يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

سريع الفضة تلطيخ البروتوكول تمكين بسيطة والكشف عن كفاءة من علامات الاشتراكية السوفياتية باستخدام هلام Polyacrylamide يشوه عدم

10.7K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/57192

⸱

أبريل 20, 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Life Sciences, Guangzhou University, 2Hard Winter Wheat Genetics Research Unit, United States Department of Agriculture - Agricultural Research Service, 3The UWA Institute of Agriculture, University of Western Australia

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

هنا، نحن تقرير فضية بسيطة ومنخفضة التكلفة تلطيخ البروتوكول الذي يتطلب سوى ثلاثة من الكواشف ودقيقة 7 من تجهيز، وهو مناسبة لتوليد سريعة عالية الجودة الاشتراكية السوفياتية البيانات في التحليل الجيني.

الملخص

تكرار تسلسل بسيط (SSR) واحد من العلامات الأكثر فعالية استخدامها في البحوث الجينية النباتية والحيوانية وبرامج التربية الجزيئية. تلوين الفضة أسلوب مستخدمة على نطاق واسع للكشف عن علامات الاشتراكية السوفياتية في جل بولياكريلاميدي. ومع ذلك، البروتوكولات التقليدية لتلطيخ الفضية من الناحية التقنية شاقة وتستغرق وقتاً طويلاً. مثل العديد من المختبرات البيولوجية الأخرى تم التقنيات، والفضة تلطيخ البروتوكولات اطراد الأمثل لتحسين كفاءة الكشف. هنا، نحن تقرير فضية مبسطة تلطيخ الأسلوب الذي يقلل تكاليف الكاشف إلى حد كبير ويعزز وضوح القرار وصورة كشف. يتطلب الأسلوب الجديد الكواشف الثلاثة (نترات الفضة, هيدروكسيد الصوديوم وفورمالدهايد)، خطوتين رئيسيتين (التشريب والتنمية) وفقط 7 دقائق لتجهيز لجل polyacrylamide غير يشوه. بالمقارنة مع بروتوكولات سبق الإبلاغ عنها، هذا الأسلوب الجديد هو أسهل وأسرع ويستخدم أقل من الكواشف الكيميائية للكشف عن إصلاح قطاع الأمن. ولذلك، سيستفيد هذا فضية بسيطة ومنخفضة التكلفة وفعالة تلطيخ البروتوكول بمساعدة الواسمات تربية قبل جيل سريعة لإصلاح قطاع الأمن علامة البيانات ورسم الخرائط الجينية.

المقدمة

وضع علامات على أساس بكر قد أحدث ثورة في علم الوراثة النباتية وتربية1. ومن علامات (SSR) تكرار تسلسل بسيط بين علامات الحمض النووي الأكثر شيوعاً والأكثر تنوعاً. تغطية الجينوم واسعة ووفرة وخصوصية الجينوم، والتكرار بعض الأسس الموضوعية لعلامات الاشتراكية السوفياتية بالإضافة إلى الإرث كودومينانت للكشف عن الأنماط الجينية متخالف2. واستخدمت عدة دراسات علامات الاشتراكية السوفياتية للتحقيق في التنوع الوراثي وتتبع النسب وبناء خرائط الربط الجينية ورسم خريطة للجينات للسمات الهامة اقتصاديا3،4.

يتم فصل منتجات PCR علامات الاشتراكية السوفياتية يشيع استخدام التفريد [اغروس] أو هلام polyacrylamide وتصور مع تلطيخ الفضة أو تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية ثم بعد تلطيخ مع اثيديوم بروميد. تلوين الفضة لشظايا من الحمض النووي في الهلام بولياكريلاميدي هو أكثر حساسية من غيرها المصبوغة أساليب5،6 وقد استخدمت على نطاق واسع للكشف عن شظايا من الحمض النووي مثل الاشتراكية السوفياتية علامات7.

مثل العديد من تقنيات المختبرات البيولوجية، تلطيخ الفضة من المواد الهلامية polyacrylamide تحسنا مطردا منذ، أولاً يتم الإبلاغ عنها كأسلوب تصور يفتت في 19798. التقنية تعديل في البداية للكشف عن شظايا من الحمض النووي من قبل بسام et al. 6 وفي عام 1991 وتحسنت ثم سانغينتي وزملاء العمل9 في عام 1994. وقد تم تحسين الأسلوب كذلك في الماضي بضعة عقود6،7،9،10،11،12،13،14 , 15-ومع ذلك، معظم هذه الإصدارات المحدثة من البروتوكولات لا تزال لديها بعض العيوب مثل ارتفاع الطلب التقنية وطويلة تجهيز الوقت للتثبيت وتركيب6، التي تحد من تطبيق هذه البروتوكولات7، 11. وضع بروتوكول أمثل الذي يجمع بين منخفضة التكلفة بكفاءة عالية من الحمض النووي جزء الكشف عن حاجة ملحة للتطبيق الروتيني للفضة تلطيخ في الأبحاث البيولوجية.

وباﻹضافة إلى ذلك، جل polyacrylamide يمكن تقسيم المواد الهلامية polyacrylamide يشوه وغير يشوه، وكلاهما يمكن استخدامها للكشف عن علامات الاشتراكية السوفياتية استخدام الفضة تلطيخ الأسلوب. التأثير والقرار التي لا تختلف كثيرا، ولكن غير يشوه الهلام polyacrylamide هي أسهل للعملية وتأخذ أقل وقت16.

استناداً إلى البحوث السابقة15، هدف الدراسة الحالية لوصف فضة أمثل تلطيخ البروتوكول بالتفصيل للكشف عن علامات الاشتراكية السوفياتية في جل polyacrylamide غير يشوه سريعة وسهلة ومنخفضة التكاليف.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1-إعداد منتجات PCR علامات الاشتراكية السوفياتية

  1. تحضير جميع المواد الكيميائية والمواد الكاشفة لبكر ردود الفعل بما في ذلك قالب الحمض النووي (30 نانوغرام/ميليلتر)، 2 × PCR ميكس الرئيسية (التي تحتوي على 2 × PCR العازلة، 0.4 ملم لكل دنتب، 3 مم من مجكل2، يو/ميليلتر 0.1 بوليميراز "الدنا بوليميراز" والأصباغ)، 10 ميكرون لكل منهما إلى الأمام وعكس الإشعال ، والمقطر أو منزوع الماء (dH2س).
    ملاحظة: علامات الاشتراكية السوفياتية المستخدمة في هذه الدراسة كانت PT51333 (الأمام تسلسل التمهيدي: 5 '-جكاككتتجتاتككجاكا-3' والتمهيدي عكس التسلسل: 5 '-تجكتتاجتكاتجتاككااتجا-3') و PT50903 (الأمام تسلسل التمهيدي: 5 '-آآتتتكتتكجتجتجاتاكتج-3' و عكس تسلسل التمهيدي: 5 '-أجاجاكتجككجتتجاتتجا-3') للتبغ، ومعادل-43 (الأمام تسلسل التمهيدي:-تجججاتجتجاجكتكتكت 5 '-3' وعكس التمهيدي التسلسل: 5 '-أججتككتتجججتجاتا-3') و CX-157 (الأمام تسلسل التمهيدي: 5 '- TCGACGCTGACTTCACTGAC-3 'وعكس التسلسل التمهيدي: 5'-جاكاجكتكاكاكاتتجك-3 ') ملفوف صيني المزهرة.
  2. إعداد 10 ميليلتر من مزيج PCR للتضخيم بإضافة 2 ميليلتر من قالب الحمض النووي، 5 ميليلتر 2 × PCR مزيج الرئيسي وميليلتر 0.2 كل التمهيدي إلى الأمام وعكس التمهيدي وميليلتر 2.6 dH2o.
  3. إجراء PCR التضخيم رد فعل في ثيرموسيكلير مع خطوة أولية 94 درجة مئوية لمدة 5 دقائق، واتبع دورات 38 من 45 ثانية في 94 درجة مئوية تمسخ، 45 s في 55 درجة مئوية للصلب التمهيدي 1 دقيقة عند 72 درجة مئوية للتمديد، وخطوة تمديد نهائي من 10 دقيقة في 72 ° ج؛ ثم تخزين منتجات PCR عند 4 درجة مئوية لاستخدامها في وقت لاحق.

2-إعداد الحلول Polyacrylamide الهلام الصب

  1. إعداد ل 1 × 5 TBE العازلة بتذويب ز 54 قاعدة تريس وحمض البوريك ز 27.5 في dH2س وإضافة 20 مل من 0.5 م يدتا (pH 8.0) وضبط الحل لوحدة تخزين نهائي من 1، 000 مل مع dH2o.
    ملاحظة: يمكن تخزين TBE العازلة في درجة حرارة الغرفة لمدة أشهر.
  2. إعداد ل 2 × 0.5 TBE العازلة بإضافة 200 مل من 5 × TBE العازلة إلى dH2س إلى وحدة تخزين نهائي ل 2، وتخزينها في درجة حرارة الغرفة.
  3. إعداد حل جل polyacrylamide غير يشوه 6% بتذويب ز 29 اكريلاميد الصف البيولوجيا الجزيئية وز 1 للبيولوجيا الجزيئية الصف ن، ن '--ميثيلينيبيساكريلاميدي في × 0.5 TBE العازلة إلى حجم 500 مل نهائي. تغطي زجاجة الحل مع رقائق الألومنيوم ومخزن في 4 درجات مئوية لاستخدامها في وقت لاحق.
    تنبيه: اكريلاميد يعتبر عصبي قوية وينبغي التعامل معها بحذر. دائماً ارتداء قفازات عند وزن مسحوق والتعامل مع الحلول التي تحتوي عليها.
  4. تحضير حلاً (الجزائرية) فوق كبريتات أمونيوم 20% بتذويب ز 2 لوكالة الأنباء الجزائرية مع dH2س إلى وحدة تخزين نهائي من 10 مل. يمكن تخزينه في-20 درجة مئوية لمدة أشهر.
    ملاحظة: لمزيد من الراحة، 10 مل من محلول APS 20% يمكن أن يكون الكوتيد إلى 1.5 مل أو 2 مل من أنابيب الطرد المركزي للتخزين في-20 درجة مئوية. ذوبان الجليد وتخلط جيدا قبل الاستخدام.
  5. تحضير حلاً سيلاني ربط مخفف بإذابة 3 ميليلتر من ربط-سيلاني في 0.997 مل إيثانول 95% يحتوي على 0.5% حمض الخليك. يمكن تخزينه في 4 درجات مئوية لمدة أسابيع.
    تنبيه: ربط سيلاني السامة وارتداء القفازات عند التعامل مع الحل وإبقاء غرفة جيدة التهوية.

3-إعداد المواد الهلامية Polyacrylamide للتفريد

  1. أغسل مجموعة واحدة من ألواح الزجاج والفواصل مع المنظفات في ماء الصنبور، متبوعاً كاملة الشطف بدرهم2أولمبيك الجوية الجافة اللوحات بإعداد منهم في لوحة تجفيف الرف.
  2. تفريق 1 مل محلول ربط سيلاني على السطح الداخلي للوحة زجاجية مستطيلة الشكل، وجافة لمدة 5 دقائق.
    ملاحظة: إذا لم ينتشر الحل سيلاني ربط موحد على سطح اللوحة، الهلام قد تكون منفصلة خلال تلطيخ ويسفر عن تأثير المصبوغة غير مرضية.
  3. تفريق 1 مل من صد سيلاني على السطح الداخلي لصفيحة الزجاج حقق مع مسحه وتمحو سيلاني صد الزائدة مع المناديل الورقية، والهواء الجاف لمدة 5 دقائق.
    ملاحظة: إذا لا معطف ريبيل-سيلاني على سطح لوحة زجاج موحد، قد تضر الهلام بتجريد جزئيا.
  4. تجميع ألواح الزجاج مع الفواصل مع لوحة مسنن أعلى، والمشبك كلا الجانبين للجمعية مع صب المشابك.
  5. صب المبلغ المناسب (40 مل) من 6% غير يشوه حل جل polyacrylamide لكوب لمجموعة لوحة العرض 33 سم × 10 سم ارتفاع ومباعدة سمك 1.5 مم، وإضافة 20 ميليلتر من تيتراميثيليثيلينيدياميني (تيميد) و 200 µLfresh 20% وكالة الأنباء الجزائرية وتخلط برفق.
    ملاحظة: تم حساب المبلغ المناسب (40 مل) من حل جل من وحدة التخزين الداخلية لوحات اثنين مع سماكة الفواصل (30 سم × 8.5 سم × 0.15 سم). أما بالنسبة لمقدار تيميد ووكالة الأنباء الجزائرية لجل البلمرة، هناك نسبة قياسية لحل جل تيميد ووكالة الأنباء الجزائرية استناداً إلى مرجعية17. حل جل الموصوفة أعلاه يتم تخزينها في 4 درجات مئوية. إذا كان حل جل يتم تخزينها في درجة حرارة الغرفة، 20 ميليلتر من تيميد وميليلتر 100% 20 ينبغي أن تستخدم وكالة الأنباء الجزائرية. يحرك برفق خليط حل جل بعصا زجاجية لتجنب فقاعات الهواء في الحل.
  6. من أجل الحل فورا بعناية إلى ألواح الزجاج المجتمعون على طول حافة لوحة مسنن، تملأ المساحة تقريبا إلى الأعلى، وإدراج المشط. إضافة كمية صغيرة من هلام الحل عبر المشط.
    ملاحظة: الاحتفاظ ألواح الزجاج الأفقية للحيلولة دون تسرب الهلام. قم بإزالة أي فقاعات مع ربط فقاعة، إذا لزم الأمر.
  7. السماح للهلام لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
    ملاحظة: يمكن تغيير وقت البلمرة مع درجات الحرارة لحل جل والبيئة.
  8. بعد الجل تماما البلمرة، إزالة المشابك الصب وموقف مجموعة لوحة في وحدة الدبابات التفريد مع لوحة مسنن يواجه نحو الخزان العلوي المخزن المؤقت، وتستخدم المشابك الكبيرة لإرفاق لوحة تعيين إلى وحدة الدبابات.
  9. صب ل 1 × 0.5 TBE العازلة في كل من الجزء العلوي والسفلي الدوائر. إزالة المشط ومسح جميع الآبار جيدا مع المخزن المؤقت باستخدام ماصة أو حقنه.
    ملاحظة: تأكد من أن ساندويتش جل في الجزء السفلي من اللوحة هو تماما غارقة في المخزن المؤقت دون أي فقاعات.

4-تشغيل والهلام

  1. تحميل حوالي 1 ميليلتر من منتج PCR في كل بئر من جل بولياكريلاميدي. تحميل سلم حجم الحمض النووي لكلا الجانبين من جل جنبا إلى جنب مع عينات منتجات PCR. إصلاح غطاء السلامة إلى الدائرة العليا المخزن المؤقت.
  2. الاتصال بالعملاء المتوقعين للإمداد بالطاقة، مطابقة المرمزة اللون الأحمر إلى الأحمر والأسود إلى الأسود. تشغيل الهلام في جهد مستمر من 110 V حتى تصل الصبغة إلى موقف محدد، عادة ~ 70 دقيقة.
    ملاحظة: يمكن ضبط الوقت والجهد والتشغيل وفقا لحجم المنتجات PCR.

5-الفضة تلطيخ للكشف عن علامات الاشتراكية السوفياتية في غير Polyacrylamide هلام-

  1. بعد التفريد، تصب المخزن المؤقت من مجلس الشيوخ في كوب كبيرة عبر الصمام. فصل المشابك الجانبية وإزالة اللوحات من الجهاز، بعناية فصل لوحة زجاج مسنن واحد جنبا إلى جنب مع ملعقة وتأكد من أن رفات جل تعلق على لوحة زجاجية أخرى مغلفة بربط سيلاني.
  2. جعل 1 لتر حل التشريب الطازجة بإذابة 1.5 غم من إنيو3 في 1 ل dH2سين تحضير 1 لتر من حل تطوير جديدة بتذويب 10 جرام من هيدروكسيد الصوديوم في 900 مل من dH2س، وإضافة 1 مل من 37% فورمالدهيد ، وضبط حجم نهائي ل 1 استخدام dH2o.
    ملاحظة: ارتداء القفازات، والتعامل مع المواد الكيميائية والحلول مع الرعاية المذكورة أعلاه. فإنه ليس من الضروري للحفاظ على الحلول والخطوات المقابلة مع الحلول في الظلام.
  3. أشطف بعناية لوحة جل والزجاج مع وافرة dH2س لإزالة المخزن المؤقت التفريد، ثم ضع اللوحة مع هلام مواجهة على علبة بلاستيكية وتغرق الهلام في 1 لتر حل التشريب. وضع العلبة شاكر.
  4. اهتزاز الدرج برفق في ص 60/دقيقة لمدة 3-4 دقيقة.
    ملاحظة: الهز وقت يمكن تعديلها وفقا لسماكة هلام وتركيز نترات الفضة في الحل التشريب.
  5. نقل اللوحة خارج الحل التشريب ووضعها على صينية أخرى. شطف الحل التشريب المتبقية قبالة من سطح اللوحة وهلام استخدام dH وافرة2س مرتين لكل من 3-5 ق.
  6. ضع اللوحة مع هلام مواجهة على صينية أخرى وتغرق اللوحة في 1 لتر من تطوير حل، ثم يهز العلبة برفق في 50 ص/دقيقة لدقيقة ~ 3 رصد شظايا المظهر من الحمض النووي ووقف التنمية عند نسبة أعلى الإشارة للحمض النووي وشظايا لوحظ أن ضجيج الخلفية (هذه الخطوة يأخذ ~ 3 دقيقة).
  7. شطف اللوحة والهلام مع وافرة dH2س مرتين، وجاف لوحة جل مع المناديل الورقية.
  8. مسح الجل باستخدام ماسح ضوئي مناسب. ويعطي قرار 300 نقطة في البوصة وضع تصور واضح لشظايا من الحمض النووي. الهلام يمكن أيضا أن يتم تصويرها باستخدام كاميرا.
  9. يمكن سجل النطاقات نمط علامات الاشتراكية السوفياتية استناداً إلى الشظايا من الحمض النووي في الصورة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

أمبليكونس بكر قد أنتجت باستخدام أزواج التمهيدي الاشتراكية السوفياتية المقابلة في ملفوف صيني المزهرة والتبغ. بعد التفريد، كانت ملطخة الجل polyacrylamide استخدام الفضة أعلاه تلطيخ البروتوكول، الذي لا لبس فيه الكشف عن أنماط النطاقات من علامات الاشتراكية السوفياتية (الشكل 1).

لمقارنة كفاءة الكشف عن مختلف الفضة تلطيخ البروتوكولات، منتجات PCR علامات الاشتراكية السوفياتية في التبغ والمزهرة ملفوف صيني تم فص...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

الغسيل جل بعد التلقيح خطوة حاسمة. حجم الغسيل عدم كفاية الوقت والمياه قد تتسبب إزالة الحل التشريب ناقصة على سطح اللوحة والهلام، ويؤدي إلى خلفية داكنة. النامية الوقت المناسب خطوة رئيسية أخرى، يمكن أن يؤدي تطوير الإفراط في خلفية بني داكن مع الصورة التباين المنخفض من شظايا من الحمض النووي. وبالإضافة إلى ذلك، يؤثر خطوة التلقيح إلى حد كبير على كفاءة المصبوغة من شظايا من الحمض النووي. على الرغم من تمديد وقت الحمل أكثر من 5 دقيقة أو زيادة مقدار3 إنيو في الحل التشريب لم تتحسن إلى حد كبير نوعية المصبوغة، الحد من الإشباع...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب يعلن أن لديهم لا تضارب المصالح المالية.

شكر وتقدير

تم تمويل هذا العمل بمؤسسة العلوم الطبيعية قوانغدونغ في الصين (2015A030313500) والمقاطعات الرئيسية التعاونية أبحاث منهاج العمل الدولي للرئيسية العلمية البحوث مشروع قوانغدونغ التعليم العالي (2015KGJHZ015)، العلم و خطة تكنولوجيا إدارة قوانغدونغ احتكار التبغ (201403، 201705) والعلوم والتكنولوجيا خطة قوانغدونغ الصين (2016B020201001)، مشروع التدريب الوطنية للابتكار لطلاب المرحلة الجامعية (201711078001). الإشارة إلى الأسماء التجارية أو المنتجات التجارية في هذا المنشور هو فقط لغرض توفير معلومات محددة ولا يعني توصية أو تأييد من قبل "وزارة الزراعة الأمريكية". وزارة الزراعة هو موفر تكافؤ الفرص ورب العمل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
مزيج PCR الرئيسي (Green Taq Mix)Vazyme Biotech Co. Ltd ، الصين#P131-03
50-2000 نقطة أساس سلم الحمض النوويBio-Rad ، الولايات المتحدة الأمريكية# 170-8200
DL500 علامة الحمض النوويTakara Bio Inc. ، اليابان#3590A
تريسسانغون للتكنولوجيا الحيوية شنغهاي ، الصين# 77-86-1
حمض البوريكسانغون للتكنولوجيا الحيوية شنغهاي ، الصين# 10043-35-3
EDTA-Na 2< / sub>مصنع الكاشف الكيميائي في قوانغتشو ، الصين# 6381-92-6
أكريلاميدسانجون للتكنولوجيا الحيوية شنغهاي ، الصين# 79-06-1
N ، N'-methylene-bis-acrylamideSangon Biotech شنغهاي ، الصين# 110-26-9
N ، N ، N '، N'-TETRAMETHYLETHYLENEDIAMINESANGON BIOTECH شنغهاي ، الصين# 110-18-9
الأمونيوم بيرسلفاتقوانغتشو الكيميائي ، الصين# 7727-54-0
Bind-silaneSolarbio بكين ، الصين#B8150
AgNO3< / sub>Sinopharm الكاشف الكيميائي بكين المحدودة ، الصين# 7761-88-8
الكاشف الكيميائي للفورمالديهايدتيانجين داماو ، الصين# 50-00-0
مصنع الكاشف الكيميائي NaOH قوانغتشو ، الصين# 1310-73-2
مصنع الكاشف الكيميائي لحمض الخليك في قوانغتشو ، الصين# 64-19-7
Na 2< / sub>CO3< / sub>الكاشف الكيميائي Tianjin DaMao ، الصين# 497-19-8
مصنع الكاشف الكيميائي للإيثانول قوانغتشو ، الصين# 64-17-5
HNO< فرعي>3< / فرعي>الكواشف الكيميائي في قوانغتشو ، الصين# 7697-37-2
Na 2< / sub>S2< / sub>O3< / sub>.5H2< / sub>OSinopharm Chemical Reagent Co.، Ltd ، الصين# 10102-17-7
Eriochrome الأسود T (EBT)مصنع الكاشف الكيميائي Tianjin DaMao ، الصين# 1787-61-7
صينية بلاستيكيةشنغهاي Yi Chen Plastic Co.، Ltd ،China-TS-1
ShakerQilinbeter JiangSu ،China-BenQ
M800 ScannerBenQ ،
مزود الطاقةBeijing Liuyi Instrument Factory ،China-High
في جميع أنحاء أنظمة الهلام العمودية ، JY-SCZFبكين Tunyi Electrophoresis المحدودة ، الصين-
قاعدة مصنع كاشف مصنع مصنع مصنع China-DYY-6C

المراجع

  1. Jiang, G. L. Molecular markers and marker-assisted breeding in plants. Plant breeding from laboratories to fields. Anderson, S. B. , InTech Press. Croatia. 45-83 (2013).
  2. Powell, W., Machray, G. C., Provan, J. Polymorphism revealed by simple sequence repeats. Trend Plant Sci. 1, 215-222 (1996).
  3. Varshney, R. K., Graner, A., Sorrells, M. E. Genic microsatellite markers in plants: features and applications. Trend Biotechnol. 23, 48-55 (2005).
  4. Tuler, A. C., Carrijo, T. T., Nóia, L. R., Ferreira, A., Peixoto, A. L., da Silva Ferreira, M. F. SSR markers: a tool for species identification in Psidium (Myrtaceae). Mol. Biol. Rep. 42, 1501-1513 (2015).
  5. Rabilloud, T. Mechanisms of protein silver staining in polyacrylamide gels: a 10-year synthesis. Electrophoresis. 11, 785-794 (1990).
  6. Bassam, B. J., Caetano-Anollés, G., Gresshoff, P. M. Fast and sensitive silver staining of DNA in polyacrylamide gels. Anal. Biochem. 196, 80-83 (1991).
  7. Liang, Q., et al. A rapid and effective method for silver staining of PCR products separated in polyacrylamide gels. Electrophoresis. 35, 2520-2523 (2014).
  8. Switzer, R. C., Merril, C. R., Shifrin, S. A highly sensitive silver stain for detecting proteins and peptides in polyacrylamide gels. Anal. Biochem. 98, 231-237 (1979).
  9. Sanguinetti, C., Dias, N., Simpson, A. Rapid silver staining and recovery of PCR products separated on polyacrylamide gels. Biotechniques. 17, PMID:7840973 915-919 (1994).
  10. Ji, Y., Qu, C., Cao, B. An optimal method of DNA silver staining in polyacrylamide gels. Electrophoresis. 28, 1173-1175 (2007).
  11. Qu, L., Li, X., Wu, G., Yang, N. Efficient and sensitive method of DNA silver staining in polyacrylamide gels. Electrophoresis. 26, 99-101 (2005).
  12. An, Z., et al. A silver staining procedure for nucleic acids in polyacrylamide gels without fixation and pretreatment. Anal. Biochem. 391, 77-79 (2009).
  13. Byun, S. O., Fang, Q., Zhou, H., Hickford, J. G. H. An effective method for silver-staining DNA in large numbers of polyacrylamide gels. Anal. Biochem. 385, 174-175 (2009).
  14. Kumar, M., Kim, S. R., Sharma, P. C., Pareek, A. Simple and efficient way to detect small polymorphic bands in plants. Genome Data. 5, 218-222 (2015).
  15. Liu, W., et al. Development of a simple and effective silver staining protocol for detection of DNA fragments. Electrophoresis. 38, 1175-1178 (2017).
  16. Wang, D., Shi, J., Carlson, S. R., Cregan, P. B., Ward, R. W., Diers, B. W. A low-cost, high-throughput polyacrylamide gel electrophoresis system for genotyping with microsatellite DNA markers. Crop Sci. 43, 1828-1832 (2003).
  17. Echt, C. S., May-Marquardt, P., Hseih, M., Zahorchak, R. Characterization of microsatellite markers in eastern white pine. Genome. 39, PMID: 8983182 1102-1108 (1996).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

DNA
سريع الفضة تلطيخ البروتوكول تمكين بسيطة والكشف عن كفاءة من علامات الاشتراكية السوفياتية باستخدام هلام Polyacrylamide يشوه عدم
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.