يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

نموذج طموح المكنسية مورين من الالتهاب الرئوي البكتيري المرتبطة بالتنفس الصناعي والمكتسبة في المستشفى

11.8K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/57672

⸱

يونيو 28, 2018

 ,  ,  , 
1Department of Molecular Microbiology and Immunology, University of Southern California, 2Division of Infectious Diseases, Department of Medicine, LAC+USC Medical Center

في هذه المقالة

ملخص

الالتهاب الرئوي المعدية من بين الأمراض الأكثر شيوعاً في الإنسان. نموذجا مناسباً في فيفو أمر بالغ الأهمية لفهم منشأ المرض واختبار فعالية العلاجات الجديدة. مع هذا الطراز الالتهاب الرئوي تطلع المكنسية مورين، أحد دراسة المرضية وعلاجات جديدة ضد هذه الأمراض القاتلة.

الملخص

نماذج مورين العدوى ذات أهمية حاسمة لفهم منشأ المرض واختبار فعالية المداواة رواية مصممة لمكافحة العوامل الممرضة المسببة. الالتهاب الرئوي المعدية هي من بين الأمراض الأكثر شيوعاً المقدمة من المرضى في العيادة وهكذا أوامر نموذجا مناسباً في فيفو . التهاب رئوي نموذجي نماذج استخدام التلقيح داخل الآنف، الذي بإيداع الكائنات المفرط خارج الرئة، مما تسبب في مضاعفات خارج الهدف والأعراض، مثل التهاب الجيوب الأنفية والتهاب المعدة والأمعاء، الصدمات الجسدية أو يمثل التغشية إلى تقليد الهباء الجوي وانتشرت أكثر نموذجية من الالتهاب الرئوي الفيروسي أو الدخني أو الفطرية. هذه النماذج لا تعكس بدقة الآلية المرضية للالتهاب الرئوي البكتيري نموذجي اكتسب المجتمع أو الرعاية الصحية. وفي المقابل، يحاكي هذا النموذج مورين المكنسية طموح الالتهاب الرئوي الطريق الحبرية في الالتهاب الرئوي الحصول على الرعاية الصحية. تطعيم 50 ميليلتر من البكتيريا يسبب تعليق في بلعوم فموي للفئران تخديره تطلع انعكاسية، مما يؤدي إلى الالتهاب الرئوي. مع هذا النموذج، واحدة دراسة الآلية المرضية للعوامل الممرضة المسببة للالتهاب الرئوي وعلاجات جديدة لمكافحة هذه الأمراض.

المقدمة

عدوى الجهاز التنفسي السفلي هي الأمراض المعدية فتكاً في العالم، والسبب الأكثر شيوعاً للوفاة في البلدان النامية1. على الصعيد العالمي، تمثل هذه الإصابات أكثر من 3.2 مليون حالة وفاة1. وباﻹضافة إلى ذلك، المستشفوية الالتهاب الرئوي من بين النماذج الأكثر شيوعاً وفتكا من العدوى المكتسبة بالرعاية الصحية، وهي الناجمة عن العوامل الممرضة أكثر مقاومة للمضادات الحيوية2،3. مسار نموذجي لاقتناء الالتهاب الرئوي البكتيري على حد سواء المكتسبة في المجتمع، والالتهاب الرئوي في المستشفيات هو طموح لمحتويات المكنسية إلى الحويصلات الهوائية. مورين النماذج المستخدمة لدراسة هذه الأمراض في كثير من الأحيان استخدام التلقيح داخل الآنف4، إيداع الكثير من البكتيريا خارج الرئة، مما تسبب في مضاعفات خارج الهدف وأعراض مثل التهاب الجيوب الأنفية والصدمات الجسدية، وتتعارض مع المرض تطور الإنسان التي كانت النماذج المصممة لمحاكاة. قد تستخدم نماذج أخرى غرف استنشاق وأجهزة ميكروميستينج، الذي أكثر دقة تحاكي بنيومونياس الفيروسية والفطرية السلية، ولكن لا الخص دقة المسار العادي للحصول على بنيومونياس البكتيرية النموذجية.

يمكن استخدام نموذج الالتهاب الرئوي مورين المكنسية التطلع إلى محاكاة الطريق الطبيعية والمرضية للالتهاب الرئوي البكتيري. بتطعيم ميليلتر 50 تعليق البكتيرية في البلعوم تخديره من الفئران باستخدام ماصة، تستتبعه تطلع انعكاسية، الذي ينتج الالتهاب الرئوي المعدية. باستخدام هذا النموذج، واحدة دراسة الآلية المرضية للعوامل الممرضة المسببة للالتهاب الرئوي وعلاجات جديدة لمكافحة هذه الأمراض مع نموذج دقة أعلى، أكثر مماثلة لعدوى الالتهاب الرئوي تطلع لاحظت في الإنسان. بالإضافة إلى ذلك، وخلافا لنماذج مماثلة أن تصيب من خلال5،تجويف الفم6، يضمن هذا النموذج أن العدوى كامل يصل إلى الرئتين بدلاً من القناة الهضمية، حيث يمكن أن يسبب التهاب خارج الموقع، والالتهابات، مثل التهاب المعدة والتهاب الأمعاء. أخيرا، خلافا لنموذج آخر المنشورة التي تتطلب المنظار وإينوكولاتيس من خلال القصبة الهوائية7، هذا النموذج لا تعيق مجرى الهواء بإبرة تزقيمية مدتها ولا تتطلب الحقن لإيصال العدوى. بدلاً من ذلك، يعتمد التطعيم على التطلعات الطبيعية المعاكسة للماوس.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

يجب أن يوافق جميع الإجراءات التي تنطوي على الحيوانات الباحث "رعاية الحيوان المؤسسية" واستخدام اللجنة (إياكوك).

1-إعداد العدوى البكتيرية

  1. عزل المستعمرات البكتيرية.
    1. خط سلالة بكتيرية (مثلاً، بوماني) أ ( "HUMC1") في مناسبة أجار العقيمة المتوسطة (مثلفول الصويا تريبتيك أجار)، مع الحرص على إنشاء المستعمرات المعزولة.
    2. احتضان في الظروف المناسبة (مثلاً، بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية).
  2. تنمو الثقافة بين عشية وضحاها.
    1. حدد ممثل، مستعمرة معزولة من لوحة أجار مع حلقة إينوكولاتينج عقيمة واستخدامها لتلقيح 10 مل من مرق معقمة مناسبة المتوسطة (مثلاً، مرق الصويا تريبتيك).
    2. تسمح العينة للوصول إلى مرحلة ثابتة في الظروف المناسبة (مثل، 37 درجة مئوية مع الهز 200 لفة في الدقيقة بين عشية وضحاها في قنينة مخروطية كاب تنفيس، 50 مل).
  3. تنمو ثقافة فرعية.
    1. نقل 100 ميكروليتر من الثقافة بين عشية وضحاها إلى 10 مل مرق العقيمة الطازجة باستخدام ماصة.
    2. السماح بالوصول إلى المرحلة الأسية/سجل في الظروف المناسبة (مثل، 37 درجة مئوية مع الهز 200 لفة في الدقيقة ح 3 في قنينة مخروطية كاب تنفيس، 50 مل).
  4. أغسل ثقافة فرعية.
    1. إزالة في ثقافة فرعية من بيئتها تحضين.
    2. الطرد المركزي في ز × 4,000 لمدة 5 دقائق بيليه البكتيريا.
    3. نضح وتجاهل المادة طافية.
    4. أضف 10 مل من المحلول الملحي المعقم مخزنة الفوسفات (PBS) بيليه ودوامه بقوة حتى حراكه تماما.
    5. كرر الخطوات 1.4.2-1.4.4 مرتين، لما مجموعة 3 يغسل.
  5. ضبط تركيز تعليق البكتيرية.
    1. باستخدام جهاز المطياف الضوئي قياس الكثافة البصرية 600 نانومتر (OD600)، قياس الكثافة الضوئية لتعليق البكتيرية.
    2. إضافة PBS العقيمة إلى تعليق البكتيرية حتى يسقط الكثافة البصرية العدوى إلى OD600 0.5، باستخدام المعادلة جأنا× الخامسأنا = Cو× Vو، حيث يتركز "ج"، "V" هي وحدة التخزين, "أنا" هي الأولى، و "و" النهائي. * جو يجب أن تكون دائماً 0.5؛ Vو هو المتغير إلى حل.
    3. إذا كان تعليق البكتيرية تنخفض OD600 0.5، الطرد المركزي أنه في 4,000 × ز لمدة 5 دقائق بيليه البكتيريا وإزالة مبلغ مناسب من المادة طافية للوصول إلى التطوير التنظيمي600 من 0.5.
    4. إجراء تخفيف المسلسل في برنامج تلفزيوني العقيمة (مثلاً، ثلاث تخفيف 1: 100 لتحقيق 1 × 10-6) ولوحة على أجار العقيمة لتحديد معامل الارتباط الذي يكشف عن تركيز البكتيرية في تشكيل مستعمرة وحدات كل مل (كفوس/mL) OD600 من 0.5.
      ملاحظة: قيمة معامل الارتباط هذا سوف تختلف عن كل سلالة من كل الأنواع، ويجب أن تحدد قبل إعداد العدوى لعدوى.
    5. وبعد تحديد معامل الارتباط، استخدامه لإنشاء العدوى من التركيز المطلوب (مثلاً، 2 × 108-1 × 109 كفوس مليلتر)؛ إذا كانت العدوى المطلوب أكبر من القطر الخارجي600 0.5، الطرد المركزي بتعليق البكتيرية في ز × 4,000 لمدة 5 دقائق بيليه البكتيريا وإزالة مبلغ مناسب من المادة طافية للوصول إلى التركيز المطلوب.
    6. أداء في فيفو دراسات تجريبية لتحديد ضراوة كل عزل البكتيريا في كل سلالة من الماوس كما ستختلف هذه القيم بين البكتيرية المعزولة من نفس النوع والفئران من مختلف الخلفيات الوراثية. لمختلف أنواع الغرام، عموما هو100 دينار في الفئران 1-5 × 108 كفوس/الماوس، على الرغم من أن بعض سلالات قاتلة في لقاح أقل.
  6. تجميد مختبرين مماثل لاستخدامها في المستقبل كلقاح بناء على الطلب، ودقيقة، كما نشرت سابقا8 (اختياري).
    1. تحضير 1 لتر العدوى البكتيرية كالموصوفة أعلاه، نقل إلى اثنين 500 مل قارورة مخروطية الشكل، وأجهزة الطرد المركزي في 4,000 × ز لمدة 5 دقائق.
    2. تجاهل 450 مل من المادة طافية من كل قنينة المخروطية وريسوسبيند كريات البكتيريا في المادة طافية المتبقية.
    3. نقل العدوى البكتيرية يتركز إلى كوب 250 مل يحتوي على حانة إثارة مغناطيسية وتخلط باستمرار على رأس لوحة ضجة 300 لفة في الدقيقة.
    4. نقل 600 الضبط ميكروليتر من تتركز العدوى البكتيرية (مثلاً، 1 × 1010 كفوس/mL) بعناية باستخدام ماصة لقنينة مبردة 1.6 مل تحتوي على الضبط 300 ميكروليتر معقمة ح2س و 300 ميكروليتر والغليسيرول عقيمة؛ خلط وتخزين في-80 درجة مئوية.
      ملاحظة: يمكن الخلط بين النتائج التجريبية والغليسيرول اللازمة للتخزين وتسبب الوفيات الزائدة ولذلك من الضروري أن تغسل بها.
    5. عندما تكون جاهزاً للاستخدام، إذابة العينة لمدة 10 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
    6. نقل مل 1 إلى 50 مل قنينة مخروطية، إضافة 9 مل PBS العقيمة، وأجهزة الطرد المركزي في ز × 4,000 لمدة 5 دقائق بيليه البكتيريا. نضح المادة طافية وريسوسبيند كمية محددة سلفا من كفوس (1 مل × تجميد الأسهم التركيز في كفوس/mL) في وحدة تخزين مناسبة لبرنامج تلفزيوني للوصول إلى التركيز المطلوب للعدوى المعدية.

2-أنيسثيتيزينج الفئران

  1. الكيتامين/إكسيلازيني
    ملاحظة: قد التخدير مع الكيتامين/إكسيلازيني مدة طويلة، الأمر الذي يوفر ما يكفي من الوقت للباحث الذي الجديد في هذه التقنية لإكمال عملية التلقيح قبل أن يوقظ الماوس.
    1. إعداد 10 مل من محلول الحقن من خلال الجمع بين 8.5 مل الصف فارماسيوتيفكال برنامج تلفزيوني، 1 مل 100 مغ/مل الحل الأسهم الكيتامين (التركيز النهائي 10 ملغ/مل)، و 0.5 مل من 20 ملغ/مل Xylazine حل الأسهم (تركيز نهائي 10 ملغ/مل).
    2. إدارة 10 ميكروليتر/غ عن طريق الحقن (الملكية الفكرية) داخل (مثلاً، 250 ميكروليتر ماوس 25-ز).
    3. تطبيق مرهم العيون لعيون الفئران تخديره مع الكيتامين/إكسيلازيني لأن عيونهم عرضه للتلف أثناء فترات موسعة من التخدير.
    4. ضع الماوس في قفص ورصد حتى أنه يستيقظ من التخدير.
      ملاحظة: هذا الحيوان لا ينبغي أن تترك غير المراقب حتى قد وعيه كافية للحفاظ على ريكومبينسي القصية.
  2. Isoflurane
    ملاحظة: الفئران بسرعة يستيقظ من التخدير التي يسببها isoflurane بعد يتم إزالتها من قاعة التوجيهي، حيث يجب استخدام هذا الأسلوب للتخدير فقط بعد أن أصبح بارعا في إجراء التطعيم.
    1. ضع الفئران ساذجة في دائرة لتحريض حجم مناسب مع تدفق الأوكسجين.
    2. بعد قاعة مغلقة مختومة، تخدير الفئران باستخدام المبخر دقة لإضافة إيسوفلوراني في 4% (v/v) لمدة 5 دقائق على الأقل؛ تأكيد التخدير عن طريق إزالة ماوس من قاعة الاستقراء وقياس الوقت الذي يستغرقه للاستيقاظ من التخدير (~ 60 ثانية).
      ملاحظة: أن تدرك أن التخدير في بعض الأحيان قد تختلف استناداً إلى المبادئ التوجيهية المؤسسية وبعض الحيوانات قد تتطلب أكثر من 5 دقائق لتصبح تخديره تماما.
    3. المحافظة على التخدير لمدة تصل إلى 10 دقائق بضبط تركيز isoflurane إلى 2-3 في المائة؛ إذا كانت المدة الإجمالية للتخدير > 15 دقيقة، تطبيق مرهم العيون لعيون تخديره من الفئران.
    4. ضع الماوس في قفص ورصد حتى أنه يستيقظ من التخدير، كما هو الحال في الخطوة 2، 1.

3-تطعيم/إصابة الفئران

  1. تعليق ماوس أنيسثيتيزيد، معلقة من قبل القواطع أعلى في سلسلة قوية ورقيقة (مثلاً، خيط تنظيف الأسنان) المضمونة إلى كائن ثابت على ارتفاع حوالي مرتين الماوس طول الجسم (مثلاً، 20 سم) فوق سطح التشغيل (مثل ، مقاعد البدلاء المختبر).
  2. بلطف سحب اللسان الماوس خارج الفم استخدام الملقط عقيمة، انتهت بلانت. نقل اللسان لاصبع العقيمة، والقفاز لمنع سحق العرضي للسان الماوس. عقد اللسان خارج الفم، والسماح بالوصول إلى البلعوم ومنع البلع من العدوى إلى الجانب.
  3. حين عقد اللسان للماوس، ضع العدوى 50 ميكروليتر (تعليق البكتيرية) في البلعوم استخدام ميكروبيبيتي؛ البلعوم يقع على مفترق الطرق في تجويف الفم والبلعوم نحو الجزء الخلفي الفم.
    ملاحظة: من المهم جداً فقط تقديم السائل من بيبيتينج إلى المحطة الأولى في ميكروبيبيتي. الماوس سوف توقف التنفس لبضع ثوان عندما يوضع العدوى في البلعوم؛ في نهاية المطاف، سوف يسبب تطلع انعكاسي الماوس يستنشق تعليق البكتيرية، يتبين من الضوضاء طقطقة المميزة للسائل يدخل الرئتين، مما يؤدي إلى الإصابة بالالتهاب الرئوي.
  4. إذا لم يتم وضع العدوى الآن مرة أخرى ما يكفي لكتلة التنفس الطبيعي، قرصه ناريس مع الملقط إلى القوة تطلع انعكاسي عن طريق الفم واستنشاق اللاحقة العدوى.
  5. بعد التلقيح، الإفراج عن اللسان وإزالة الماوس من سلسلة تعليق ووضعه في قفص ورصد حتى أنه يستيقظ من التخدير، كما هو الحال في الخطوة 2، 1.

4-رصد تطور المرض

ملاحظة: سبب معاناة الحيوان، مختلف المؤشرات ينبغي استخدامها للإشارة عند الفئران أصبحت تحتضر؛ يجب أن يتم تنفيذ القتل الرحيم عقب هذا القرار، وفقا لبروتوكول إياكوك التي سبقت الموافقة عليها؛ وتشمل علامات مختلفة من موريبونديتي درجة حرارة الجسم وفقدان الوزن والمظهر، ومشية والمؤشرات الحيوية الأخرى التي يمكن الحصول عليها من الدم (مثلاً، عن طريق المعهد الوطني الإيطالي)9،10،،من1112، 13،14،،من1516.

  1. Euthanize الفئران وفقا لبروتوكول IACUC الموافق عليه من قبل (مثلاً، CO2 متبوعاً بخلع عنق الرحم).
  2. إزالة الرئتين من الماوس euthanized بقطع في القصبة الهوائية والشريان الرئوي والاوردة الرئوية القريبة من الرئتين.
    1. الفحص المجهري
      1. ضع الرئتين (أو جزء) في قالب نموذج.
      2. ملء القالب عينة مع مجمع درجة حرارة القطع الأمثل (O.C.T.)، غمر الأنسجة تماما.
      3. تجميد العينة في-80 درجة مئوية.
      4. إرسال العينة إلى مختبر علم أمراض الفرع وجبل على الشرائح للفحص المجهري.
    2. عبء البكتيرية
      1. وزن أنسجة الرئة على توازن التحليلي.
      2. نقل أنسجة الرئة إلى 50 مل فيال مخروطية الشكل الذي يحتوي على 2-5 مل PBS العقيمة (تبعاً لحجم الأنسجة).
      3. مجانسة أنسجة الرئة مع الخالطون أنسجة.
      4. إجراء تخفيف المسلسل هوموجيناتي في برنامج تلفزيوني العقيمة لتحقيق ما يقارب 1,000 كفوس مليلتر، استناداً إلى عبء البكتيرية المتوقعة في الرئتين.
        1. على سبيل المثال، إذا كان من المتوقع 1 × 109 مغ/كفوس، إجراء تخفيف 1: 100 ثلاثة: نقل 100 ميكروليتر من هوموجيناتي إلى 9.9 مل برنامج تلفزيوني ودوامه؛ وهذا هو أول تمييع 1: 100. نقل 100 ميكروليتر من تمييع 1: 100 الأولى إلى 9.9 مل برنامج تلفزيوني ودوامه؛ هذا هو تمييع 1: 100 ثانية. نقل 100 ميكروليتر من تمييع 1: 100 ثانية إلى 9.9 مل برنامج تلفزيوني ودوامه؛ هذا هو تمييع الثالثة والنهائية من 1: 100.
        2. إذا كان عبء بكتيرية في الرئتين غير معروف، تنفيذ مجموعة من تخفيف للقبض على النطاق المتوقع.
      5. لوحة dilution(s) في أجار العقيمة.
        1. إعداد العقيمة تريبتيك الصويا مرق (TSB) مع لوحات أجار (TSA): الجمع بين 30 غ TSB، ز 15 من أجار، و 1 لتر من الماء، يخلط محرض مغناطيسية، والحرارة حتى الغليان في ~ 100 درجة مئوية للحد الأدنى 5 السماح لتبرد وثم اﻷوتوكﻻف على دورة السائل للسماح لتبرد إلى 15 دقيقة ~ 55 درجة مئوية، ونقل 10 مل طازجة يعقم حساب السياحة الفرعي إلى أطباق بتري معقمة، والسماح لتبرد بدرجة حرارة الغرفة. اسمحوا جافة في benchtop لمد 2-5 أو كشف إطار السلامة الأحيائية مجلس الوزراء لمدة 10 دقائق.
        2. نقل 100 ميكروليتر من التخفيف إلى طبق بتري يحتوي على حساب السياحة الفرعي العقيمة وتنتشر عبر حساب السياحة الفرعي استخدام خرز الناشرة أو الزجاج.
        3. تخزين طبق بيتري بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية في حاضنة هوميديفيد (أي، حاضنة 37 درجة مئوية تتضمن الكأس 1-L كشفت مملوءة بالماء)
      6. تحديد هوموجيناتي الرئة كفوس مليلتر استناداً إلى تصفيح أجار (مثلاً، كفوس 100 لوحة السياحة مع 100 ميكروليتر من تمييع الثالثة والأخيرة المذكورة أعلاه سيكون 100 كفوس/100 ميكروليتر × 100ديل #1 × 100ديل #2 × 100ديل #3 = 1 × 109 CFUs/mL).
      7. حساب أنسجة الرئة كفوس/mg يقوم بتقسيم هوموجيناتي الرئة كفوس مليلتر بملغ الرئة الأنسجة/مل هوموجيناتي (مثلاً، إذا كان استخدام النموذج الوارد وصفها أعلاه 100 مغ أنسجة الرئة تجانس في 5 مل من برنامج تلفزيوني، ثم 1 × 109 كفوس مليلتر ÷ 100 ملغ/5 مل = 5 × 107 CFUs/mg).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

بعناية بعد على البروتوكول، استنساخه وقوية ويمكن بسهولة الحصول على البيانات. من المهم أن تلتزم إعداد بروتوكول لواحدة العدوى مخصصة للتجارب بالمقارنة إلى واحد كل منهما الآخر. كما أن من المهم معالجة الفئران بشكل صحيح أثناء إجراء العدوى. تأكد من وضع الفئران في دائرة لتخدير خالية من إيسوفلوراني. سوف الذعر إذا وضعت في غرفة التي كانت مليئة قبل isoflurane الفئران وقد تعاني من الإجهاد الزائد، الذي ربما يمكن أن تمس النتائج التجريبية. بعد تأمين غطاء حاوية، ببطء إدخال إيسوفلوراني بزيادة تركيزه من 0% إ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

بالتأكيد، أن الفئران ليست البشر مصغرة. ويجب النظر فيها في سياق النتائج التي تم الحصول عليها من نماذج الماوس وتفسيرها لاحقاً لانطباق للبشر، استناداً إلى أوجه الاختلاف والتشابه بين هذين النوعين6. من المهم أيضا أن اختيار السلالة المناسبة الماوس كمعينة تكون أكثر عرضه لبعض أنواع العدوى من الآخرين؛ وينطبق نفس الشيء سلالة الممرض من اختيار16.

من الضروري أن تؤدي العدوى بطريقة متشددة واستنساخه بدرجة عالية. لقاح يمكن أن يكون مميتاً للفئران في قيمة واحدة بعد...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب يعلن أن لديهم لا تضارب المصالح المالية.

شكر وتقدير

وأيده هذا العمل بالمعهد الوطني للحساسية والأمراض المعدية في المعاهد الوطنية للصحة [أرقام المنحة R01 AI117211، R01 AI130060 و R21 AI127954 و AI106375 R42 لدرجة البكالوريوس] ولنا الغذاء والدواء [العقد HHSF223201710199C إلى BML].

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
AgarBD214530تتحد مع TSB لصنع
حبات TSA ، زجاج البورسليكات135003التعقيم عن طريق الخبز أو التعقيم قبل كل استخدام
دورق ، 250 ملPyrex1003تستخدم أثناء الاقتباس الدقيق للقاح البكتيري المركز
جهاز الطرد المركزيSorvallST 40Rقادر على 4,000 مرة. ز عند 4 درجة ؛ غرفة C
للتخديركينت العلميةVetFlo-0720تستوعب ما يصل إلى 5 فئران
Cryomold ، متوسط الحجمSakura Tissue-Tek4566قوالب عينات الفينيل التي يمكن التخلص منها ، 15 مرة ؛ 15 ومرات.
خيط تنظيف الأسنان5 مم Oral-B37000469537ربط بعمود مستقر حوالي 6 بوصات فوق ارتفاع الطاولة
ملقطVWR82027-440يستخدم لسحب اللسان برفق من فم الفأر
المجانس لأنسجة الرئةOmni InternationalTM125-115الأوتوكلاف قبل الاستخدام الأول ؛ شطف بين العينات
Isoflurane للتخديرAbbott10015516يمكن استخدام الأدوية البديلة. تعديل الإجراء وفقا لذلك
خرطوشة iSTATAbbott03P79-25تتوفر خراطيش مختلفة لتناسب احتياجاتك
الكيتامين ، 100 مجم / ملمن الإمدادات الطبية الغربية4165تمييع 1:10 في PBS إلى 1 مجم / مل وتمزج مع الزيلازين بمعدل 1 مجم / مل
مرهم للعيوندموع Akornمتجددةتجنب لمس العين بطرف الموزع
درجة حرارة القطع المثلى (O.C.T.) مركبفيشر العلمي23-730-571يستخدم لتجميد عينات الرئة عند -80 درجة ؛ C للتحضير لقسم علم الأمراض
طبق بتريVWR25384-302البوليسترين ، يمكن التخلص منه ، معقم ، 100 مرة ؛ 15 مم
محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS)Corning21-031-CMDulbecco's PBS بدون أطراف ماصة الكالسيوم والمغنيسيوم
، 200-&mu ؛ LVWR10017-044الأوتوكلاف قبل استخدام
ماصة ، 200-& LGilsonPipetman P200الأوتوكلاف والمعايرة قبل الاستخدام
الموزع ، الخلية البكتيريةBel-ArtF377360006التعقيم عن طريق الخبز أو التعقيم قبل كل استخدام
شريط التحريك ، مغناطيسي ، 7.9 مم القطر والأوقات ؛ 38.1 مم طولVWR58948-150يستخدم لتقليب اللقاحات البكتيرية المركزة أثناء نقل
لوحة التحريك ، المغناطيسيةCorningPC-620Dيستخدم لتقليب اللقاحات البكتيرية المركزة أثناء تناول
مرق الصويا Tryptic (TSB)BD211822يمزج مع أجار لصنع
قارورة TSA ، مخروطي ، معقم ، 50 ملCorning431720يستخدم لتحضير قارورة اللقاح البكتيرية
، مخروطي ، معقم ، 500 مل431123Corning يستخدم لتركيز اللقاحات لتحضير قارورة اللقاح
المجمدة ، مبردة ، 2.0 مل430659 Corningيستخدم للتخزين المبرد لللقاح البكتيري المركز
زيلازين ، 20 مجم / ملAkornAnaSed Injectionيخفف 1:20 في PBS إلى 1 مجم / مل ويمزج مع الكيتامين عند 1 مجم / مل
شركة

المراجع

  1. Media Centre, W. H. O. World Health Organization. Fact Sheet - Top 10 Causes of Death. , Available from: http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs310/en/ (2017).
  2. Spellberg, B., Talbot, G. H. Recommended Design Features of Future Clinical Trials of Antibacterial Agents for Hospital-Acquired Bacterial Pneumonia and Ventilator-Associated Bacterial Pneumonia. Clinical Infectious Diseases. 51 (S1), S150-S170 (2010).
  3. Kalil, A. C., et al. Management of Adults With Hospital-acquired and Ventilator-associated Pneumonia: 2016 Clinical Practice Guidelines by the Infectious Diseases Society of America and the American Thoracic Society. Clinical Infectious Diseases. 63 (5), e61-e111 (2016).
  4. Medina, E. Murine model of pneumococcal pneumonia. Methods in Molecular Biology. , 405-410 (2010).
  5. Azoulay-Dupuis, E., et al. In vivo efficacy of a new fluoroquinolone, sparfloxacin, against penicillin-susceptible and -resistant and multiresistant strains of Streptococcus pneumoniae in a mouse model of pneumonia. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 36 (12), 2698-2703 (1992).
  6. Mizgerd, J. P., Skerrett, S. J. Animal models of human pneumonia. American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 294 (3), L387-L398 (2008).
  7. Rayamajhi, M., et al. Non-surgical intratracheal instillation of mice with analysis of lungs and lung draining lymph nodes by flow cytometry. Journal of Visualized Experiments. (51), (2011).
  8. Nielsen, T. B., Bruhn, K. W., Pantapalangkoor, P., Junus, J. L., Spellberg, B. Cryopreservation of virulent Acinetobacter baumannii to reduce variability of in vivo studies. BMC Microbiology. 15, 252(2015).
  9. Trammell, R. A., Toth, L. A. Markers for predicting death as an outcome for mice used in infectious disease research. Comparative Medicine. 61 (6), 492-498 (2011).
  10. Bast, D. J., et al. Novel murine model of pneumococcal pneumonia: use of temperature as a measure of disease severity to compare the efficacies of moxifloxacin and levofloxacin. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 48 (9), 3343-3348 (2004).
  11. Hankenson, F. C., et al. Weight loss and reduced body temperature determine humane endpoints in a mouse model of ocular herpesvirus infection. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 52 (3), 277-285 (2013).
  12. Adamson, T. W., Diaz-Arevalo, D., Gonzalez, T. M., Liu, X., Kalkum, M. Hypothermic endpoint for an intranasal invasive pulmonary aspergillosis mouse model. Comparative Medicine. 63 (6), 477-481 (2013).
  13. Nielsen, T. B., et al. Diabetes Exacerbates Infection via Hyperinflammation by Signaling through TLR4 and RAGE. mBio. 8 (4), (2017).
  14. Nielsen, T. B., et al. Monoclonal Antibody Protects Against Acinetobacter baumannii Infection by Enhancing Bacterial Clearance and Evading Sepsis. Journal of Infectious Diseases. 216 (4), 489-501 (2017).
  15. Cheng, B. L., et al. Evaluation of serotypes 5 and 8 capsular polysaccharides in protection against Staphylococcus aureus in murine models of infection. Human Vaccine Immunotherapy. 13 (7), 1609-1614 (2017).
  16. Wong, D., et al. Clinical and Pathophysiological Overview of Acinetobacter Infections: a Century of Challenges. Clinical Microbiology Reviews. 30 (1), 409-447 (2017).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

نموذج التهاب رئوي لدى الفئرانالالتهاب الرئوي المرتبط بجهاز التنفس الاصطناعيتجانس أنسجة الرئةالوحدات المكونة للمستعمراتالتحليل النسيجي المرضيدرجة حرارة القطع المثلىالتخفيفات المتسلسلةأغار صويا تريبتيك
نموذج طموح المكنسية مورين من الالتهاب الرئوي البكتيري المرتبطة بالتنفس الصناعي والمكتسبة في المستشفى
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.