مقالة منهجية

جيل الماغنيسيوم الفائق الورم ثلاثية الأبعاد لفحص المخدرات

8.3K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/57476

⸱

سبتمبر 5, 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Oncology Drug Discovery: Molecular Pharmacology, Novartis Institutes for Biomedical Research, 2Chemical Biology and Therapeutics, Novartis Institutes for Biomedical Research

في هذه المقالة

ملخص

عبر مجموعة واسعة من مؤشرات المرض، يجري النماذج ذات الصلة أكثر فسيولوجيا المخدرات المتقدمة وتنفذ في اكتشاف البرامج. النظام النموذجي الجديد الموصوفة هنا يوضح الورم ثلاثي الأبعاد كيف يمكن مثقف الماغنيسيوم وفرزهم في نظام القائم على لوحة الفائق 1536-جيدا للبحث عن أدوية جديدة لعلاج الأورام.

الملخص

وقد تم مثقف الخلايا السرطانية بشكل روتيني في بعدين (2D) على سطح بلاستيك. هذا الأسلوب، ومع ذلك، تفتقر إلى البيئة الحقيقية ورم يتعرض فيفو فيكتلة. الأورام الصلبة تنمو ليس كورقة تعلق على البلاستيك، ولكن بدلاً من ذلك كمجموعة من الخلايا الاستنساخ في ثلاثية الأبعاد (3D) مساحة التفاعل مع جيرانهم، ومع الخصائص المكانية متميزة مثل اضطراب الاستقطاب الخلوي العادي. هذه التفاعلات تسبب الخلايا المستزرعة 3D اكتساب الخصائص المورفولوجية والخلوية التي أكثر صلة بأورام في فيفو . بالإضافة إلى ذلك، وجود ورم الشامل في الاتصال المباشر مع سائر أنواع الخلايا مثل الخلايا اللحمية ومحصنة، فضلا عن المصفوفة خارج الخلية من جميع أنواع الخلايا الأخرى. مصفوفة أودعت تتألف من الجزيئات الكبيرة مثل الكولاجين وفيبرونيكتين.

في محاولة لزيادة ترجمة نتائج البحوث في علم الأورام من مقاعد البدلاء إلى جانب السرير، بدأت العديد من المجموعات للتحقيق في استخدام نظم النموذج الثلاثي الأبعاد في استراتيجياتها الإنمائية الخاصة بالمخدرات. ويعتقد أن أكثر فسيولوجيا ذات الصلة نظراً لأنها محاولة لتلخيص البيئة المعقدة وغير متجانسة من ورم في هذه النظم. هذه الأنظمة، ومع ذلك، يمكن أن تكون معقدة جداً، وعلى الرغم من أن قابلة للنمو في تنسيقات 96-جيدا، وبعضها الآن حتى في 384، أنها توفر خيارات قليلة للنمو على نطاق واسع والفرز. ولاحظ هذه الفجوة قد أدى إلى تطوير الأساليب الموصوفة هنا بالتفصيل للثقافة الورم الماغنيسيوم في قدرة الإنتاجية العالية في لوحات 1536-جيدا. هذه الطرق تمثل حلاً وسطا للأنظمة المستندة إلى مصفوفة معقدة للغاية، من الصعب على الشاشة، وفحوصات 2D التقليدية. مجموعة متنوعة من خطوط خلايا السرطان إيواء الطفرات الوراثية مختلفة يتم فحصهم بنجاح، دراسة فعالية مركب باستخدام مكتبة المنسق من مركبات استهداف ميتوجيناكتيفاتيد البروتين كيناز أو MAPK المسار. ثم تتم مقارنة الردود ثقافة كروي لاستجابة الخلايا التي نمت في 2D، ويتم الإبلاغ عن الأنشطة التفاضلية. هذه الأساليب تقديم بروتوكول فريدة لاختبار نشاط المجمع في إعداد 3D الفائق.

المقدمة

في العقد الماضي، نفذت دراسات أكثر وأكثر استخدام نماذج الثقافة خلية ثلاثية الأبعاد لفهم المفاهيم التي لا يرد موجز لها تماما بزراعة الخلايا في 2D على البلاستيك. وتشمل أمثلة لهذه المفاهيم المصطنعة في الخلايا الظهارية العادية قطبية1 حيث يتم فقدان التوجه المكاني لطبقات قمي والقاعدية للخلايا، فضلا عن دور المصفوفة خارج الخلية في تنظيم بقاء ومصير الخلية. أبحاث علم الأورام، على وجه الخصوص، قد تستخدم نماذج ثلاثية الأبعاد لفهم البيولوجيا الأساسية للخلايا السرطانية والفروق في 2D و 3D خلية ثقافة النظم3،4. وقد مكن تطوير تقنيات استزراع خلية أكثر تطورا وعلى تكييف إضافية إلى صيغ متعددة جيدا البحث عن عقاقير جديدة في إعدادات ثلاثية الأبعاد. وعلى النقيض من الخلايا التي نمت في ظروف 2D، 3D نماذج من مجموعة الأورام في التعقيد من الطبقات الخلوية نظم5 مجالات نوع واحد من الخلايا ذات أحجام مختلفة، إلى مجالات متعددة سيل من نوع معقد6،7، 8-اكتشاف مركبات جديدة أو البيولوجي التي أظهرت تسبب موت الخلايا في هذه النظم نموذج ثلاثي الأبعاد، بالتالي، ارتفاع الفوائد في حملات التنمية المخدرات. نقاط النهاية لهذه الاختبارات غالباً ما تكون مطابقة لما تم تنفيذه في 2D الثقافات لتقييم التغييرات في تكاثر الخلايا، ولكن عندما تجري في أجواء أكثر فسيولوجيا ذات صلة، أنها قد تكشف عن المستوى الحقيقي لتبعية الجينات المستهدفة أو يجري المسار استجوب.

كما عرضت أعلاه، مجموعة متنوعة من نظم نموذجية قد وضعت لدراسة الردود المخدرات في نظم الاستزراع 3D، ولكن الأغلبية تستخدم أما لوحات microtiter 96 أو 384-جيدا وليست قابلة للتكيف بسهولة إلى صيغ الفرز (HTS) الفائق غالباً ما تستخدم في حملات الفحص اكتشاف المخدرات. تشمل هذه النظم استخدام معلقة التكنولوجيات الحبرية، الثقافات كروي، النبض الخلايا مع جزيئات مغناطيسية للحث على الارتفاع، والثقافات التي تتضمن المواد الهلامية الطبيعية أو الاصطناعية مثل الكولاجين أو ماتريجيل أو البولي إثيلين غليكول (شماعة)2 . نقدم هنا، مفصلاً أساليب تقنية المتقدمة سابقا لإنتاج الثقافات كروي ثلاثي الأبعاد من خطوط خلايا السرطان المنشأة في شكل لوحة 1536-جيدا. في هذا البروتوكول، تستخدم وسيلة محددة بدرجة عالية مما يمنع إلحاق خلية عادة ملتصقة خطوط9. هذا النظام قد القيود (أيأنها لا يمكن أن الخص تماما نظام طراز معقدة للسرطان)، ولكن على الرغم من ذلك، تمكن هذه الاختبارات فرز الفائق لمجموعات كبيرة من الجزيئات الصغيرة وإجراء مقارنات عبر فتحه لاستجابة المخدرات بين الثقافات 2D و 3D ضد مجموعة متنوعة من خطوط الخلايا والمركبات.

خطوط الخلايا المحددة لإظهار الأساليب الموجودة في هذه المقالة كل ميناء الطفرات في الجينات المتصلة ب MAPK إشارات الطريق، طريق الذي هو الغاية dysregulated في السرطان، وتتوفر فيه العديد من العلاجات. العديد من الخطوط بتفعيل النمطان الطفرات في فيروس "ساركومه الفئران كيرستن" يشار إليه أيضا كراس ورأس نيوروبلاستوما أو تجاوزها والسرطاني الفيروس "هارفي الفئران ساركومه" أو HRAS ومؤنزم المرتبطة "فيبروساركوماس التعجيل بسرعة"، المعروف أيضا رافس. الأدب الأخيرة تشير إلى أن مثبطات الفروع المختلفة لهذا المسار فريد أكثر نجاعة في مجموعة فرعية من خطوط الخلايا عندما نمت تحت ظروف 3D9،10. وجدت إحدى الدراسات أن عندما كانت استزراع الخلايا السرطانية مع RAS نشطة في 3D، أنها برهنت على الوعي المتزايد بمثبطات MAPK، وعلاوة على ذلك، أن هذا النهج يمكن أن تحدد مسارات واستهدفت الموانع التي قد تكون أخطأت في 2D التقليدية الإعداد. والهدف من هذه الدراسة تقديم الأساليب المستخدمة لثقافة هذه خطوط الخلايا، وعلاوة على ذلك، تثبت التفاضلية الردود على هذه الموانع التي يمكن ملاحظتها فقط عند استخدام 3D الخلية نظم الثقافة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1-استزراع من الماغنيسيوم الورم 3D 1536-جيدا

  1. إعداد ورم 3D طازجة كروي جذعية متوسطة (المتوسطة خلية + خروج المغلوب المصل استبدال الأنسولين-ترانسفيرين-السيلينيوم) عن طريق إضافة الكواشف التالية إلى 500 مل من "تعديل النسور المتوسطة" دولبيكو (DMEM/F12): 1 x البنسلين/ستربتوميسين، 10 نانوغرام/مل من الإنسان أساسية تنتجها الخلايا الليفية عامل النمو (بفجف)، 20 نانوغرام/مليلتر من البشرية البشرة عامل النمو (لو)، 0.4% ألبومين المصل البقري (BSA) (جزء الخامس)، 1 x الأنسولين-ترانسفيرين-السيلنيوم، واستبدال المصل 1% خروج المغلوب (كو) (عدم تجميد أذاب).
  2. عامل التصفية-تعقيم المتوسطة كامل مع الملاحق من خلال نظام تصفية أعلى زجاجة 0.4 ميكرومتر.
  3. فصل خطوط خلايا السرطان، التي ظلت تنمو وفقا لشروط الثقافة الروتينية الموصى به، من قوارير زراعة الخلايا التقليدية بغسلها 3 x مع 1 x فوسفات مخزنة المالحة (PBS) وإضافة مبلغ مناسب من 0.25% التربسين (1 مل كل 5 سم2) لمدة 5 دقائق لإنشاء طبقة رقيقة فوق الخلايا. تحييد التربسين مع 5 × المبلغ للوسائط التي تحتوي على المصل والمضي قدما لعد الخلايا. على سبيل المثال، استخدام 25 مل متوسطة 5 مل التربسين.
  4. ضبط تركيز حل خلية 62.5 × 104 خلايا/مل من أجل البذور مجموعة خلايا 500 كل بئر في 8 ميليلتر من المتوسطة كروي في لوحات الأنسجة-الثقافة-تعامل 1536-جيدا.
  5. في مجلس الوزراء سلامة بيولوجية، بذور الخلايا باستخدام كاسيت معقم، صغيرة مقلوب من الفولاذ المقاوم للصدأ مع نظام يقوم على مضخة تمعجية. بين خطوط الخلايا المختلفة، تدفق أنابيب الكاسيت مع 1 x برنامج تلفزيوني و 70% إيثانول 10 s.
  6. وبدلاً من ذلك، بذور الخلايا باستخدام معالج سائل الموجود داخل غرفة هيبا تصفيتها باستخدام أما كاسيت مقلوب من الفولاذ المقاوم للصدأ معقمة، صغيرة ومضخة تمعجية أو مضخة الحقن مرفقة، اعتماداً على عدد اللوحات كل خط الخلية المطلوبة.
  7. ختم لوحات استخدام ختم لوحة لاصقة تنفس أما يدوياً أو باستخدام السدادة لوحة.
  8. وضع اللوحات في حاضنة لغزل في الدقيقة 10 37 درجة مئوية مع رطوبة نسبية 95% و 5% ثاني أكسيد الكربون (CO2). تسمح الماغنيسيوم إلى نموذج لمد 3.

2-استزراع خطوط السرطان 2D 1536-جيدا

ملاحظة: خطوط السرطان 2D 1536-كذلك ينبغي مثقف 24 ساعة قبل إضافة المجمع إلى لوحات ثلاثية الأبعاد.

  1. تعد وسيلة خلية سرطان 2D عن طريق إضافة الكواشف التالية إلى 500 مل وسيط النمو المناسب للبنود المحددة: 1 × البنسلين/ستربتوميسين و 10% الجنين المصل البقري (FBS).
  2. عامل التصفية-تعقيم المتوسطة كامل مع الملاحق من خلال نظام تصفية أعلى زجاجة 0.4 ميكرومتر.
  3. فصل خطوط خلايا السرطان، التي ظلت تنمو وفقا لشروط الثقافة الروتينية الموصى به، من قوارير زراعة الخلايا التقليدية بغسلها 3 x 1 x برنامج تلفزيوني وإضافة مبلغ مناسب من 0.25% التربسين (1 مل كل 5 سم2) لمدة 5 دقائق إلى قم بإنشاء طبقة رقيقة فوق الخلايا. تحييد التربسين مع 5 × المبلغ للوسائط التي تحتوي على المصل والمضي قدما لعد الخلايا. على سبيل المثال، استخدام 25 مل متوسطة 5 مل التربسين.
  4. ضبط تركيز حل خلية 62.5 × 104 خلايا/مل من أجل البذور مجموعة خلايا 500 كل بئر في 8 ميليلتر الكامل المتوسطة إلى لوحات الأنسجة-الثقافة-تعامل 1536-جيدا.
  5. في مجلس الوزراء سلامة بيولوجية، بذور الخلايا باستخدام كاسيت معقم، صغيرة مقلوب من الفولاذ المقاوم للصدأ مع نظام يقوم على مضخة تمعجية. بين خطوط خلية مختلفة، تدفق أنابيب الكاسيت مع 1 x العقيمة PBS و 70% إيثانول 10 s.
  6. وبدلاً من ذلك، بذور الخلايا باستخدام معالج سائل الموجود داخل غرفة الروبوتات هيبا تصفيتها باستخدام أما كاسيت مقلوب من الفولاذ المقاوم للصدأ معقمة، صغيرة ومضخة تمعجية أو مضخة الحقن المرفقة، تبعاً لحجم لوحات كل خلية خط اللازمة.
  7. ختم لوحات استخدام ختم لوحة لاصقة تنفس أما يدوياً أو باستخدام السدادة لوحة.
  8. وضع اللوحات في حاضنة لغزل في الدقيقة 10 37 درجة مئوية عن 24 ساعة قبل إضافة مركب، مع أول أكسيد الكربون 5%2 و 95% رطوبة نسبية.

3-مجمع بالإضافة

  1. يعد تخفيف 8 نقطة، 3-fold المسلسل من مثبطات MAPK في 100% ثنائي ميثيل سلفوكسيد ([دمس]) على روبوت مناولة السائل بتركيز أعلى 10 ملم. مثبط بروتوزوم بورتيزوميب كعنصر إيجابي لخلية كاملة قتل لتحديد النطاق الديناميكي للفحص.
  2. الاعتداء السريع-تدور جميع لوحات ولوحات المركب في 100 غ س لجمع أي التكثيف. إزالة الختم لاصقة من كل لوحة ووضع لوحة على إنشاء موزع صوتية إضافة ما مجموعة 8 nL لكل مجمع/تمييع يمثلون بتركيز نهائي [دمس] 0.1% من كل بئر وجرعة مركب أعلى من 10 ميكرون.
  3. بعد الانتهاء من إضافة المجمع، ضع غطاء ثقافة خلية مصنوعة خصيصا، والفولاذ المقاوم للصدأ الذي يمنع التبخر على اللوحة، ووضع اللوحة في حاضنة غزل في 37 درجة مئوية لمد 5، مع أول أكسيد الكربون 5%2 و 95% رطوبة نسبية.

4-كشف كاشف الإضافة والحصول البيانات الخام

  1. قبل الحارة حجم مناسب من الكاشف تحلل الخلية التي تحتوي على لوسيفرين للكشف عن التغييرات في الأدنين ثلاثي الفوسفات (ATP)، ومن ثم التغيرات في انتشار الخلية في درجة حرارة الغرفة أو في حمام مائي 37 درجة مئوية. إضافة إجمالي 3 ميليلتر من الكشف عن الكاشف لكل بئر باستخدام مضخة تمعجية واحتضان اللوحة في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة على الأقل.
  2. التقاط التﻷلؤ في لومينوميتير لوحة.

5-معالجة البيانات

  1. استخراج البيانات الخام من الصك وتطبيع جميع الحقول التي تحتوي على مركبات اختبار المتوسط لجميع الآبار التي تحتوي على [دمس] وحدها كعنصر محايد. من هذه القيمة، حساب تثبيط نمو النسبة المئوية لكل مجمع. هذا هو إنجاز باستخدام الصيغة الدالة في Microsoft Excel حيث f (x) = {(نموذج القيمة النسبية وحدات خفيفة (رلوس)/(متوسط القيمة [دمس] رلوس) * 100)}.
  2. إنشاء منحنيات الاستجابة للجرعة والمثبطة IC50s بقيم البيانات الموحدة من الخطوة 5.1 ضد تركيز مركب باستخدام برنامج الرسوم البيانية برسوم بيانية.
    ملاحظة: قمنا بتحليل البيانات باستخدام هيليوس، أداة برمجيات نيبر داخلية. لإكمال هذه المهمة، اخترنا أداة تحليل منحنى nonparametric.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

مجموعة متنوعة من الخلايا السرطانية ثابتة تم اختبار خطوط معروفة لتنمو جيدا في ظل ظروف الثقافة 2D باستخدام الأساليب المذكورة هنا. صور الممثل من مجموعة متنوعة من السرطان متحولة MAPK الخلية خطوط (كالو-6:KRAS، NCI-H1299:NRAS، كورونا-ميل-30:NRAS، وكيلونيوتن-62:HRAS) ينظر في الشكل 1. هذه الصور تبين أنه على الرغم من أن خطوط الخلايا مورفولوجيس المختلفة، كل تشكيل هياكل ثلاثية الأبعاد في لوحات المقايسة 1536-جيدا. ويبين الشكل 2 أن، عند استخد...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

الأساليب المقدمة هنا إظهار بروتوكول مفصلة حول كيفية إنتاج الماغنيسيوم ورم في لوحات 1536-جيدا لعروض مجمع على نطاق واسع. هذه الأساليب كانت في البداية مقتبسة من العمل في المعهد الوطني للسرطان حيث كانت تزرع الماغنيسيوم ورم في فحوصات الإنتاجية المنخفضة في لوحات 6-جيدا وكذلك 96 طرح أسئلة حول تبعيات الوراثية وحساسية مجمع13، 14 , 15. ميزة حاسمة وفريدة من نوعها لهذا البروتوكول أن الماغنيسيوم تتشكل من خلايا الأنسجة المستزرعة 2D التقليدية ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

المؤلفين هم موظفون في شركة نوفارتيس، وأيضا بعض الموظفين حاملي الأسهم.

شكر وتقدير

الكتاب تود أن تقر مارك فيرير في المركز الوطني للنهوض بالعلوم متعدية الجنسيات، والمعاهد الوطنية للصحة للدعم والتوجيه بشأن تطوير هذه الاختبارات الأولية. وبالإضافة إلى ذلك، نود أن نشكر فريمان أليسون، مارييﻻ جاسكيليوف واكر مايكل، ويعقوب هالينج وفيسيلينا كوك للمدخلات العلمية والمناقشة كأعضاء فريق المشروع.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
<قوية > كواشف < / قوية >
DMEM تم شراء وسائط النسر المعدلة (DMEM) / F12ATCC30-2006كحل معد. وجد أن هذا المستلم مفضل مقارنة بالبائعين الآخرين.
وسائط النسر المعدلة (DMEM) / F12Lonza12-604FDulbecco كحل معد.
معهد روزويل بارك التذكاري (RPMI)تم شراء Lonza12-115Qكحل معد.
مصل الأبقار الجنينية (FBS)Seradigm1500-500تم شراؤه كمحلول معد.
1x 0.25٪ تريبسين مع حمض الإيثيلين ديامين تترا أسيتيك (EDTA)HycloneSH30042.01تم شراؤه كمحلول معد.
1x البنسلين / الستربتومايسينجيبكو15140تم شراؤه كحل معد.
10 نانوغرام / مل عامل النمو البشري الأساسي الليفي (bFGF)سيجماF0291يعلق في ماء معقم.
20 نانوغرام / مل عامل نمو البشرة البشرية (EGF)سيجماE9644يعاد تعليقه في الماء المعقم.
0.4٪ ألبومين مصل البقر (BSA)سيجماA9418يعلق في PBS معقم وفلتر.
1x الأنسولين ترانسفيرين السيلينيوم (ITS)جيبكو51500056
1٪ بالضربة القاضية (KO) بديل المصلجيبكو10828-028أضف طازجا قبل الاستخدام مباشرة.
100٪ ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO)Sigma276855-100ML
CellTiter-GloPromegaG7573تم شراؤها كمحلول معد.
< قوي > مستهلكات < / قوي >
صغير كومبي كاسيتThermoFisher24073295
كاسيت صغير متعدد التدفقBioTek294085
ألواح TC معقمة 1536 جيدا (أبيض)Corning3727
1536 بئر معقمة (أسود)Corning3893
ScivaxMBL InternationalNCP-LH384-10<
strong>Equipment< / قوي >
مواد لاصقة أختامThermoFisherAB0718
حاضنة الغزلLiCONiC
أغطية الفولاذ المقاوممعهد الجينوم لمؤسسة أبحاث نوفارتيس (GNF)
موزع صوتي ATSEDS Biosystems
Echo Acoustic DispensorLabcyte
LuminometerEnvision-Perkin Elmer
Peristaltic Pump- Multidrop CombiThermoFisher
Liquid Handler-Multiflow FXBioTek
تم شراء من DMEM ألواح لوحات للصدأ

المراجع

  1. Lee, M., Vasioukhin, V. Cell polarity and cancer--cell and tissue polarity as a non-canonical tumor suppressor. Journal of Cell Science. 121 (Pt 8), 1141-1150 (2008).
  2. Nath, S., Devi, G. R. Three-dimensional culture systems in cancer research: Focus on tumor spheroid model. Pharmacology & Therapeutics. 163, 94-108 (2016).
  3. Weigelt, B., Ghajar, C. M. The need for complex 3D culture models to unravel novel pathways and identify accurate biomarkers in breast cancer. Advanced Drug Delivery Reviews. 69, 42-51 (2014).
  4. Li, Q., Chow, A. B., Mattingly, R. R. Three-dimensional overlay culture models of human breast cancer reveal a critical sensitivity to mitogen-activated protein kinase kinase inhibitors. The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 332 (3), 821-828 (2010).
  5. Li, L., Lu, Y. Optimizing a 3D Culture System to Study the Interaction between Epithelial Breast Cancer and Its Surrounding Fibroblasts. Journal of Cancer. 2, 458-466 (2011).
  6. Pickl, M., Ries, C. H. Comparison of 3D and 2D tumor models reveals enhanced HER2 activation in 3D associated with an increased response to trastuzumab. Oncogene. 28 (3), 461-468 (2009).
  7. Nyga, A., Cheema, U., Loizidou, M. 3D tumour models: novel in vitro approaches to cancer studies. Journal of Cell Communication and Signaling. 5 (3), 239-248 (2011).
  8. Kimlin, L. C., Casagrande, G., Virador, V. M. In vitro three-dimensional (3D) models in cancer research: an update. Molecular Carcinogenesis. 52 (3), 167-182 (2013).
  9. Mathews Griner, L. A., et al. Large-scale pharmacological profiling of 3D tumor models of cancer cells. Cell Death & Disease. 7 (12), e2492(2016).
  10. Polo, M. L., et al. Responsiveness to PI3K and MEK inhibitors in breast cancer. Use of a 3D culture system to study pathways related to hormone independence in mice. PLoS One. 5 (5), e10786(2010).
  11. Hatzivassiliou, G., et al. RAF inhibitors prime wild-type RAF to activate the MAPK pathway and enhance growth. Nature. 464 (7287), 431-435 (2010).
  12. Bhargava, A., et al. Registered report: RAF inhibitors prime wild-type RAF to activate the MAPK pathway and enhance growth. Elife. 5, e09976(2016).
  13. Mathews, L. A., Hurt, E. M., Zhang, X., Farrar, W. L. Epigenetic regulation of CpG promoter methylation in invasive prostate cancer cells. Molecular Cancer. 9, 267(2010).
  14. Mathews, L. A., Crea, F., Farrar, W. L. Epigenetic gene regulation in stem cells and correlation to cancer. Differentiation. 78 (1), 1-17 (2009).
  15. Mathews, L. A., et al. Increased expression of DNA repair genes in invasive human pancreatic cancer cells. Pancreas. 40 (5), 730-739 (2011).
  16. Mathews, L. A., et al. A 1536-well quantitative high-throughput screen to identify compounds targeting cancer stem cells. Journal of Biomolecular Screening. 17 (9), 1231-1242 (2012).
  17. Horii, T., Nagao, Y., Tokunaga, T., Imai, H. Serum-free culture of murine primordial germ cells and embryonic germ cells. Theriogenology. 59 (5-6), 1257-1264 (2003).
  18. Sun, L., et al. Epigenetic regulation of SOX9 by the NF-kappaB signaling pathway in pancreatic cancer stem cells. Stem Cells. 31 (8), 1454-1466 (2013).
  19. Mathews, L. A., et al. A 1536-well quantitative high-throughput screen to identify compounds targeting cancer stem cells. Journal of Biomolecular Screening. 17 (9), 1231-1242 (2012).
  20. Mathews Griner, L. A., et al. High-throughput combinatorial screening identifies drugs that cooperate with ibrutinib to kill activated B-cell-like diffuse large B-cell lymphoma cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (6), 2349-2354 (2014).
  21. Herter, S., et al. A novel three-dimensional heterotypic spheroid model for the assessment of the activity of cancer immunotherapy agents. Cancer Immunology, Immunotherapy. 66 (1), 129-140 (2017).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

1536 MAPK ATP

مقالات ذات صلة