تريدوهيل: "بروتوكول التدريب" الفاصل الزمني "ممارسة فعل بلطف" في melanogaster المورفولوجية

Summary

يستخدم تريدوهيل حركة دورانية لحمل ممارسة البالغين melanogaster المورفولوجية بلطف باستغلال جيوتاكسيس الفطرية، والسلبية الذباب. أنها تسمح لتحليل التفاعلات بين العوامل، مثل النمط الوراثي، والجنس، والنظام الغذائي، وأثرها على فحوصات الجزيئية والفيزيولوجية وممارسة لتقييم الصحة الأيضية.

Abstract

معدل الإصابة بالأمراض الأيضية المعقدة زاد نتيجة لانتقال على نطاق واسع نحو أساليب الحياة من زيادة السعرات الحرارية ومستويات النشاط المخفض. وتنشأ هذه الأمراض المتعددة العوامل من مزيج من العوامل الوراثية والبيئية والسلوكية. هو أحد الأمراض المعقدة مثل هذه "المتلازمة الأيضية" (ميتس)، التي مجموعة من الاضطرابات الأيضية، بما في ذلك ارتفاع ضغط الدم وارتفاع السكر في الدم، والسمنة البطن. ممارسة والتدخل الغذائية هي العلاجات الأولية الذي أوصت به الأطباء للتخفيف من السمنة والأمراض الأيضية اللاحقة لها. ممارسة التدخل، خاصة الهوائية الفاصل الزمني للتدريب، ويحفز تغييرات إيجابية في عوامل الخطر الشائعة "النوع 2 السكري" (T2DM)، وأمراض القلب والأوعية الدموية (الرسوم التعويضية)، والظروف الأخرى. ومع تدفق الأدلة تصف ممارسة التأثير العلاجي له على الصحة الأيضية، وإنشاء نظام لممارسة نماذج في إعداد التي تسيطر عليها يوفر أداة قيمة لتقييم آثار ممارسة في سياق تجريبي. Melanogaster المورفولوجية هو أداة عظيمة للتحقيق في التغيرات الفسيولوجية والجزيئية التي تنتج عن ممارسة التدخل. وقد الذباب آليات مماثلة من التاييض المواد الغذائية بالمقارنة مع البشر وإعمار قصيرة. للحث على ممارسة في المورفولوجية، قمنا بتطوير جهاز يسمى تريدوهيل، الذي يستخدم الطاير جيوتاكسيس الفطرية، والسلبية الميل إلى الحث بلطف التسلق. هذا يتيح للباحثين لإجراء تجارب على أفواج كبيرة من الذباب وراثيا متنوعة لتحسين فهم التفاعلات الوراثي بالبيئة الأساسية لآثار العملية على الصحة الأيضية.

Introduction

الطفولة والبالغين من السمنة تتزايد الأوبئة في الثقافات التي تستهلك الوجبات عالية السعرات الحرارية وتبقى خاملة لفترات طويلة من الزمن، والتي يمكن أن تؤدي إلى عواقب طويلة الأجل، بما في ذلك مقاومة الأنسولين والتهاب مزمن، وهشاشة العظام ^{1 , 2 , 3 , 4}-لا يزال انتشار هذه الاضطرابات الارتفاع بسبب الاختلال المتزايد في السعرات الحرارية والإنفاق وتعزى إلى ارتفاع استهلاك الدهون والسكريات و نمط حياة المستقرة أساسا⁵. وفي المقابل، أدى هذا الاختلال الطاقة إلى زيادة في حالات من "النوع 2 السكري" (T2DM) وأمراض القلب والأوعية الدموية (الرسوم التعويضية)⁵. الأفراد هم في خطر أعلى لتطوير كلا اضطرابات إذا ما تم تشخيص اضطراب "المتلازمة الأيضية" (ميتس)، الأعراض التي تشمل السمنة البطن ودسليبيدميا². ميتس يتشكل بتفاعلات معقدة بين النمط الوراثي والعوامل البيئية المختلفة، مثل النظام الغذائي وممارسة⁶. وهكذا، الحصول على فهم كامل للآليات الكامنة لهذا المرض معقدة، كل هذه العوامل ينبغي النظر.

عندما يتعلق الأمر بمكافحة ميتس، يوصي الأطباء أولاً تغيرات نمط الحياة تشمل تناول الطعام نظام غذائي صحي ومتوازن جيدا والنشاط البدني^2،،من⁷⁸. حيث تقتصر الأدوية الفعالة والمعدة لعملية جراحية مكلفة وتتطلب مراقبة طبية مدى الحياة، ينصح بالتدخل الدوائي والجراحي فقط للحالات الشديدة، وفقط بالاقتران مع هذه التغيرات في نمط الحياة^{3 ،،}من⁷⁸. بينما يمكن أن تنتج التدخلات نمط الحياة، مثل ممارسة واتباع نظام غذائي، والحفاظ على الأهداف طويلة الأجل وفقدان الوزن، أو عدمه هذه التدابير التصحيحية تماما يمكن تحسين الآثار السلبية المرتبطة ميتس يحتاج إلى مزيد من الدراسة^{7، 8}.

وقد استخدمت نماذج الماوس لدراسة آثار العملية على الأمراض الأيضية لسنوات؛ لكن هو الأخذ بممارسة للطيران للبحث عن ميتس حديثة نسبيا مسعى^9،10،،من¹¹¹². توفير الذباب السيارة المثالية لدراسة الممارسة في مختبرات التي تسيطر عليها، نظراً لأنها يتم التلاعب بها بسهولة، فترة قصيرة، وهي غير مكلفة للحفاظ على، والمتصلة بالطاقة الأيضية العالية المحافظة عليها بين المورفولوجية والبشر¹³. جينومات melanogaster دال- تتميز جيدا، وهناك ثروة من علم الوراثة الأدوات متوفرة للاستخدام في المورفولوجية التي يمكن أن توفر نظرة ثاقبة مختلف الأنماط الجينية والتفاعلات الوراثي بالبيئة التي يمكن أن تعدل أثر ممارسة الصحة العضوي¹⁴.

استدعاء الأساليب الحالية لممارسة المورفولوجية جيوتاكسيس الفطرية، والسلبية الميل للطيران، غريزة السلوكية الصعود إلى أعلى، وحفز التسلق في البالغين داخل على أسوار^11،12،15 . برج الطاقة، أسلوب واحد لتحفيز عملية في الذباب، بشكل منهجي ويثير التسييج يطير عمودياً وثم إلغاؤه لهم العودة إلى السطح، ومقاعد البدلاء فعالية يطرق الذباب إلى أسفل القنينة، مما حمل على جيوتاكسيس السلبية الغرائبية ^{12 , 16}-التجارب التي أجريت باستخدام هذا الجهاز وأظهرت أن ممارسة هو عامل وقائي قوية ضد العديد من الأمراض المتصلة بالشيخوخة، بما في ذلك الرسوم التعويضية و T2DM، وتعزز الشيخوخة الصحية^12،17،18 . على وجه التحديد، فقد أظهرت أن ممارسة يمكن تقليل حدوث انخفاض الحركة المرتبطة بالسن في الذباب وتحسين متعددة الأعراض المرتبطة بالسن، مثل أداء القلب والتشديد على استجابة^17،18. ومع ذلك، الذباب التحكم ابدأ وضع على البرج وأظهرت عشرات تسلق أعلى من تلك التي تعاني من الجهاز، مما يوحي بقوة قطرات المتكررة قد تكون إصابة الذباب والتي تؤثر على تنقل¹². وهذا يوحي بأن أسلوب بديل لحمل ممارسة أقل قوية ويتجنب يسبب الصدمة البدنية طريقة مفيدة ومكملة ل بروتوكول برج الطاقة¹⁶.

للطف الحث على ممارسة في المورفولوجية، قمنا بتطوير جهاز ممارسة تسمى تريادوهيل (الشكل 1). تريدوهيل في (من الآن فصاعدا يختصر ك TW) الحركة الدورانية مشغلات ميل جيوتاكسيس الفطرية، والسلبية الذباب باستمرار إعادة الجاذبية أعلى قارورة، الذي يحفز بدوره، تسلق في الذباب. خلافا للطرق الأخرى، حركة دورانية TW طبيعتها رقيقة، مما يقلل من عدد الضغوطات الإضافية التي قد تنشأ وتؤثر النتائج. وهكذا، يوفر الجهاز وسيلة للحث على ممارسة إعداد كبيرة من الذباب دون حمل الإجهاد، والتي سوف تمكن الباحثين من دراسة آثار العملية على الصحة الأيضية (الشكل 2)، والشيخوخة، والنوم، والعديد من المواضيع الأخرى¹¹.

لدينا أسلوب يتبع هرمي معكوس، والفاصل الزمني للتدريب البروتوكول، الذي يتضمن جوانب التدريب (AIT) مع بعض التحمل الهوائية للفاصل الزمني الخاص إلى حد كبير ممارسة التدريب. يتم تغيير نظام المعهد الآسيوي للتكنولوجيا القياسية في هذا البروتوكول تدريجيا بزيادة مدة كل فاصل زمني لمدة خمسة أيام لتعزيز القدرة على التحمل. المعهد الآسيوي للتكنولوجيا مفيدة بشكل خاص في منع ميتس مقارنة بغيره من أساليب التدخل وكانت أكثر فعالية في عكس "متلازمة الأيض" عوامل الخطر المشترك من استمرار ممارسة معتدلة^19،20. ومع ذلك، هو سيئات TW بالنسبة إلى برج الطاقة أن روض الذباب بسرعة أكبر للحركة الدورية، وبالتالي الاختلاف في الميل الفطري روض بين الذباب يمكن أن يعقد تفسير فوائد ممارسة. ¹¹ حلاً رائعا لهذا القيد هو وصف واتانابي واللغز¹⁵ وما يكمل المادة²¹.

Protocol

1-تريادوهيل الإعداد والتشغيل

ملاحظة: انظر تكميلية الرقم 1 للخطط في TW ممارسة بناء الجهاز. يتم سرد الأجزاء المطلوبة في الجدول للمواد. العبارات "TW"، "تريدوهيل"، "ممارسة الجهاز"، و "آلة" تستخدم بالتبادل في جميع أنحاء البروتوكول.

1. معايرة للسيارات باستخدام مفتاح الطاقة مثل فترة دوران الكامل هو 15 s (4 لفة في الدقيقة). معايرة سرعة دوران الجهاز قبل وضع قنينات يطير إلى المضمون المشابك يعلق على الأسلحة الدورية.
   1. ضبط سرعة استخدام ساعة توقيت قياسي وكائن غير متحرك موقت في الجهاز، مثل فرشاة طلاء صغيرة مسجلة بغطاء المحرك مع الفرشاة مجرد لمس أحد الأقواس الدورية. الوقت عدد عمليات التناوب في دقيقة واحدة باستخدام كائن غير متحرك كنقطة مرجعية، وضبط السرعة لتحقيق فترة تناوب s 15 (4 لفة في الدقيقة).

2-يطير جمع وصيانة

ملاحظة: يتم الاحتفاظ بجميع الذباب في حاضنة 25 درجة مئوية مع رطوبة 50% ومن دائرة ضوء/الظلام ح 12 بين التلاعبات benchtop الموصوفة أدناه. ويتم تغذية الذباب غذائي معمل دبس دقيق ذرة قياسي إلا إذا ذكر خلاف ذلك.

1. إعداد الدوائر زرع لكل النمط الوراثي لمصلحة استخدام لوحات أجار عصير التفاح، قطره خميرة لصق كل لوحة، وأوقية. 6 زجاجات بلاستيكية لجمع البيض الذي سوف يفقس إلى يرقات.
   1. لتحضير عصير التفاح لوحات أجار، وملء أطباق بتري 35 مم × 10 مم ¾-كامل مع أجار 3% حله في عصير التفاح خزن اشترى. تخزين ألواح الصلب في ثلاجة حتى الاستخدام.
   2. في أنبوب 50 مل مخروطية أجهزة الطرد مركزي، الجمع بين خزن اشترى الخميرة الجافة النشطة مع الماء المقطر بنسبة 2 مل الماء لكل غرام من الخميرة. مزيج الخميرة مع الماء لخلق عجينة مع اتساق الصلصة استخدام زجاج إثارة رود. ضبط نسب الخميرة والماء حسب الحاجة لتحقيق التناسق المنشود.
   3. تخزين لصق الخميرة في ثلاجة بين الاستخدامات. إبقاء الغطاء أنبوب فضفاضة للسماح بإزالة جاسينج.
   4. استخدام إبرة حادة أو سكين للكمه ثقوب صغيرة في أوقية. 6 زجاجات أسفل مربع (بولي بروبلين) كفتحات التهوية للدوائر زرع.
   5. الدأب بقعة صغيرة من عجينة الخميرة (~ 3 مم في القطر) على كل لوح أجار عصير التفاح.
2. ضع الذباب الكبار من النمط الوراثي المطلوب في 6 أوقية. زجاجة وزجاجة كاب مع لوحة أجار عصير التفاح. تأمين لوحة بزجاجة مع الأربطة المطاطية. عكس، ووضع في حاضنة للسماح للكبار لوضع البيض.
3. تغيير لوحات أجار عصير التفاح في دائرة زرع مرتين في يوم (صباحا ومساء). لوحات إجازة المستخدمة في الحاضنة لآخر ح 12-24 للسماح بالأول instar اليرقات فتحه.
4. جمع أول instar اليرقات استخدام بيك رقيقة الرسام أو جمع (إبرة رقيقة مرنة مرفقة بمقبض). أولاً instar 50 مكان اليرقات النمط الوراثي محددة في قنينة أغذية من نوع الغذاء المطلوب التجريبية لتطوير ومسخ كاملة بينما يقع في الحاضنة (الشكل 2أ).
5. جمع الكبار لممارسة العلاج (الشكل 2أ).
   1. عند بوبيشن، جمع الخوادر مع الرسام صغيرة ورطبة وتوضع في قنينة فارغة قبل اكلوسيون لمنع الذباب الكبار من التعرض لغذاء اليرقات.
   2. نقل الذباب الكبار إلى الغذاء قنينة من حمية المختبر القياسية كما أنهم اكلس. واحد إلى خمسة أيام بعد اكلوسيون، فصل الذباب على أساس نوع الجنس.
6. النصف المعين من الكبار التي جمعت كل إلى التجريبية ومجموعات المراقبة. الحفاظ على الذباب في قارورة مختبر معيار النظام الغذائي بتركيز 50 الذباب كل قنينة.
7. نقل الكبار إلى قنينات المواد الغذائية الطازجة كل يومين للحيلولة دون أن يعلقوا أثناء ممارسة الرياضة. إضافة العديد من الحبوب من الخميرة الحية تكميلية للأغذية الجديدة مباشرة قبل إدخال الذباب.
   ملاحظة: في حين أنه من الممكن للحفاظ على الذباب دون تكملة خميرة حية، وجدنا أن الذباب الكبار بأداء أفضل مع مكملات. مكملات الخميرة الحية هو متغير التي يمكن تعديلها لتناسب أهداف تجريبية للباحث.

3-ممارسة البروتوكول

1. في اليوم الأول من العملية (1 يوم)، المقابس قنينة دفعة ترك 1 سم الفضاء في قنينات التحكم و 6 سم من المساحة بين الغذاء وسد العجز في ممارسة القنينات (الشكل 1).
   ملاحظة: قنينة التحكم سوف لديك مساحة محدودة للذباب لنقل بينما على الجهاز ممارسة وهكذا سيعكف الذباب في كثير الحركة أقل مما في قنينات ممارسة.
2. ضع قارورة في المشابك، ومن ثم إعطاء الذباب 10 دقيقة ليتأقلم على الجهاز (الشكل 1ب).
   ملاحظة: عنصر تحكم بديلة الحفاظ على الذباب باء على benchtop المتاخمة للجهاز ممارسة مع 6 سم الفضاء (في القنينة) لنقل عادة. نتائج مماثلة للعملية بالنسبة لكل من "1 سم في تريدوهيل" وعناصر "6 سم في benchtop" عثر على¹¹.
3. التعامل مع كل عنصر تحكم، وممارسة الذباب بالتناوب على الجهاز في درجة حرارة الغرفة ثابتة لمدة 5 أيام متتالية في الأسبوع مع نوبات من التناوب وبقية (الشكل 1د) بالتناوب.
   ملاحظة: درجة حرارة ثابتة ضروري لتجنب آثار الخلط في درجة حرارة على مستويات النشاط. الدراسات التلاعب بدرجة الحرارة، ضع TW داخل حاضنة لتعديل درجة الحرارة العلاجات أثناء ممارسة التدريب.
   1. تشغيل الجهاز لأربع نوبات 15 دقيقة من ممارسة "يوم واحد". بديل هذه نوبات مع فترات الراحة 5 دقائق.
   2. كل يوم من الأيام التالية، إضافة 5 دقائق لممارسة واحدة من نوبات ممارسة موجودة مسبقاً. على سبيل المثال، في اليوم 2، تجعل نوبة ممارسة أول 20 دقيقة طويلة، ولكن الحفاظ على بقية نوبات في 15 دقيقة طويلة.
   3. في يوم 3، ممارسة الذباب لمدة 20 دقيقة أثناء نوبات الأولى والثانية و 15 دقيقة لنوبات اثنين التالية.
   4. في يوم 4، استخدم نوبات ممارسة 20 دقيقة للجميع باستثناء المباراة النهائية، التي ينبغي إلا 15 دقيقة طويلة.
   5. في يوم 5، تبقى جميع ممارسة نوبات طويلة 20 دقيقة.
      ملاحظة: أثناء فترات الراحة، ينبغي أن تظل قارورة تحتوي على الذباب فرضت بشكل أمن على TW. اتجاه القنينات أثناء هذه الفترات ليست ذات الصلة نظراً لقوة الجاذبية التي تعانيها جميع الذباب سوف تكون قادمة من نفس الاتجاه.
4. بعد الانتهاء من الممارسة العلاج ليوم معين، عودة المقابس قنينة الغذاء إلى مواقعها المعتادة والعودة تسير رحلات إلى انتهاء الحاضنات حتى اليوم التالي.
5. بعد انتهاء نظام ممارسة كاملة، تخدير الذباب باستخدام أساليب التخدير يطير القياسية CO₂ . ثم نقل الذباب إلى قارورة جديدة من الأغذية أو أنابيب ميكروسينتريفوجي لتقييم الخصائص المظهرية للفائدة.
   ملاحظة: تشمل تعمل المثال تسلق قدرة (قنينة الغذائية) أو تخزين الدهون الثلاثية (أنبوب ميكروسينتريفوجي) أو التعبير الجيني (أنبوب ميكروسينتريفوجي). يمكن أن يكون مؤقتاً البروتوكول هنا مع العينات المخزنة على نحو مناسب اعتماداً على التقييمات التي يتعين القيام بها. سوف تحتاج فحوصات تشمل الذباب المعيشة تجري على وجه السرعة وفقا للأهداف المحددة للمقايسة المظهرية.

4-تسلق التقييم

1. وبعد يوم واحد من الراحة بعد انتهاء البروتوكول ممارسة، اختبار الطيران العام تسلق الأداء باستخدام جيوتاكسيس سلبية تكرارية سريع (الدائري)-مثل التسلق جيوتاكسيس السلبية الاعتداء²².
   1. وضع مجموعات من الذباب 10 في قنينة فارغة باستخدام التخدير₂ CO (أو التنصت مباشرة من قارورة الغذاء إذا كان الفعل فرز) وختم مع الفيلم البرافين لمنع الذباب من الفرار. تعطي مين الذباب على الأقل 10 إلى تأقلم إلى القنينة الجديدة. للحيلولة دون يقلب القنينات، الشريط ~ 5 سم قطر دائرة البطاقات إلى أسفل القنينة لتوفير مساحة إضافية.
      ملاحظة: المقابس القنينة ينبغي لا أن تستخدم لأنها تعوق جزء من القنينة المستخدمة لتحديد الارتفاع قد ارتفع.
   2. ضع قارورة 20 سم أمام شبكة 1 سم × 1 سم على مرأى ومسمع من كاميرا محمولة، ثابتة مع جهاز ضبط وقت مضمنة (الهواتف ذكية جهاز ضبط وقت كاميرا تطبيق يعمل جيدا مع).
   3. اضغط القنينات بلطف على أوقات ثلاثة مضادة لضرب الذباب جميع أسفل القنينة. بعد التنصت على القنينة أسفل المرة الثالثة، يبدأ فورا 4 s الكاميرا الموقت لالتقاط صورة لتحديد الارتفاع قفز بكل ذبابة.
      ملاحظة: ينبغي أن يتم التنصت كثافة متسقة والباحث نفسه في كل ممارسة السيطرة على النقيض للتقليل من التباين في استجابات الذباب بسبب التنصت.
   4. كرر الخطوة 4.1.3 مرتين، مع باقي دقيقة على الأقل 1 بين المحاكمات، لإنتاج ما مجموعة ثلاث محاكمات للقنينة الواحدة.
2. للحفاظ على الذباب لغيرها من التحليلات، فورا بعد اكتمال الإنزيم التسلق، تجميد فلاش الذباب بالانغماس في نيتروجين سائل.
   1. استخدام قارورة ديوار الضحلة، وتصدرت مفتوحة مليئة بعمق ~ 5 سم بالنتروجين السائل.
   2. نقل الذباب لأنابيب ميكروسينتريفوجي الصغيرة باستخدام التخدير₂ CO ثم قم بوضع الأنابيب في قارورة ديوار مملوءة بالنتروجين السائل. وبدلاً من ذلك، إذا كان التحليلات المقبلة تتطلب تجنب CO₂، تجميد المفاجئة الذباب مباشرة في هذه القنينات التسلق بالتنصت على الذباب إلى الجزء السفلي من هذه القنينة بلطف بينما الجزء السفلي هي غارقة في النتروجين السائل، ومن ثم نقل الذباب المجمدة إلى ميكروسينتريفوجي الأنابيب باستخدام الملقط.
      ملاحظة: نيتروجين سائل المبردة ويجب استخدامه فقط مع المعدات وغرفة واقية التهوية.
3. معالجة الصور باستخدام أداة التحديد المتعدد النقاط²³ إيماجيج.
   1. فتح صورة للمعالجة داخل إيماجيج.
   2. تعيين نطاق 1 سم استناداً إلى ورقة خلفية الشبكة لحساب المسافة قفز بكل ذبابة الفردية. استخدام "أداة سطر" من شريط الأدوات إلى تتبع جانب واحد على ساحة² 1 سم من الورق الشبكة الخلفية. انقر فوق علامة التبويب "تحليل" وحدد "تعيين مقياس". تعيين "المسافة المعروفة" كما '1.00' و "وحدة من طول" 'سم'، تأكد من "العالمية" من دون رادع، وانقر فوق "موافق".
   3. حدد الرمز "اختيار متعددة النقاط" من شريط الأدوات، والتكبير في أسفل القنينة في الصورة. تعيين أول نقطة كقاع القنينة بالنقر فوق في الجزء الأدنى من القنينة.
   4. انقر فوق مركز كل ذبابة في القنينة لوضع علامة عليها كنقطة بيانات. علما أن هناك ما مجموعة 11 نقطة كل قنينة، واحدة مناسبة أسفل القنينة وواحدة لكل ذبابة.
   5. انقر فوق علامة التبويب "تحليل" وحدد "إجراء" لإنشاء جدول القيم المقاسة. حفظ الجدول في ملف csv.
   6. فتح ملف csv في برنامج جداول بيانات وحساب المسافة بالضبط قفز بكل يطير بطرح قيم y من النقاط 2-11 من النقطة 1 في الجدول القيم المقاسة.
   7. كرر الخطوات من 4.3.1 عن طريق 4.3.6 لكل صورة.

5-الدهون الثلاثية بتخزين الإنزيم

ملاحظة: عينات، المعايير وحل والغليسيرول القياسية، وحل العامل تريجليسيرول المستخدمة في جميع أنحاء المقايسة ينبغي إبقاء على الجليد لمدة البروتوكول ويجب تخزينها في الثلاجة عندما لا تكون قيد الاستعمال.

1. إعداد معايير لاستخدام الحل "والغليسيرول القياسية".
   1. جعل فارغة (ب) عن طريق إضافة 1,000 ميليلتر من تجانس المخزن المؤقت إلى أنبوب ميكروسينتريفوجي المسمى ب
   2. جعل معيار 1 (S1)، 2.5 ملغ/مل في البئر، بإضافة ميليلتر 1,000 الحل والغليسيرول القياسية لأنبوب ميكروسينتريفوجي المسمى S1.
   3. جعل 2 القياسية (S2)، 1.25 ملغ/مل في البئر، بإضافة 500 ميليلتر من الحل والغليسيرول القياسية إلى 500 ميليلتر من diH₂س في أنبوب ميكروسينتريفوجي المسمى S2.
   4. جعل 3 القياسية (S3)، 0.625 ملغ/مل في البئر، بإضافة 250 ميليلتر من الحل والغليسيرول القياسية إلى 750 ميليلتر من diH₂س في أنبوب ميكروسينتريفوجي المسمى S3.
   5. جعل 4 القياسية (S4)، 0.3125 مغ/مل في البئر، بإضافة 125 ميليلتر من الحل والغليسيرول القياسية إلى 875 ميليلتر من diH20 في أنبوب ميكروسينتريفوجي المسمى S4.
2. إعداد حل العامل تريجليسيرول من "مجموعة تصميم المصل الدهون الثلاثية".
   1. إضافة 40 مل من diH₂س للكاشف والغليسيرول مجاناً من الطقم ومزج بعكس الزجاجة.
   2. إضافة 10 مل من diH₂س بحل الدهون الثلاثية من طقم ومزج بعكس الزجاجة.
   3. الجمع بين حل والغليسيرول الكاشف والدهون الثلاثية ومزج بعكس إعداد الحل العامل تريجليسيرول.
      ملاحظة: الحل العامل تريجليسيرول جيدة لمدة 60 يوما ويمكن إكمال أربعة فحوصات لوحة 96-جيدا كل مجموعة باستخدام البروتوكول أدناه. التناسب تقليص وحدات التخزين المستخدمة من الطقم "المصل الدهون الثلاثية التصميم" الرسمية لاستخدامها في تنسيق لوح 96-جيدا.
3. تحقق من فارغة والمعايير بعناية بيبيتينج 5 ميليلتر لكل معيار في شقة 96-بئر القاع، الميكروسكوبية واضحة في ثلاث نسخ (أو البيلوروسية للفراغ).
   1. إضافة 125 الضبط ميليلتر من "تريجليسيرول يعمل الحل" لكل معيار يتضمن أيضا. تتيح حلول للرد لمدة 30 دقيقة.
   2. ضع لوحة 96-جيدا في جهاز المطياف الضوئي وقراءة امتصاص في 540 نانومتر. استخدام القياسات امتصاص لإنشاء منحنى قياسي والتحقق من دقة معايير تقييم قيمة² R. إذا كان R² للمعايير أقل من 0.98، إعادة إعداد المعايير بعناية أكبر.
4. يبدأ يوم 1 من المقايسة ل تخزين الدهون الثلاثية¹⁴ استخدام أنابيب ميكروسينتريفوجي التي تحتوي على 10 المجمدة الذباب كل منهما.
   ملاحظة: ماصة تكرار أو متعدد القنوات ينبغي ابدأ أن تستخدم في هذه الخطوة لأنه يجب أن تكون المبالغ لكل كاشف المستخدمة في المقايسة جداً دقيقة ومتناسقة للحصول على النتائج استنساخه. في تجربتنا، لا تملك ماصات تكرار ومتعدد القنوات هذه الدرجة من الدقة والاتساق. كل قاسمة من ماصة قناة واحدة يمكن أن يؤكده بصريا المجرب لمراقبة الجودة والتحيزات الخاصة ماصة قناة واحدة أي سوف يكون من ذوي الخبرة بجميع العينات بنفس الدرجة.
   1. إعداد مخزون 200 مل من "تجانس المخزن المؤقت" عن طريق الجمع بين 0.272 ز خ₂ص₄، 400 ميليلتر يدتا 0.5 متر، ومل 199.6 diH₂س في زجاجة زجاج.
   2. إضافة بالضبط 100 ميليلتر من تجانس المخزن المؤقت لكل من الأنابيب ميكروسينتريفوجي 40 يحتوي على 10 أشخاص بالغين المجمدة بعد الإنزيم التسلق. ثم الطرد المركزي عينات لمدة 30 ثانية في 18,000 ز.
   3. طحن الذباب باستخدام طاحونة يجهز ومدقة (أو شكل آخر من تجانس الأنسجة) لإعداد حل حليبي. تأكد من أن يستخدم مدقة جديدة لكل عينة. ثم الطرد المركزي عينات لمدة 2 دقيقة في 18,000 ز.
   4. "الماصة؛" فقط ميليلتر أعلى 75 من السوائل طافية من كل أنبوبة في أنابيب ميكروسينتريفوجي جديدة. ضمان أن لا بت يطير من بيليه يتم نقلها عبر. وضع أنابيب جديدة في الثلاجة بين عشية وضحاها.
5. يبدأ يوم 2 من البروتوكول الدهون الثلاثية عن طريق إزالة عينات 1 يوم من الثلاجة.
   ملاحظة: يمكن إجراء الخطوة 5.5 في نفس اليوم الذي 5.4 لكن وجدنا الإشارة لتركيز الدهون الثلاثية لتكون أكثر قوة بعد ليلة في الثلاجة. ومع ذلك، إلا تتجاوز الفترة بين 5.4 الخطوات و 5.5 ح 36.
   1. (اختياري) دوامة الأنبوب الأول مع سائل طاف 10 s وماصة 5 ميليلتر في أنبوب ميكروسينتريفوجي نظيفة. إضافة ميليلتر 95 من 0.15 م كلوريد الصوديوم في أنبوب ميكروسينتريفوجي الجديدة. تخزين هذه عنها في الثلاجة-20 درجة مئوية مقايسة لاحق من البروتين إذا رغبت في ذلك.
      ملاحظة: يمكن استخدام هذه العينات من المادة طافية مع محلول كلوريد الصوديوم المضافة تحديد محتوى البروتين باستخدام مقايسة المفضل للباحث. ونحن نستخدم "أسلوب برادفورد"²⁴. محتوى البروتين هو أحد السبل لتوحيد قياس محتوى الدهون الثلاثية، لكن الباحث كما ينبغي الحذر في تفسير هذه النسب منذ ممارسة، والنظام الغذائي يمكن أن يؤثر أيضا على تخزين البروتين.
   2. للقنينات طافية الأصلي، يتطابق دوامة الأنبوب الأول مع سائل طاف ل 10 s، ثم ماصة 5 ميليلتر في آبار منفصلة اثنين من الميكروسكوبية 96-جيدا لإنتاج التقنية. تأكد من ملاحظة الآبار التي يتم استخدامها لكل عينة. كرر هذه الخطوة للأنابيب 39 آخرين.
   3. "الماصة؛" بالضبط 5 ميليلتر من الفراغ إلى أربعة آبار الصفيحة، وعن الآبار المتبقية، "الماصة؛" بالضبط 5 ميليلتر لكل معيار في ثلاث نسخ.
   4. إضافة حل العامل تريجليسيرول ميليلتر 125 بالضبط لكل بئر، والسماح للحل الرد لمدة 30 دقيقة.
   5. ضع لوحة 96-جيدا في جهاز المطياف الضوئي وقراءة امتصاص في 540 نانومتر.
   6. تحويل قيم امتصاص إلى تركيز (مغ/مل) باستخدام المنحنى القياسي المحسوب من المعايير.

Results

نحن مهتمة بصفة خاصة في تحديد العوامل التي تسهم في صحة التمثيل الغذائي الشاملة للفرد. واتضح سابقا أن النمط الوراثي بحمية التفاعلات تسهم إلى حد كبير السكان مستوى التباين في الصفات الأيضية¹⁴. وهذا يعني أن كل الوراثي ويستجيب للاختلافات البيئية بطريقة فريدة ومعقدة. تمديد عملنا بشأن تأثيرات النمط الوراثي بالبيئة لتشمل ممارسة الرياضة البدنية، قمنا بتطوير تريدوهيل، التي قادرة على تعريض إعداد كبيرة من الأنماط الجينية للفاصل الزمني الهوائي للتدريب (AIT) بطريقة الفائق.

لإثبات ما إذا كانت ممارسة في TW أثرت الصفات الأيضية، قمنا بقياس تخزين الدهون الثلاثية في ولاية أوريغون-R (أورير) و y¹ث¹ الذباب، الذباب wildtype المشتركة (الشكل 2ب – ج)، وطبعت تلك القيم ضد الذباب تركيز البروتين، ذكرت أصلاً في مينديز et al. ¹¹-قمنا بتحليل البيانات من تحليل التباين المتعدد (MANOVA) المحاسبة على النمط الوراثي، الجنس، ممارسة المعاملة (وتفاعلاتها)، وآثار كتلة التجريبية مثل replicates الوقت والغذاء فيال ووجدت أن هناك كبير التفاعل الوراثي بممارسة (p = 0.0017) التي تؤثر على تخزين الدهون الثلاثية. وكان هناك أثر كبير في ديمبرافيك جنسي بين الذكور والإناث، مع الذكور تخزين الشحوم أكثر من الإناث (ف < 0.0001). لقد رأينا أن الذباب تمارس في الإناث، وقد مستويات الدهون الثلاثية أقل بكثير من نظرائهم باء (الشكل 2ب، ف < 0.0001). في الذكور، بينما تمارس النقصان في تخزين الدهون الثلاثية التي لوحظت في ولاية أوريغون-R الذباب (بالمقارنة مع عناصر تحكم) لم يكن مهما إحصائيا، لوحظ اختلاف كبير في تخزين الدهون الثلاثية بين سطرين منفصلين (الشكل 2ج، ف < 0.0001). لاحظ أن بينما يوفر نظرة على جسم يطير عموما نسب تكوين توحيد تركيز الدهون الثلاثية ضد تركيز البروتين، كما يمكن أن توفر المقارنة المباشرة تركيز الدهون الثلاثية أو البروتين بين مجموعات مختلفة من الذباب معلومات محددة عن التأثير العملية على هذه تعمل على حدة.

نظراً للمتغيرات مثل الكبار ممارسة الجنس، ويتم إظهار النمط الوراثي تؤثر على تخزين الدهون الثلاثية، كان من المتوقع أن هذه العوامل أيضا أثر أخرى تعمل وتتفاعل مع النظام الغذائي. ورفعنا اليرقات من wildtype ممثل المورفولوجية "الوراثية المرجعية لوحة" خط (دجرب 153)²⁵ أما ارتفاع الدهون أو النظام الغذائي العادي وممارسة المستحثة في الذباب الكبار لمدة أسبوع واحد (الشكل 2أ). وفي وقت لاحق، أجرينا مقايسة جيوتاكسيس سلبية مثل خاتم لقياس القدرة على التسلق. الإنزيم التسلق المستخدمة تختلف مقايسة خاتم قياسية؛ بدلاً من جهاز رنين، استخدمت قارورة مع الفيلم البارافين تغطي الفتحات للذباب البيت أثناء الفحص. وكانت الجوانب الأخرى للتحليل الدائري الأصلي، مثل الوقت بين الاستفادة من الذباب إلى أسفل القنينة وأخذ الصورة، المحتفظ بها²².

جميع العلاجات كانت تتكرر ثلاث مرات منفصلة مع حد أدنى من 59 الذباب الفردية الواحدة وتكرار الوقت والعلاج. البيانات تم تحليلها بواسطة مانوفا المحاسبية للنظام الغذائي، والتركيب الوراثي، والجنس، وممارسة العلاج (وتفاعلاتها)، فضلا عن الآثار التجريبية كتلة تكرار الوقت والقنينة المقايسة وتكرار الفحص قنينة. وجدنا أن الإناث ممارسة تسلق أعلى بكثير (p < 0.005) عند تربيتها في حمية الدهون عالية من أي من العلاجات الإناث الأخرى (الشكل 2د). للذكور، فقد رئي أن ممارسة تحسن فقط التسلق عند الذكور قد أثيرت في النظام الغذائي العادي، وتلك التي أثيرت بشأن النظام الغذائي الدهون عالية أظهرت أي تغيير ملموس (الشكل 2ه). كما وجدنا آثار جنسياً ديمبرافيك كبيرة (ف < 0.0001) في تسلق مع الذكور تسلق أعلى من الإناث. مفاجئة نتيجة انخفاض في تسلق الأداء بعد ممارسة للإناث من سطر 153 دجرب (الشكل 2د) للإناث المستهلكة اتباع نظام غذائي عادي (ف < 0.0001) مثال عن كيفية قد لا يكون هذا النوع من ممارسة التدخل الإيجابي شكل موحد لجميع الأنماط الوراثية ويمكن أن يكون مشروطاً بعوامل بيئية أخرى. في مينديز et al. ¹¹، الإناث من أربعة خطوط وراثية أخرى اختبار لأدائهم التسلق بعد إثارة على عادي حمية جميع أظهرت قدرة التسلق معززة مع ممارسة التدريب. وهذا يشير إلى أن الاستجابة التي لوحظت في 153 دجرب الخاصة بالنمط الوراثي وليس خاصية عامة من العلاج ممارسة TW. التغير في الاستجابة عبر الجنس، والنظام الغذائي، وممارسة معاملة الجماعات يشير إلى أن هناك تفاعلات الجنس بالنظام الغذائي بممارسة هامة تؤثر على قدرة التسلق للخط (ف < 0.0001).

وتشير النتائج مجتمعة إلى أن أثر عملية في الصحة الأيضية يطير الكبار يمكن أن تكون وظيفة الجنس والوراثي، والنظام الغذائي اليرقات. لاحظ الاختلاف المظهرية ردا على النمط الوراثي، متغيرات البيئة (مثلالنظام الغذائي وممارسة)، والجنس أيضا لوحظت في سائر الدراسات^11،12،،من¹⁴¹⁵. وهكذا، يمكن TW و المورفولوجية استراتيجية قوية لتوضيح العوامل الوراثية والبيئية التي تشكل الصحة الأيضية.

الشكل 1 : "تريادوهيل" ممارسة الجهاز. (أ) الجهاز يحمل قنينة 48 ولديه ميزة ضبط سرعة. هنا تجارب أجريت في 4 لفة في الدقيقة. قارورة الغذاء الفردية (ب) تحتوي على الذباب التجريبية انقطعت في الأقواس التي تعلق على محور تناوب. (ج) المسافة بين قنينة التوصيل والغذاء كان 6 سم قنينات ممارسة و 1 سم للقنينات التحكم. ثم وضعت في قارورة على الجهاز لممارسة. (د) ممارسة الهرم المعكوس يوم 5 نظام استخدمت لممارسة الذباب الكبار. في كل يوم إضافي خمس دقائق أضيفت إلى واحدة من نوبات ممارسة تكثيف ممارسة الشدة تدريجيا، ونماذج القدرة على التحمل، وفترة التدريب. وقد تم تعديل هذا الرقم من منديز et al. ¹¹- الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

الشكل 2 : وسائل بصرية ونتائج الممثل. (أ) الأساليب لاختبار النظام الغذائي اليرقات وآثار التفاعل ممارسة البالغين. اليرقات التي أثيرت بشأن النظام الغذائي المختبر العالية الدهون أو العادي وتحولت إلى الغذاء العادي عند اكلوسيون. كانت مفصولة بالجنس الذباب الكبار ووضعها في مجموعات تجريبية وتمارس لمدة خمسة أيام متتالية. بعد ذلك، أجرى جيوتاكسيس سلبية مثل خاتم تسلق المقايسة، وجمدت الذباب لقياسات الدهون الثلاثية. وترد بيانات الدهون الثلاثية الممثلة سطرين الوراثية، ولاية أوريغون R و y¹ث¹ للإناث (ب) و (ج) الذكور. جميع الذباب كانت تربى على اتباع نظام غذائي عادي ويمارس في مرحلة البلوغ. المستويات مع رسائل مختلفة تختلف اختلافاً كبيرا (ف < 0.05) استخدام الطالب وظيفة المخصص تي-اختبار. وهذا الرقم يحتوي على مجموعة فرعية بيانات المبلغ عنها في مينديز et al. ¹¹-وترد بيانات التسلق الممثل لخط دجرب 153 للإناث (د) و (ﻫ) الذكور. كل نقطة تمثل متوسط أداء تسلق الأفراد 232 أو أكثر عبر ثلاث نقاط زمنية مستقلة. أشرطة الخطأ تشير إلى خطأ معياري واحد. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

تكميلية الشكل 1: تخطيطي مفصل تريادوهيل- (أ) الرسم التخطيطي هيكل المشبك قنينة المزدوج يستخدم لإرفاق قنينات للجهاز. (ب) العرض الداخلي لنظام التناوب بالسيارة للجهاز. (ج) الإسقاط الموازي للواجهة الأمامية للجهاز. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

ملف التعليمات البرمجية الإضافية: TreadWheel.skp اضغط هنا لتحميل هذا الملف.

Discussion

لقد ثبت نجاح تنشيط ممارسة لطيف في المورفولوجية البروتوكول ممارسة هنا بالتفصيل ويمكن استخدامها لمحاكاة ممارسة القدرة على التحمل في أحد مختبرات التي تسيطر عليها إعداد¹¹. تجدر الإشارة إلى أنه عند تطوير مفهوم تريدوهيل في البداية، أننا النظر في المنتجات التجارية التي يمكن أن تعدل إلى القيام بالمثل (مثلاً، المشواة مختبر). بيد أننا في نهاية المطاف رفض هذا النهج، اختيار تصميم مبنية خصيصا لأن المعدات التجارية لم تكن سرعة دوران منخفضة بما فيه الكفاية (4 لفة في الدقيقة)، وتفتقر إلى القدرات قنينة كافية لتوليد نموذج الفائق.

ويمكن تعديل البروتوكول TW نفسه ليشمل مجموعة واسعة من مواضيع البحث. على سبيل المثال، يمكن أن يغير تعديل تواتر ومدة نظم ممارسة الذباب كثافة عموميات العمل التي يتلقونها. بتمديد البروتوكول أطول من أسبوع واحد أو إلى الفئات العمرية الأخرى، سيكون من الممكن لدراسة آثار الشيخوخة والأمراض المرتبطة بالسن المختلفة لممارسة. نحن نوصي بأنه إذا تم تطبيق نهج عملية موسعة، ثم يوم راحة واحد على الأقل في الأسبوع ينبغي إضافة للسماح للانتعاش. وأبدى الأداء وتحسين تكون أكبر في الأنظمة التي شملت يوم انتعاش من تلك النظم التي تستخدم ممارسة يومية متتالية¹². كما أننا نود أن نحذر من توسيع ممارسة نوبة أطوال الماضية 30 دقيقة نظراً للتعود على اقتراح التناوب يمكن أن يحدث بعد فترات طويلة من استمرار ممارسة¹¹. وقد لاحظنا أيضا الاختلافات الوراثية في الدافع الذباب للحفاظ على مستويات النشاط في TW¹¹. وهكذا، إذا هي رغبت في نوبات أطول، النظر في رصد مستويات النشاط الذباب، كما قدمها واتانابي واللغز^15،21 تصف التعديل عليها مفهوم TW. العوامل الأخرى التي يمكن أن تكون متنوعة تشمل درجة الحرارة والنوم-اليقظة أنماط، والتي تظهر أيضا يؤثر على حركة الطيران^26،27.

وهناك عدد كبير تحليلات المتاحة أثناء وبعد إنجاز البروتوكول معالجة الآثار المترتبة على ممارسة الرياضة في مستوى الفسيولوجية والسلوكية والجزيئية، فضلا عن القدرة على كشف آثار جينية لممارسة. فحوصات الأيض إضافية (مثل الجلوكوز والجليكوجين، والبروتين) القلب والأداء والاستجابة الالتهابية يمكن استخدام تدابير لمواصلة استكشاف ممارسة تأثير على ذبابة فسيولوجيا الجسم وتكوين^{12،14 ،،}من²⁴²⁸. مختلف التغيرات السلوكية المرتبطة بممارسة التعريفي، مثل التغييرات في تغذية السلوك والنشاط الحركي، والنوم، ويمكن أن يقاس أيضا باستخدام أدوات مثل مقهى المقايسة²⁹ أو نشاط رصد أجهزة^{12،15 ،30}. يمكن أيضا قياس التغيرات في التعبير الجيني والتنفس الخلوي تعزى إلى ممارسة استخدام أساليب مثل qRT PCR¹¹ وريسبيروميتري³¹. وأخيراً، قد المورفولوجية قيمة الموارد الوراثية المتاحة، مثل لوحة إشارة الوراثة المورفولوجية 2 والموارد السكانية الاصطناعية المورفولوجية التي منبرا الباحثين لإجراء الدراسات الوراثية الكمية^25،32. تمكن هذه الأدوات تجارب رسم الخرائط ذات الصلة، مثل رسم الخرائط على نطاق الجينوم جمعية الدراسات والكمية سمة المكاني، لتحديد مرشح المكاني المرتبطة بالممارسة والنظام الغذائي.

أثبتت الدراسات اكتملت باستخدام تريدوهيل أن، في المتوسط، ممارسة يقلل من وزن الجسم وتخزين إجمالي الدهون الثلاثية، والجليكوجين، بينما زيادة محتوى البروتين وتسلق الأداء¹¹. بالإضافة إلى ذلك، كانت هناك ردود متغير ممارسة عبر الجنسين والأنماط الجينية لوزن الجسم، فضلا عن الشحوم والبروتين والجليكوجين، والجلوكوز ومستويات النشاط^11،15. وفي حين تباين استجابة لممارسة واتباع نظام غذائي عبر الأنماط الوراثية والجنس قد يكون تحديا لتفسير، وفي بعض الأحيان، الحدس، وهو يعكس مصادر التباين البيولوجي الحقيقي الملاحظة في السكان طبيعية. ونحن نسعى جاهدين لفهم تنوع العوامل الأساسية التي تسهم في ارتفاع معدلات ميتس، الأدوات التي تيسر مقدر الدور النسبي لمختلف العوامل المساهمة عن طريق اختبار هذه العوامل في نموذج الكائنات الحية سيكون أمرا حاسما لقدرتنا على تطوير شخصية تدخلات الوقاية والعلاج. لإجراء تقييم كامل لفعالية ممارسة، كل هذه العوامل وكيف تتفاعل يجب النظر عند إجراء التجارب وصياغة استنتاجات.

TW، مثل آلات ممارسة يطير الأكثر أخرى، محدودة في قدرتها على قياس حركة الطيران. في الآونة الأخيرة، وضعت واتانابي واللغز التناوب ممارسة القياس الكمي النظام (ريكس)، العمود الفقري TW تعديل مع نشاط الرصد وحدة (LAM25H) من^15،21سلسلة "نظام الرصد المورفولوجية". مثل TW، يستخدم هذا النظام الحركة الدوارة للحث على ممارسة أثناء استخدام الذراع LAM25H لتتبع وقياس النشاط يطير بلطف، ولكن أنه يحمل عدد أصغر من قنينة (قارورة 32) من TW¹⁵. الدراسات ممارسة الفائق، إذا كان النشاط الكمي ليس من الضروري أو المرغوب فيه، يسمح TW لعدد أكبر من عينة. ويمكن أيضا تعديل تصميم TW من شكله الحالي لاستيعاب عدد أكبر من قارورة. وهذا النظام، جنبا إلى جنب مع أساليب ممارسة أخرى موجودة، وساعد على إنشاء أن ممارسة لا يمكن تحقيقه في المورفولوجية فقط ولكن يمكن أيضا دراسة لتحديد تأثير النشاط البدني على مجموعة متنوعة من الاستجابات الفسيولوجية والجزيئية ^11،،من¹²¹⁵. وهكذا، TW، كأسلوب ثبت حمل ممارسة لطيف في الذباب، يمكن استخدامها للتحقيق في مجموعة كبيرة ومتنوعة من الأسئلة البيولوجية.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
<قوية>مواد لبناء TreadWheel: < / قوي>
الثقيلة الاهتزاز التخميد جبل	McMaster-Carr	60855K71	الكمية: 4
محمل كروي من الفولاذ المقاوم للصدأ	McMaster-Carr	57155K306	الكمية: 8
محول جهد إضافي (500MA ، إدخال 120VAC ، خرج 24 فولت تيار متردد)	McMaster-Carr	70235K16	الكمية: 1
محرك تروس DC مدمج ذو وجه مربع	McMaster-Carr	6409K23	الكمية: 1
حامل أداة (مشابك)	McMaster-Carr	1723A22	الكمية: 5 (10x)
12L14 الكربون الصلب ضيق التسامح قضيب	McMaster-Carr	5227T24	الكمية: 1
مجموعة طوق عمود المسمار	McMaster-Carr	6432K13	الكمية: 8
بكرة	حزام دائريماكماستر كار	6284K51	الكمية: 5
أدوات تحكم في السهام &ndash ؛ 25 دورة في الدقيقة كحد أقصى ، محرك تيار متردد كهربائي	ماكماستر كار	13DV 1A	الكمية: 1
< قوي > مواد لصيانة الذباب وتربية الذباب < / قوي >
6 أوقية زجاجات مربعة القاع (بولي بروبيلين)	جينيسي ساينتيف	32-130	الكمية: 1
أطباق بتري 35 × 10 مم	VWR	82050-536	الكمية: 1
قارورة ذبابة الفاكهة الضيقة	Genesee Scientific	32-116	الكمية: 1
Flystuff Flypad	Genesee Scientific	59-114	الكمية: 1
بندقية النفخ ، ميني	جينيسي العلمي	54-104	الكمية: 1
< قوي > مواد لفحص يشبه الحلقة: < / قوي >
برنامج ImageJ	المعاهد الوطنية للصحة	https://imagej.nih.gov/ij/	الكمية: 1
1 سم ورقة رسم بياني أو شبكة مرسومة (على الأقل 20 سم × 30 سم)	كمية مختلفة		: 1
كاميرا رقمية مع مؤقت أو هاتف ذكي مع تطبيق مؤقت الكاميرا	مختلف		الكمية: 1
<قوي>مواد لفحص الدهون الثلاثية: < / قوي>
دوار قارورة	VWR	14200-960	الكمية: 1
طقم تحديد الدهون الثلاثية في المصل	Sigma Aldrich	TRO100	الكمية: 1
محرك مدقة لاسلكي	VWR	47747-370	الكمية: 1
مدقة	VWR	47747-358	الكمية: 1