أسلوب يظهر هنا لإعداد المصفوفة خارج الخلية اللسان (TEM) مع ديسيلولاريزيشن تتسم بالكفاءة. يمكن استخدام في تيم السقالات الوظيفية لإعادة بناء نموذج الخلايا الحرشفية (TSCC) اللسان تحت ظروف ثقافة ثابتة أو المقلبة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تصنيع المصفوفة خارج الخلية اللسان وإعادة تشكيل للسان الخلايا الحرشفية في المختبر
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
من أجل بناء نموذج فعال وواقعي للسان صدفية خلية سرطان (TSCC) في المختبر، تم إنشاؤها بأساليب لإنتاج ديسيلولاريزيد اللسان خارج الخلية مصفوفة (TEM) الذي يوفر السقالات الوظيفية للبناء TSCC. تيم تنص مكانة في المختبر لنمو الخلايا، والتمايز، والهجرة الخلية. المجهرية من المصفوفة خارج الخلية الأصلية (ECM) والتراكيب الكيميائية الحيوية الإبقاء في المصفوفة على ديسيلولاريزيد توفير منافذ خاصة بالانسجة لترسيخ الخلايا. يمكن أن تتحقق تلفيق تيم بالهضم ديوكسيريبونوكليسي (الدناز) مصحوبا جدية للمعالجة العضوية أو غير العضوية. من السهل أن تعمل هذا البروتوكول ويضمن كفاءة عالية ديسيلولاريزيشن. وأظهرت تيم سيتوكومباتيبيليتي مواتية للخلايا TSCC ظروف ثقافة ثابتة أو المقلبة، التي تمكن من بناء نموذج TSCC. كما استخدمت مفاعل حيوي عصامي للشرط المقلبة المستمرة لثقافة الخلية. وأظهرت TSCC أعيد بناؤها باستخدام ال سمات وخصائص تشبه السريرية TSCC الأنسجة، مما يوحي بإمكانية البحث TSCC.
المقدمة
وقد اللسان مختلف المهام الهامة، مثل ديجلوتيشن، وصياغة، وتذوق. وهكذا، الأضرار بوظيفة اللسان تأثيراً كبيرا على نوعية حياة المرضى1. هو الورم الخبيث الأكثر شيوعاً في تجويف الفم اللسان الخلايا الحرشفية (TSCC)، التي تحدث عادة في الأشخاص الذين يشربون الكحول أو دخان التبغ2.
في السنوات الأخيرة، تم إحراز تقدم ضئيل في البحوث الأساسية في TSCC. الافتقار إلى الكفاءة في المختبر البحث نماذج يظل واحداً من أكبر المشاكل. وهكذا، تبين المصفوفة خارج الخلية (ECM) أن يكون حل محتمل. نظراً لإدارة المحتوى في المؤسسة إطار شبكة معقدة تتألف من عناصر المصفوفة درجة عالية من التنظيم، ستكون المواد سقالة بعد إدارة المح....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
جميع الحيوانات العمل المنجز وفقا لقانون رعاية الحيوان، المبادئ التوجيهية المؤسسية والمعتمدة برعاية الحيوان المؤسسية واستخدام اللجنة، جامعة سون يأت-صن.
1-إعداد تيم
- تنفيذ الفئران بواسطة التفكك عنق الرحم وإزالة اللسان استخدام مقص الجراحية المعقمة وملاقط.
- تزج الألسنة في الإيثانول 75% لمدة 3 دقائق، ثم وضعت كل اللسان 1.5 مل أنابيب ايبندورف (الجيش الشعبي) مع 1 مل فوسفات 10 ملم معقمة مخزنة الحل (PBS).
ملاحظة: تركيز برنامج تلفزيوني في جميع الخطوات التالية نفس التركيز في هذه الخطوة. - خلية تفسخ بذوبان التجميد: تجميد الألسنة في أنابيب الجيش الشعبي في-80 درجة مئوية ح 1، وثم ذوبان الجليد الألسنة في درجة حرارة الغرفة لمدة 4....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
هذا البروتوكول للتحضير لتبين أن تكون فعالة ومناسبة. أظهرت تيم ديسيلولاريزيشن مثالية بالمقارنة مع الأنسجة لغتهم الأصلية. وأكد نجاعة ديسيلولاريزيشن الهيماتوكسيلين-ويوزين (أنه) تلوين (الشكل 1أ-ب). وكشف أنه يلطخ النتائج الاختفاء التام لتلطيخ النووية في تيم (الشكل 1ب). وعلاوة على ذلك، تقدير محتوى الحمض النووي من الأعمال السابقة أظهرت أن الحمض النووي أزيلت تماما تقريبا من ال3. و.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
بروتوكول راسخة لتلفيق ECM ديسيلولاريزيد ينبغي الاحتفاظ بتكوين إدارة المحتوى في المؤسسة الأصلية أثناء إزالة المكونات الخلوية في الأنسجة تقريبا تماما21. وعلى الرغم من ديسيلولاريزيشن المبلغ عنها حاليا البروتوكولات التي تتطلب نضح عن طريق المفرج إزالة المواد الخلوية عن طريق النقل الحراري، الانفعالات الميكانيكية اعتمد هنا، المعروفة طريقة بسيطة ورخيصة تقليدية22 , 23 , 24 , 25 <.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
الكتاب تقر بالدعم للمنح البحثية من مؤسسة العلوم الطبيعية الصينية الوطنية (31371390)، وبرنامج مشروع تنمية التكنولوجيا العالية الدولة (2014AA020702) والبرنامج "قوانغدونغ العلوم" والتكنولوجيا (2016B030231001).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| C57-BL / 6J الفئران | مختبر جامعة صن يات صن مركز | ||
| الإيثانول | مصنع الكاشف الكيميائي قوانغتشو | HB15-GR-2.5L | |
| كلوريد الصوديوم | سانجون للتكنولوجيا الحيوية | A501218 | |
| كلوريد البوتاسيوم | سانغون للتكنولوجيا الحيوية | A100395 | |
| ثنائي القاعدة فوسفات الصوديوم | مصنع الكواشف | الكيميائي قوانغتشوBE14-GR-500G | |
| فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدة | سانجون للتكنولوجيا الحيوية | A501211 | |
| 1.5 مل أنبوب EP | Axygen | MCT-150-A | |
| فريزر درجة حرارة منخفضة للغاية | Thermo Fisher Scientific | ||
| 3.5 سم | Thermo Fisher Scientific | 153066 | |
| 6 سم طبق زراعة الخلايا | Greiner | 628160 | |
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | V900502 | |
| كلوريد الكالسيوم | سيجما ألدريتش | 746495 | |
| DNase | Sigma-Aldrich | D5025 | |
| كبريتات المغنيسيوم | سانجون التكنولوجيا الحيوية | A601988 | |
| الجلوكوز | سيجما ألدريتش | 158968 | |
| بيكربونات الصوديوم | سيجما ألدريتش | S5761 | |
| أمبيسلين | سيجما ألدريتش | A9393 | |
| كاناميسين | سيجما ألدريتش | PHR1487 | |
| خياطة جراحية | شنغهاي جينهوان | ||
| 250 مل زجاجة واسعة الفم | SHUNIU | 1407 | |
| مغناطيسي | AS ONE | 1-4602-32 | |
| CO2< / sub> حاضنة | SHEL LAB | SCO5A | |
| 10 مل حقنة | هونان بينجان | ||
| 50 مل أنبوب الطرد المركزي | Greiner | 227270 | |
| خلية Cal27 | الأكاديمية الصينية للعلوم ، شنغهاي بنك | الخلية اللسان سرطان الخلايا الحرشفية خط خلية | |
| U2OS الخلية | الأكاديمية الصينية للعلوم ، شنغهاي سيل | بنك خط خلايا الساركوما العظمية البشرية | |
| DMEM / F12 | Sigma-Aldrich | D0547 | |
| بيروفات الصوديوم | سيجما ألدريتش | P5280 | |
| حمض الهبس الخالي | من الحمض BBI | A600264 | |
| FBS | Hyclone | SH30084.03 | |
| 4 درجة ؛ ثلاجة C | Haier | ||
| جهاز تنقية المياه | ELGA | ||
| مقياس الدم | BLAU | 717805 |
المراجع
- Elfring, T., Boliek, C. A., Winget, M., Paulsen, C., Seikaly, H., Rieger, J. M. The relationship between lingual and hypoglossal nerve function and quality of life in head and neck cancer. J. Oral Rehabil. 41, 133-140 (2014).
- Patel, S. C., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
