هضم البروتين، أولترافيلتراتيون، وحجم الاستبعاد اللوني لتحسين عزل اكسوسوميس من بلازما الدم البشري والمصل

Gustavo Diaz; Chandler Bridges; Megan Lucas; Yong Cheng; Jeff S. Schorey; Karen M. Dobos; Nicole A. Kruh-Garcia

doi:10.3791/57467

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

هضم البروتين، أولترافيلتراتيون، وحجم الاستبعاد اللوني لتحسين عزل اكسوسوميس من بلازما الدم البشري والمصل

16.6K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/57467

⸱

أبريل 13, 2018

Gustavo Diaz¹ , Chandler Bridges¹ , Megan Lucas¹ , Yong Cheng² , Jeff S. Schorey² , Karen M. Dobos¹ , Nicole A. Kruh-Garcia¹

¹Department of Microbiology, Immunology and Pathology, Colorado State University, ²Department of Biological Sciences, Eck Institute for Global Health, University of Notre Dame

في هذه المقالة

ملخص

نقدم هنا، بروتوكولا لتنقية اكسوسوميس من البلازما والمصل مع انخفاض تنقية المشارك من بروتينات الدم غير اكسوسومال. ويشمل البروتوكول الأمثل ultrafiltration وعلاج مبطلات وحجم الاستبعاد اللوني. تنقية اكسوسوميس فوائد تحليل المتلقين للمعلومات، بما في ذلك تقدير أكثر دقة من حويصلات وتوصيف البروتين المعزز.

الملخص

اكسوسوميس، نوع من نانوفيسيكلي صدر من جميع أنواع الخلايا، يمكن أن تكون معزولة عن أي السوائل الجسدية. محتويات اكسوسوميس، بما في ذلك البروتينات والكشف، فريدة من نوعها للخلايا التي يتم اشتقاق ويمكن أن تستخدم كمؤشرات للمرض. عدة بروتوكولات تخصيب مشتركة، بما في ذلك تنبيذ فائق، تسفر عن اكسوسوميس محملة بالملوثات بروتين قابل للذوبان. على وجه التحديد، لقد وجدنا أن البروتينات الأكثر وفرة في الدم غالباً ما تنقية يشترك مع اكسوسوميس ويمكن الخلط بين دراسات البروتين المصب، وإحباط تحديد المرشحين العلامات البيولوجية وفرة منخفضة. لقلق إضافي إيريبرودوسيبيليتي اكسوسومي البروتين الكمي بسبب التمثيل غير متناسقة من مستويات البروتين غير اكسوسومال. ووضع البروتوكول بالتفصيل هنا لإزالة البروتينات غير اكسوسومال التي شارك تنقية جنبا إلى جنب مع اكسوسوميس، مشيراً إلى الصرامة في عملية تنقية اكسوسومي. وقورنت خمس طرق استخدام إقران بلازما الدم والمصل من خمس جهات مانحة. وكشف التحليل باستخدام نانوحبيبات تتبع تحليل وفحص البروتين حمض بيسينتشونينيك الصغرى أن بروتوكول المجمعة باستخدام أولترافيلتريشن وحجم الاستبعاد اللوني أسفرت عن إثراء حويصلة الأمثل وإزالة البروتين للذوبان. واستخدمت للتحقق من أنه تم استنفاد بروتينات الدم الوفيرة المتوقعة، بما في ذلك الزلال وأبوليبوبروتينس، النشاف الغربية.

المقدمة

اكسوسوميس نانوفيسيكليس (يتراوح حجمها بين 30 نانومتر إلى 150 nm) نشرته تقريبا جميع الخلايا الموجودة في جسم الإنسان لتسهيل الاتصالات خلية إلى خلية العمليات¹^،². من المثير للاهتمام، التغييرات تكوين اكسوسوميس تبعاً لخلايا المنشأ، فضلا عن الحالة الصحية ل الفرد³^،⁴^،⁵. بالإضافة إلى ذلك، اكسوسوميس يمكن استردادها من سوائل بيولوجية عديدة مثل: اللعاب والبول والدم². وبسبب هذه الميزات، تعتبر اكسوسوميس يكون مصدرا جيدا للمؤشرات الحيوية في الأمراض. ولسوء الحظ، لا يوجد أي أسلوب القياسية لعزل اكسوسوميس. النظر بعض ....