مقالة منهجية

التحليل الجزيئي غشائي الوسيطة الانتقالية الناجمة عن تحويل الإشارات عامل النمو-β

DOI:

10.3791/57577

⸱

أغسطس 3, 2018

 ,  ,  , 
1David H. Koch Institute for Integrative Cancer Research, Massachusetts Institute of Technology, 2Department of Respiratory Medicine, Graduate School of Medicine, The University of Tokyo, 3Hastings Center for Pulmonary Research, Division of Pulmonary, Critical Care and Sleep Medicine, Department of Medicine, Keck School of Medicine, University of Southern California, 4Department of Molecular Pathology, Graduate School of Medicine, The University of Tokyo

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويرد وصف بروتوكول لتحريض في المختبر الانتقال غشائي الوسيطة (اندمت)، ومفيدة للتحقيق في مسارات الإشارات الخلوية المشتركة في اندمت،. في هذا النموذج التجريبي، هو اندمت الناجمة عن المعاملة مع TGF-β في خلايا بطانية 1 مللي ثانية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

اللدونة المظهرية من خلايا بطانية يكمن وراء تطوير نظام القلب والأوعية الدموية، وأمراض القلب والأوعية الدموية، ومختلف الشروط المرتبطة بالتليف الجهاز. في ظل هذه الظروف، يكتسب خلايا بطانية المتباينة تعمل الوسيطة مثل. هذه العملية يسمى الانتقال غشائي الوسيطة (اندمت) ويتسم ب downregulation علامات بطانية، upregulation من علامات الوسيطة، والتغييرات الشكلية. اندمت هو الناجمة عن مسارات إشارات عدة، بما في ذلك تحويل عامل النمو (TGF)-β، Wnt، والدرجة، وينظمها الجزيئية آليات مماثلة لتلك التي الانتقالية الظهارية الوسيطة (EMT) هام ل gastrulation، تليف الأنسجة، و سرطان خبيث. فهم آليات اندمت مهم لوضع نهج التشخيصية والعلاجية التي تستهدف اندمت. تحريض قوي اندمت في المختبر مفيد لتميز التوقيعات تعبير الجينات المشتركة، وتحديد الآليات الجزيئية دروجابل وشاشة المغيرون اندمت. وهنا يصف لنا أسلوب في المختبر لتحريض اندمت. خلايا بطانية microvascular البنكرياس الماوس MS-1 الخضوع اندمت بعد التعرض لفترة طويلة إلى TGF-β وإظهار upregulation من علامات الوسيطة والتغييرات الشكلية وكذلك تحريض السيتوكينات والمستقطبات التهابات متعددة. أساليب لتحليل ميكرورنا (ميرنا) التحوير مدرجة أيضا. هذه الأساليب توفير منبر للتحقيق في الآليات الكامنة وراء اندمت والمساهمة من ميرناس إلى اندمت.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الانتقال غشائي الوسيطة (اندمت) هو العملية التي يخضع خلية غشائي متمايزة مجموعة متنوعة من التغيرات الجزيئية، الناتج في خلية مثل تنتجها الخلايا الليفية الوسيطة1. ووصفت اندمت في البداية تحول خلايا غشائي أثناء التطوير من قلب2،3. في قلب التنمية المبكرة، يتألف أنبوب القلب البطانة داخلية وعضلة القلب خارجي. يتم فصل هذه الطبقتين طبقة من المصفوفة خارج الخلية تسمى هلام القلب. الخلايا الجنينية للوفلر، التي تكتسب علامات خلية بطانية، العبور إلى الخلايا الوسيطة وتغزو هلام القلب الكامنة، وتشجيع تشكيل الوسائد القلب، توفر الأساس للصمامات بي وحاجز والصمامات سيميلونار. وعلاوة على ذلك، قد اقترح اندمت لتكون مصادر بيريسيتيس وخلايا العضلات الملساء والأوعية الدموية في نظم الأوعية الدموية الجنينية الأخرى بما في ذلك الأوعية التاجية والشريان الاورطي البطني والشريان الرئوي4،،من56. وبالإضافة إلى ذلك، هو تورط اندمت في الأوعية الفسيولوجية التي تنتشر في7.

تتراكم الأدلة قد اقترح أن اندمت تشارك أيضا في العديد من أمراض القلب والأوعية الدموية وغيرها من الأمراض81،. وتشمل الشروط المرتبطة اندمت تكلس الأوعية الدموية، تصلب الشرايين، وارتفاع ضغط الدم الشرياني الرئوي، وتشوه الكهفي، تليف الجهاز، يعيد البناء الابتزاز المنوال، الخلل في allograft في زرع الكلي والسرطان8، 9،10،11،،من1213،،من1415،16،17، 18-وصف تقرير صدر مؤخرا أن عدة علامات اندمت الجزيئية يمكن أن تكون أداة للتنبؤ التشخيص والتكهن بالخلل الوظيفي الكلوي الاختلاس في زرع الكلي17. تعديل مسارات الإشارات الخلوية المتصلة اندمت قد ثبت أن تحسين ظروف المرض عدة بما في ذلك تليف القلب ويعيد البناء الابتزاز المنوال في الحيوان النماذج8،15. ولذلك فهم الآليات الكامنة وراء اندمت هامة لتطوير استراتيجيات تشخيصية وعلاجية تستهدف اندمت.

اندمت تتسم بفقدان تقاطعات خلية خلية، والزيادة في إمكانيات الهجرة، downregulation الجينات غشائي محددة مثل هاء-كادهيرين، و upregulation من الجينات الوسيطة بما في ذلك العضلات الملساء α أكتين (α-SMA). وباﻹضافة إلى ذلك، اندمت والانتقالية الظهارية الوسيطة (EMT)، عملية مماثلة تقوم بتحويل الخلايا الظهارية للخلايا الوسيطة، المرتبطة بالإنتاج المتغيرة لمختلف عناصر المصفوفة خارج الخلية، التي قد تسهم في تطوير أنسجة التليف8،19.

في الآونة الأخيرة، عدة دراسات في المختبر من اندمت قد شرحت تفاصيل الآليات الجزيئية اندمت15،20. اندمت هو الناجمة عن مسارات الإشارات المختلفة بما في ذلك تحويل عامل النمو (TGF)-β، Wnt، وتحقيقها1. فيما بينها، TGF-β يلعب دور محوري في استحثاث EMT واندمت. في اندمت، لفترات طويلة التعرض لنتائج TGF-β في اندمت في خلايا بطانية شتى، في حين يبدو أن التعرض القصير غير كافية21. ونحن هنا وصف بروتوكولا مباشرة لتحريض اندمت، في أي ميل سفين 1 (MS-1) الخضوع للماوس البنكرياس خلايا بطانية microvascular اندمت في المختبر بعد التعرض لفترة طويلة إلى TGF-β20. في هذا النموذج، يمكن إجراء تحليلات متعددة للمتلقين للمعلومات للتحقيق في ملامح مميزة اندمت، بما في ذلك التغييرات الشكلية، downregulation علامات بطانية، upregulation من علامات الوسيطة والجينات التحريضية، سيتوسكيليتال ترتيبات جديدة، وانكماش جل الكولاجين.

ميكرورناس (ميرناس) هي ~ 22 nt الكشف التنظيمية الصغيرة أن المباشرة القمع بوسترانسكريبشونال مختلف مرناً الأهداف22،23. من خلال الاعتراف بالهدف تسلسل بوساطة البذور، ميرناس قمع مئات جينات المستهدفة وتعدل الوظائف الخلوية المتنوعة مثل تمايز الخلايا وانتشارها، وحركية. وهذا هو الحال لتنظيم EMT واندمت أيضا، وأبلغ ميرناس عدة المنظمين من24،EMT واندمت25. يمكن الجمع بين نموذج اندمت قدم في هذا الاستعراض بسهولة مع ميرنا تعديل إجراءات لاختبار أدوار ميرناس في اندمت. هذا الاستعراض يلخص لدينا إجراءات تجريبية للتحقيق اندمت TGF-β-المستحث في خلايا مرض التصلب العصبي المتعدد-1 ويشمل أيضا مقارنة شروط الاستقراء اندمت طريق TGF-β في خلايا بطانية أخرى.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1-تحريض اندمت

  1. الحفاظ على خلايا مرض التصلب العصبي المتعدد-1 في ظروف الثقافة الموحدة وتجنب كونفلوينسي. مصدرا لخلايا مرض التصلب العصبي المتعدد-1 يرد في الجدول للمواد. لمرض التصلب العصبي المتعدد-1 الخلايا، استخدام "الحد الأدنى الأساسية" المتوسطة-α (MEM-α) مع 10% مصل العجل الجنين (FCS) والبنسلين U/mL 50 50 ميكروغرام/مل والستربتوميسين.
  2. طبق مع 1 × الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) الخلايا يغسل MS-1 على 10 سم وإضافة 1.0 مل التربسين اللوحة. احتضان لمدة 5 دقائق عند 37 درجة مئوية.
  3. فصل الخلايا باستخدام 9 مل وسائط الثقافة. جمع تعليق خلية في أنبوب 15 مل.
  4. الطرد المركزي بتعليق خلية في 300-400 x ز لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
  5. بعناية إزالة المادة طافية وتعليق بيليه الخلية في حرارة قبل الثقافة الإعلامية.
  6. حساب عدد الخلايا قابلة للتطبيق استخدام الحل تريبان الأزرق وهيموسيتوميتير قياسي أو عداد تلقائي خلية.
  7. 1 MS بلايت الخلايا على لوحات الثقافة القياسية غير المصقول في 0.5 × 103 خلايا كل سم2 لفترة طويلة الأجل الثقافة. على سبيل المثال، لوحة 5.0 × 103 خلايا كل بئر في 6 الثقافة أيضا لوحة. استخدام نفس الوسائط الثقافة بما في ذلك تركيز نفس FCS. في الخلايا من مرض التصلب العصبي المتعدد-1، يستحث TGF-β اندمت في المدى الطويل الثقافة (على الأقل ح 48 – 72) مع استخدام FCS.
  8. تنشيط خلايا بطانية مع TGF-β2 (تركيز نهائي من 1 نانوغرام/مليلتر) بعد 24 ساعة.
  9. خلايا الثقافة في حاضنة هوميديفيد (5% CO2، 37 درجة مئوية). رصد الخلايا يوميا عند التركيز على التغييرات الشكلية.
  10. استبدال وسائط الإعلام مع وسائط الثقافة المعالجون مسبقاً الطازجة التي تحتوي على TGF-β2 بعد 48 ساعة معاملة مع TGF-β في ثقافة طويلة الأجل.
  11. الشروع في تحليل المتلقين للمعلومات. عادة، إعادة تنظيم أكتين ويلاحظ بعد 24 ساعة علاج، ولوحظت downregulation علامات بطانية و upregulation من علامات الوسيطة بعد 48 – 72 ساعة معاملة مع TGF-β.

2-إيمونوسيتوتشيميكال التحليل

  1. الحفاظ على خلايا مرض التصلب العصبي المتعدد-1 في ظروف الثقافة القياسية.
  2. كذلك الخلية خلايا MS بلايت 1 إلى 4 شرائح دائرة الثقافة في 1.0 × 103 خلايا كل بئر (1.7 سم2). الشرائح مغلفة مسبقاً مع الجيلاتين. استخدام 0.5 – 1.0 مل من وسائط الثقافة الواحدة وكذلك.
  3. تنشيط خلايا بطانية مع TGF-β2 (تركيز نهائي من 1 نانوغرام/مليلتر) بعد 24 ساعة. عند تحليل مشاركة روك في اندمت، إضافة أ قبل ح 1 (10 ميكرومترات) مثبط Y-27632 روك للعلاج TGF-β. وعند تقييم تأثير تثبيط الإشارات TGF-β، يمكن استخدام مثبطات كيناز مستقبلات TGF-β.
  4. خلايا الثقافة في حاضنة هوميديفيد (5% CO2، 37 درجة مئوية). ويلاحظ أكتين إعادة التنظيم في خلايا مرض التصلب العصبي المتعدد-1 بعد 24 ساعة علاج مع TGF-β. تغييرات أخرى أصبح واضحا بعد 48 – 72 ساعة علاج. لثقافة ح 72، استبدال الوسائط مع وسائط جديدة تحتوي على TGF-β بعد 48 ساعة معاملة مع TGF-β.
  5. واو-أكتين تلطيخ
    1. بعد 24 ساعة علاج TGF-β، قم بإزالة الوسائط وإصلاح الخلايا مع بارافورمالدهيد 4% في برنامج تلفزيوني 1 x لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، وشطف الخلايا مع برنامج تلفزيوني 1 x.
    2. احتضان مع 0.2% X-100 تريتون لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
    3. شطف الخلايا ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني 1 x.
    4. احتضان مع إيسوثيوسياناتي ب فالويدين-تيتراميثيلرهوداميني من الامانيت phalloides المخفف 150-fold مع حظر المخزن المؤقت لح 1 في درجة حرارة الغرفة.
    5. شطف الخلايا ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني 1 x.
    6. وصمة عار الأنوية بالأصباغ سينين الحمض النووي ملزم لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
    7. شرائح الشطف وجبل كوفيرسليبس الوجه للأسفل على شريحة باستخدام شريحة متزايدة في وسائل الإعلام.
    8. مراقبة مع مجهر [كنفوكل]. استخدام ليزر نانومتر 543 وعامل تصفية انبعاثات من 560 – 615 نانومتر للكشف عن الأسفار فالويدين. استخدام ليزر 633 نانومتر وعامل تصفية انبعاثات أكثر من 650 نانومتر لتلطيخ النووية. بناء على المعاملة مع TGF-β، أن تراعي تشكيل ألياف سميكة من الإجهاد.
  6. هاء-كادهيرين وتلطيخ α-SMA
    1. بعد 72 ساعة علاج TGF-β، قم بإزالة الوسائط، وإصلاح الخلايا مع الباردة 50% والميثانول والاسيتون 50% (0.5 – 1.0 مل في البئر) لمدة 5 دقائق.
    2. شطف الخلايا ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني 1 x (0.5 – 1.0 مل في البئر).
    3. احتضان مع الأجسام الأولية في المخزن المؤقت حظر بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية في الظلام وفقا للتركيز الموصى بها الشركة المصنعة. هاء-كادهيرين استخدام [مونوكلونل] جسم (BV13، وتمييع 1: 100) ومترافق Cy3 α-SMA [مونوكلونل] جسم (1A4، وتمييع 1: 200)20.
    4. شطف الخلايا ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني 1 x.
    5. احتضان الخلايا مع أخضر مترافق صبغ ثانوية جسم إلى جسم VE-كادهيرين في المخزن المؤقت حظر لح 1 في درجة حرارة الغرفة في الظلام وفقا للتركيز الموصى بها الشركة المصنعة.
    6. شطف الخلايا ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني 1 x.
    7. وصمة عار الأنوية بالأصباغ سينين الحمض النووي ملزم لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
    8. شرائح الشطف وجبل كوفيرسليبس الوجه للأسفل على شريحة باستخدام شريحة متزايدة في وسائل الإعلام.
    9. مراقبة مع مجهر [كنفوكل]. استخدام ليزر نانومتر 543 وعامل تصفية انبعاثات من 560 – 615 نانومتر للكشف عن α-SMA (Cy3). استخدام ليزر 488 نانومتر وعامل تصفية انبعاثات 505-550 نيوتن متر للكشف عن كادهيرين VE. عادة، عند العلاج مع العلاج TGF-β، نقصان في إشارات VE-كادهيرين وسوف يلاحظ زيادة في إشارات α-SMA.

3-والرزن انكماش جل الكولاجين ثلاثي الأبعاد

  1. أداء الثقافة من مرض التصلب العصبي المتعدد-1 الخلايا مع أو بدون TGF-β ح 72 قبل الكولاجين هلام انكماش المقايسة.
  2. إعداد النوع أنا جل الكولاجين على الجليد. مزيج الحل الكولاجين الباردة والمتوسطة MEM x 10 مركزة، والكولاجين تمييع مخزن يحتوي على هيدروكسيد الصوديوم N 0.05 و 2.2 في المائة ناكو3و 200 ملم حبيس الأس الهيدروجيني 7.4 8:1: نسبة 1.
  3. ميكس 200 مل من عنصر التحكم أو معلقات TGF-β-يعامل خلية غشائي (1.0 × 106 خلايا/200 ميكروليتر) و 800 ميكروليتر من حل جل الكولاجين. إضافة العينات المعالجة، ل TGF-β TGF-β2 (1 نانوغرام/ملليلتر) على تعليق خلية.
  4. إضافة مل 1.0 من الخليط لكل بئر من لوحات الثقافة 12-جيدا والسماح لترسيخ في الحضانة عند 37 درجة مئوية لمدة 30 – 60 دقيقة.
  5. وبعد جيلاتينيزيشن، تراكب 1.0 مل من MEM-α التي تحتوي على 10 ٪ السفح و 50 يو/مليلتر البنسلين والستربتوميسين 50 ميكروغرام/مل لتعويم الهلام. إضافة العينات المعالجة، ل TGF-β TGF-β2 (1 نانوغرام/مل) لوسائل الإعلام.
    ملاحظة: لعينات TGF-β، تعامل، إضافة TGF-β لجل وثقافة وسائل الإعلام على السواء.
  6. احتضان المواد الهلامية الطافية في 37 درجة مئوية ح 48.
  7. مسح الصور من المواد الهلامية من الجزء السفلي من لوحات باستخدام ماسح ضوئي. وبدلاً من ذلك، تسجيل صور الجل باستخدام كاميرا رقمية على مسافة ثابتة أعلاه المواد الهلامية.
  8. تحديد مقدار المساحة السطحية جل استناداً إلى عدد بكسل باستخدام إيماجيج. حدد الجل باستخدام تحديد يدوي أو أدوات التحديد ذات الصلة، أو حدد استخدام هلام "صورة | ضبط | تلوين عتبة "أداة، ومن ثم تحديد مجال استخدام هلام" تحليل | أمر التدبير ".

4-تثبيط ميرنا الأنشطة بميرنا المستندة إلى "تأمين الحمض النووي" مثبطات

  1. الحفاظ على خلايا مرض التصلب العصبي المتعدد-1 في ظروف الثقافة القياسية.
  2. ترانسفيكت مثبطات ميرنا مؤمن الحمض النووي (LNA)، ميرنا الاصطناعية الدوبلكس أو سيرناس (20 أو 50 من شمال البحر الأبيض المتوسط) باستخدام الكواشف ليبوفيكشن وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. ووصفت مصادر LNA مثبطات ميرنا, ميرنا الاصطناعية الدوبلكس، وسيرناس وتفاصيل في أعمالنا السابقة تقارير26،27. في مرض التصلب العصبي المتعدد-1 الخلايا، تعمل الإجراءات القياسية تعداء استناداً إلى إرشادات الشركة المصنعة جيدا للأخذ بمثبطات ميرنا LNA أو الدوبلكس ميرنا الاصطناعية أو سيرناس.
  3. بعد ح 16-48، حفز خلايا بطانية مع TGF-β2 (تركيز نهائي من 1 نانوغرام/مليلتر).
  4. انتقل إلى مختلف التحليلات المتلقين للمعلومات بما في ذلك تحليل التعبير (RT-PCR الكمي وتحاليل الحمض النووي الريبي-تسلسل (الحمض النووي الريبي-seq)) وتحليل immunocytochemical المقايسة مراسل الجيش الملكي النيبالي. وقد وصف تحليلات المصب في أعمالنا السابقة تقارير26،،من2027.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

TGF-β محفز قوي اندمت في مختلف خلايا بطانية. بعد العلاج 24 ساعة مع TGF-β في خلايا مرض التصلب العصبي المتعدد-1، يظهر تلطيخ أكتين و إعادة تنظيم أكتين إجهاد الألياف (الشكل 1A)20. المعالجة المسبقة مع مثبط روك Y-27632 يحول دون تنظيم دورات تعريفية ل إعادة تنظيم أكتين20. تغيير خلايا بطانية MS-1 من مورفولوجيا حصاة كبيرة مثل كلاسيكية إلى علم التشكل الوسيطة على شكل عمود الدوران عند معاملة TGF-β (الشكل ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأفيد أن المنشط علاج TGF-β ورأس ح 24 الناجم عن اندمت في خلايا مرض التصلب العصبي المتعدد-1، في حين فشل TGF-β وحدها لحمل اندمت في هذه الفترة القصيرة21. دأبت، لاحظنا أن TGF-β إلى حد كبير التي يسببها اندمت بعد العلاج الطويل (ح 48 – 72) في مرض التصلب العصبي المتعدد-1 خلايا20. اندمت لوحظ مرارا وتكرارا بعد العلاج المطول مع TGF-β (2 – 6 أيام) في خلايا بطانية مختلفة مثل السرة البشرية الوريد خلايا بطانية (هوفيك) الجلدي microvascular غشائي الخلايا البشرية (هكميك)، (البشرية خلايا بطاني...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ونحن نشكر بوروك زيا ومييازونو كوهية للاقتراحات في إعداد مخطوطة. H.I.S. ومحمد تدعمها "زمالة أبحاث مؤسسة النصب التذكاري أوهارا"، ويدعمه H.I.S. "أوسامو هايايشى التذكاري المنح الدراسية" "الدراسة في الخارج". وأيد هذا العمل بمنحه من مؤسسة العلوم وتاكيدا (أ. س.).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
خلايا MS-1الثقافة من النوع الأمريكيCRL-2279
MEM-alphaThermo Fisher Scientific32571036
TGF-beta2R & D302-B2-002
4 آبار Lab-Tek II غرفة الشريحةالحرارية فيشر العلمية154526
Y-27632   ؛سيجما ألدريتشY0503
حجب واحدناكالاي tesque03953-95
فالويدين-رباعي ميثيل رودامين ب إيزوثيوسياناتسيجما-ألدريتشP1951
توتو-3 يوديدثيرمو فيشر ScientificT3604
VE كاديرين الجسم المضاد أحادي النسيلة (BV13)ثيرمو فيشر العلمي14-1441-82
ألفا-SMA الجسم المضاد أحادي النسيلة Cy3 (1A4)Sigma-AldrichC6198
Alexa Fluor 488 الماعز المضاد للفأر IgG (H + L) ThermoFisher ScientificA-11001
غطاء زلةThermo Fisher Scientific174934
محلول الكولاجينNitta gelatin Inc.Cellmatrix I-P
الكولاجين تخفيف المخزنالمؤقت نيتا الجيلاتين Inc.Cellmatrix I-P
LNA MIRNAEXIQON  مثبط الطاقة miRCURY LNAmicroRNA (التحكم السلبي B والهدف miRNA) miRNA
الاصطناعي المزدوجQiagen   ؛miScript miRNA تقليد
ليبوفاكتامين RNAiMAXثيرمو فيشر 13778030
ليبوفيكتامين 200011668027ثيرمو فيشر العلمي
مجموعة مثبط العلمي

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Sanchez-Duffhues, G., Garcia de Vinuesa, A., Ten Dijke, P. Endothelial-to-mesenchymal transition in cardiovascular diseases: Developmental signaling pathways gone awry. Developmental Dynamics. , (2017).
  2. Markwald, R. R., Fitzharris, T. P., Smith, W. N. Structural analysis of endocardial cytodifferentiation. Developmental Biology. 42 (1), 160-180 (1975).
  3. Eisenberg, L. M., Markwald, R. R. Molecular regulation of atrioventricular valvuloseptal morphogenesis. Circulation Research. 77 (1), 1-6 (1995).
  4. Chen, Q., et al. Endothelial cells are progenitors of cardiac pericytes and vascular smooth muscle cells. Nature Communications. 7, 12422(2016).
  5. DeRuiter, M. C., et al. Embryonic endothelial cells transdifferentiate into mesenchymal cells expressing smooth muscle actins in vivo and in vitro. Circulation Research. 80 (4), 444-451 (1997).
  6. Arciniegas, E., Neves, C. Y., Carrillo, L. M., Zambrano, E. A., Ramirez, R. Endothelial-mesenchymal transition occurs during embryonic pulmonary artery development. Endothelium. 12 (4), 193-200 (2005).
  7. Welch-Reardon, K. M., Wu, N., Hughes, C. C. A role for partial endothelial-mesenchymal transitions in angiogenesis. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 35 (2), 303-308 (2015).
  8. Zeisberg, E. M., et al. Endothelial-to-mesenchymal transition contributes to cardiac fibrosis. Nature Medicine. 13 (8), 952-961 (2007).
  9. Chen, P. Y., et al. Endothelial-to-mesenchymal transition drives atherosclerosis progression. Journal of Clinical Investigation. 125 (12), 4514-4528 (2015).
  10. Bostrom, K. I., Yao, J., Guihard, P. J., Blazquez-Medela, A. M., Yao, Y. Endothelial-mesenchymal transition in atherosclerotic lesion calcification. Atherosclerosis. , 124-127 (2016).
  11. Qiao, L., et al. Endothelial fate mapping in mice with pulmonary hypertension. Circulation. 129 (6), 692-703 (2014).
  12. Ranchoux, B., et al. Endothelial-to-mesenchymal transition in pulmonary hypertension. Circulation. 131 (11), 1006-1018 (2015).
  13. Maddaluno, L., et al. EndMT contributes to the onset and progression of cerebral cavernous malformations. Nature. 498 (7455), 492-496 (2013).
  14. Krenning, G., Zeisberg, E. M., Kalluri, R. The origin of fibroblasts and mechanism of cardiac fibrosis. Journal of Cell Physiology. 225 (3), 631-637 (2010).
  15. Cooley, B. C., et al. TGF-beta signaling mediates endothelial-to-mesenchymal transition (EndMT) during vein graft remodeling. Science Translational Medicine. 6 (227), 227ra234(2014).
  16. Wang, Z., et al. Transforming Growth Factor-beta1 Induces Endothelial-to-Mesenchymal Transition via Akt Signaling Pathway in Renal Transplant Recipients with Chronic Allograft Dysfunction. Annals of Transplantation. 21, 775-783 (2016).
  17. Xu-Dubois, Y. C., et al. Markers of Endothelial-to-Mesenchymal Transition: Evidence for Antibody-Endothelium Interaction during Antibody-Mediated Rejection in Kidney Recipients. Journal of the American Society of Nephrology. 27 (1), 324-332 (2016).
  18. Zeisberg, E. M., Potenta, S., Xie, L., Zeisberg, M., Kalluri, R. Discovery of endothelial to mesenchymal transition as a source for carcinoma-associated fibroblasts. Cancer Research. 67 (21), 10123-10128 (2007).
  19. Pardali, E., Sanchez-Duffhues, G., Gomez-Puerto, M. C., Ten Dijke, P. TGF-beta-Induced Endothelial-Mesenchymal Transition in Fibrotic Diseases. International Journal of Molecular Sciences. 18 (10), (2017).
  20. Mihira, H., et al. TGF-beta-induced mesenchymal transition of MS-1 endothelial cells requires Smad-dependent cooperative activation of Rho signals and MRTF-A. Journal of Biochemistry. 151 (2), 145-156 (2012).
  21. Hashimoto, N., et al. Endothelial-mesenchymal transition in bleomycin-induced pulmonary fibrosis. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 43 (2), 161-172 (2010).
  22. Suzuki, H. I., Miyazono, K. Dynamics of microRNA biogenesis: crosstalk between p53 network and microRNA processing pathway. Journal of Molecular Medicine (Berl). 88 (11), 1085-1094 (2010).
  23. Suzuki, H. I., Miyazono, K. Emerging complexity of microRNA generation cascades. Journal of Biochemistry. 149 (1), 15-25 (2011).
  24. Nicoloso, M. S., Spizzo, R., Shimizu, M., Rossi, S., Calin, G. A. MicroRNAs--the micro steering wheel of tumour metastases. Nature Reviews Cancer. 9 (4), 293-302 (2009).
  25. Lagendijk, A. K., Goumans, M. J., Burkhard, S. B., Bakkers, J. MicroRNA-23 restricts cardiac valve formation by inhibiting Has2 and extracellular hyaluronic acid production. Circulation Research. 109 (6), 649-657 (2011).
  26. Katsura, A., et al. MicroRNA-31 is a positive modulator of endothelial-mesenchymal transition and associated secretory phenotype induced by TGF-beta. Genes Cells. 21 (1), 99-116 (2016).
  27. Suzuki, H. I., et al. Regulation of TGF-beta-mediated endothelial-mesenchymal transition by microRNA-27. Journal of Biochemistry. 161 (5), 417-420 (2017).
  28. Camenisch, T. D., et al. Temporal and distinct TGFbeta ligand requirements during mouse and avian endocardial cushion morphogenesis. Developmental Biology. 248 (1), 170-181 (2002).
  29. Krenning, G., Moonen, J. R., van Luyn, M. J., Harmsen, M. C. Vascular smooth muscle cells for use in vascular tissue engineering obtained by endothelial-to-mesenchymal transdifferentiation (EnMT) on collagen matrices. Biomaterials. 29 (27), 3703-3711 (2008).
  30. Medici, D., Potenta, S., Kalluri, R. Transforming growth factor-beta2 promotes Snail-mediated endothelial-mesenchymal transition through convergence of Smad-dependent and Smad-independent signalling. Biochemical Journal. 437 (3), 515-520 (2011).
  31. Krizbai, I. A., et al. Endothelial-mesenchymal transition of brain endothelial cells: possible role during metastatic extravasation. PLoS One. 10 (3), e0119655(2015).
  32. Arciniegas, E., Sutton, A. B., Allen, T. D., Schor, A. M. Transforming growth factor beta 1 promotes the differentiation of endothelial cells into smooth muscle-like cells in vitro. Journal of Cell Science. 103 (Pt 2), 521-529 (1992).
  33. Deissler, H., Deissler, H., Lang, G. K., Lang, G. E. TGFbeta induces transdifferentiation of iBREC to alphaSMA-expressing cells. International Journal of Molecular Medicine. 18 (4), 577-582 (2006).
  34. Paranya, G., et al. Aortic valve endothelial cells undergo transforming growth factor-beta-mediated and non-transforming growth factor-beta-mediated transdifferentiation in vitro. American Journal of Pathology. 159 (4), 1335-1343 (2001).
  35. Maleszewska, M., et al. IL-1beta and TGFbeta2 synergistically induce endothelial to mesenchymal transition in an NFkappaB-dependent manner. Immunobiology. 218 (4), 443-454 (2013).
  36. Ubil, E., et al. Mesenchymal-endothelial transition contributes to cardiac neovascularization. Nature. 514 (7524), 585-590 (2014).
  37. Xu, X., et al. Epigenetic balance of aberrant Rasal1 promoter methylation and hydroxymethylation regulates cardiac fibrosis. Cardiovasc Research. 105 (3), 279-291 (2015).
  38. Xiao, L., et al. Tumor Endothelial Cells with Distinct Patterns of TGFbeta-Driven Endothelial-to-Mesenchymal Transition. Cancer Research. 75 (7), 1244-1254 (2015).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

TGF Beta MS 1 VE Cadherin MicroRNA

مقالات ذات صلة