في هذا البحث، نبدي طريقة فصل خالية من تسمية العَدلات من إفرازات السريرية مجرى الهواء باستخدام عملية مغلقة من دوامة القصور الذاتي ميكروفلويديكس. الطريقة المقترحة ستوسع فحوصات سريرية في المختبر لأمراض الجهاز التنفسي المختلفة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تخصيب خالية من تسمية العَدلات من إفراز مجرى الهواء المستمدة من المريض استخدام حلقة مغلقة ميكروفلويديكس القصور الذاتي
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
مجرى الهواء إفرازات تحتوي على عدد كبير من الخلايا المتصلة بجهاز المناعة، مثلاً، العَدلات، الضامة، والخلايا الليمفاوية، التي يمكن استخدامها كمورد رئيسي لتقييم مجموعة متنوعة من الأمراض الرئوية، سواء بالنسبة للبحوث والأغراض السريرية. ومع ذلك، نظراً للطبيعة غير المتجانسة ولزوجة المخاط المريض، يوجد حاليا أي أسلوب الانفصال الموثوق بها التي لا تضر بالخلايا المناعية المضيف في إفراز مجرى الهواء المريض. في هذا البحث، علينا الأخذ بأسلوب إعداد نموذج يستخدم ميكروفلويديكس القصور الذاتي للتقييم المناعي للمريض. بغض النظر عن خصائص العينات السريرية فلويديك غير المتجانسة، يستعيد الطريقة المقترحة أكثر من 95 في المائة العَدلات من عينات إفراز مجرى الهواء التي هي المخفف 1,000-fold مع ملليلتر من المحلول الملحي نظيفة. وترد بتعميم دفق الإخراج المركزة إلى خزان عينة أولية، تركيزات عالية والانتعاش والنقاء من الخلايا المناعية؛ ويعتبر إعادة تدوير مفاضلة لتشغيل المستندة إلى حقنه واحدة تديرها ميكروفلويديكس القصور الذاتي. وتقدم العملية حلقة مغلقة من دوامة ميكروفلويديكس الكريات البيضاء دون اضطراب الفيزيائية أو الكيميائية، كما يتبين من phorbol 12-ميريستاتي 13-خلات (سلطة النقد الفلسطينية)-الناجم عن إطلاق سراح elastase العَدلات تم فرزها.
المقدمة
حيث يتم تغليف الخلايا في كمية كبيرة من المخاط في مجرى الهواء إفرازات، وعرقل الوظيفية تقييم الكريات البيضاء بفحص في المختبر . ديثيوثريتول (DTT) هو الأكثر شيوعاً تحلل المخزن المؤقت أيوناتها وتجانسه البلغم لتحليل الخلوية والكشف عن الوسطاء مع توفير السلامة مقبولة للخلايا المعزولة1،2. ومع ذلك، القيمة يمكن أن تتداخل مع المستضدات السطحية زمنياً من العَدلات مجرى الهواء، أدى إلى تعطيل وظيفة العَدلات مثل الستسي وميلوبيروكسيداسي (الخطة الرئيسية للعمليات) الإصدار2،3. ولذلك، أجريت دراسات قليلة من وظيفة العَدلات مجرى الهواء البشرية مع العَدلات الدم المحيطية، التي قد لا تكشف عن الخصائص الفسيولوجية ل الرئة4. وفي الوقت نفسه، ميكروفلويديكس القصور الذاتي قد أحرزت تقدما في عزل الخلايا من مختلف بيوماتريسيس المريض5،6. التوازن بين القوى رفع القصور الذاتي واسحب عميد يحاذي الجسيمات/الخلية وفقا لحجمها، مما يسمح للجسيمات خالية من تسمية الفصل7. عرض مجموعتنا سابقا طريقة إعداد نموذج لتعميم ورم الخلايا8،9، العوامل الممرضة في الدم8خلايا من تعليق ثقافة10،11، 12، والكريات البيض النوى (بمنس) من الدم13،14.
نقدم لك هنا، وضع بروتوكول لإعداد الخلايا المناعية من إفرازات مجرى الهواء للمريض استخدام حلقة مغلقة ميكروفلويديكس القصور الذاتي للمتلقين للمعلومات في المختبر مقايسة، مثل المقايسة elastase العَدلات (شمال شرق). يوفر هذا الأسلوب التركيز العالي والانتعاش، ولا سيما عندما يكون هناك تداخل كبير في الاتجاه الأفقي الخلية/الجسيمات منه الخلية/الجسيمات من الفائدة المراد إزالتها، الذي يتم الاحتفال به عادة في العينات السريرية. بتعميم الجدار الداخلية (IW)-تركز الجزيئات الكبيرة أو الخلايا إلى أنبوب العينة الإدخال، والجسيمات أو مركزات الخلية من الفائدة في الخزان الأصلي، بينما يمر السوائل الخلفية مع المجاميع الصغيرة الميوسين خزان النفايات. على الرغم من خصائص العينات السريرية فلويديك غير المتجانسة، يسترد الأسلوب المقترح استمرار أعلاه 95% العَدلات من عينات إفراز مجرى الهواء التي هي تضعف 1,000-fold مع المحلول الملحي نظيفة (~ 1 مل). على النقيض من ذلك، يعرض طريقة تحلل طائفة واسعة من بمنس معدلات الاسترداد استناداً الشرط الذي عينة. يلتقط البروتوكول المقترح الكريات البيضاء بطريقة خالية من التسمية مع لا اضطراب الفيزيائية أو الكيميائية، التي توفر إمكانية لحصاد الخلايا الحساسة من تحدي سريرياً القياسات الحيوية مع إجراءات كسبها.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
جمع العينات أقرها مجلس جامعة بيتسبرغ المراجعة المؤسسية (IRB # PRO16060443، PRO10110387). جميع التجارب التي تتم تحت السلامة الأحيائية مجلس الوزراء مع معدات الحماية الشخصية المناسبة.
1-جهاز التصنيع والطباعة الحجرية الناعمة
ملاحظة: استخدمت تقنيات الطباعة الحجرية الناعمة القياسية15،16 لإنشاء microchannel بولي دايمثيل سيلوكسان (PDMS).
- مزيج من السلائف PDMS بنسبة 10:1 قاعدة وعلاج عامل.
- صب 30 جرام المخلوط السلائف PDMS على القالب الصغير تشكيلة الألومنيوم (انظر الشكل 1 لإبعاد) و 20 غرام الخليط السلائف PDMS على 100 مم من طبق بيتري.
ملاحظة: يتم استخدام طبق بيتري جعل الفيلم سميكة من PDMS (~ 3 مم) الطبقة الداعمة. الطبقة الداعمة ل PDMS توفر خصائص سطح المادية موحدة في جميع أنحاء ميكروفلويديكس. وبدلاً من ذلك، يمكن استخدام طبقة رقيقة PDMS على الشريحة الزجاجية. صمم القالب الرئيسي مع أبعاد قناة معينة وملفقة بالطحن الجزئي على ورقة الألمنيوم. وكان دوامة القناة المستخدمة في هذه الدراسة microchannel دوامة 8-حلقة مع مدخل واحد واثنين من المنافذ، مع دائرة نصف قطرها زيادة من 8 ملم إلى 24 ملم لكفاءة الفصل على أساس الحجم. - ضع العفن وطبق بيتري إلى مجفف فراغ ديغا حتى لا فقاعات مرئية على السطح، وعادة 5-10 دقيقة استخدام فراغ بيت مجففة.
- الإفراج عن الفراغ ومكان العفن وطبق بيتري في فرن 90 درجة مئوية ح 1.
ملاحظة: هوتبلت أو غيرها من أدوات تدفئة استخدامها بدلاً من فرن. - إزالة العفن وطبق بيتري من الفرن والسماح لها لتبرد في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق.
- قطع الخطوط العريضة ولكمه ثقوب الوصول السوائل على الجهاز باستخدام تثقيب 2 مم بعناية.
ملاحظة: يمكن أن تختلف الحجم لكمه تبعاً لحجم الدليل الأنابيب أو السوائل. - التقيد شريط إلى جانب قناة الجهاز والفيلم سميكة من PDMS وقشر بعناية مع الملقط لإزالة الغبار.
- علاج جانبي القناة للجهاز وعادي PDMS مع الهواء البلازما والسندات مع طبقة دعم استعداد PDMS عادي (الشكل 1A).
- ضع الشريحة على الشريحة الزجاجية 50 ملم × 70 ملم ووضعه في فرن 70 درجة مئوية مدة 30 دقيقة على الأقل تعزيز قوة الترابط.
2-القصبة الهوائية إفراز مجموعة من المرضى الموضوعين على التهوية الميكانيكية
ملاحظة: إفرازات القصبة الهوائية ويمكن الحصول من المرضى الموضوعين على التهوية الميكانيكية أثناء رعاية الخطوط الجوية الروتينية العادية باستخدام بروتوكول تعديل من الأساليب التقليدية لاستيعاب المريض التهوية القياسية، والكبار. الشطب وحددت عينات وإرسالها فورا للمعالجة.
- إذا كان تتم الإشارة إلى تطلع الرغامى، استخدام قسطرة لاستخراج إفرازات مجرى الهواء.
- تقدم القسطرة بعناية في منتصف الطريق في أنبوب داخل الرغامى وغرس 5 مل من 0.9% عقيمة المالحة العادية من حقنه معبئة مسبقاً 10 مل.
- عندما القسطرة متقدمة تماما، أو الوفاء بالمقاومة، نضح الإفرازات وجمع في وعاء جمع بصاق عقيمة.
- جمع 10 مل إفرازات القصبة الهوائية في حاوية معقمة بصاق ووضعه على الجليد. إرسال العينات فورا للمعالجة.
3-إعداد عينة إفراز القصبة الهوائية
ملاحظة: يجب إجراء جميع التجارب تحت السلامة الأحيائية مجلس الوزراء مع معدات الحماية الشخصية المناسبة.
- تفريق 1 مل عينات إفراز مجرى الهواء في 9 مل من الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) باستخدام المحاقن بلاستيكية 10 مل (لإضعاف 10 x). استخدام ماصة غير حادة لمجانسة عينة مخاط.
- سلالة مخفف مع 40 ميكرومتر نايلون خلية مصفاة لإزالة أجزاء كبيرة أو تجلط الدم، الذي يمكن أن كتلة الثقب الوصول ميكروفلويديكس أو القناة. ضع العينة على الجليد بعد المعالجة.
- تفريق مخفف لكل عينة باستخدام وحدة تخزين 100 x من المخزن المؤقت لبرنامج تلفزيوني، أدى 1,000 x تعليق المخفف. ضع العينة على الجليد أثناء عملية الانفصال الكامل.
4-الإعداد تجريبي
ملاحظة: يجب إجراء جميع التجارب تحت السلامة الأحيائية مجلس الوزراء مع معدات الحماية الشخصية المناسبة.
- تجميع الرقائق PDMS مع دليل السائل تطبيق تدفق موحد لكل من ميكروتشانيلس دوامة الأربعة (الشكل 1B).
ملاحظة: استخدمت أربع قنوات لزيادة الإنتاجية بالموازاة، فضلا عن الاستفادة المثلى من كثافة التخزين وخلية تعليق الناتجة. دليل السائل هو تصميم ومع طابعة نوع المجسمة ثلاثية الأبعاد مع الراتنج واضحة. المدخل ومنفذ مأخذ الدليل السوائل استخدام الإناث اللوير موصلات لسهولة الاتصال وختم مستقرة أثناء العملية. - قم بتوصيل موصل اللوير ذكور 1/16 بوصة المدخل ومنفذ الجدار الداخلي (IW) والمنفذ منفذ الجدار الخارجي (آه) من دليل السائل وتوصيل أنابيب سيليكون تعليق عينة.
- إدراج نصائح حادة في نهاية كل مدخل ومنافذ للوصول إلى الجزء السفلي من الخزان عينة.
- قم بتوصيل مضخة تمعجية مع أنابيب مدخل.
- وضع النهاية لمدخل الأنبوب والأنابيب منفذ IW في الخزان العينة ووضع نهاية الأنابيب منفذ آه في خزان النفايات (الشكل 1، د).
- وضع أنبوب 50 مل من برنامج تلفزيوني تم تصفيتها دون الكالسيوم والمغنيسيوم في الخزان عينة.
- بدء ضخ بمعدل تدفق منخفض (~ 1 مل/دقيقة) رئيس الجهاز.
ملاحظة: عندما يتم التقاط فقاعات في القناة، دفع الجزء العلوي من القناة مع ملقط لزعزعة الاستقرار والقضاء على فقاعات الهواء. عندما يتم تعبئة الجهاز تماما مع الحل المخزن المؤقت، تغيير الأنبوب برنامج تلفزيوني لإعداد أنبوب عينة إفراز مجرى الهواء. - عندما يتم وضع العينة في الخزان عينة، التبديل على مضخة تمعجية وتعيين معدل التدفق في 4 مل/دقيقة (الشكل 1، د).
- عندما يصل حجم العينة إلى وحدة التخزين المعينة (~ 1 مل)، إيقاف العملية وقطع أنابيب سيليكون.
ملاحظة: الأسلوب المقترح أكثر فعالية في الحد من حجم كبير من مخفف (> 50 مل) إلى حجم أنبوب الصغير-الطرد المركزي (~ 1 مل) (الشكل 2).
5. التدفق الخلوي التحليل
ملاحظة: لمقارنة طرق الانفصال (ميكروفلويديكس وتحلل)، تم استخدام التدفق الخلوي مع الفلورة.
- إضافة fluorescein isothiocyanate (فيتك)-الماوس مترافق الإنسان المضادة CD66b [مونوكلونل] جسم واللوفيكوسيانين (APC)-مترافق الماوس المضادة الإنسان CD45 [مونوكلونل] جسم إلى تعليق الأولى (الخطوة 3، 3) والمعلقات الناتجة (الخطوة 4.9) (200 ميليلتر لكل جسم) بنسبة 01:25 الخامس/الخامس.
- احتضان هذه العينات في 4 درجات مئوية في الظلام لمدة 30 دقيقة.
- تحليل كل العينات في سيتوميتير تدفق للقياس الكمي في بمنس.
ملاحظة: يعتبر السكان إيجابية مزدوجة فيتك-آسيا والمحيط الهادئ والإيجابي CD66b وإيجابية CD45 أن العَدلات. تم حساب الاسترداد بنسبة أرقام الخلية إجمالي المدخلات وتعليق الناتجة.
6. تحليل الإصدار ني
ملاحظة: لمقارنة وظيفة عزلة العَدلات بطريقة ميكروفلويديكس، وتحلل، وضع مجموعة من أدوات تحليل NE استخدمت.
- إضافة سلطة النقد الفلسطينية (المقدمة في أدوات التحليل) لكل تعليق الناتجة (التي تم الحصول عليها في الخطوة 4.9) بتركيز نهائي من 50 نانومتر.
- احتضان هذه العينات في 37 درجة مئوية ح 2.
- الطرد المركزي أن الإيقاف على 300 غرام x لمدة 10 دقائق.
- نقل 10 ميليلتر من المادة طافية كل لوح 96-جيدا (المقدمة في أدوات التحليل).
ملاحظة: يمكن استخدام ميكروسكوبية 96-جيدا مع مسطحة القاع والبوليستيرين الأسود كذلك. - إضافة ميليلتر 90 المخفف بالانزيم المخزن المؤقت (المقدمة في أدوات التحليل) لكل بئر.
- إضافة 10 ميليلتر من الركازة elastase (Z-علاء-علاء-علاء-علاء 2Rh110، قدمت في أدوات التحليل).
- احتضانها ح 1.5 عند 37 درجة مئوية.
- قراءة لوحة 96-جيدا باستخدام فلوروميتير في الطول موجي إثارة من 485 نانومتر والطول موجي انبعاثات من 525 نانومتر.
ملاحظة: تم تقسيم مستوى ني بالعد المجنحة من تحليل التدفق الخلوي.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
لقد حققنا معلقات الخلايا المناعية شفافة مع كلا DTT موكوليسيس وميكروفلويديكس الانفصال (الشكل 3A). ميكروفلويديكس تفارق جمعت 4.40 × 105 بمنس في المتوسط (2.1 × 104 إلى 5، 60 × 105 بمنس، n = 6) من مجرى الهواء إفراز عينات المخفف 1,000-fold (الحجم الإجمالي 50 مل) في 1 مل تعليق نظيفة. مخفف الأولية، بمنس 94.0% بالمقارنة مع (CD66b+/CD45+) عثر في حجم صغير، باستمرار أكثر من 6 عينات سريرية. ومع ذلك، الأسلوب موكوليسيس ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
في ميكروفلويديكس القصور الذاتي، تعريب الخلايا والجسيمات في موقف معين جانبية في الدقيقة-قناة استناداً على حجم5،18،،من1920. بسبب التأثير المشترك للعميد سحب قوة وقوة رفع القصور الذاتي في microchannel المنحنية أو الجسيمات الكبيرة أو العَدلات (> 10 ميكرون) تقع داخل القناة والجسيمات الصغيرة والمجاميع المخاط، والحطام أصغر من 6 ميكرون متوضعة خارج القناة في سرعة تدفق بعض الظروف10...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
مقدمي البلاغ قد قدم طلب براءة التكنولوجيا المبينة هنا.
شكر وتقدير
وأيد هذا العمل المعاهد الوطنية للصحة/نييد (R21AI119042) فضلا عن برنامج الفحص "تجنيب عينة U24 المعاهد الوطنية للصحة" (U24-AI118656).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| سلائف PDMS | داو كورنينج | 184 سيل ELAST كيت 3.9 كجم | 10: 1 نسبة القاعدة وعامل المعالجة |
| VWR فرن الحمل الحراري بالجاذبية | VWR 414005-128 | PDMS ليتم علاجها في 90 درجة. | |
| طبق بتري 100 مم | VWR | 89000-324 | تصنيع طبقة دعم PDMS |
| لكمة هاريس أحادية النواة | Sigma-aldrich | WHAWB100076 | قطر 2 مم أو غيرها اعتمادا على حجم الأنبوب آلة |
| بلازما الهواء | Femto Science | البلازما السطحية اللطيفة لجهاز PDMS إلى القاعدة السفلية. | |
| 2 "× 3" شريحة زجاجية | تيد بيلا ، INC. | 2195 | لدعم جهاز PDMS |
| Masterflex بكرة أنابيب السيليكون المعالجة بالبلاتين ، L / S 14 | Cole-Parmer | EW-96410-14 | أنابيب للموائع الدقيقة والمضخة التمعجية |
| 1/16 بوصة موصل لور ، ذكر | جهاز هارفارد | PC2 72-1443 | موصل لدليل السوائل |
| 50 مل أنبوب الصقر | Corning | 21008-940 | جمع العينات وإعدادها |
| محلول ملحي مخزن بالفوسفات، 1X بدون الكالسيوم والمغنيسيوم | كورنينج | 45000-446 | محلول عازل لتخفيف العينة |
| قسطرة شفط مغلقة Halyard ، الكوع ، 14F / قناة 4.67 مم | HALYARD HEALTH | 22113 | قسطرة شفط القصبة الهوائية |
| 0.9٪ محلول ملحي عادي معقم ، حقنة مملوءة مسبقا 10 مل | BD PosiFlush | NHRIC: 8290-306547 | لجمع فصل القصبة الهوائية من المرضى |
| SecurTainer & trade ؛ حاويات العينات الثالثة ، 20 مل | Simport | 1176R36 | حاوية جمع البلغم المعقم (إفراز مجرى الهواء) |
| حقنة مع طرف Luer-Lok ، 10 مل | BD | BD309604 | لتجانس عينة المخاط والوصول إلى قاع أنبوب العينة |
| BD & nbsp ؛ إبرة تعبئة حادة ، مع BD Luer-Lok ؛ نصيحة | BD | لتجانس العينة المخاطية والوصول إلى قاع أنبوب العينة | |
| 40 & micro; م مصفاة خلية النايلون | فالكون | 21008-949 | لإزالة قطعة كبيرة أو جلطات دموية ، والتي يمكن أن تسد فتحة الوصول إلى الموائع الدقيقة أو القناة. |
| المضخة التمعجية (محرك رقمي Masterflex L / S) | Cole-Parmer | HV-07522-30 | تشغيل الموائع الدقيقة |
| BD LSR II مقياس التدفق الخلوي | BD Bioscience | LSR II مقياس التدفق | القياس الكمي لنسبة استرداد الخلية |
| الفلورسين إيزوثيوسيانات (FITC) الفأر المترافق المضاد للإنسان CD66b BD | Bioscience | 561927 | تلوين مناعي للعدلات لتحليل مقياس التدفق الخلوي |
| Allophycocyanin (APC) - الفأر المترافق المضاد للإنسان CD45 الجسم المضاد أحادي النسيلة | BD Bioscience | 561864 | تلطيخ المناعة للعدلات لتحليل مقياس التدفق |
| الخلوي قارئ اللوحة | Thermo Fisher العلمي | قارئ لوحة Varioskan لمقايسة الإيلاستاز العدلات ، ex485 / em525 | |
| مجموعة فحص الإيلاستاز العدلات | كايمان الكيميائية | 600610 | تقييم وظائف العدلات |
| الفلورسبرايت YG المجهرية 10.0 & ميكرو ؛ م | PolyScience، Inc. | 18140-2 | جزيئات الفلورسنت للتعبير عن مسار خلايا الدم البيضاء في الموائع الدقيقة |
المراجع
- Hamid, Q., et al. Methods of sputum processing for cell counts, immunocytochemistry and in situ hybridisation. European Respiratory Journal. 20 (Supplement 37), 19S-23S (2002).
- van Overveld, F. J., et al. Effects of homogenization of induced sputum by dithiothreitol on polymorphonuclear cells. J Physiol Pharmacol. 56, Suppl 4. 143-154 (2005).
- Qiu, D., Tan, W. C. Dithiothreitol has a dose-response effect on cell surface antigen expression. J Allergy Clin Immunol. 103 (5 Pt 1), 873-876 (1999).
- Usher, L. R., et al. Induction of Neutrophil Apoptosis by the Pseudomonas aeruginosa Exotoxin Pyocyanin: A Potential Mechanism of Persistent Infection. The Journal of Immunology. 168 (4), 1861-1868 (2002).
- Di Carlo, D. Inertial microfluidics. Lab Chip. 9 (21), 3038-3046 (2009).
- Martel, J. M., Toner, M. Inertial focusing dynamics in spiral microchannels. Phys Fluids. 24 (3), 32001(2012).
- Zhang, J., et al. Fundamentals and applications of inertial microfluidics: a review. Lab Chip. 16 (1), 10-34 (2016).
- Hou, H. W., Bhattacharyya, R. P., Hung, D. T., Han, J. Direct detection and drug-resistance profiling of bacteremias using inertial microfluidics. Lab Chip. 15 (10), 2297-2307 (2015).
- Warkiani, M. E., et al. Ultra-fast, label-free isolation of circulating tumor cells from blood using spiral microfluidics. Nat Protoc. 11 (1), 134-148 (2016).
- Warkiani, M. E., Tay, A. K., Guan, G., Han, J. Membrane-less microfiltration using inertial microfluidics. Sci Rep. 5, 11018(2015).
- Warkiani, M. E., Wu, L., Tay, A. K., Han, J. Large-Volume Microfluidic Cell Sorting for Biomedical Applications. Annu Rev Biomed Eng. 17, 1-34 (2015).
- Kwon, T., et al. Microfluidic Cell Retention Device for Perfusion of Mammalian Suspension Culture. Sci Rep. 7 (1), 6703(2017).
- Wu, L., Guan, G., Hou, H. W., Bhagat, A. A., Han, J. Separation of leukocytes from blood using spiral channel with trapezoid cross-section. Anal Chem. 84 (21), 9324-9331 (2012).
- Guan, G., et al. Spiral microchannel with rectangular and trapezoidal cross-sections for size based particle separation. Sci Rep. 3, 1475(2013).
- Kotz, K., Cheng, X., Toner, M. PDMS Device Fabrication and Surface Modification. J Vis Exp. (8), e319(2007).
- Duffy, D. C., McDonald, J. C., Schueller, O. J. A., Whitesides, G. M. Rapid Prototyping of Microfluidic Systems in Poly(dimethylsiloxane). Analytical Chemistry. 70 (23), 4974-4984 (1998).
- Ryu, H., et al. Patient-Derived Airway Secretion Dissociation Technique To Isolate and Concentrate Immune Cells Using Closed-Loop Inertial Microfluidics. Anal Chem. 89 (10), 5549-5556 (2017).
- Mach, A. J., Di Carlo, D. Continuous scalable blood filtration device using inertial microfluidics. Biotechnol Bioeng. 107 (2), 302-311 (2010).
- Di Carlo, D., Irimia, D., Tompkins, R. G., Toner, M. Continuous inertial focusing, ordering, and separation of particles in microchannels. Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (48), 18892-18897 (2007).
- Xiang, N., et al. Fundamentals of elasto-inertial particle focusing in curved microfluidic channels. Lab Chip. 16 (14), 2626-2635 (2016).
- Lotvall, J., et al. Asthma endotypes: a new approach to classification of disease entities within the asthma syndrome. J Allergy Clin Immunol. 127 (2), 355-360 (2011).
- Houston, N., et al. Sputum neutrophils in cystic fibrosis patients display a reduced respiratory burst. J Cyst Fibros. 12 (4), 352-362 (2013).
- Janoff, A., Scherer, J. Mediators of inflammation in leukocyte lysosomes. IX. Elastinolytic activity in granules of human polymorphonuclear leukocytes. J Exp Med. 128 (5), 1137-1155 (1968).
- Kawabata, K., Hagio, T., Matsuoka, S. The role of neutrophil elastase in acute lung injury. Eur J Pharmacol. 451 (1), 1-10 (2002).
- Rubin, B. K. Plastic Bronchitis. Clin Chest Med. 37 (3), 405-408 (2016).
- Kokot, K., Teschner, M., Schaefer, R. M., Heidland, A. Stimulation and inhibition of elastase release from human neutrophils dependent on the calcium messenger system. Miner Electrolyte Metab. 13 (2), 133-140 (1987).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
