حقن ليبوبوليساكتشاريدي في الفئران لتقليد دخول المنتجات المستمدة من الجراثيم بعد خرق جدار الأمعاء

هو استعمار الأمعاء البشرية مع مجموعة كبيرة من الكائنات الحية الدقيقة التي تشكل الحجمية، الذي أقام علاقة متبادلة مع المضيف أثناء التطور. المضيف في هذه العلاقة، يوفر مكاناً أمنا الحجمية، بينما يوفر الحجمية الفيتامينات والمغذيات الهضم والحماية من مسببات الأمراض إلى المضيف، حيث يتواجد الحجمية¹. عندما يتم تضطرب هذه العلاقة المفيدة بين البلد المضيف والحجمية، يمكن وضع الأمراض، مثل مرض التهاب الأمعاء (بنك التنمية بين الأمريكتين). بنك التنمية بين الأمريكتين هو مرض التهاب مزمن المتعددة العوامل الأمعاء الناجمة عن العوامل الوراثية والبيئية التي تحدث في شكلين الرئيسية، المرض (CD) كرون والتهاب القولون التقرحي (UC). وعلى الرغم من أوجه التشابه بين هذين الشكلين بنك التنمية بين الأمريكتين، تتسم ببعض الاختلافات في موقع وطبيعة التعديلات التحريضية. مؤتمر نزع السلاح هو اضطراب تحريضية transmural النكس يمكن أن يحتمل أن تمتد إلى أي جزء من الجهاز الهضمي، بينما تفرد غير ترانسمورال، ويقتصر على القولون. وعلاوة على ذلك، حدوث طفرات في النوكليوتيدات ملزمة أوليجوميريزاتيون التي تحتوي على المجال البروتين 2 (NOD2)، مستقبلات اعتراف بنمط (بر) تسلم موراميل dipeptide (الديمقراطي)، مكون من جدار الخلية البكتيريا الأكثر إيجابية والسلبيه، المرتبطة مع القرص المضغوط². وعلاوة على ذلك، الإشريكيّة القولونية ()، الليستيريا و العقديّات ومنتجاتها جميع عثر داخل الضامة في المرضى مؤتمر نزع السلاح التي دخلت البلد المضيف بعد خرق حاجز³. عندما تدخل البكتيريا أو منتجاتها المضيف أثناء وضع مؤتمر نزع السلاح، يطور المناعي استجابة مما يؤدي إلى إنتاج أجسام مضادة للبكتيريا⁴تعميم. ربما، والأدلة الأكثر إقناعاً لدور الحجمية في الآلية المرضية لبنك التنمية بين الأمريكتين ينبع من نماذج الماوس. عند الحيوانات تعامل مع المضادات الحيوية، أو عندما يتم الاحتفاظ الفئران في ظروف خالية من جرثومة (GF)، يتم تقليل شدة المرض في معظم النماذج التهاب القولون، مثل في إيل-10-/--الفئران التي لا تتطور التهاب القولون في فرنك غيني مرافق^5،6. وعلاوة على ذلك، التهاب القولون تزعج أيضا تكوين الحجمية، الذي يتميز تركيبة غير متوازنة وخفض ثراء تسمى ديسبيوسيس⁷. يمكن أن يكون نتيجة لبنك التنمية بين الأمريكتين زيادة نفاذية معوية التي يمكن أن تؤدي إلى مدخل للمنتجات المستمدة من الجراثيم والميكروبات في البلد المضيف.

في الحيوانات، والحث على التطبيق من كبريتات الصوديوم ديكستران (DSS) خرق الظهارية معوية مما يؤدي إلى زيادة نفاذية الحاجز الظهارية⁸. المدخل لبس تركيزات مرتفعة في الحيوانات ب التهاب القولون DSS⁹. من المثير للاهتمام، الحيوانات تفتقر ج نوع يكتين مستقبلات الالتصاق داخل الخلايا المحددة الجزيء-3 الاستيلاء على نونينتيجرين المتصلة هومولوج 1 (تسجيل-R1) محمية من مفاجآت التهاب القولون والمستحثه بلبس اندوتوكسيميا¹⁰. للتوسع في نشر في البلد المضيف، أن البكتيريا أو منتجات البكتيريا تستمد اجتياز الحاجز الأوعية الدموية¹¹، التجويف الصفاقى، الذي يوجد الأمعاء الصغيرة والكبيرة والليمفاوية المساريقي العلوي و/أو الكبد¹². لتقليل تعقيد هذا النظام، تم استخدام مركب معرفة المستمدة من البكتيريا. لبس، الذي يسبب اندوتوكسيميا بعد داخل (القائمة) أو في الوريد (رابعا) حقن¹³ تم حقن الفئران، لدراسة التعبير عن interleukins Il6 و إيلب وسيتوكين تنفا استجابة للبس.

لبس هو المرتبطة بالعوامل الممرضة جزيئية نمط (بمب) أعرب كمكون جدار خلية من البكتيريا سلبية الغرام، يتكون من الدهن A (بمب الرئيسية في الهيكل للبس)، oligosaccharide أساسية ويا جانب سلسلة¹⁴. تسلم مستقبلات مثل عدد القتلى 4 (TLR4) عن طريق الخلايا الجذعية والضامة، والخلايا الظهارية لبس¹⁵، يتطلب مستقبلات المشارك للربط المناسبة. المرحلة الحادة البروتين ملزمة لبس البروتين (ليرة لبنانية) يربط لبس لتشكيل مجمع نقل لبس لكتلة التمايز 14 (CD14)، بروتين غشائي مرتبط جليكوسيلفوسفاتيديلينوسيتول. CD14 كذلك المكوكات لبس مستضد لمفاويات 96 أو يعرف أيضا باسم MD-2، الذي يرتبط بالمجال خارج الخلية من TLR4. ييسر ربط لبس للعضو المنتدب-2 ثنائي TLR4/MD-2 للحث على التغييرات conformational تجنيد الجزيئات داخل الخلايا محول لتنشيط المصب مما يشير إلى مسار¹⁴، الذي يشمل المرحلة الابتدائية التمايز النقوي استجابة الجينات 88 (MyD88)-تعتمد المسار وفي النقل الدولي البري المحتوية على المجال الذي يحفز محول الانترفيرون-بيتا (طريف)-مسار يعتمد¹⁶. ثم الاعتراف بلبس من TLR4 ينشط في مسار NF-κB والحث على التعبير عن السيتوكينات proinflammatory، مثل TNFα، وايل-6، وايل-1β¹⁷.

على وجه الخصوص، عندما يتم حقن لبس في الحيوانات، وتركيز لبس نظراً للحيوانات، وقد الخلفية الوراثية للحيوانات والغذاء النظر. تركيزات عالية من لبس ويؤدي إلى صدمة التفسخ، تتميز بانخفاض ضغط الدم وفشل الجهاز متعددة، وأخيراً إلى وفاة¹⁸. الفئران أقل حساسية للبس مقارنة بالبشر، وقادرة على حمل عاصفة سيتوكين¹⁹فيها تركيزات لبس بين 2-4 نانوغرام/كيلوغرام من وزن الجسم (الأسلحة البيولوجية). للفئران، الجرعة القاتلة (LD50)، الذي يؤدي إلى الموت في نصف عدد النطاقات الفئران من 10-25 مغ/كغ وزن الجسم²⁰ اعتماداً على سلالة الماوس المستخدمة. بالنسبة الجرعة المميتة 50 في المائة (LD50) سلالات الماوس استخداماً، C57Bl/6 وبالب/ج، 10 مغ/كغ وزن الجسم. وفي المقابل، محمية سلالات C3H/HeJ و C57BL/10ScCr من لبس الناجم عن اندوتوكسيميا، الذي سبب الطفرات في Tlr4²¹. ونتيجة لذلك، الفئران التي تفتقر إلى Tlr4 هيبوريسبونسيفي للحقن مع لبس²². خطوط الماوس المعدلة وراثيا الأخرى، مثل PARP1/الفئران²³ مقاومة للصدمة السمية التي يسببها لبس.

هنا يستخدم نموذج الماوس ووصف جرعة المقاسة من لبس تدار النظامية لتقليد المترتبة على نشر لبس بعد خرق حاجز من الأسطح في الجسم. عدم حمل تركيز لبس المختارة (2 مغ/كغ وزن الجسم) وفيات في الفئران C56Bl/6، ولكن إطلاق سراح المستحث السيتوكينات الموالية التحريضية.

ولدت الفئران والاحتفاظ بظروف معينة خالية من مسببات الأمراض (SPF) في منشأة الحيوان من إدارة الطب الحيوي، جامعة بازل (بازل، سويسرا). أجريت جميع التجارب التي الماوس وفقا "الاتحادية السويسرية" واللوائح الكانتونات (بروتوكول الحيوان رقم 2816 [كانتون بازل-شتات]).

1-إعداد حل لبس

1. فتح مخزون لبس تنقيته من الإشريكيّة القولونية 0111:B4 تحت ظروف معقمة وإعادة تشكيل ذلك في المياه بتركيز 5 ملغ/مل.
2. تمييع الأسهم لبس مع المياه المالحة الفوسفات العقيمة مخزنة (PBS) إلى تركيز العامل 0.2 ميكروغرام/ميليلتر.

2-داخل حقن لبس للفئران

1. نضح لبس يعمل الحل في حقنه 0.5 مل بإبرة ز 30 في تدفق هواء الصفحي.
2. تزن الإناث الفئران C57Bl/6 (ستة إلى عشرة أسابيع من العمر) وحساب كمية لبس التي سيتم حقنها: 10 ميليلتر (2 ميكروغرام)/g وزن الجسم.
   ملاحظة: على سبيل المثال، إذا كان ماوس يزن 20 غرام، ثم ميليلتر ز 20 × 10 = 200 ميليلتر لبس يعمل الحل يحتاج إلى حقن.
3. التعامل مع الماوس برفق ولكن بحزم، وكبح جماح هذا الحيوان في يد واحدة. تأكد من أن الحيوانات قادرة على التنفس بشكل طبيعي ولكن ليس على تطور وتحول أثناء ضبط النفس.
4. إمالة الآنف الماوس قليلاً نحو الكلمة لتعريض البطن للحقن. تحديد خط الوسط في البطن ومكان الحقن في البطن المنخفض الأيمن أو الأيسر من خط الوسط. حقن PBS القائمة بدلاً من لبس في مكافحة الفئران.
5. مع اليد الحرة، حقن حجم مناسب (حجم المحسوبة في الخطوة 2، 2) من لبس يعمل الحل. تأكد من أن الإبرة دخلت في التجويف الصفاقى على خلاف ذلك، قد يحدث سوء الحقن في طبقة العضلات البطن. لا يزال، لا تذهب عميقة جداً مع الإبرة في التجويف الصفاقى لتجنب إصابة الأجهزة الداخلية الموجودة في هذا المجال.
6. العودة الحيوان بعناية إلى القفص مع الفئران تصل إلى 5 في قفص.

3-رصد الفئران

1. مراقبة الحيوانات في وقت الحقن وكل ح 2 بعد الحقن ح 8 عن وقوع وشدة اندوتوكسيميا. ولذلك، استخدم ورقة نقاط (الجدول 1) التي قد تم تكييفه من مخطوطة منشورة سابقا ²⁴.
2. نقاط لبس حقن الفئران للمعلمات التالية المدرجة في الجدول 1
   1. تحقق من ظهور الفراء وعادة السلس. إذا ظهر الفراء الفراء تكدرت، وشائك أو منتفخ مما يشير إلى عدم الراحة أو الألم، نقاط منهم 1 أو 2 أو 3.
   2. تحقق من وجود نشاط الماوس.
      ملاحظة: الفئران عادة التنقل بحرية حول القفص كله الأكل، والشرب، وتسلق الجبال، ولكن نشاط الممنوعة أو المقيدة يمكن أن يكون علامة على الألم.
   3. التحقق من مستوى وعيه.
      ملاحظة: الفئران غريبة جداً، وأنها تتحرك عادة حول القفص التحقيق في المناطق المحيطة. غياب أو يمكن أن تشير إلى انخفاض حركة الألم والانزعاج.
   4. فحص العيون.
      ملاحظة: من المتوقع عيون مفتوحة بالكامل في الفئران صحية، ولكن العيون مغلقة جزئيا أو كلياً، وربما مع إفراز، يمكن أن يكون مؤشرا للألم.
   5. تحقق من معدل التنفس.
      ملاحظة: الفئران صحية عادة ما يكون معدل تنفس الطبيعي والسريع، بمعدل انخفاض تنفس يمكن أن يكون مؤشرا على عدم الراحة).
   6. التحقق من جودة التنفس.
      ملاحظة: احتملت في التنفس مع أو بدون يلهث علامة على الألم.

4-الأنسجة العينات لاستخراج الحمض النووي الريبي (الرنا) والتجانس

1. إعداد أنابيب جمع/التجانس: إضافة 1 مل خطوة واحدة كاشف عزل الحمض النووي الريبي لأنابيب 2 مل المعبأة مع مجالات السيراميك 1.4 ملم.
2. نقاط الوقت المناسب (قبل (ح 0) وح 2، ح 4 وح 8 بعد حقن لبس) euthanize الماوس مع جرعة مخدر (إيسوفلوراني) تليها اكسسانجوينيشن والمضي قدما في التشريح.
3. قطع الجلد وطبقة العضلات فضح تجويف البطن مع الأجهزة الداخلية مع زوج من مقص.
4. عناية تشريح الطحال، والكبد، والقولون وتنظيف الأجهزة من الدهون والاحتفاظ بها في برنامج تلفزيوني على الجليد.
5. قطع قطعة صغيرة (حوالي 0.5 سم) من كل جهاز باستخدام مقص أو مشرط.
   ملاحظة: من المهم دائماً أن القطعة من تقريبا نفس الجزء من الجهاز في كل الماوس (نفس فص من الكبد، والدانية أو القاصي جزء من القولون).
6. قريبا الجاف للأنسجة على قطعة من الورق الأنسجة ووضعه في أنبوب جمع/التجانس مع التأكد من أنها هي مغمورة تماما في كاشف عزل الحمض النووي الريبي.
7. مجانسة الأنسجة في الخالطون benchtop عالية السرعة. للأنسجة الرخوة مثل الطحال والكبد والقولون استخدم دورة 1 من التجانس في سرعة 6.00 ل 30 ثانية.
8. احتضان هذه العينات لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
9. بدقة مكان الأنبوبة في النيتروجين السائل لانجذاب تجميد الأنسجة ليستي. تخزين المفاجئة المجمدة في-80 درجة مئوية حتى عزل الحمض النووي الريبي.

5-الجيش الملكي النيبالي الاستخراج من الأنسجة

ملاحظة: تعتبر الكواشف عزل الحمض النووي الريبي، كلوروفورم والكحول كمواد خطرة. القيام باستخراج الحمض النووي الريبي تحت غطاء كيميائية. استخدام مصدقة الكواشف رناسي خالية والمعدات للمحافظة على بيئة خالية من رناسي.

1. فصل المرحلة
   1. ذوبان الجليد الأنسجة المجمدة ليستي على الجليد.
   2. الطرد المركزي العينة على 1,000 ز x لمدة 5 دقائق عند درجة 4 مئوية بيليه جزيئات الأنسجة المتبقية التي يمكن أن يترك.
   3. نقل المادة طافية إلى أنبوب خالية nuclease 1.5 مل جديدة.
   4. إضافة 200 ميليلتر كلوروفورم المثلج كل 1 مل من الحمض النووي الريبي العزلة الكاشف واهتز بشدة باليد ل s 10-15.
   5. احتضان لمدة 2-3 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
   6. أجهزة الطرد المركزي في 12، 000 x ز لمدة 15 دقيقة في 4 درجات مئوية.
      ملاحظة: العينة سوف الآن تحتوي على 3 مراحل: تخفيض كلوروفورم الفينول الأحمر مرحلة، في الطور البيني والعلوي عديم اللون مائي. الجيش الملكي النيبالي موجود في المرحلة المائية العليا.
   7. جمع المرحلة المائية العليا (50% حجم الإجمالي)، ونقل في أنبوب خالية نوكلاس 1.5 مل جديدة.
2. الجيش الملكي النيبالي هطول الأمطار
   1. إضافة 0.5 مل الايزوبروبانول المثلج كل كاشف عزل الحمض النووي الريبي 1 مل وتخلط بلطف بعكس الأنبوب 5-6 مرات.
   2. احتضان لمدة 10-15 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
   3. أجهزة الطرد المركزي في 12,000 س ز لمدة 10 دقائق في 4 درجات مئوية.
      ملاحظة: بيليه الجيش النيبالي الملكي يجب أن تكون مرئية في هذه المرحلة.
3. الغسيل من الحمض النووي الريبي بيليه
   1. إزالة المادة طافية المحتوية على الكحول دون إزعاج بيليه.
   2. أغسل بيليه مع المثلج الإيثانول 75% 1 مل كل 1 مل كاشف عزل الحمض النووي الريبي المستخدمة لتحلل الأولية.
   3. دوامة العينة بإيجاز.
   4. أجهزة الطرد المركزي العينة في ز خ 7,500 (أو 12,000) لمدة 5 دقائق في 4 درجات مئوية.
4. حل الجيش الملكي النيبالي
   1. إزالة تماما الإيثانول في المادة طافية دون إزعاج بيليه.
   2. اترك فتح الأنبوب تحت غطاء محرك السيارة الكيميائية لمدة 3-5 دقيقة أيردري بيليه الجيش الملكي النيبالي في درجة حرارة الغرفة (عدم الإفراط الجاف كما في تلك الحالة سيكون من الصعب حل الجيش الملكي النيبالي).
   3. حل بيليه الجيش الملكي النيبالي في 20-50 ميليلتر خالية نوكلاس المياه التي بيبيتينج بعناية صعودا وهبوطاً.
   4. احتضان العينة في 55 درجة مئوية لمدة 10-15 دقيقة لمواصلة تحسين حل الجيش الملكي النيبالي.
      ملاحظة: في هذه المرحلة، يمكن تخزين الحمض النووي الريبي في-80 درجة مئوية حتى إجراء مزيد من التحليل.

6-هضم الحمض النووي الباقية

1. قياس تركيز الحمض النووي الريبي مع جهاز المطياف الضوئي قبل بيبيتينج قاسمة (2 ميليلتر) إلى جهاز المطياف الضوئي وضبط لتركيز الموصى بها.
2. تبدأ عملية الهضم من تلويث الحمض النووي مع ماكس. الجيش الملكي النيبالي 10 ميكروغرام في المياه خالية من نوكلياسي 50 ميليلتر.
3. إضافة 0.1 حجم 10 x الدناز أنا المخزن المؤقت وردناسي 1 ميليلتر أنا كل عينة والمزيج بلطف بيبيتينج أعلى وأسفل.
4. احتضان في 37 درجة مئوية لمدة 20-30 دقيقة.
5. دوامة "الدناز المنظمة الكاشف" وإضافة 0.1 حجم العينة خلط جيدا مع الماصة.
6. احتضان لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة خلط أحياناً باليد.
7. الطرد المركزي في 10,000 ز x 1.5 دقيقة.
8. نقل المادة طافية تتضمن خالية من الحمض النووي الريبي في أنبوب نوكلاس الحرة الجديدة.
9. قياس تركيز الحمض النووي الريبي والجودة بجهاز المطياف الضوئي.

7-عكس النسخ

1. استخدام أدوات نسخ عكسي (RT) كدنا حمض الخلوي الصبغي متاحة تجارياً للنسخ العكسي.
   ملاحظة: هنا، ما يصل إلى 2 ميكروغرام من الجيش الملكي النيبالي يمكن عكس يدون.
2. حساب الحجم، الذي يحتوي على 2 ميكروغرام الجيش الملكي النيبالي. "الماصة؛" 2 ميكروغرام الجيش الملكي النيبالي في أنبوب بكر جديدة.
3. إضافة المياه خالية من نوكلاس للعينة في أنبوب PCR إلى وحدة التخزين النهائي من 10 ميليلتر.
4. إعداد 2 x ميكس ماجستير بخلط المكونات التالية المدرجة في الجدول 2
5. إضافة 10 ميليلتر 2 x ميكس الرئيسية إلى 10 ميليلتر الحمض النووي الريبي للحصول على 1 x ميكس ماجستير في إجمالي حجم 20 ميليلتر.
6. إغلاق أنبوب بوليميريز سلسلة من ردود الفعل (الاسترداد) وتدور أسفل العينة بإيجاز.
7. وضع العينات في "ثيرموسيكلير بكر" وتعيين الإعدادات المسرودة في الجدول 3.
8. تخزين كدنا ولدت في-20 درجة مئوية لمزيد من التحليل.

8-الكمية بكر (قبكر)

1. القيام برد فعل قبكر مع مجموعة متاحة تجارياً.
2. الذاتي تصميم واختبار الإشعال التي تغطي إنترون، قبل الاستخدام، مع تركيزات مختلفة من كدنا القالب. تحليل فعالية التمهيدي عن طريق إنشاء منحنى قياسي واستخدام كبسولة تفجير بكفاءة عالية ومنحنيات ذوبان الصحيح.
   ملاحظة: يتم سرد تسلسل الإشعال المستخدمة في هذه التجربة في الجدول 2.
3. إعداد سلسلة من ردود الفعل (qPCR) البلمرة الكمية في لوحة 384-جيدا مع رد فعل الإعداد المبينة في الجدول 4.
4. الاحتفاظ بجميع الحلول ولوحة على الجليد باستخدام رقائق الألومنيوم لمنع لوحة البلل عند إعداد الخليط رد فعل.
5. أداء جميع ردود الفعل في تريبليكاتيس.
6. القيام برد فعل بكر على ثيرموسيكلير استخدام الإعداد المدرجة في الجدول 5.
7. حساب متوسط قيمة الأشعة المقطعية لجميع ردود فعل تريبليكاتيس. تطبيع جميع الجينات المستهدفة إلى مستوى التعبير جليسيرينيلدهيدي-3-الفوسفات-نازعة (جابده) الجينات التدبير المنزلي بحساب 2^(-ΔCt).
   ملاحظة: جميع الهدف الجينات مع الأشعة المقطعية متوسط > 35 كانت تعتبر تحت حد الكشف.

لمحاكاة الآثار للمضيف بعد دخول البكتيريا أو المنتجات المشتقة من البكتيريا التي تحدث بعد خرق جدار الأمعاء، لبس تم حقن الفئران C57Bl/6 في جرعة المقاسة (2 ميكروغرام/غرام وزن الجسم). رصد كل واحدة بالماوس وسجل لحدوث اندوتوكسيميا مع المعلمات المسرودة في الورقة إلى النتيجة التي تشمل ظهور الفئران، والنشاط للحيوانات، والشرط من العيون، ومعدل التنفس والجودة (الجدول 1) . الحيوانات تظهر عليهم علامات سريرية للمرض الذي بلغ ذروته ح 6 إلى 10 بعد الحقن لبس واسترجاعها، في غضون 24 ساعة (الشكل 1). وكانت الفئران الفردية يضحي ح 2، ح 4 وح 8 بعد الحقن لبس. وجمعت قطع الأنسجة من الطحال والكبد والقولون. وكان الجيش الملكي النيبالي معزولة من هذه الأجهزة وعكس نسخها إلى كدنا. كدنا كان استخدامه كقالب ل qPCR لتحديد مستويات التعبير Il1b (الشكل 2) Il6 (الشكل 2A)، تنفا (الشكل 2) و Il10 (الشكل 2D) مع الإشعال المستخدمة قبكر المدرجة في الجدول 6. التعبير عن Il6 ح 2 وصل إلى ذروته بعد الحقن في الطحال والقولون، و 4 ح بعد الحقن في الكبد. التعبير عن Il1b، تنفا، و Il10 ح 4 وصل إلى ذروته بعد الحقن في الطحال والكبد، والقولون. ضمن 8 ح بعد الحقن، والتعبير عن Il6، Il1b، تنفا، و Il10 عاد إلى مستويات خط الأساس.

رقم 1: حقن لبس (2 ميكروغرام/غرام وزن الجسم) الناجم عن علامات سريرية من اندوتوكسيميا في C57Bl/6mice- بعد حقن 2 ميكروغرام/غرام من وزن الجسم للبس، ورصدت الفئران الفردية وفقا لدرجة المرض المعروضة في الجدول 1 الذي يتضمن المظهر والنشاط للحيوانات، وفتح عيونهم ومعدل التنفس ونوعية كل ح 2 ح 12 والمعونة لأجل التجارة ح 24 أية حقن لبس. درجة المرض تم مسح المحور (ص) إلى وقت كل منها محور (س). يعني ± يرد SD للفئران 4-5 لكل نقطة في الوقت الواحد. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

رقم 2: لبس الحقن (2 ميكروغرام/غرام وزن الجسم) الحث على التعبير عن السيتوكينات الموالية التحريضية في الفئران C57Bl/6- تم حقن الفئران مع 2 ميكروغرام/غرام من وزن الجسم للبس، ومستويات التعبير Il6 (A)، Il1b (ب)، تنفا (ج) (د) من Il10 تم تحليلها بواسطة qPCR في الطحال والكبد والقولون في الوقت المشار إليه نقاط بعد الحقن. تم تطبيع جميع مستويات التعبير سيتوكين للتعبير عن جابده. يعني ± يرد SD للفئران 4-5 لكل نقطة في الوقت الواحد. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

الجدول 1: ورقة نقاط المرض لرصد C57Bl/6 في الفئران بعد الحقن بلبس- المعلمات التي يتم مراقبتها بعد حقن لبس. ورصدت الحيوانات كل ح 2 بعد الحقن لمدة 12 ساعة، وقدمت عشرات لكل معلمة الفردية المدرجة في الجدول. والنتيجة النهائية لكل الحيوانات يمثل مجموع كل الحسابات الفردية. وهذا مقتبس من مرجع24. اضغط هنا لتحميل هذا الملف.

الجدول 2: الكواشف المستخدمة لإعداد مزيج الرئيسي للنسخ العكسي.

الجدول 3: ثيرموسيكلير الإعدادات المستخدمة للنسخ العكسي.

الجدول 4: وصف لتفاعل PCR.

الجدول 5: ثيرموسيكلير الإعدادات المستخدمة لبكر.

الجدول 6: الإشعال المستخدمة في رد فعل qPCR. تسلسل الإشعال المستخدمة ل qPCR للكشف عن الماوس السيتوكينات والجينات التدبير المنزلي جابده.

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.