يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

مكافئات الأنسجة البشرية التحريضية ثلاثية الأبعاد للثة

9.5K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/57157

⸱

أبريل 3, 2018

 ,  , 
1Department of Pharmacology, The Nippon Dental University, 2Department of Oral and Maxillofacial Surgery, The Nippon Dental University Hospital

في هذه المقالة

ملخص

وهدف البروتوكول بناء نموذج التهاب لثة بشرية في المختبر. هذا نموذج الأنسجة المزروعة شارك ثلاثة أنواع من الخلايا البشرية والخلايا الكيراتينيه هاكات والليفية اللثة والضامة THP-1، تحت ظروف ثلاثي الأبعاد. يمكن تطبيق هذا النموذج على التحقيق في أمراض اللثة، مثل التهاب اللثة والتهاب اللثة.

الملخص

أمراض اللثة (مثل التهاب اللثة والتهاب اللثة) هي الأسباب الرئيسية لفقدان الأسنان لدى البالغين. التهاب اللثة هو الفيزيولوجيا المرضية الأساسية لأمراض اللثة. تم إنشاء النماذج التجريبية الحالية لأمراض اللثة في أنواع مختلفة من الحيوانات. الفيزيولوجيا المرضية لنماذج حيوانية غير مختلفة عن البشر، مما يجعل من الصعب تحليل الآليات الجزيئية والخلوية، وتقييم الأدوية الجديدة لأمراض اللثة. نقدم هنا، بروتوكول مفصل لتعمير مكافئات الأنسجة البشرية التهاب اللثة (إيجتي) في المختبر. أولاً نبني مكافئات الأنسجة البشرية من لثة (GTE) باستخدام نوعين من الخلايا البشرية، بما في ذلك الخلايا الليفية اللثة البشرية (هجف) وجلد الإنسان البشرة الكيراتينيه (هاكات)، تحت ظروف ثلاثي الأبعاد. نحن خلق نموذج جرح باستخدام تثقيب أنسجة لكمه ثقب في GTE. يتم حقن وحيدات THP-1 المقبل، البشرية مختلطة مع جل الكولاجين في الحفرة في GTE. قبل أديميستراتيون من 10 نانوغرام/مل phorbol 12-ميريستاتي 13-خلات (سلطة النقد الفلسطينية) ح 72، THP-1 خلايا متباينة في الضامة للنموذج البؤر الملتهبة في GTE (إيجتي) (إيجتي كما يمكن أن يكون ستوميلاتيد مع 2 ميكروغرام/مل من ليبوبوليساكتشاريديس (LPS) عن 48 ساعة لبدء التهاب ). إيجتي هو أول نموذج في المختبر لالتهاب اللثة باستخدام الخلايا البشرية مع بنية ثلاثية الأبعاد. إيجتي يعكس التغييرات المرضية الرئيسية (اكتيفيشن إيمونوسيتيس، والتفاعلات داخل الخلايا بين فيبريوبلاستس والخلايا الظهارية ووحيدات والضامة) في أمراض اللثة. GTE و GTE الجرحى إيجتي يمكن استخدامها كأدوات متعددة لدراسة التئام الجروح وتجديد الأنسجة والتهاب، التفاعل خلية خلية وشاشة الأدوية المحتملة لأمراض اللثة.

المقدمة

أمراض اللثة هي السبب الرئيسي لفقدان الأسنان لدى البالغين. التهاب اللثة والتهاب اللثة هي أمراض اللثة الأكثر شيوعاً. كل هذا التغييرات الالتهابات الحادة أو المزمنة بيوفيلم بوساطة في اللثة. التهاب اللثة يتميز بالتهاب حاد، بينما التهاب اللثة ويعرض عادة كالتهاب مزمن. على المستوى النسيجي، مكونات بكتيرية تؤدي إلى تنشيط الخلايا المناعية، مثل الضامة والخلايا الليمفاوية وخلايا البلازما وخلايا ماست1،2. هذه الخلايا المناعية، وبخاصة الضامة، تتفاعل مع الخلايا المحلية (بما في ذلك الخلايا الظهارية اللثة والخلايا الليفية، وخلايا بطانية وخلايا الاوستيوبلاستس) أدى إلى آفات التهاب في أنسجة اللثة3،4. تم إنشاء نماذج تجريبية لأمراض اللثة في أنواع مختلفة من الحيوانات مثل الفئران، الهامستر والأرانب، فرت، الأنياب والرئيسات. الفيزيولوجيا المرضية لنماذج حيوانية غير مختلفة عن البشر، مما يجعل من الصعب تحليل الآليات الجزيئية والخلوية، وتقييم الأدوية الجديدة لأمراض اللثة5. وقد استخدمت المشارك زراعة اللثة البكتيريا والخلايا الظهارية الشفوي البشري أحادي الطبقة التحقيق إليه التهابات اللثة6. ومع ذلك، تفتقر ثقافات أحادي الطبقة من الخلايا عن طريق الفم هندسة الأنسجة سليمة؛ الخلوية ثلاثية الأبعاد (3D) ولذلك، أنهم لا يمكن أن تحاكي الحالة في المختبر .

وهنا تنشأ مكافئات 3D الأنسجة البشرية التهاب اللثة (إيجتي) لتمثل أمراض اللثة في المختبر. هذا نموذج ثلاثي الأبعاد من أمراض اللثة تحتل موقعا وسيطة بين الثقافات الخلية أحادي الطبقة ونماذج حيوانية. ثلاثة أنواع من الخلايا البشرية، بما في ذلك الخلايا الكيراتينيه هاكات واللثة الليفية الضامة THP-1، يزرع شارك في جل الكولاجين، وتحفزها المبادرين التحريضية لبناء إيجتي. إيجتي يحاكي عن كثب الأوضاع في فيفو الخلية التمايز والتفاعل خلية خلية التنشيط بلعم في اللثة. هذا النموذج قد العديد من التطبيقات الممكنة للمخدرات فحص واختبار النهج الجديدة الدوائي في أمراض اللثة، وكذلك لتحليل الآليات الخلوية والجزيئية في التئام الجروح والالتهابات، وتجديد الأنسجة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تم تصميم هذا البروتوكول لإنشاء مكافئات أنسجة اللثة البشرية وجرح اللثة نماذج ونماذج التهاب اللثة. وقدمت جلد الإنسان البشرة الكيراتينيه (هاكات) يرجى من البروفيسور نوربرت هاء فوسينيج كريبسفورشونجسزينتروم الألماني (هايدلبرغ، ألمانيا)7. الليفية اللثة البشرية (هجفس) بمعزل عن أنسجة اللثة وفقا للبروتوكولات المنشورة سابقا8. تم الحصول على الموافقة المستنيرة مسبقاً، وتمت الموافقة على الدراسة وفقا للمبادئ التوجيهية التي وضعتها "لجنة الأخلاقيات"، نيبون الأسنان جامعة مدرسة الحياة طب الأسنان في طوكيو (رقم الترخيص: جامعة سيدة اللويزة-T2012-35). ينبغي القيام بالخطوات 1-3 من البروتوكول في غطاء ثقافة خلية.

1-إعداد معادلات الأنسجة البشرية 3D للثة (GTE) (الشكل 1A)

  1. مزيج الكولاجين النوع-أ جل مع 10% تتركز MEM-ألفا والتعمير 10% المخزن المؤقت (2.2 ز ناكو3 وز 4.47 حبيس في 100 مل 0.05 هيدروكسيد الصوديوم N) في أنبوب عقيم 15 مل من بيبيتينج. يبقى الحل الكولاجين مختلطة على الجليد حتى استخدامها.
  2. مكان إدراج الثقافة 24-جيدا (الحجم 3.0 المسام ميكرومتر) في لوحة 24-جيدا.
  3. إزالة هجفس من على سطح الثقافة باستخدام حل يدتا التربسين 0.25%. تعليق الخلايا في 10 مل متوسط الثقافة (MEM-ألفا + 20% FBS + 1% جلوتاماكس). حساب عدد الخلايا بعداد خلية تورك Bürker.
    1. استخراج الكمية المطلوبة من الخلايا (1-5 x105 خلايا/مل)، ثم الطرد المركزي لمدة 4 دقائق في 190 x ز.
    2. تعليق الخلايا الموجودة في الحل الكولاجين مختلطة. الحفاظ على الجليد الخليط حتى الخطوة التالية.
  4. إضافة 0.5 مل المخلوط الخلية-الكولاجين (0.5-2.5 × 105 خلايا/جيد) في إدراج الثقافة دون إنتاج أي فقاعات. احتضان هذا الخليط لمدة 10-30 دقيقة في جو هوميديفيد بنسبة 5% CO2 في 37 درجة مئوية يتجمد الخليط في جل.
    ملاحظة: إضافة خليط الكولاجين داخل مركز إدراج الثقافة لتجنب تشكيل غير المتكافئ لجل الكولاجين.
  5. أضف 1 مل المتوسطة الثقافة في البئر ومل 0.5 إلى الإدراج. احتضان لوحة الثقافة عن 24 ساعة أو طوال الليل في جو هوميديفيد بنسبة 5% CO2 في 37 درجة مئوية.
  6. إزالة خلايا هاكات من السطح الثقافة باستخدام حل يدتا التربسين 0.25%. تعليق الخلايا في 10 مل متوسطة ب (دميم + 10% FBS + 1% جلوتاماكس) وعدد الخلايا. استخراج الكمية اللازمة من الخلايا (1 – 5 × 105 خلايا/مل) مع ماصة، أجهزة الطرد المركزي لمدة دقيقة 4 في غ. س 190 تعليق الخلايا في المتوسط ب
  7. إزالة المتوسطة من إدراج الثقافة، التي تحتوي على خليط هجف-الكولاجين، بالطموح. إضافة 0.5 مل تعليق خلية هاكات (0.5-2.5 × 105 خلايا/جيد) على رأس هذا الخليط هجف-الكولاجين. احتضان ثقافات ح 24 أو بين عشية وضحاها.
    ملاحظة: عند هذه النقطة الزمنية، المتوسطة في الثقافة كذلك ينبغي أن يكون بالمتوسط، بينما ينبغي أن تكون المتوسطة في إدراج الثقافة ب المتوسطة
  8. استبدال المتوسطة الثقافة بقصر المتوسطة (المتوسطة ثقافة المشارك) (MEM-ألفا + 15% "خروج المغلوب المصل البديل" + 1% جلوتاماكس) + 5% FBS. إضافة 1 مل المتوسط الثقافة إلى الثقافة جيدا و 0.5 مل في إدراج الثقافة. احتضانها الثقافات من أجل ح 24-48.
  9. استبدال المتوسطة الثقافة بقصر متوسطة + 1% FBS. أضف 1 مل في الثقافة جيدا و 0.5 مل في إدراج الثقافة. احتضان ثقافات ح 24 أو بين عشية وضحاها.
  10. استبدال المتوسطة الثقافة في الثقافة جيدا مع 0.7 – 1 مل قصر المتوسطة. إزالة الوسط تماما من إدراج الثقافة (على سطح الثقافة ينبغي أن تتعرض للهواء). احتضان الثقافات 1 – 2 أسابيع. تغيير وسيلة في ثقافة جيدا مرتين في الأسبوع.
    ملاحظة: لا تدع ارتفاع المستوى المتوسط فوق سطح الثقافة (الطبقة العليا المؤلفة من الخلايا الكيراتينيه). تبقى دائماً على سطح الثقافة الجافة.

2-إعداد الجرحى GTE (الشكل 1B)

  1. إعداد تثقيب أنسجة قطرها 1 – 3 مم. تعقيم أنه مع اﻷوتوكﻻف في 121 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.
  2. دفع التثقيب الأنسجة عمودياً إلى GTE عن عميق 300 ميكرون، ولكمه ثقب في الأنسجة لمحاكاة جرح.
  3. في هذه الخطوة، استخدم GTE الجرحى للتحقيق في تجديد الجرح الشفاء والأنسجة. وبدلاً من ذلك، إصلاح GTE استخدام 10% فورمالين محلول عازلة محايدة لإجراء التحليل النسيجي.

3-إعداد التحريضية GTE (إيجتي) (الشكل 1B)

  1. زراعة الخلايا THP-1 وفقا للتقرير السابق9.
  2. مزيج الكولاجين النوع-أ جل مع 10% تتركز 1640 RPMI، المخزن المؤقت لإعادة الإعمار 10% (2.2 ز ناكو3 وز 4.47 حبيس في 100 مل 0.05 هيدروكسيد الصوديوم N) و 10 نانوغرام/مل سلطة النقد الفلسطينية. يبقى الحل الكولاجين مختلطة على الجليد حتى الاستخدام.
  3. العدد 1 – 2 × 106 THP-1 الخلايا وأجهزة الطرد المركزي لمدة دقيقة 4 في غ. س 190 تعليق الخلايا الموجودة في 1 مل الحل الكولاجين مختلطة. الحفاظ على الجليد الخليط حتى الخطوة التالية.
  4. إضافة 10 – 30 ميليلتر THP-1-الكولاجين المخلوط إلى منطقة الجرحى GTE. استبدال ثقافة المتوسط إلى 0.7 – 1 مل قصر المتوسطة التي تحتوي على 10 نانوغرام/مل من سلطة النقد الفلسطينية.
  5. احتضان هذا الخليط في جو هوميديفيد بنسبة 5% CO2 في 37 درجة مئوية ح 72.
  6. استخدم هذا النموذج للتحري عن التهاب اللثة أو أمراض اللثة (على سبيل المثال، إضافة الأدوية المضادة للالتهابات المحتملة إلى إيجتي لمعرفة آثارها على سيتوكين الإصدار10). بدلاً من ذلك، تجاهل ح 72 سلطة النقد الفلسطينية-العلاج وإضافة 2 ميكروغرام/مل من لبس في الثقافة، واحتضان الأنسجة في جو هوميديفيد بنسبة 5% CO2 في 37 درجة مئوية ح 4811،12.

4-التثبيت وكله إيمونوستينينج جبل GTE وإيجتي الثقافات

  1. تثبيت الثقافات.
    1. إزالة المتوسطة الثقافة من لوحة 24-جيدا. تغسل الأنسجة 2 مرات مع الفوسفات مخزنة المالحة (PBS).
    2. أضف 1 مل من محلول عازلة محايدة الفورمالين 10% للإدراج ومل 1 للثقافة جيدا. اترك لوحة 24-جيدا في ثلاجة عند درجة 4 مئوية بين عشية وضحاها.
    3. إزالة الحل عازلة محايدة الفورمالين 10% في اليوم التالي.
    4. لكل جبل إيمونوستينينج، غسل الأنسجة 3-4 مرات مع برنامج تلفزيوني بعد التثبيت.
    5. الهيماتوكسيلين ويوزين (H & E) تلطيخ و immunostaining العادية، المضي قدما في الجفاف وتضمين البارافين وتمزيقها.
      ملاحظة: لكل جبل إيمونوستينينج، يمكن حذف هذه الخطوة.
  2. كله جبل إيمونوستينينج
    ملاحظة: تم تعديل هذا البروتوكول من واحد في مرجع 13.
    1. تغسل الأنسجة 3 x في برنامج تلفزيوني 0.5 – 1% تريتون، 10 – 30 دقيقة في كل مرة.
    2. احتضان الأنسجة مرتين لمدة 30 دقيقة في المخزن المؤقت لحظر (برنامج تلفزيوني 1% تريتون + 10% جيش صرب البوسنة)، في درجة حرارة الغرفة.
    3. أغسل × الأنسجة 2 في المخزن المؤقت لحظر، 5 – 10 دقيقة كل مرة.
    4. إضافة 50 ميليلتر من حل جسم الأولية إلى تدرج في تمييع/التركيز المطلوب. تستخدم فيلم تتشبث بلاستيكية رقيقة للالتفاف إدراج لتجنب جفاف الأنسجة.
    5. احتضان الأنسجة لمدة 1 إلى 2 في 4 درجات مئوية.
    6. غسل الأنسجة 3 مرات، لمدة 30 دقيقة في برنامج تلفزيوني 1% تريتون + 10% من جيش صرب البوسنة. أغسل مرة أخرى 3 مرات، لمدة 5 دقائق في برنامج تلفزيوني 1% تريتون.
    7. إضافة 50 ميليلتر من جسم الثانوية في المخزن المؤقت لحظر (برنامج تلفزيوني 1% تريتون + 10% جيش صرب البوسنة) و 5 ميليلتر من حل هويشت 33342 (خلية يعيش نوكبلوي وصمة عار) لكل إدراج. تستخدم فيلم تتشبث بلاستيكية رقيقة للالتفاف إدراج لتجنب جفاف الأنسجة.
    8. احتضان لمدة 1 إلى 2 في 4 درجات مئوية. التفاف لوحة 24-جيدا في منشفة ورقية رطب ومن ثم وضعه في علبة بلاستيكية لاستخدامها في جميع أنحاء الحضانة.
    9. غسل الأنسجة 3 مرات، لمدة 10 دقائق في برنامج تلفزيوني 1% تريتون
    10. استخدام إبرة حادة لقطع الغشاء لإدراج ثقافة الحصول على الأنسجة. مكان الغشاء إلى شريحة.
      ملاحظة: ينبغي أن تكون الأنسجة على الغشاء.
    11. إضافة 2-3 قطرات من الأسفار جبل المتوسطة. تغطية الأنسجة بتغطية الزجاج ومخزن في 4 درجات مئوية في الظلام حتى التحليل.
    12. عرض الأنسجة بليزر [كنفوكل] الفحص المجهري (LSM).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

عرض هاكات الخلايا keratinocyte نموذجي مورفولوجيا تحت الملاحظة المجهرية المرحلة عالي التباين (الشكل 2A). الماسح الضوئي الإلكترون المجهرية (SEM) الصور أظهرت أن أسطح الخلية هاكات مشمولة بالعديد من زغيبات. كانت وساطة الاتصالات بين الخلايا بين الخلايا هاكات من عمليات غشاء (الشكل 2). وأعرب هاكات خلايا ظهارة اللثة علامة K8/1814، تشير إلى أن الخلايا هاكات تصلح لتعمير اللثة (الشكل 2).<...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

ويستند هذا البروتوكول أساليب إنشاء معادلات أنسجة اللثة ومكافئات الأنسجة الدهنية تحت الجلد الموصوفة بالتقارير السابقة8،،من2122. على الرغم من أن هذا أسلوب بسيط وسهل، بعض الخطوات تتطلب اهتماما خاصا. على سبيل المثال، ينبغي أن يوضع الخليط الكولاجين على الجليد حتى استخدامها لتجنب تكوين هلام في الحل. عند إضافة خليط الكولاجين في إدراج الثقافة، تأكد من تم حقن الحل في وسط الإدراج لتجنب تشكيل هلام متحيزة (كما هو الحال في

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب يعلن لا تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

هذا العمل وأيد جزئيا "مجتمع اليابان" لمعونات النهوض بالعلوم (JSPS) "البحوث العلمية" (ك 26861689 و 17 11813). المؤلف يود أن يشكر السيد ناثانيل غرين لتصحيح التجارب المطبعية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
نوع الكولاجين I-ANitta Gelatin Incلصنع أدمة GTE
MEM-alphaThermo Fisher Scientific11900073Cell Cell
Culture Insert Cell Insert (للوحة 24 بئرا) ، حجم المسام 3.0 & mu ؛ مكورنينج ، إنك.353096لزراعة الأنسجة
GlutaMAXThermo Fisher Scientific35050061كاشف ثقافة الخلايا
DMEMThermo Fisher Scientific31600034زراعة الخلايا متوسط
بالضربة القاضية استبدال المصلالحراري فيشر العلمي10828028كاشف ثقافة الخلية
أداة ثقافة الأنسجة أداة لثقب الأنسجةShibata System Service Co.، LTDSP-703ل ثقوب في GTE
RPMI 1640Thermo Fisher Scientific31800022وسط ثقافة الخلايا
BSASigma-AldrichA3294للتلوين المناعي
Hoechst 33342 (صبغة الخلية الحية NucBlue)Thermo Fisher ScientificR37605لوضع العلامات على النوى
متوسط تركيب مضانDakoلتركيب العينات بعد التلوين
المناعيالجسم المضاد المضاد للسيتوكيراتين 8 + 18 [5D3]abcamab17139لتحديد الظهارة
مسح المجهر الإلكترونيهيتاشي المحدودة.هيتاشي S-4000لمراقبة تضاريس سطح العينات وتكوينها
الفحص المجهري للمسح الضوئي بالليزر متحد البؤرLSM 700 ؛ كارل زايس المجهري المحدودةLSM 700لمراقبة تلطيخ التألق المناعي للعينات
المضاد للكيراتين 19 الجسم المضادabcamab52625لتحديد الظهارة
الجسم المضاد المضاد للفيمنتينabcamab92547لتحديد الخلايا الليفية والضامة المنشطة
الأجسام المضادة ل TE-7MilliporeCBL271لتحديد الخلايا الليفية في الأدمة
Anti-CD68 الأجسام المضادةسيجما ألدريتشSAB2700244لتحديد البلاعم
CD14 الأجسام المضادةR & D SystemsMAB3832-SPلتحديد البلاعم
Alexa Fluor 594 مترافق الماعز الثانوي المضاد للأرانب ThermoFisher ScientificA11012لتلوين التألق المناعي
Alexa Fluor 488 مترافق الماعز الأجسام المضادة للفأرThermo Fisher ScientificA11001لتلوين التألق
المناعي EVOS FL نظام تصوير الخلاياThermo Fisher Scientificلمراقبة تلطيخ خلايا THP-1 بالتألق المناعي للعينة
خلية Riken BRCRCB1189لصنع iGTE
PMA (Phorbol 12-myristate 13-acetate)Sigma-AldrichP8139للتفريق بين خلايا THP-1
البشرية بنك

المراجع

  1. Cekici, A., Kantarci, A., Hasturk, H., Van Dyke, T. E. Inflammatory and immune pathways in the pathogenesis of periodontal disease. Periodontology 2000. 64 (1), 57-80 (2014).
  2. Hasturk, H., Kantarci, A., Van Dyke, T. E. Oral Inflammatory Diseases and Systemic Inflammation: Role of the Macrophage. Frontiers in Immunology. 3, 118(2012).
  3. Koh, T. J., DiPietro, L. A. Inflammation and wound healing: The role of the macrophage. Expert reviews in molecular medicine. 13, e23(2011).
  4. Mescher, A. L. Macrophages and fibroblasts during inflammation and tissue repair in models of organ regeneration. Regeneration. 4 (2), 39-53 (2017).
  5. Struillou, X., Boutigny, H., Soueidan, A., Layrolle, P. Experimental Animal Models in Periodontology: A Review. The Open Dentistry Journal. 4, 37-47 (2010).
  6. Han, Y. W., et al. Interactions between Periodontal Bacteria and Human Oral Epithelial Cells: Fusobacterium nucleatum Adheres to and Invades Epithelial Cells. Infection and Immunity. 68 (6), 3140-3146 (2000).
  7. Boukamp, P., Petrussevska, R. T., Breitkreutz, D., Hornung, J., Markham, A., Fusenig, N. E. Normal keratinization in a spontaneously immortalized aneuploid human keratinocyte cell line. J Cell Biol. 106 (3), 761-771 (1988).
  8. Xiao, L., Miwa, N. Hydrogen-rich water achieves cytoprotection from oxidative stress injury in human gingival fibroblasts in culture or 3D-tissue equivalents, and wound-healing promotion, together with ROS-scavenging and relief from glutathione diminishment. Hum Cell. 30 (2), 72-87 (2017).
  9. Tsuchiya, S., Yamabe, M., Yamaguchi, Y., Kobayashi, Y., Konno, T., Tada, K. Establishment and characterization of a human acute monocytic leukemia cell line (THP-1). Int J Cancer. 26 (2), 171-176 (1980).
  10. Ara, T., Kurata, K., Hirai, K., Uchihashi, T., Uematsu, T., Imamura, Y., Furusawa, K., Kurihara, S., Wang, P. L. Human gingival fibroblasts are critical in sustaining inflammation in periodontal disease. J Periodontal Res. 44 (1), 21-27 (2009).
  11. Park, E. K., Jung, H. S., Yang, H. I., Yoo, M. C., Kim, C., Kim, K. S. Optimized THP-1 differentiation is required for the detection of responses to weak stimuli. Inflamm Res. 56 (1), 45-50 (2007).
  12. Sharif, O., Bolshakov, V. N., Raines, S., Newham, P., Perkins, N. D. Transcriptional profiling of the LPS induced NF-kappaB response in macrophages. BMC Immunol. 8, 1(2007).
  13. Abcam. Whole mount fluorescent immunohistochemistry. , Available from: http://www.abcam.com/ps/pdf/protocols/whole_mount_fluorescent_ihc.pdf (2017).
  14. Shetty, S., Gokul, S. Keratinization and its disorders. Oman Med J. 27 (5), 348-357 (2012).
  15. Klinge, B., Matsson, L., Attström, R. Histopathology of initial gingivitis in humans. A pilot study. J Clin Periodontol. 10 (4), 364-369 (1983).
  16. Nagarakanti, S., Ramya, S., Babu, P., Arun, K. V., Sudarsan, S. Differential expression of E-cadherin and cytokeratin 19 and net proliferative rate of gingival keratinocytes in oral epithelium in periodontal health and disease. J Periodontol. 78 (11), 2197-2202 (2007).
  17. Goodpaster, T., Legesse-Miller, A., Hameed, M. R., Aisner, S. C., Randolph-Habecker, J., Coller, H. A. An immunohistochemical method for identifying fibroblasts in formalin-fixed, paraffin-embedded tissue. J Histochem Cytochem. 56 (4), 347-358 (2008).
  18. Langeland, K., Rodrigues, H., Dowden, W. Periodontal disease, bacteria, and pulpal histopathology. Oral Surg Oral Med Oral Pathol. 37 (2), 257-270 (1974).
  19. Holness, C. L., Simmons, D. L. Molecular cloning of CD68, a human macrophage marker related to lysosomal glycoproteins. Blood. 81 (6), 1607-1613 (1993).
  20. Mor-Vaknin, N., Punturieri, A., Sitwala, K., Markovitz, D. M. Vimentin is secreted by activated macrophages. Nat Cell Biol. 5 (1), 59-63 (2003).
  21. Xiao, L., Aoshima, H., Saitoh, Y., Miwa, N. The effect of squalane-dissolved on adipogenesis-accompanied oxidative stress and macrophage in a preadipocyte-monocyte co-culture system. Biomaterials. 31 (23), 5976-5985 (2010).
  22. Xiao, L., Aoshima, H., Saitoh, Y., Miwa, N. Highly hydroxylated fullerene localizes at the cytoskeleton and inhibits oxidative stress in adipocytes and a subcutaneous adipose-tissue equivalent. Free Radic Biol Med. 51 (7), 1376-1389 (2011).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

HaCaT THP 1 PMA LPS
مكافئات الأنسجة البشرية التحريضية ثلاثية الأبعاد للثة
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.