Method Article

سريع الفضة تلطيخ البروتوكول تمكين بسيطة والكشف عن كفاءة من علامات الاشتراكية السوفياتية باستخدام هلام Polyacrylamide يشوه عدم

DOI:

10.3791/57192

⸱

April 20th, 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Life Sciences, Guangzhou University, 2Hard Winter Wheat Genetics Research Unit, United States Department of Agriculture - Agricultural Research Service, 3The UWA Institute of Agriculture, University of Western Australia

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هنا، نحن تقرير فضية بسيطة ومنخفضة التكلفة تلطيخ البروتوكول الذي يتطلب سوى ثلاثة من الكواشف ودقيقة 7 من تجهيز، وهو مناسبة لتوليد سريعة عالية الجودة الاشتراكية السوفياتية البيانات في التحليل الجيني.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تكرار تسلسل بسيط (SSR) واحد من العلامات الأكثر فعالية استخدامها في البحوث الجينية النباتية والحيوانية وبرامج التربية الجزيئية. تلوين الفضة أسلوب مستخدمة على نطاق واسع للكشف عن علامات الاشتراكية السوفياتية في جل بولياكريلاميدي. ومع ذلك، البروتوكولات التقليدية لتلطيخ الفضية من الناحية التقنية شاقة وتستغرق وقتاً طويلاً. مثل العديد من المختبرات البيولوجية الأخرى تم التقنيات، والفضة تلطيخ البروتوكولات اطراد الأمثل لتحسين كفاءة الكشف. هنا، نحن تقرير فضية مبسطة تلطيخ الأسلوب الذي يقلل تكاليف الكاشف إلى حد كبير ويعزز وضوح القرار وصورة كشف. يتطلب الأسلوب الجديد الكواشف الثلاثة (نترات الفضة, هيدروكسيد الصوديوم وفورمالدهايد)، خطوتين رئيسيتين (التشريب والتنمية) وفقط 7 دقائق لتجهيز لجل polyacrylamide غير يشوه. بالمقارنة مع بروتوكولات سبق الإبلاغ عنها، هذا الأسلوب الجديد هو أسهل وأسرع ويستخدم أقل من الكواشف الكيميائية للكشف عن إصلاح قطاع الأمن. ولذلك، سيستفيد هذا فضية بسيطة ومنخفضة التكلفة وفعالة تلطيخ البروتوكول بمساعدة الواسمات تربية قبل جيل سريعة لإصلاح قطاع الأمن علامة البيانات ورسم الخرائط الجينية.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وضع علامات على أساس بكر قد أحدث ثورة في علم الوراثة النباتية وتربية1. ومن علامات (SSR) تكرار تسلسل بسيط بين علامات الحمض النووي الأكثر شيوعاً والأكثر تنوعاً. تغطية الجينوم واسعة ووفرة وخصوصية الجينوم، والتكرار بعض الأسس الموضوعية لعلامات الاشتراكية السوفياتية بالإضافة إلى الإرث كودومينانت للكشف عن الأنماط الجينية متخالف2. واستخدمت عدة دراسات علامات الاشتراكية السوفياتية للتحقيق في التنوع الوراثي وتتبع النسب وبناء خرائط الربط الجينية ورسم خريطة للجينات للسمات الهامة اقتصاديا3،4.

يتم فصل منتجات PCR علامات الاشتراكية السوفياتية يشيع استخد....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1-إعداد منتجات PCR علامات الاشتراكية السوفياتية

  1. تحضير جميع المواد الكيميائية والمواد الكاشفة لبكر ردود الفعل بما في ذلك قالب الحمض النووي (30 نانوغرام/ميليلتر)، 2 × PCR ميكس الرئيسية (التي تحتوي على 2 × PCR العازلة، 0.4 ملم لكل دنتب، 3 مم من مجكل2، يو/ميليلتر 0.1 بوليميراز "الدنا بوليميراز" والأصباغ)، 10 ميكرون لكل منهما إلى الأمام وعكس الإشعال ، والمقطر أو منزوع الماء (dH2س).
    ملاحظة: علامات الاشتراكية السوفياتية المستخدمة في هذه الدراسة كانت PT51333 (الأمام تسلسل التمهيدي: 5 '-جكاككتتجتاتككجاكا-3' والتمهيدي عكس التسلسل: 5 '-تجكتتاجتكاتجتاككااتجا-3') و PT50903 (الأمام تسلسل التمهيدي: 5 '-آآتتتكتتكجتجتجاتاكتج-3' و عكس تسلسل التمهيدي: ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أمبليكونس بكر قد أنتجت باستخدام أزواج التمهيدي الاشتراكية السوفياتية المقابلة في ملفوف صيني المزهرة والتبغ. بعد التفريد، كانت ملطخة الجل polyacrylamide استخدام الفضة أعلاه تلطيخ البروتوكول، الذي لا لبس فيه الكشف عن أنماط النطاقات من علامات الاشتراكية السوفياتية (الشكل 1).

لمقارنة كفاءة الكشف عن مختلف الفضة تلطيخ البروتوكولات، منتجات PCR علامات الاشتراكية السوفياتية في التبغ والمزهرة ملفوف صيني تم فص.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الغسيل جل بعد التلقيح خطوة حاسمة. حجم الغسيل عدم كفاية الوقت والمياه قد تتسبب إزالة الحل التشريب ناقصة على سطح اللوحة والهلام، ويؤدي إلى خلفية داكنة. النامية الوقت المناسب خطوة رئيسية أخرى، يمكن أن يؤدي تطوير الإفراط في خلفية بني داكن مع الصورة التباين المنخفض من شظايا من الحمض النووي. وبالإضافة إلى ذلك، يؤثر خطوة التلقيح إلى حد كبير على كفاءة المصبوغة من شظايا من الحمض النووي. على الرغم من تمديد وقت الحمل أكثر من 5 دقيقة أو زيادة مقدار3 إنيو في الحل التشريب لم تتحسن إلى حد كبير نوعية المصبوغة، الحد من الإشباع.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب يعلن أن لديهم لا تضارب المصالح المالية.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تمويل هذا العمل بمؤسسة العلوم الطبيعية قوانغدونغ في الصين (2015A030313500) والمقاطعات الرئيسية التعاونية أبحاث منهاج العمل الدولي للرئيسية العلمية البحوث مشروع قوانغدونغ التعليم العالي (2015KGJHZ015)، العلم و خطة تكنولوجيا إدارة قوانغدونغ احتكار التبغ (201403، 201705) والعلوم والتكنولوجيا خطة قوانغدونغ الصين (2016B020201001)، مشروع التدريب الوطنية للابتكار لطلاب المرحلة الجامعية (201711078001). الإشارة إلى الأسماء التجارية أو المنتجات التجارية في هذا المنشور هو فقط لغرض توفير معلومات محددة ولا يعني توصية أو تأييد من قبل "وزارة الزراعة الأمريكية". وزارة الزراعة هو موفر تكافؤ الفرص ورب العمل.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
مزيج PCR الرئيسي (Green Taq Mix)Vazyme Biotech Co. Ltd ، الصين#P131-03
50-2000 نقطة أساس سلم الحمض النوويBio-Rad ، الولايات المتحدة الأمريكية# 170-8200
DL500 علامة الحمض النوويTakara Bio Inc. ، اليابان#3590A
تريسسانغون للتكنولوجيا الحيوية شنغهاي ، الصين# 77-86-1
حمض البوريكسانغون للتكنولوجيا الحيوية شنغهاي ، الصين# 10043-35-3
EDTA-Na 2< / sub>مصنع الكاشف الكيميائي في قوانغتشو ، الصين# 6381-92-6
أكريلاميدسانجون للتكنولوجيا الحيوية شنغهاي ، الصين# 79-06-1
N ، N'-methylene-bis-acrylamideSangon Biotech شنغهاي ، الصين# 110-26-9
N ، N ، N '، N'-TETRAMETHYLETHYLENEDIAMINESANGON BIOTECH شنغهاي ، الصين# 110-18-9
الأمونيوم بيرسلفاتقوانغتشو الكيميائي ، الصين# 7727-54-0
Bind-silaneSolarbio بكين ، الصين#B8150
AgNO3< / sub>Sinopharm الكاشف الكيميائي بكين المحدودة ، الصين# 7761-88-8
الكاشف الكيميائي للفورمالديهايدتيانجين داماو ، الصين# 50-00-0
مصنع الكاشف الكيميائي NaOH قوانغتشو ، الصين# 1310-73-2
مصنع الكاشف الكيميائي لحمض الخليك في قوانغتشو ، الصين# 64-19-7
Na 2< / sub>CO3< / sub>الكاشف الكيميائي Tianjin DaMao ، الصين# 497-19-8
مصنع الكاشف الكيميائي للإيثانول قوانغتشو ، الصين# 64-17-5
HNO< فرعي>3< / فرعي>الكواشف الكيميائي في قوانغتشو ، الصين# 7697-37-2
Na 2< / sub>S2< / sub>O3< / sub>.5H2< / sub>OSinopharm Chemical Reagent Co.، Ltd ، الصين# 10102-17-7
Eriochrome الأسود T (EBT)مصنع الكاشف الكيميائي Tianjin DaMao ، الصين# 1787-61-7
صينية بلاستيكيةشنغهاي Yi Chen Plastic Co.، Ltd ،China-TS-1
ShakerQilinbeter JiangSu ،China-BenQ
M800 ScannerBenQ ،
مزود الطاقةBeijing Liuyi Instrument Factory ،China-High
في جميع أنحاء أنظمة الهلام العمودية ، JY-SCZFبكين Tunyi Electrophoresis المحدودة ، الصين-
قاعدة مصنع كاشف مصنع مصنع مصنع China-DYY-6C

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Jiang, G. L. Molecular markers and marker-assisted breeding in plants. Plant breeding from laboratories to fields. Anderson, S. B. , InTech Press. Croatia. 45-83 (2013).
  2. Powell, W., Machray, G. C., Provan, J. Polymorphism revealed by simple sequence repeats. Trend Plant Sci. 1, 215-222 (1996).
  3. Varshney, R. K., Graner, A., Sorrells, M. E.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Silver StainingSSR MarkersNon denaturing GelPolyacrylamide GelGenetic ResearchMarker DetectionImpregnation DevelopmentDNA Fragment AnalysisGel ElectrophoresisChemical Reagents

Related Articles