يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

داخل الجمجمة سوباراتشنويدال الطريق للعدوى "أدوار التحقيق" للأغشية الحيوية العقدية الخنزيرية في التهاب السحايا في "نموذج العدوى الماوس"

6.6K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/57658

⸱

يوليو 1, 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural University, 2Key Lab of Animal Bacteriology, Ministry of Agriculture, 3OIE Reference Lab for Swine Streptococcosis, 4School of Medicine, Tsinghua University, 5Jiangsu Co-innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses

في هذه المقالة

ملخص

هنا، يمكننا وصف مسار العدوى في الفئران لدراسة أدوار للأغشية الحيوية في التهاب السحايا العقدية الخنزيرية سوباراتشنويدال داخل الجمجمة. هذا النموذج الإصابة أيضا مناسبة لدراسة الآلية المرضية لالتهاب السحايا الجرثومي الأخرى ونجاعة أدوية جديدة لمكافحة التهاب السحايا الجرثومي.

الملخص

هو العقدية الخنزيرية الممرضات بكتيرية رئيسية الخنازير في جميع أنحاء العالم ليس فقط، بل أيضا وكيلاً الحيوانية ناشئة. في البشر والخنازير، التهاب السحايا مظهراً رئيسيا للالتهابات الخنزيرية . نموذج عدوى مناسبة أداة أساسية فهم آليات الأمراض الناجمة عن العوامل الممرضة. وقد وضعت عدة طرق للعدوى في الفئران لدراسة الآلية المرضية للعدوى الخنزيرية . ومع ذلك، طرق العدوى داخل وداخل الآنف، وعن طريق الحقن الوريدي ليست مناسبة لدراسة دور كل من مكونات السطح الخنزيرية في التهاب السحايا مباشرة في الدماغ، مثل المصفوفة خارج الخلية من الأغشية الحيوية. على الرغم من أن التطعيم إينتراسيستيرنال قد استخدمت للإصابة الخنزيرية ، لا قد وصف موقع الحقن دقيقة. هنا، وصفت الطريق سوباراتشنويدال داخل الجمجمة للإصابة في طراز ماوس للتحقيق في دور كل من الأغشية الحيوية في التهاب السحايا الخنزيرية . مباشرة تم حقن الخنزيرية العوالق الخلايا أو الخلايا الدولة بيوفيلم في الفضاء تحت العنكبوتية من الفئران عن طريق الحقن يقع روسترال من بريجما 3.5 ملم. تحليل نسيجية وزيادة التعبير مرناً من TLR2 والسيتوكينات من أنسجة المخ من الفئران حقن الخلايا بيوفيلم الدولة بينت بوضوح أن بيوفيلم الخنزيرية يلعب أدوار نهائية في التهاب السحايا الخنزيرية . هذا الطريق للعدوى ومزايا واضحة عبر طرق أخرى للعدوى، مما يتيح دراسة تفاعل البكتيريا المضيفة. وعلاوة على ذلك، فهو يسمح تأثير عناصر جرثومية على الاستجابات المناعية المضيف مباشرة في الدماغ لتقييم، ويحاكي مدخل البكتيرية في الجهاز العصبي المركزي. ويمكن تمديد هذا الطريق للعدوى للتحقيق وآليات لالتهاب السحايا الناجم عن بكتيريا أخرى. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن أيضا استخدامه لاختبار فعالية العقاقير المضادة لالتهاب السحايا الجرثومي.

المقدمة

العقدية الخنزيرية (الخنزيرية) هو الممرضات بكتيرية رئيسية الخنازير في جميع أنحاء العالم، مما تسبب في الأمراض الحادة بما في ذلك التهاب السحايا والالتهاب الرئوي وتسمم الدم، والتهاب الشغاف والتهاب المفاصل1. وأيضا عامل الحيوانية ناشئة. وحتى الآن، أفيد أن تسعة من اللقاح يمكن أن يسبب عدوى في البشر، بما في ذلك اللقاح 2 و 4، 5، 9، 14، 16، 21، 24 و 312،،من34. في البشر والخنازير، التهاب السحايا واحد من علامات سريرية رئيسية التهابات الخنزيرية . الخنزيرية في فيتنام وتايلاند، السبب الرئيسي لالتهاب السحايا في البالغين5. الأغشية الحيوية الميكروبية هي الكائنات المجهرية التي تنضم إلى بعضها البعض والتي تتركز في واجهة؛ أنها ضرورية لضراوة البكتيرية، والبقاء على قيد الحياة في بيئات متنوعة، ومقاومة المضادات الحيوية5. الأغشية الحيوية عادة محاطة مصفوفة خارج الخلية تحتوي عموما على السكريات والبروتينات والحمض النووي6. هذه الأخيرة غير قادرة على الحصول على استجابات المضيف التحريضية و إنتاج سيتوكين7. تشكيل بيوفيلم أبلغ أن تشارك في التهاب السحايا العقدية في الدراسات السابقة. الأغشية الحيوية المساهمة في التهاب السحايا العقدية اجالاكتيا في نموذج أسماك البلطي وتشكيل بيوفيلم تم كشف داخل أنسجة المخ وحولها سحائي السطوح في فيفو عن طريق التلقيح داخل البطن8. أثناء التهاب السحايا، العقدية الرئوية في دولة مثل بيوفيلم والبكتيريا في هذه دولة بيوفيلم كانت أكثر فعالية في حمل التهاب السحايا في نموذج9إصابة بماوس. وبالإضافة إلى ذلك، في أعمالنا السابقة دراسة، تسهم الدولة بيوفيلم المرتبطة الخنزيرية في الدماغ الماوس ضراوة البكتيريا ب تحليل البقاء على قيد الحياة10. ومع ذلك، أدلة مباشرة لمشاركة بيوفيلم في التهاب السحايا الخنزيرية تتطلب مزيدا من التحقيق.

وقد وضعت نماذج حيوانية للإصابة الخنزيرية في الفئران باستخدام داخل (القائمة)11،12من داخل الآنف (i.n.) وفي الوريد (رابعا)13وطرق العدوى14، إينتراسيستيرنال (جيم) 15 , 16-ومع ذلك، الطرق القائمة، و i.n.، ورابعاً للعدوى ليست مناسبة لدراسة دور كل من مكونات السطح الخنزيرية في التهاب السحايا في الدماغ مباشرة. وتشمل هذه المصفوفة خارج الخلية من الأغشية الحيوية. على الرغم من أن تم استخدام التطعيم جيم للإصابة الخنزيرية ، قد وصف موقع الحقن دقيقة لا في هذه الورقات. وفي المقابل، وصفت إحداثيات الموقع حقن التطعيم داخل الجمجمة سوباراتشنويدال ستيريوتاكسيك وضوح في دراسة سابقة17. هذا يسمح بالتعرف السهل نقطة التطعيم والبروتوكول التجريبي التبسيط أكثر. وباﻹضافة إلى ذلك، يحاكي الطريق سوباراتشنويدال داخل الجمجمة للعدوى البكتيرية مدخل في الجهاز العصبي المركزي من الجيوب الأنفية أو الإذن الوسطى17، والعلاقة بين الإذن الوسطى والتهاب السحايا الناجم عن الخنزيرية وقد تجلت مادسن وآخرون18. وعلاوة على ذلك، بتطبيق التوجيه سوباراتشنويدال داخل الجمجمة للعدوى في الفئران، لقد أظهرنا أن الخنزيرية الصغيرة رنا rss04 يسهم في التهاب السحايا في أعمالنا السابقة دراسة10.

في هذه الدراسة، استخدمت الطريق سوباراتشنويدال داخل الجمجمة للعدوى في الفئران للتحقيق في دور كل من الأغشية الحيوية في التهاب السحايا الخنزيرية . كانوا مصابين الفئران العوالق الخلايا أو الخلايا الدولة بيوفيلم من الخنزيرية في هذا الطريق للعدوى. تحليل نسيجية وزيادة التعبير مرناً TLR2 والسيتوكينات من أنسجة المخ الفئران حقن الخلايا بيوفيلم الدولة بينت بوضوح أن بيوفيلم الخنزيرية يسهمان في التهاب السحايا.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

ووافقت في مختبر الحيوان رصد اللجنة لمقاطعة جيانغسو "، الصين" تجارب العدوى بالماوس ثم أداؤها في الجامعة "مختبر الحيوان مركز نانجينغ الزراعية" (رقم تصريح: سيكسك (سو) 2017-0007).

1-إعداد البكتيريا

ملاحظة: السويسية 2 النمط المصلي المسيطر ظهرت سلالة P1/7 كان معزولاً عن خنزير مريضة بالتهاب السحايا19. سلالة P1/7 كان يزرع في مرق تود هيويت (THB، صيغة للتر الواحد من THB: "ضخ القلب"، ز 3.1؛ نيوبيبتوني، ز 20.0 سكر العنب، ز 2.0؛ وكلوريد الصوديوم، ز 2.0؛ وثنائي فوسفات، ز 0.4؛ كربونات الصوديوم، 2.5 g) ومطلي على هيويت تود أجار (ثا، صيغة للتر الواحد من ثا: ضخ القلب، ز 3.1؛ نيوبيبتوني، ز 20.0؛ سكر العنب، ز 2.0؛ كلوريد الصوديوم، ز 2.0؛ ثنائي فوسفات، ز 0.4؛ كربونات الصوديوم، 2.5 g؛ أجار، ز 15.0) في شركة 37 درجة مئوية و 5%2.

  1. مجموعة من سلالة الخلايا العوالق P1/7
    1. جمع 5 مل خلايا العوالق من الثقافة سجل منتصف المرحلة (OD600= 0.6) والطرد المركزي لمدة 3 دقائق في 8000 × ز، ويغسل 3 مرات مع برنامج تلفزيوني.
    2. ريسوسبيند الخلايا مع 5 مل والغليسيرول 25% في THB، الكوة في أنابيب 5، ومن ثم تخزين في-80 درجة مئوية.
  2. مجموعة من سلالة الخلايا الدولة بيوفيلم P1/7
    1. أخذ 20 مل ثقافة بين عشية وضحاها، وإضافة إلى 180 مل THB جديدة؛ تقسيم ثقافة المخفف 10 جولة الثقافة لوحات على قدم المساواة، ومن ثم وضع اللوحات في حاضنة في 37 درجة مئوية في 5% CO2 ح 24.
    2. وبعد الحضانة، يهز لوحة بلطف ريسوسبيند البكتيريا التي لم تنضم إلى اللوحة ومن ثم تجاهل المادة طافية بتطلع.
      ملاحظة: اهتزاز اللوحة بلطف وتجنب ريسوسبيندينج الرواسب.
    3. إضافة 5 مل من برنامج تلفزيوني حصاد بيوفيلم الدولة الخلايا وريسوسبيند الرواسب تماما ثم نقل العينة إلى أنبوب جديد.
    4. Sonicate الخلايا بيوفيلم الدولة من الخطوة الأخيرة مع المعلمات التالية: 60 ث، دورات 4، 5 s s 10 وعلى الخروج.
    5. الطرد المركزي لمدة 3 دقائق في 8000 × ز وتخزين المادة طافية في-80 درجة مئوية.
      ملاحظة: قد تحتوي المادة طافية على مكونات بيوفيلم ويمكن استخدامه على ريسوسبيند البكتيريا بيوفيلم قبل الإصابة كما هو موضح في التجارب الحيوانية (الخطوة 3).
    6. ريسوسبيند الرواسب مع 10 مل والغليسيرول 25% في THB ومن ثم تخزين الخلايا بيوفيلم الدولة في-80 درجة مئوية.

2-المسح تحليل المجهر الإلكتروني (SEM)

  1. إصلاح الخلايا الدولة بيوفيلم التي تم جمعها والعوالق الخلايا باستخدام بارافورمالدهيد 4% ح 12-24 في 4 درجات مئوية.
  2. شطف العينات بسرعة مع الماء المقطر ويذوي في نماذج التتابع مع تركيز متزايد من الإيثانول (25% و 50%، 70%، 90% و 100%) لمدة 30 دقيقة في كل حل.
  3. الالتزام العينات المجففة للمعادن أصحاب مع الشريط على الوجهين وأخيراً معطف لهم في مبخر مع الذهب والحراسة.
  4. مراقبة العينات مجهر الإلكتروني المسح الضوئي استخدام المعلمات التالية: ات (التوتر العالي إضافي) = 10 كيلو فولت؛ (العمل عن بعد) WD = 7.0 أو 8.0 ملم؛ التكبير = 5000 ×؛ إشارة A = SE1.

3-الحيوانات والتجارب

  1. استخدام منتدى جنوب المحيط الهادئ في الأسبوع من 6-العمر الإناث بالب/ج الفئران في هذه الدراسة. تصيب كل الفئران من خلال مسار الإصابة الحقن التي يقع 3.5 مم روسترال من بريجما سوباراتشنويدال داخل الجمجمة. ووصفت ستيريوتاكسيك إحداثيات موقع الحقن وضوح et alتشيافوليني17.
    1. لتحليل نسيجية، تصيب مجموعتين من الفئران (5 الفئران في كل مجموعة) باستخدام خلايا العوالق أو بيوفيلم الدولة الخلايا في جرعة مقدارها 3 × 107 مستعمرة تشكيل وحدات (زيمبابوي)، وتم حقن الفئران 5 آخر مع برنامج تلفزيوني كعنصر تحكم.
    2. باستخدام خلايا العوالق أو بيوفيلم الخلايا الدولة عند جرعة مقدارها 3 × 107 زيمبابوي للكشف عن التعبير مرناً TLR2 والسيتوكينات في الدماغ، وتصيب اثنين مجموعات إضافية من الفئران (6 الفئران في كل مجموعة).
    3. تحديد العدد من البكتيريا قادرة على البقاء بطلاء تخفيف المسلسل إلى ثا.
    4. Euthanize جميع الفئران في ح 12 الإصابة بعد إجراء مزيد من البحوث.
      ملاحظة: يجب إزالة الجلسرين في وسيط الأوراق المالية قبل الإصابة. تغسل العوالق الخلايا والخلايا الدولة بيوفيلم شُفي-80 درجة مئوية 3 مرات مع برنامج تلفزيوني. ثم حراكه مع برنامج تلفزيوني خلايا العوالق والمخفف للجرعة المناسبة للعدوى؛ بيوفيلم الدولة الخلايا حراكه مع المادة طافية المخزنة (من الخطوة 1.2.5) والمخفف للجرعة المناسبة للإصابة. لا ينبغي أن يكون حجم الإصابة بأكثر من 50 ميليلتر.
  2. الكشف عن التعبير مرناً TLR2 والسيتوكينات في أنسجة المخ
    1. استخراج مجموع الجيش الملكي النيبالي من أنسجة المخ باستخدام مجموعة أدوات استخراج الحمض النووي الريبي.
      1. لكل الماوس، استخدام أنسجة المخ كله لاستخراج الحمض النووي الريبي. تقسيم أنسجة المخ كله إلى أنابيب 5. يستغرق فترة تصل إلى 100 مغ أنسجة المخ وإضافة 1 مل من محلول تحلل لكل أنبوبة تحتوي على مصفوفة ليسينج التي قدمتها عدة.
      2. عملية الأنبوب في الخالطون ل 40 ثانية عند إعداد 6.0، ومن ثم الطرد المركزي الأنبوب في 12000 × ز و 4 درجة مئوية لمدة 5 دقائق.
      3. بعد الطرد المركزي، نقل في المرحلة العليا لأنبوب ميكروسينتريفوجي جديدة.
      4. احتضان العينة المحولة لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة؛ إضافة 300 ميليلتر من كلوروفورم، دوامة ل 10 ق، واحتضان ثم لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
      5. الطرد المركزي الأنبوب في 12000 × ز و 4 درجة مئوية للحد الأدنى 5 نقل في المرحلة العليا لأنبوب جديد.
      6. إضافة 500 ميليلتر من الإيثانول المطلقة الباردة إلى الأنبوب، قبل عكس ذلك 5 مرات ومن ثم تخزين العينة في-20 درجة مئوية على الأقل 1 ح.
      7. الطرد المركزي الأنبوب في 12000 × ز و 4 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة وإزالة المادة طافية. أغسل بيليه مع 500 ميليلتر الباردة الإيثانول 75% في خالية رناسي ح2o.
      8. إزالة الإيثانول، الهواء الجاف بيليه لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة، وريسوسبيند الجيش الملكي النيبالي في 100 ميليلتر خالية رناسي ح2o.
      9. احتضان الجيش الملكي النيبالي لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة وتحديد تركيز الجيش الملكي النيبالي باستخدام بيواناليزير من الجيش الملكي النيبالي.
    2. إجراء توليف كدنا، بما في ذلك القضاء على الحمض النووي (جدنا)، باستخدام ثيرموسيكلير مع مجموعة كاشف نسخ عكسي (RT).
      1. إضافة 1 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي ميليلتر أنبوب 2 تحتوي على x gDNA 5 القضاء على المخزن المؤقت، 1 ميليلتر من إنزيم القضاء على جدنا وخالية من رناسي ح2س حتى حجم يصل إلى 10 ميليلتر. احتضانها لمدة 2 دقيقة في 42 درجة مئوية.
      2. إضافة 10 ميليلتر من مزيج الرئيسي (1 ميليلتر من إنزيم RT المزيج الأول، 1 ميليلتر من "الرايت التمهيدي مزيج"، ميليلتر 4 من 5 × 2 المخزن المؤقت، وميليلتر 4 خالية رناسي ح2س) في حل رد فعل آخر خطوة وثم تخلط بلطف. الشروع فورا برد فعل RT: 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة ومن ثم 85 درجة مئوية 5 s.
      3. القيام التحليل الكمي لبكر (RT-qPCR) في الوقت الحقيقي باستخدام جهاز PCR الوقت الحقيقي مع مجموعة سيبر RT-قبكر. إضافة 10 ميليلتر من 2 × الإنزيم، 0.8 ميليلتر من التمهيدي إلى الأمام، ميليلتر 0.8 لعكس التمهيدي، ميليلتر 0.4 50 x "الثاني صبغ إشارة روكس"، 2 ميليلتر من قالب كدنا، وخالية من رناسي ح2س حتى إجمالي حجم 20 ميليلتر.
      4. تشغيل كل عينة في ثلاث نسخ باستخدام المعلمات الحرارية التالية: 30 s في 94 درجة مئوية، تليها دورات 40 من 5 s عند 95 درجة مئوية، و 34 ثانية في 60 درجة مئوية، مع مرحلة نهائية من 15 s عند 95 درجة مئوية، 1 دقيقة في 60 درجة مئوية ، و 15 ثانية عند 95 درجة مئوية. كبسولة تفجير ل RT qPCR مدرجة في الجدول 1. التدبير المنزلي الجينات ب2م و 18s الرنا الريباسي واستخدمت الضوابط الداخلية.
    3. حساب التغيير إضعاف النسبي على أساس الأسلوب 2-ΔΔCt .
  3. مراقبة الأقسام النسيجي
    1. بعد التثبيت 24 ساعة مع الفورمالين 10%، إعادة بناء أنسجة المخ الثابتة إلى أحجام مناسبة لقطع الأنسجة في 2-3 مم.
    2. وضع قطع الأنسجة في كاسيت تضمين وتزج في حل مثبت جديد للجفاف مع dehydrator فراغ تلقائي.
    3. إخراج الأنسجة الثابتة ويذوي من التتابع في زيادة تركيزات إيثانول (70% و 80%، 95%، 95% و 100%) لمدة 30 دقيقة في كل حل.
    4. ترانسبارينتيزي العينة مع زيلين نفط لمدة 15 دقيقة، تراجع من البارافين السائل عند 60 درجة مئوية لمدة 90 دقيقة، ومن ثم تضمين باستخدام جهاز تضمين.
    5. قطع الأنسجة كتلة المضمنة البارافين إلى شرائح 3 ميكرومتر وتجانب الشريحة على المياه في 45 درجة مئوية ثم الجافة في الهواء.
    6. احتضان باب 3 ح عند 60 درجة مئوية ووصمة عار haematoxylin وويوزين (أنه) باستخدام أسلوب، وختم ذلك بالصمغ محايدة.
    7. مراقبة تغييرات نسيجية في الدماغ مع مجهر ضوئي. واستخدم نظام درجات أربع نقاط لتقييم التغييرات النسيجي. استخدام إجراء اختبار مزاوج تي للتحليل الإحصائي.
      الازدحام/النزف: غائبا، ونقاط 0؛ مساحة صغيرة من الازدحام المحورية/النزيف، نقاط 1؛ مساحة كبيرة من الازدحام/النزف المحورية، أو مواقع متعددة لمساحة صغيرة من الازدحام المحورية/النزيف، نقاط 2؛ ما يصل إلى ثلاثة مواقع للازدحام تنسيق كبير/النزيف، نقاط 3؛ نزع فتيل احتقان/النزيف، 4 نقاط.
      نخر: غائبا، ونقاط 0؛ نخر المحورية، نقاط 1؛ منتشر الحدوث من 1-10 نخرية الخلايا، ونقاط 2؛ نقاط بؤر نخر المتلاقية، 3؛ نخر المتلاقية واسعة النطاق، 4 نقاط.
      تسلل خلية التحريضية: غائبا، ونقاط 0؛ نقاط قليلة وتنسيق عمليات التسلل، 1؛ نقاط تسلل البؤر أو تسلل مع تشكيل المجاميع، 2؛ ما يصل إلى ثلاثة مجاميع، نقاط 3؛ وأكثر من أربعة مجاميع، نقاط 4.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تم إجراء تحليل وزارة شؤون المرأة لدراسة تشكيل بيوفيلم تحت ظروف تجريبية. كما هو مبين في الشكل 1، وهناك اختلاف كبير في تشكيل بيوفيلم بين الخلايا العوالق (الشكل 1أ) والدولة بيوفيلم الخلايا (الشكل 1ب). وأظهر تحليل وزارة شؤون المرأة أن البكتيريا بيوفيلم في كتل وطبقات متعددة، وأنهم كانوا المغطى في المصفوفة خارج الخلية، بينما البكتيريا العوالق كانت أقل بكثير من الكثافة ومشت...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

مسار سوباراتشنويدال داخل الجمجمة الإصابة الموصوفة هنا مزايا واضحة عبر طرق أخرى للعدوى. أنها تسمح للمحققين بدراسة تفاعل البكتيريا المضيفة وتأثير عناصر جرثومية على الاستجابات المناعية المضيف مباشرة في الدماغ، والتي تحاكي مدخل البكتيرية في الجهاز العصبي المركزي. وهكذا، يمكن توسيع هذا الطريق للعدوى للتحقيق وآليات لالتهاب السحايا الناجم عن بكتيريا أخرى. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن أيضا استخدامه لاختبار فعالية العقاقير المضادة لالتهاب السحايا الجرثومي.

وللحصول على نتائج جيدة باستخدام هذا النموذج، تكون ا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

شكر وتقدير

أيد هذا العمل منح من البحوث الرئيسية الوطنية وبرنامج التنمية في الصين [2017YFD0500102]؛ المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية من الصين [31572544]؛ الدولة الرئيسية مختبر بيولوجيا مسببا البيطرية [SKLVEB2016KFKT005]؛ الزراعة شانغهاي تطبق تكنولوجيا تطوير البرنامج، الصين [G2016060201].

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
مرق تود هيويت (THB)DF0492078 Becton و Dickinson and Companyقم بإذابة 30 جم من المسحوق في 1 لتر من الماء النقي. الأوتوكلاف عند 121 درجة ؛ لمدة 15 دقيقة.
أجارDSBIO16C0050قم بإذابة 15 جم من المسحوق في 1 لتر من THB. الأوتوكلاف عند 121 درجة ؛ لمدة 15 دقيقة.
نظام تنقية المياه المرجعي Milli-QMerck KGaAZ00QSVCUSبدون Dnase / Rnase
NaClTianjin Kemiou Chemical Reagent Co.، Ltd10019318يذوب 8 جم كلوريد الصوديوم ، 0.2 جم KCl ، 1.42 جم Na2HPO3 ، 0.27 جم KH2PO4 في 1 لتر من الماء النقي. الأوتوكلاف عند 121 درجة ؛ لمدة 15 دقيقة. استخدم KOH لضبط الرقم الهيدروجيني إلى 7.4.
Na2HPO3Xilong Scientific Co.، Ltd9009012-01-09تذوب 8 جم كلوريد الصوديوم ، 0.2 جم كلوريد الصوديوم ، 1.42 جم Na2HPO3 ، 0.27 جم KH2PO4 في 1 لتر من الماء النقي. الأوتوكلاف عند 121 درجة ؛ لمدة 15 دقيقة. استخدم KOH لضبط الرقم الهيدروجيني إلى 7.4.
KClXilong Scientific Co.، Ltd9009017-01-09تذوب 8 جم كلوريد الصوديوم ، 0.2 جم KCl ، 1.42 جم Na2HPO3 ، 0.27 جم KH2PO4 في 1 لتر من الماء النقي. الأوتوكلاف عند 121 درجة ؛ لمدة 15 دقيقة. استخدم KOH لضبط الرقم الهيدروجيني إلى 7.4.
KH2PO4Xilong Scientific Co.، Ltd9009019-01-09تذوب 8 جم كلوريد الصوديوم ، 0.2 جم كلوريد الصوديوم ، 1.42 جم Na2HPO3 ، 0.27 جم KH2PO4 في 1 لتر من الماء النقي. الأوتوكلاف عند 121 درجة ؛ لمدة 15 دقيقة. استخدم KOH لضبط الرقم الهيدروجيني إلى 7.4.
KOHXilong Scientific Co.، Ltd9009014-01-09تذوب 8 جم كلوريد الصوديوم ، 0.2 جم كلوريد الصوديوم ، 1.42 جم Na2HPO3 ، 0.27 جم KH2PO4 في 1 لتر من الماء النقي. الأوتوكلاف عند 121 درجة ؛ لمدة 15 دقيقة. استخدم KOH لضبط الرقم الهيدروجيني إلى 7.4.
الجلسرينSionpharm Chemical Reagent Co. ، Ltd10010618مخفف بحجم متساو من الماء النقي ، الأوتوكلاف عند 121 درجة ؛ لمدة 15 دقيقة
4٪ بارافورمالديهايدSionpharm Chemical Reagent Co. ، Ltd80096675
25٪ GlutaraldehydeSionpharm Chemical Reagent Co. ، Ltd3009243610 أضعاف مخففة بالماء النقي للتثبيت.
الإيثانولسيونفارم الكاشف الكيميائي المحدودة10009218
الكلوروفورمسيونفارم الكاشف الكيميائي المحدودة10006818
SpctrophotometreDeNovix Inc.DS-11 +
كسارة الخلايا بالموجات فوق الصوتيةنينغبو Scientz التكنولوجيا الحيوية المحدودةJY96-IIN
الطرد المركزيهيتاشي كوكي المحدودةCT15RE
ثلاجةAucma Co.، LtdDW-86L500
مجهر إلكتروني المسحZeissEVO-LS10
FastRNA Pro Green KitMP Biomedicals# 6045-050
FastPrep-24 أداةMP Biomedicals116005500
أداة ل PCRSensoQuest GmbH1124310110
QuantStudio 6 FlexThermo Fisher Scientific4485689
SYBR Premix Ex Taq IITakara Biomedical Technology (Beijing) Co.، Ltdمجموعة كاشف RR820A
PrimeScript RT مع gDNA EraserTakara Biomedical Technology (Beijing) Co.، LtdRR047A
معالج الأنسجة المغلقLeica Biosystems Nussloch GmbHASP200S
تضمين البارافين الساخن LeicaBiosystems Nussloch GmbHEG1150H
دوارة شبه آلية MicrotomeLeica Biosystems Nussloch GmbHRM2245
حمام مائي لأقسام البارافينلايكا Biosystems Nussloch GmbHHI1210
Autostainer XLLeica Biosystems Nussloch GmbHST5010
Agilent 2100Agilent TechnologiesG2939A
مجهر بصريأوليمبوسBX51
بالكامل وحدة

المراجع

  1. Gottschalk, M., Xu, J., Calzas, C., Segura, M. Streptococcus suis: a new emerging or an old neglected zoonotic pathogen? Future Microbiology. 5, 371-391 (2010).
  2. Goyette-Desjardins, G., Auger, J. P., Xu, J., Segura, M., Gottschalk, M. Streptococcus suis, an important pig pathogen and emerging zoonotic agent-an update on the worldwide distribution based on serotyping and sequence typing. Emerging Microbes & Infections. 3 (6), e45(2014).
  3. Kerdsin, A., et al. Emergence of Streptococcus suis serotype 9 infection in humans. Journal of Microbiology, Immunology and Infection. 50 (4), 545-546 (2017).
  4. Hatrongjit, R., et al. First human case report of sepsis due to infection with Streptococcus suis serotype 31 in Thailand. BMC Infect Diseases. 15, 392(2015).
  5. Fittipaldi, N., Segura, M., Grenier, D., Gottschalk, M. Virulence factors involved in the pathogenesis of the infection caused by the swine pathogen and zoonotic agent Streptococcus suis. Future Microbiology. 7 (2), 259-279 (2012).
  6. Hall-Stoodley, L., Costerton, J. W., Stoodley, P. Bacterial biofilms: from the natural environment to infectious diseases. Nature Reviews Microbiology. 2 (2), 95-108 (2004).
  7. Fuxman Bass, J. I., et al. Extracellular DNA: a major proinflammatory component of Pseudomonas aeruginosa biofilms. Journal of Immunology. 184 (11), 6386-6395 (2010).
  8. Isiaku, A. I., et al. Biofilm is associated with chronic streptococcal meningoencephalitis in fish. Microbial Pathogenesis. 102, 59-68 (2017).
  9. Oggioni, M. R., et al. Switch from planktonic to sessile life: a major event in pneumococcal pathogenesis. Molecular Microbiology. 61 (5), 1196-1210 (2006).
  10. Xiao, G., et al. Streptococcus suis small RNA rss04 contributes to the induction of meningitis by regulating capsule synthesis and by inducing biofilm formation in a mouse infection model. Veterinary Microbiology. 199, 111-119 (2017).
  11. Dominguez-Punaro, M. C., et al. Streptococcus suis serotype 2, an important swine and human pathogen, induces strong systemic and cerebral inflammatory responses in a mouse model of infection. Journal of Immunology. 179 (3), 1842-1854 (2007).
  12. Seitz, M., et al. A novel intranasal mouse model for mucosal colonization by Streptococcus suis serotype 2. Journal of Medical Microbiology. 61 (Pt 9), 1311-1318 (2012).
  13. Busque, P., Higgins, R., Caya, F., Quessy, S. Immunization of pigs against Streptococcus suis serotype 2 infection using a live avirulent strain. Canadian Journal of Veterinary Research. 61 (4), 275-279 (1997).
  14. Williams, A. E., Blakemore, W. F. Pathology of Streptococcal meningitis following intravenous intracisternal and natural routes of infection. Neuropathology and Applied Neurobiology. 4 (4), 345-356 (1990).
  15. Dominguez-Punaro, M. C., et al. Severe cochlear inflammation and vestibular syndrome in an experimental model of Streptococcus suis infection in mice. European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases. 31 (9), 2391-2400 (2012).
  16. Auger, J. P., Fittipaldi, N., Benoit-Biancamano, M. O., Segura, M., Gottschalk, M. Virulence Studies of Different Sequence Types and Geographical Origins of Streptococcus suis Serotype 2 in a Mouse Model of Infection. Pathogens. 5 (3), (2016).
  17. Chiavolini, D., et al. Method for inducing experimental pneumococcal meningitis in outbred mice. BMC Microbiology. 4, 36(2004).
  18. Madsen, L. W., Svensmark, B., Elvestad, K., Jensen, H. E. Otitis interna is a frequent sequela to Streptococcus suis meningitis in pigs. Veterinary Pathology. 38 (2), 190-195 (2001).
  19. Holden, M. T., et al. Rapid evolution of virulence and drug resistance in the emerging zoonotic pathogen Streptococcus suis. PLoS One. 4 (7), e6072(2009).
  20. Dominguez-Punaro Mde, L., et al. In vitro characterization of the microglial inflammatory response to Streptococcus suis, an important emerging zoonotic agent of meningitis. Infection and Immunity. 78 (12), 5074-5085 (2010).
  21. Hassan, A., et al. Evaluation of different detection methods of biofilm formation in the clinical isolates. Brazilian Journal of Infectious Diseases. 15 (4), 305-311 (2011).
  22. Vanier, G., et al. New putative virulence factors of Streptococcus suis involved in invasion of porcine brain microvascular endothelial cells. Microbial Pathogenesis. 46 (1), 13-20 (2009).
  23. Takeuchi, D., et al. The contribution of suilysin to the pathogenesis of Streptococcus suis meningitis. Journal of Infectious Diseases. 209 (10), 1509-1519 (2014).
  24. Tenenbaum, T., et al. Polar bacterial invasion and translocation of Streptococcus suis across the blood-cerebrospinal fluid barrier in vitro. Cellular Microbiology. 11 (2), 323-336 (2009).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

التهاب السحايا الغشائي الحيويالخلايا العائمةخلايا الحالة الغشائية الحيويةالتحليل النسيجي المرضيتعبير TLR2تحليل السيتوكيناتاستخلاص الحمض النووي الريبوزي (RNA)
داخل الجمجمة سوباراتشنويدال الطريق للعدوى "أدوار التحقيق" للأغشية الحيوية العقدية الخنزيرية في التهاب السحايا في "نموذج العدوى الماوس"
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.