مقالة منهجية
هنا يصف لنا طريقة "مجموعة النسخ المتماثلة"، ونهج لقياس كمي C. ايليجانس عمر/البقاء وهيلثسبان بطريقة الفائق وقوية، مما يتيح فحص ظروف كثيرة دون التضحية بجودة البيانات. هذا البروتوكول تفاصيل الاستراتيجية ويوفر أداة حاسوبية لتحليل البيانات "مجموعة النسخ المتماثلة".
الأسلوب "مجموعة النسخ المتماثلة" نهج لقياس عمر أو البقاء على قيد الحياة من الديدان الخيطية ايليجانس كاينورهابديتيس كمياً بطريقة الفائق، مما يسمح لمحقق واحد الشاشة أكثر العلاجات أو شروط على نفس القدر من الوقت دون فقدان جودة البيانات. الأسلوب يتطلب المعدات المشتركة التي وجدت في معظم المختبرات العاملة مع C. ايليجانس وهكذا بسيط لاعتماد. مراكز النهج على فحص عينات مستقلة من عدد السكان في كل نقطة مراقبة، بدلاً من عينة واحدة على مر الزمن مع الطرق الطولية التقليدية. سجل يستلزم إضافة السائل إلى الآبار للوحة متعددة جيدا، الذي يحفز C. ايليجانس للانتقال ويسهل تحديد التغيرات في هيلثسبان. وتشمل الفوائد الأخرى الرئيسية أسلوب "مجموعة النسخ المتماثلة" خفض التعرض للأسطح أجار للملوثات المحمولة جوا (مثل العفن أو الفطريات)، الحد الأدنى من التعامل مع الحيوانات، ومتانة لسوء التهديف متفرقة (مثل استدعاء حيوان كالميت عند فإنه لا يزال على قيد الحياة). بشكل مناسب تحليل ووضع تصور للبيانات من تجربة نمط "مجموعة النسخ المتماثلة"، وضعت أيضا أداة برمجية مخصصة. وتشمل القدرات الحالية للبرنامج رسم منحنيات البقاء على قيد الحياة لكل "مجموعة النسخ المتماثلة" والتقليدية (كابلان-ماير) تجارب،، فضلا عن التحليل الإحصائي "مجموعة النسخ المتماثلة". البروتوكولات المقدمة هنا وصف النهج التجريبي التقليدي والأسلوب "مجموعة النسخ المتماثلة"، فضلا عن لمحة عامة عن تحليل بيانات المقابلة.
كان من بين التقدم التكنولوجي معظم التحويلية نحو فهم الأساس الجيني للشيخوخة تطوير القائم على تغذية [رني] في ايليجانس جيم-1؛ قبل استخدام تجريبي [رني]، لم تكن تعمل العديد من الشيخوخة وراثيا أصعب. [رني] على أساس التغذية ويتحقق من خلال إنتاج دسرنا داخل كولاي التي تطابق الذاتية مرناً C. ايليجانس : إيبتج يدفع النسخ ثنائي الاتجاه عبر إدراج كدنا C. ايليجانس أما أو جزء من فتح إطار القراءة داخل بلازميد2. عندما C. ايليجانس آر عند سليمة دسرنا كولاي، التي تنتجها البكتيريا المنقولة من التجويف داخل الخلايا المعوية عن طريق البروتين transmembrane SID-23....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
1-الأسلوب التقليدية لسجل C. ايليجانس طول العمر
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
في تطور أي منهجية جديدة، لا بد أن الأسلوب الجديد يلخص النتائج المقبولة من النهج السابقة ويفي بمعيار داخل حقل. لقد بينا سابقا تجريبيا أن "مجموعة النسخ المتماثلة" والأساليب التقليدية للمعايرة عمر C. ايليجانس تنتج نتائج مماثلة20. ويعيش البرية من نوع C. ايليجانس (N2) الإبقاء على 20 درجة مئوية عادة ما بين 20 و 25 يوما، الذي لاحظنا مع نهج "مجموعة النسخ المتماثلة" (الشكل 4 باء، الأسود) والتقليدية (الشكل .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
أساليب تعيين التقليدية والنسخة المتماثلة تتطلب مزامنة الحيوانات زمنياً عاماً. نحن تتضمن أسلوب يقوم بمزامنة استخدام العلاج تحت كلوريت جرابيد من الكبار، حيث البقاء فقط من البيض المخصب مع الكبار جرابيد معاملة الحيوانات. هذه الأجنة هاتش في التعليق السائل واعتقال تنمويا في مرحلة اليرقات الأولى (L1). بعد البذر L1 الحيوانات على الغذاء (مثل كولاي تعرب عن دسرنا لجينات للفائدة)، استئناف الحيوانات التنمية. مزامنة الحيوانات L1 بالعلاج تحت كلوريت البالغين جرابيد له ميزة أن بقايا الحيوانات L1 المصنف يمكن تجميدها وتخز.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الكتاب يعلن أن لديهم لا تضارب المصالح المالية.
التمويل اللازم لهذا العمل الموصوف في هذه المخطوطة وقدم: مكتب جامعة روتشستر "قائد الشرطة العسكرية" وكلية الطب وطب الأسنان عميد مكتب عبر مركز العلوم الصحية للابتكار الحسابية (هسكسي)؛ أليسون الطبية مؤسسة جديدة العلماء في "زمالة الشيخوخة" (AG-NS-0681-10) الممولين بأي دور في تصميم الدراسة أو جمع البيانات والتحليل، وقرار نشر أو إعداد المخطوطة.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| IPTG (الأيزوبروبيل بيتا-D-1-ثيجالاكتوبيرانوسيد) | جولد بيو | 12481C100 | |
| FuDR (5-فلورو-2'-ديوكسيuridine) | ألفا إيسار | L16497 | |
| 24 ألواح ثقافة الآبار | Greiner Bio-One | # 662102 | |
| لوحة بئر واحدة غير معالجة ، 128 × 86 مم | Thermo-Fisher | 242811 | |
| 600 & micro ؛ ألواح L 96 جيدا | Greiner Bio-One | # 786261 | |
| 2 مل 96 ألواح بئر | Greiner Bio-One | # 780286 | |
| اللوحة النفاذية للهواء | VWR | 60941-086 | |
| مكرر الألواح 96 دبوس | Nunc | 250520 | |
| باكتو الببتون | VWR | 90000-368 | |
| أجار بكتريولوجي | Affymetrix / USB | 10906 | |
| C. elegans مكتبة استنساخ الحمض النووي الريبي في بكتيريا HT115- مصدر Ahringer | Bioscience | C. elegans مجموعة RNAi (Ahringer) | انظر أيضا Kamath et al، Nature 2003. |
| C. elegans مكتبة استنساخ RNAi في بكتيريا HT115- Vidal | Source Bioscience | C. elegans مورد ORF-RNAi (Vidal) | انظر أيضا Rual et al. ، أبحاث الجينوم 2004. هذه المكتبة متاحة أيضا من Dharmacon. |
| WormLife- برنامج لتحليل البقاء على قيد الحياة لمجموعة النسخ المتماثلة | Samuelson Lab | N / A | https://github.com/samuelsonlab-urmc/wormlife |
| L4440 Empty Vector Plasmid | Addgene | 1654 | https://www.addgene.org/1654/ |
| Wormbase | http://www.wormbase.org/ | ||
| https://sbi.postech.ac.kr/oasis2/ | الواحة؛ | ||
| Graphpad المنشور | https://www.graphpad.com/scientific-software/prism/ ؛ |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن