي تصاعدي وإزالة الأنسجة الدهنية ارتشاح بلطف.
  6. كانولاتي الشريان الاورطي ونتخلل القلب ريتروجراديلي بإبرة ز 30 يعلق على 1 مل حقنه مليئة 0.5 مل من 4 درجات مئوية الفوسفات المخزن المؤقت الحل (PBS).
  7. بعد نضح، المكوس في القلب، وتقسم إلى البطينين الأيسر والأيمن. المكوس في الكبد والرئة والطحال.
  8. بعد يغسل اثنين في برنامج تلفزيوني الباردة (4 درجة مئوية)، تخزين كل الأنسجة التي تم جمعها بشكل منفصل في قنينات المبردة في نيتروجين سائل.

7-تحديد التعبير البروتين

  1. يعد التجانس المخزن المؤقت عن طريق إضافة كوكتيل مثبط البروتياز في المخزن المؤقت لتحلل متوفرة تجارياً بنسبة 1: 100. حساب الحجم الإجمالي استناداً إلى عدد العينات بحيث تتم معالجتها. الحفاظ على التجانس إعداد المخزن المؤقت عند 4 درجة مئوية للاستخدام اللاحق.
  2. إخراج الأنسجة من خزان النتروجين السائل. وزن الأنسجة على مقاييس عالية الدقة (حوالي 60 ملغ لكل قطعة من الأنسجة).
  3. نقل الأنسجة إلى أنبوب 1.5 مل ميكروسينتريفوجي جديدة. فور إضافة 200 ميليلتر التجانس المخزن المؤقت وكرات الصلب بريكوليد 1.5 ملم (4 درجة مئوية) في أنبوب ميكروسينتريفوجي.
  4. تأمين أنابيب ميكروسينتريفوجي في بريكوليد (4 درجات مئوية) أصحاب المعادن في أنسجة تلقائي آلة طحن، وتبدأ التجانس قبل بدء تشغيل الجهاز بالإعدادات التالية: التردد: هرتز 70؛ الوقت: 120 ثانية.
  5. بعد التجانس، الطرد المركزي هوموجيناتي (16,000 ز ×، 4 درجة مئوية)، ونقل المادة طافية بعناية إلى أنبوب 1.5 مل جديدة مع ماصة 100 ميليلتر.
  6. أضف تحميل المخزن المؤقت الحل (5 س) للبروتين طافية بنسبة 1:4، وتجريدها من البروتين في 100 درجة مئوية لمدة 5 دقائق.
  7. مستويات البروتين التعبير في القلب والأنسجة الجهاز الأخرى تخضع لمواصلة تحليل لطخة غربية (الممثل وترد النتائج في الشكل 2 و الشكل 3) وفقا للبروتوكول تم وصفه سابقا12.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بروتوكول التجربة وبعض الخطوات الرئيسية لأسلوب الإبلاغ عنها يرد في الشكل 1. في 5 أيام بعد الحقن إينتراميوكارديال من إتش لوسيفراس الترميز (ادف لوك)، في فيفو التصوير في لوك ادف حقن الفئران أوضحت قوية overexpression من لوسيفراس على وجه التحديد في القلب (الشكل 2 أ، ب)، الذي كان وأكد تحليل لطخة غربية (الشكل 2)، مما يوحي بعدم وجود توصيل الجهاز nontarget. وفي المقابل، تم الكشف عن أي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا التقرير يوضح تقنية معدلة لحقن إينتراميوكارديال من النواقل الفيروسية للتلاعب بالجينات القلب، الذي عدل من أسلوب لتحريض احتشاء عضلة القلب بغاو et al. 13 حاليا، في فيفو توصيف لوظائف الجينات محددة في أغلب الأحيان تنطوي على توليد خروج المغلوب أو الفئران المعدلة وراثيا3،،من1415،16،17 ، وهي مكلفة وتستغرق وقتاً طويلاً، وكثي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا العمل كان يدعمها "الصندوق الوطني للعلوم" للعلماء الشبان البارزين (81625002)، الوطنية الطبيعية مؤسسة العلوم الصينية (81470389، 81270282، 81601238)، البرنامج من شانغهاي أكاديمية بحوث الزعيم (18XD1402400)، وبلدية شانغهاي التعليم اللجنة جوفينج الطب السريري منحة الدعم (20152209)، مركز تطوير مستشفى في شانغهاي شينكانج (16CR3034A)، جامعة شانغهاي جياو تونغ (YG2013MS42)، شانغهاي جياو تونغ جامعة مدرسة الطب (15ZH1003 و 14XJ10019)، شانغهاي الإبحار (18YF1413000)، وبرنامج الابتكار بعد التخرج من كلية الطب بنغبو (Byycx1722). ونشكر الدكتور آر قاو لمساعدته السابقة في المختبر لدينا.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
<قوي> المعدات< قوي>
رقائقي تدفق معقم غطاءFengshi Animal Experimental  معدات التكنولوجيا المحدودة (سوشو ، الصين)FS-CJ-2F
الطرد المركزيالحرارية العلمية (والثام ، الولايات المتحدة الأمريكية)75005282
آلة طحن الأنسجةScientz Biotechnology Co.، Ltd. (نينغبو ، الصين)Scientz-48
معقم درجة حرارة عالية / ضغطعالي Hirayama (سايتاما ، اليابان)HVE-50
مبخر Isoflurane   ؛ماتريكس (أورشارد بارك ، الولايات المتحدة الأمريكية)VIP3000
IVIS  نظام التصوير Lumina IIIPerkinElmer (Waltham ، الولايات المتحدة الأمريكية)CLS136334
Precision  التوازنSartorius (G & ouml; tingen, Germany)28091873
Instruments  ماصة < / قوية>
إيبندورف (100 وميكرو ؛ ل)إيبندورف (ويستبري ، الولايات المتحدة الأمريكية)  ؛ 4920000059
ماصة Eppendorf (10 & micro; ل)إيبندورف (ويستبري ، الولايات المتحدة الأمريكية)  ؛ 4920000113
الملقطشنغهاي للأدوات الطبية (المجموعة) المحدودة ، الشركة & nbsp ؛JD4020منحني
حقنة هاميلتونهاميلتون (نيفادا ، الولايات المتحدة الأمريكية) 80501المجلد 50 & L
رقيق البعوض الصغيرFST (فوستر سيتي ، الولايات المتحدة الأمريكية)13011-12منحني ، عرض الطرف 1.3 مم
حامل إبرة   ؛شنغهاي للأدوات الطبية (المجموعة) المحدودة ، كورب (شنغهاي ، الصين)J32110
مقص جراحيFST (فوستر سيتي ، الولايات المتحدة الأمريكية)14002-12
حقنة 1 ملWeiGao Group Medical Polymer Co.، Ltd. (ShangDong ، الصين)
<قوي > المواد والكواشف < / قوي >
الأجسام المضادة المضادة ل GAPDHCST (Danvers ، & nbsp ؛ الولايات المتحدة الأمريكية)# 2118
الأجسام المضادة المضادة لوسيفيرازAbcam (كامبريدج ، المملكة المتحدة)ab187340
Anti-rabbit IgGCST (Danvers ،   ؛ الولايات المتحدة الأمريكية) #7074
الأجسام المضادة للتشفيرالمضادة Abcam (كامبريدج، المملكة المتحدة)  ab109234
بوبرينورفينحراري علمي (والثام ، الولايات المتحدة الأمريكية)PA175056
هيدراس كلوراليكLingFeng Chemical (شانغهاي ، الصين) قوارير
مبردةحراري علمي (والثام ، الولايات المتحدة الأمريكية)3754181.8 مل & nbsp ؛
كريم مزيل الشعرVeet (شنغهاي ، الصين)
ملحي مخزن بالفوسفات من Dulbecco   ؛Gibco (Grand Island,  الولايات المتحدة الأمريكية)14040133
EntoiodineLiKang (شنغهاي ، الصين)310132
أنبوب EPSarstedt (نيوتن ، الولايات المتحدة الأمريكية)PCR001
مرشحMillipore (بيدفورد ، الولايات المتحدة الأمريكية)حجم المسام 0.2 & micro ؛ m 
IsofluraneYipin Pharmaceutical Company (Hebei ، الصين)
LuciferinPromega (ماديسون ، الولايات المتحدة الأمريكية)P1041
عازلة التحلل للغرب   لطخةBeyotime (شنغهاي ، الصين)P0013Jبدون مثبطات
كريم العيونمختبرات Apex (ملبورن ، أستراليا)) PBS
Gibco (Grand Island,  الولايات المتحدة الأمريكية)10010023
كوكتيل مثبط البروتيازالحراري العلمي (والثام ، الولايات المتحدة الأمريكية)78438
5-0 خياطة الحريرشنغهاي للأدوات الطبية (المجموعة) المحدودة (شنغهاي ، الصين)
الكرة الفولاذيةScientz Biotechnology Co.، Ltd. (نينغبو ، الصين)عرض 1.5 مم
إبرة حقنةKindly Medical Devices Co.، Ltd. (تشجيانغ ، الصين)30 مقياس 
حصيرة دافئةWarmtact الكهربائية التدفئة التكنولوجيا المحدودة (قوانغدونغ ، الصين)NF-GNCW
محرك السيارة طرف محلول شركة

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Yancy, C. W., et al. 2017 ACC/AHA/HFSA Focused Update of the 2013 ACCF/AHA Guideline for the Management of Heart Failure: A Report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Clinical Practice Guidelines and the Heart Failure Society of America. J Card Fail. 23 (8), 628-651 (2017).
  2. Pu, J., et al. Cardiomyocyte-expressed farnesoid-X-receptor is a novel apoptosis mediator and contributes to myocardial ischaemia/reperfusion injury. Eur Heart J. 34 (24), 1834-1845 (2013).
  3. He, B., et al. The nuclear melatonin receptor RORα is a novel endogenous defender against myocardial ischemia_reperfusion injury. J Pineal Res. (3), 313-326 (2016).
  4. Yao, T., et al. Vitamin D receptor activation protects against myocardial reperfusion injury through inhibition of apoptosis and modulation of autophagy. Antioxid Redox Signal. 22 (8), 633-650 (2015).
  5. He, Q., et al. Activation of liver-X-receptor alpha but not liver-X-receptor beta protects against myocardial ischemia/reperfusion injury. Circ Heart Fail. 7 (6), 1032-1041 (2014).
  6. Ding, J., et al. Preparation of rAAV9 to Overexpress or Knockdown Genes in Mouse Hearts. J Vis Exp. (118), (2016).
  7. Bish, L. T., Sweeney, H. L., Muller, O. J., Bekeredjian, R. Adeno-associated virus vector delivery to the heart. Methods Mol Biol. 807, 219-237 (2011).
  8. Michael, J., et al. Cardiac gene delivery with cardiopulmonary bypass. Circulation. 104 (2), 131-133 (2001).
  9. Lei, S., et al. Increased Hepatic Fatty Acids Uptake and Oxidation by LRPPRC-Driven Oxidative Phosphorylation Reduces Blood Lipid Levels. Front Physiol. 7, 270(2016).
  10. Zhang, H. B., et al. Maintenance of the contractile phenotype in corpus cavernosum smooth muscle cells by Myocardin gene therapy ameliorates erectile dysfunction in bilateral cavernous nerve injury rats. Andrology. 5 (4), 798-806 (2017).
  11. Virag, J. A., Lust, R. M. Coronary artery ligation and intramyocardial injection in a murine model of infarction. J Vis Exp. (52), (2011).
  12. Mahmood, T., Yang, P. C. Western blot: technique, theory, and trouble shooting. N Am J Med Sci. 4 (9), 429-434 (2012).
  13. Gao, E., et al. A novel and efficient model of coronary artery ligation and myocardial infarction in the mouse. Circ Res. 107 (12), 1445-1453 (2010).
  14. Zhao, Y., et al. Novel protective role of nuclear melatonin receptor RORα in diabetic cardiomyopathy. J Pineal Res. 62 (3), (2017).
  15. Nduhirabandi, F., Lamont, K., Albertyn, Z., Opie, L. H., Lecour, S. Role of toll-like receptor 4 in melatonin-induced cardioprotection. J Pineal Res. 60 (1), 39-47 (2016).
  16. Wu, H. M., et al. JNK-TLR9 signal pathway mediates allergic airway inflammation through suppressing melatonin biosynthesis. J Pineal Res. 60 (4), 415-423 (2016).
  17. de Luxan-Delgado, B., et al. Melatonin reduces endoplasmic reticulum stress and autophagy in liver of leptin-deficient mice. J Pineal Res. (1), 108-123 (2016).
  18. Scofield, S. L., Singh, K. Confirmation of Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury in Mice Using Surface Pad Electrocardiography. J Vis Exp. (117), (2016).
  19. Cai, B., et al. Long noncoding RNA H19 mediates melatonin inhibition of premature senescence of c-kit(+) cardiac progenitor cells by promoting miR-675. J Pineal Res. 61 (1), (2016).
  20. Chua, S., et al. The cardioprotective effect of melatonin and exendin-4 treatment in a rat model of cardiorenal syndrome. J Pineal Res. 61 (4), 438-456 (2016).
  21. Pei, H. F., et al. Melatonin attenuates postmyocardial infarction injury via increasing Tom70 expression. J Pineal Res. 62 (1), (2017).
  22. Yu, L., et al. Membrane receptor-dependent Notch1_Hes1 activation by melatonin protects against myocardial ischemia-reperfusion injury_ in vivo and in vitro studies. J Pineal Res. 59 (4), 420-433 (2015).
  23. Yu, L., et al. Melatonin rescues cardiac thioredoxin system during ischemia-reperfusion injury in acute hyperglycemic state by restoring Notch1/Hes1/Akt signaling in a membrane receptor-dependent manner. J Pineal Res. 62 (1), (2017).
  24. Poggioli, T., Sarathchandra, P., Rosenthal, N., Santini, M. P. Intramyocardial cell delivery: observations in murine hearts. J Vis Exp. (83), e851064(2014).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة