Method Article

المطبوعة جليكان الصفيف: تقنية حساسة لتحليل مرجع تعميم الأجسام المضادة الكربوهيدرات في الحيوانات الصغيرة

DOI:

10.3791/57662

⸱

February 14th, 2019

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Infectious Pathology and Transplantation Division, Bellvitge Biomedical Research Institute (IDIBELL), 2Shemyakin-Ovchinnikov Institute of Bioorganic Chemistry (IBCh), Russian Academy of Sciences, 3Semiotik LLC, 4Auckland University of Technology, 5Intensive Care Department, Bellvitge University Hospital

* These authors contributed equally

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويبين هذا العمل إمكانات تكنولوجيا صفيف (PGA) جليكان المطبوعة لتحليل تعميم الأجسام المضادة الكربوهيدرات في الحيوانات الصغيرة.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وكثيراً ما يرتبط مرجع تعميم الأجسام المضادة الكربوهيدرات فرد معين مع حالتها المناعية. لا يحدد الشرط محصنة ضد كل النجاح في مكافحة إشارات التهديد المحتملة الداخلية والخارجية فحسب، بل أيضا يمكن أن يكون وجود نمط معين لتعميم الأجسام المضادة-جليكان (وعلى اختلاف مستوى المصلية) علامة هامة لظهور وتطور بعض الحالات المرضية. وهنا، يمكننا وصف منهجية المستندة إلى الشبكة الصفيف جليكان طبعت التي تتيح الفرصة لقياس مئات أهداف جليكان مع حساسية عالية جداً؛ استخدام الحد أدنى من عينة، وحيوانات موجودة عند صغيرة مشتركة تقييد (الجرذان، الفئران، الهامستر، إلخ) وتستخدم كنماذج لتناول الجوانب المتعلقة بالأمراض التي تصيب الإنسان. وكمثال ممثل لهذا النهج، نعرض النتائج المستخلصة من تحليل مرجع الأجسام المضادة الطبيعية-جليكان في الفئران بالب/ج. علينا أن نظهر أن الماوس بالب/ج كل المشاركين في الدراسة، وعلى الرغم من كونها متطابقة وراثيا وصيانتها تحت نفس الظروف، تطور نمط معين من الطبيعي الكربوهيدرات المضادة الأجسام المضادة. ويدعي هذا العمل لتوسيع نطاق استخدام تكنولوجيا الشبكة للتحقيق مرجع (الخصائص) ومستويات تداول الكربوهيدرات المضادة الأجسام المضادة، سواء في الصحة أو أثناء أي حالة مرضية.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الأجسام المضادة تلعب دوراً مركزياً في دفاعنا ضد غزو العوامل الممرضة بتحييد الفيروسات1،2 والبكتيريا2،3، مباشرة قبل تفعيل4،نظام مكمل5 وتعزيز البلعمه6. بالإضافة إلى ذلك، عناصر أساسية في استهداف السرطان والقضاء على الخلايا الخبيثة7، وصيانة التوازن8،9.

يمكن أن تؤدي أمراض المناعة الذاتية والالتهابات10 والسرطان11اضطرابات ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1-جليكوتشيبس الإنتاج

  1. إعداد ميكرواري
    1. طباعة جليكانس (50 مم) والسكريات (10 ميكروغرام/مل) في الفوسفات 300 مم مخزنة المالحة (PBS، الأس الهيدروجيني 8.5) الساعة 6 وإنشاء نسخ متماثلة على الشرائح الزجاجية N-هيدروكسيسوكسينيميدي-ديريفاتيزيد، باستخدام غير-اتصل أرايير الروبوتية (انخفاض حجم ~ 900 رر). تحتوي كل شريحة على 4 كتل مختلفة من الصفيف الفرعي (الشكل 1A، ألوان) كرر 6 مرات. كل مجموعة فرعية واحدة تتكون من 112 جليكان مختلف المواقع، بما في ذلك عناصر التحكم (8 صفوف أعمدة × 14) (الشكل 1B).
      ملاحظة: يتم توفير المعلومات المتصلة جليكان في التكميلية الجدول 1. مكتبة جليكا....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نقدم هنا، موجزاً للممثل النتائج التي تم الحصول عليها من التحديد الكمي لمرجع الأجسام المضادة الطبيعية-جليكان في عدد سكان من 20 بالب/ج الفئران. جليكوتشيبس المستخدمة في هذه الدراسة الواردة 419 جليكان مختلف الهياكل. معظم جليكانس تم تصنيعه ك-CH2CH2CH2NH2 فاصل المسلحة س-جليكوسيدات، في العديد من الحالات ك-CH2CH2NH2 أو-نهكوتش2NH2 جليكوسيدات. جميع جليكان هياكل تتسم بدقة عالية (700-أو 800 ميج.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد أصبحت جليكان [ميكروارس] أدوات لا غنى عنها لدراسة تفاعلات البروتين-جليكان40. ويصف العمل الحالي بروتوكول يستند إلى تكنولوجيا الشبكة لدراسة مرجع المتداولة من الكربوهيدرات المضادة الأجسام المضادة في الفئران بالب/ج. منذ الشبكة يتيح إمكانية لشاشة إعداد كبيرة من جليكانس بيولوجيا غير معروف، هو اكتشاف استثنائي ملائمة أداة13،،من1528. الطريقة المقترحة توفر إمكانية قياس، في نفس الإعداد التجريبية، مئات هياكل جليكا.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

خاسبيولينا نايلياونكيل أليكسي هم موظفون في سيميوتيك LLC، الذي هو مورد جليكوتشيبس المستخدمة في هذه الدراسة.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا العمل كان يدعمها "فوندو دي البحوث Sanitarias" منح (الجبهة الإسلامية للإنقاذ) PI13/01098 من معهد كارلوس الثالث الصحي، وزارة الصحة الإسبانية. وكان استفاد DB-ز من مركز أبحاث ما بعد دكتوراه ممولة من "الاتحاد الأوروبي البرنامج الإطاري السابع" (FP7-2007-2013) تحت 603049 اتفاق المنحة (ترانس). وأيد أعمال ناغورني-كاراباخ، NS، وملاحظة: منحة #14-50-00131 "المؤسسة الروسية للعلوم". ز-DB يريد أن يعرب عن امتنانه لمارتا Broto، "ج." بابلو السلفادور وأنا سانشيز للمساعدة التقنية الممتازة، وألكسندر راكيتكو للمساعدة في التحليل الإحصائي. بالدعم من "الصناعيين جيش التحرير الشعبي الصيني de دوكتوراتس de la أمانة d'Universitats أنا d'Empresa ريسيركا ديل خلية أنا كونيكسيمينت de la محافظة كات....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
<قوية > الأجسام المضادة < / قوية >
البيوتينيل الماعز المضادة للإنسان IgsThermo Fisher Scientific ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكيةالمرجع #: 31782
الماعز البيوتينيل المضاد للفأر IgM + IgGThermo Fisher المرجع العلمي#: 31807
Equipment< / strong>
Robotic Arrayer sciFLEXARRAYER S5 Scienion AG ، برلين ، ألمانياhttp://www.scienion.com/products/sciflexarrayer/
صينية البقع (غرفة حضانة الشرائح)Simport ، Beloeil ، QC ، كنداالمرجع #: M920-2
جهاز طرد مركزيEppendorf ، هامبورغ ، ألمانيا   ؛المرجع #: 5810 R
PipettesGilson, Middleton, WI, USAhttp://www.gilson.com/en/Pipette/
Slide Scanner PerkinElmer, Waltham, MA, USAScanArray GX Plus 
حاضنة اهتزازكول بارمر ، ستافوردشاير ، المملكة المتحدةالمرجع #: SI50
Biological samples
BALB / c مصل الفئرانهذه الورقةN / A
Complex Immunoglobulin Preparation (CIP)Immuno-Gem ، موسكو ، روسياhttp://www.biomedservice.ru/price/goods/1/17531
< > المواد الكيميائية والكواشف والجليكانات   ؛ < / strong>
مكتبة جليكانمعهد الكيمياء العضوية الحيوية (IBCh) ، موسكو ، روسياN / A
ألبومين مصل الأبقار (BSA)سيجما ألدريتش ، سانت لويس ، ميزوري ، & nbsp ؛المرجع #: A9418
الإيثانولامينسيجما ألدريتشالمرجع #: 411000
توين -20ميرك للكيماويات & أمبير علوم الحياة SA ، مدريد ، إسبانياالمرجع #: 655204
محلول ملحي مخزن مؤقت من الفوسبات (PBS)VWR International Eurolab SL ، برشلونة ، إسبانياالمرجع #: E404
أزيد الصوديومSigma-AldrichRef. #: S2002
Streptavidin Alexa Fluor 555 Conrupgate  المرجع العلمي Thermo Fisher#: S21381
Streptavidin Cy5 conjugateGE Healthcare ، Little Chalfont ، Buckinghamshire ، UKRef. #: PA45001
Materials
N-hydroxysuccinimide الشرائح الزجاجية المشتقة H Schott-Nexterion, Jena, GermanyRef. #: 1070936
ورق ترشيح Whatman Sigma-AldrichRef. #: WHA10347509
أنابيب 1.5 ملEppendorf   ؛المرجع #: 0030120086
<قوي>البرامج والخوارزميات
ScanArray Express نظام تحليل المصفوفات الدقيقةPerkinElmerhttp://www.per
جامعة ماريلاند ، ماريلاند ، الولايات المتحدة الأمريكيةhttp://www.cs.umd.edu/hcil/hce/
تطبيق مستكشف التجميع الهرمي kinelmer.com/microarray

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Karlsson, G. B., Fouchier, R. A., Phogat, S., Burton, D. R., Sodroski, J., Wyatt, R. T. The challenges of eliciting neutralizing antibodies to HIV-1 and to influenza virus. Nat Rev Microbiol. 6 (2), 143-155 (2008).
  2. Lu, L. L., Suscovich, T. J., Fortune, S. M., Alter, G.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Printed Glycan ArrayAnti glycan AntibodiesCirculating AntibodiesSmall Animal ModelsGlycan TargetsSerum SamplesFluorescent ScanningMicroarray AnalysisBiotinylated DetectionStreptavidin Conjugate

Related Articles