هنا، نحن تصف طريقة بسيطة للحث على الجلد ذات الصلة سريرياً قرحة الضغط (صديد) في نموذج الفأر من إصابات النخاع الشوكي (الخيال العلمي). يمكن استخدام هذا النموذج في الدراسات ما قبل السريرية على الشاشة للعلاجات المختلفة للشفاء صديد في الخيال المرضى.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نموذج الفأر من قرحة الضغط بعد إصابة الحبل الشوكي
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
قرحة الضغط (صديد) شائعة من المنهكة مضاعفات إصابات النخاع الشوكي الرضية (العلوم)، وتميل إلى أن تحدث في الأنسجة الرخوة حول prominences عظمى. هناك، مع ذلك، معروفة حول تأثير العلوم على شفاء الجلد الجرح في سياق نماذج حيوانية في إعدادات التجريبية التي تسيطر عليها. ويرد في هذه الدراسة، نموذج ماوس بسيطة وغير الغازية، واستنساخه وذات الصلة سريرياً من صديد في سياق علوم كاملة. وقد حلق الفئران الذكور البالغين (بالب/ج، 10 أسابيع من العمر) وديبيلاتيد. بعد إزالة الشعر (24 ساعة)، تعرض الفئران للصفيحة تليها الحبل الشوكي كاملة ترانسيكشن (T9 T10 فقرات). مباشرة بعد رفع إضعاف جلد في الجزء الخلفي الفئران وتقع بين اثنين من الأقراص المغنطيسية في المكان للقادم ح 12، وبالتالي إيجاد منطقة الدماغية التي تطورت البلوتونيوم خلال الأيام التالية. أثبتت مجالات الجرحى وذمة الأنسجة واختفاء البشرة قبل تطبيق المغناطيس بعد يوم 3. قيح تلقائياً وتلتئم. الشفاء كان، بالمقارنة مع ذلك، أبطأ في الفئران علوم التحكم الفئران غير الخيال عندما أنشئت الجرح دون مستوى "عشر على العكس من ذلك"، لا يوجد فرق في الشفاء كان ينظر بين الفئران غير الخيال العلمي والتحكم عندما أنشئت الجرح فوق مستوى عشر هذا النموذج هو أداة يمكن أن تكون مفيدة لدراسة ديناميات التنمية بو الجلد وتضميد الجراح بعد الخيال العلمي، فضلا عن اختبار النهج العلاجية التي قد تساعد على تضميد هذه الجروح.
المقدمة
قرحة الضغط (صديد) هي المضاعفات الثانوية الرئيسية من الصدمة علوم1. قيح هي إصابات موضعية للجلد و/أو الأنسجة الكامنة التي عادة ما تحدث خلال prominences عظمى حيث يتركز وزن الجسم بينما هو يجلس المريض أو الكذب1. الجلد والدهون، والعضلات تتعرض لهذا الضغط المستمر الذي يؤدي إلى تنمية الاسكيمية المترجمة والتهاب الأنسجة والأضرار الميكانيكية ونخر2،3.
تطوير صديد يتأثر بعوامل محلية عدة، بما في ذلك حجم الضغط والقص، تحميل المدة ورطوبة الجلد ودرجة الحرارة، وطول العمر الإصابة والنظافة العامة الجلد. وهناك أيضا العوامل النظامية التي تلعب دوراً، مثل الحالة البدنية العامة والعظام ومورفولوجيا أنسجة العضلات وقوتها4، سن المريض، التدابير الدموية، والجنس والعوامل الاجتماعية-الاقتصادية حتى بما في ذلك الحالة الاجتماعية، التعليم، ودخل4،5.
الوقاية والعلاج من صديد تبقى تحديات كبيرة في الخيال المرضى. وضع المرضى علوم صديد في ~ 30-40% من الحالات، مع معدل تكرار 60-85%، ربما بسبب ضعف ندبا وانعدام الإحساس الواقية1. وهكذا، كثيرا ما يؤدي إلى إعادة الاستشفاء للمرضى علوم صديد، وعموما تشكل عبئا ماليا كبيرا (80 ٪ أكثر مقابل الخيال فقط) لأن نظام الرعاية الصحية5،،من67،،من89 , 10.
على حد علمنا، كانت هناك لا دراسات في إعدادات التجريبية الخاضعة للتحقيق أثر الخيال على بو عملية الشفاء بسبب عدم وجود نماذج حيوانية مناسبة. ويرد هنا، طراز ماوس ذات الصلة سريرياً واستنساخه من البلوتونيوم في الجلد. يمكن استخدام هذا النموذج لدراسة ديناميات بداية بو والشفاء اللاحقة، فضلا عن اختبار النهج العلاجية المحتملة لمنع البلوتونيوم أو تحسين بو الشفاء في سياق عشر
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وأجريت جميع الحيوانات المناولة والعمليات الجراحية وفقا لبروتوكول أقرته لجنة الاستخدام ورعاية الحيوان المؤسسية جامعة روتجرز. تم تغذية الفئران حمية القياسية ومتواصلة للمياه.
1-إعداد الأدوات الجراحية وغير الجراحية
- تعقيم الأدوات الجراحية وغير الجراحية في اﻷوتوكﻻف.
- تنظيف طاولة العمليات الجراحية مع الإيثانول 70% والحارة وسادة تدفئة إلى 37 درجة مئوية.
- وضع وسادة التدفئة على طاولة العمليات، وتغطية ذلك مع الستائر الجراحية المعقمة.
ملاحظة: في جميع إجراءات البقاء على قيد الحياة، يستخدم تقنية "اللمس لا" هنا للحفاظ على العقم.
2-إعداد الحيوانات وأداء الصفيحة العمود الفقري T9 T10
- شراء الكبار (بالب/ج) أنثى عمرها 10 الأسبوع الفئران. حمل التخدير في الحيوانات كل استخدام بداية استنشاق مع إيسوفلوراني 5% ومن ثم ينخفض إلى 2-3% للمحافظة على التخدير لما تبقى من الإجراءات.
- تأكيد التخدير الكامل قبل استخلاص لا استجابة لحفز nociception قرصه الناجمين عن ذيل/مخلب.
- حلق الشعر أكثر دورسوم (الرأس إلى الذيل) مع ماكينة كهربائية، ومن ثم تطبيق كريم مزيل الشعر (3 دقائق) لإزالة الشعر المتبقي. وأخيراً، أغسل dorsum مع تشغيل المياه/الرطب فرك، وإرجاع الحيوانات إلى اقفاصها.
ملاحظة: وهذا ضروري لتجنب إضافية تهيج الجلد والتلوث الكيميائي في وقت إصابة الجلد - وفي اليوم التالي تطبيق مرهم العيون القرنيات حماية العينين من الجفاف خلال العملية الجراحية وثم فرك الجلد مع 3 الاستعدادات بديلة من الإيثانول تدين فرك و 70%.
- مع مشرط، تنفيذ شق جلد (~1.0-1.5 سم) على طول خط الوسط في الظهر على مستوى فقرات T8 T12.
ملاحظة: يتم تعريف مستوى فقرات بإعادة عد الفقرة من T13 استخدام موقع الأضلاع العائمة التي تتوافق مع T13 فقرة11،12. - مسح الأنسجة الدهنية تحت الجلد الحصول على حق الوصول إلى العضلات باراسبينال وثم تشريح لهم ببطء لكشف العمليات الشائكة وعن كلا الجانبين.
ملاحظة: القيام بهذا الإجراء بعناية فائقة لتجنب النزيف الزائد أو أي ضرر للحبل الشوكي، عند هذه النقطة. - أداء الصفيحة لفضح الحبل الشوكي (الفقرات T9 T10) بلطف تقشير قبالة الصفيحة العمود الفقري باستخدام الملقط ميكروديسيكتينج.
ملاحظة: تنفيذ الصفيحة بحيث يتعرض فائض في النخاع الشوكي لتيسير إيجاد الضرر. في المجموعة عنصر التحكم، يتم فقط الاستئصال.
3-أداء إصابة الحبل الشوكي الكاملة T9 T10
- استخدام الملقط، تأمين العمود الفقري في T8 ورفع يصل إلى المبالغة انحناء العمود الفقري.
- باستخدام مقص الجميلة، الفرع الحبل الشوكي بين فقرة T9 و T10 وصولاً إلى الكلمة فقري للقناة، لضمان ترانسيكشن كاملة.
- بعد مراقبة تطبيق ترانسيكتيون كاملة تحت مجهر جراحي، قطعة من الدهون تحت الجلد عبر موقع الصفيحة توفير مزيد من الحماية للحبل الشوكي قبل إغلاق موقع الجراحية.
- وأخيراً، الجرح وخياطة عضلات مجاورة، فآسيا سطحية، استخدام خياطة مستمرة ثم أغلق والجلد باستخدام مقاطع خياطة12.
- الوظيفة-الخيال، مراقبة حركة الأمعاء اليوم التالي؛ ومع ذلك، إدارة المثانة البولية بإخلاء المثانة اليدوي.
ملاحظة: يمكن أن تكون المستخدمة رصد التقدم المحرز في اللكتات الانتعاش وظيفية وظيفة-العلوم في يوم 2 وثم أسبوعية مقياس الماوس باسو (خدمات إدارة المباني)، انظر التكميلية الرقم 111،،من1213.
4-تنظيم دورات تعريفية لقرحة الضغط الجلد بعد علوم كاملة
- فورا بعد الجراحة الخيال، فرك الجزء الخلفي الحيوان مع الكحول تدين و 70%.
- بو أدناه موقع الخيال، لحقن في الجلد الظهرية بالقرب من العجز، كمية صغيرة جداً (10 ميليلتر) من 0.125 في المائة بوبيفاكيني الحل باستخدام إبرة ز 25 في أماكن مسافة واحدة ~0.5-1.0 سم عن بعضها البعض، في قطع ناقص حول موقع التطبيق المغناطيس.
ملاحظة: بو فوق موقع الخيال، لحقن الجلد الظهرية بالقرب من منطقة عنق الرحم. - رفع إضعاف جلد في الجزء الخلفي الماوس برفق وساندويتش أنها بين 2 أقراص مغناطيسية (5 × 12 مم، كل 2.4 ز، ز 3800 القوة المغناطيسية) (الشكل 1). 11 , 12
- مباشرة بعد تطبيق المغناطيس، عودة الحيوانات في أقفاص واحدة توضع على وسادة تدفئة حتى يتم الوعي الكامل استعاد (الشكل 1).
- بعد 12 ساعة تطبيق المغناطيس، طفيفة تخدير الحيوان مع إيسوفلوراني وإزالة المغناطيس. أخذ صورة فوتوغرافية لمواقع الجرح، لتسجيل مظهر الأولية بو (يوم الوقت 0 نقطة). تغطية الجرح مع الفيلم خلع الملابس شفافة (م 3) لتجنب التجفيف أو التلوث.
5-بعد العمليات الجراحية الرعاية الحيوانية، والقتل الرحيم، وجمع الأنسجة لعلم الأنسجة
- فورا بعد جراحة، حقن الحيوان مع 1 مل من المحلول الملحي 0.9% تحت الجلد للماء.
- تحت الجلد حقن البوبرينورفين-ريال (1 مغ/كغ) فورا للتسكين.
- حقن سيفازولين (50 مغ/كغ لمدة 3-7 أيام)، ميلوكسيكام يوميا تحت الجلد الحيواني (1 مغ/كغ)، ومرتين يوميا من إخلاء المثانة اليدوي.
- ضع الحيوانات في أقفاص مفردة وتوفير الغذاء موجوداً والمياه libitum الإعلانية. الفئران بالخيال العلمي كاملة يمكن المشي باستخدام تلك الأمامية والاقتراب من الأغذية والمياه دون أي صعوبات.
- إزالة مقاطع الجراحية 7 أيام بعد الجراحة الخيال.
- في نقاط الوقت المطلوب بعد الخيال وإصابة الجلد، euthanize الحيوانات باستنشاق أول أكسيد الكربون2 (3-5 دقائق)، وفقا للمبادئ "التوجيهية وبرايتون" شأن القتل الرحيم14.
- جمع عينات الجلد الجرحى وإصلاح في الفورمالين 10% ح 24 وتخزينها ثم في الإيثانول 70% في 4 درجات مئوية حتى تمزيقها.
- معالجة الأنسجة، تضمين في البارافين وإنشاء أقسام رقيقة (5 ميكرومتر) في مبضع. وصمة عار والهيماتوكسيلين ويوزين (H & E) لتصور مورفولوجيا الأنسجة (الشكل 3). للدراسات إيمونوهيستوتشيميستري (الشكل 4)، وصمة عار الأقسام باستخدام الأجسام المضادة المناسبة ل Ki67 (انتشار)، CD31 (الأوعية)، والعضلات الملساء ألفا أكتين (α-SMA) كما هو موضح في كومار et al.12
ملاحظة: يمكن استخدام برمجيات تحليل الصورة تحديد حجم الصورة ميزات12.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
ينشئ هذا البروتوكول بو في الإعداد لإكمال "عشر بإيجاز" (كما هو موضح في الشكل 1)، وجميع الفئران مع أو بدون علوم كاملة التسامح المغناطيس جيدا جداً، التي ظلت في موضعها الأصلي لكامل ح 12 (الأرقام 1 ج، د 1، 1 واو، ح 1 ). ووضع جميع الفئران جرحين دائرية مفصولة بواسطة جسر أنسجة طبيعية (الشكل 1e, ز 1, 1i). وكان الرد المبدئي إصابة مماثلة في الفئران دون علوم (الشكل 1e)، أو مع علوم أسفل الموقع عل...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
ويصف البروتوكول في هذه الدراسة نموذج تجريبي رواية من صديد لتقييم أثر الخيال على التئام. تم فعل الجلد صديد عبر تطبيق ح 12 من قطرها 12 مم اثنين القرص المغناطيس في حظيرة جلد الظهرية، أما تعيين أعلى أو أسفل الموقع الخيال. وتظهر البيانات أن علوم يبطئ التئام الجلد في الفئران. الأهم من ذلك، هذه الملاحظات على وجه التحديد في الجروح الجلدية تحت مستوى تعصيب للخيال العلمي، كالجروح المشار إليه أعلاه على مستوى الخيال، وهكذا أن بقي إينيرفاتيد، ولم تتأثر إلى حد كبير في نمطها الشفاء مقارنة بالفئران غير الخيال.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
وأيد هذا العمل جزئيا "اللجنة ولاية نيو جيرسي" في الحبل الشوكي البحوث (CSCR15IRG010) ووزارة الدفاع الأمريكية (SC160029) وجامعة ييل إدارة لجراحة أوهسي منحة برنامج البحوث. ونحن نشكر ليرى "يا شون" من مركز كيك "علم الأعصاب التعاونية"، روتجرز للمساعدة التقنية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| مغناطيس | ماستر ماغناطيكس ، إنك ، كاسل روك ، CO | CD14C | 3800 G قوة مغناطيسية |
| الفئران النظام الغذائي القياسي | PMI Nutrition International ، Brentwood ، MO | Standard Food Pellet | |
| Isoflurane | HENRY SCHEIN Animal Health ؛ | رمز المنتج: 029405 | |
| ImageJ | NIH, Bethesda, MD | برنامج تحليل | |
| الصور BETADINE Surgical Scrub | HENRY SCHEIN Animal Health | ||
| مرهم العيون | هنري شاين لصحة | رمز المنتج 008897 | |
| NAIR-Hair Remover Lotion | Church & شركة دوايت ، إنك برينستون ، نيوجيرسي | ||
| ELOXIJECT (ميلوكسيكام) حقن | هنري شاين لصحة ؛ | كود التخزين التعريفي 049755 | 5 مجم / مل ، 10 مل |
| سيفازولين الصوديوم | هنري شاين لصحة | كود التخزين التعريفي 054846 | 1 جم ، زجاجة 10 مل |
| بوبرينورفين-SR | ZooPharm ، وندسور ، ثاني أكسيد | الكربون - | |
| 0.9٪ حقن كلوريد الصوديوم USP | BRAUN ، إيرفين ، كاليفورنيا | S8004-5384 | |
| 10٪ فورمالين محايد مخزن ؛ | VWR ، Radnor ، PA | 16004-130 | |
| BALB / C ذكر فأر | تشارلز ريفر لاب. ، ويلمنجتون ، ماساتشوستس | 28 | |
| قضيب قطني معقم برأس | بيوريتان ، جيلفورد ، ME | رمز المنتج#: 25-806 | |
| Michel Suture Clips | Fine Science Tools (USA) Inc. ، فوستر سيتي ، كاليفورنيا | 12040-01 | |
| خياطة جراحية ، USP | هنري شاين لصحة | 101-2636 |
المراجع
- Rappl, L. M. Physiological changes in tissues denervated by spinal cord injury tissues and possible effects on wound healing. International Wound Journal. 5 (3), 435-444 (2008).
- Salcido, R., Popescu, A., Ahn, C. Animal models in pressure ulcer research. The Journal of Spinal Cord Medicine. 30 (2), 107-116 (2007).
- Mak, A. F., Zhang, M., Tam, E. W. Biomechanics of pressure ulcer in body tissues interacting with external forces during locomotion. Annual Review of Biomedical Engineering. 12, 29-53 (2010).
- National Pressure Ulcer Advisory Panel. Prevention and Treatment of Pressure Ulcers: Clinical Practice Guideline. , Cambridge Media. Osborne Park, Western Australia. (2014).
- Marin, J., Nixon, J., Gorecki, C. A systematic review of risk factors for the development and recurrence of pressure ulcers in people with spinal cord injuries. Spinal Cord. 51 (7), 522-527 (2013).
- Krause, J. S. Skin sores after spinal cord injury: relationship to life adjustment. Spinal Cord. 36 (1), 51-56 (1998).
- Redelings, M. D., Lee, N. E., Sorvillo, F. Pressure ulcers: more lethal than we thought? Advances in Skin & Wound. 18 (7), 367-372 (2005).
- Kruger, E. A., Pires, M., Ngann, Y., Sterling, M., Rubayi, S. Comprehensive management of pressure ulcers in spinal cord injury: current concept and future trends. The Journal of Spinal Cord Medicine. 36 (6), 572-585 (2013).
- Lala, D., Dumont, F. S., Leblond, J., Houghton, P. E., Noreau, L. Impact of pressure ulcers on individuals living with a spinal cord injury. Archives of Physical Medicine and Rehabilitation. 95 (15), 2312-2319 (2014).
- Li, C., DiPiro, N. D., Krause, J. A latent structural equation model of risk behaviors and pressure ulcer outcomes among people with spinal cord injury. Spinal Cord. 55 (6), 553-558 (2017).
- Kumar, S., Yarmush, M. L., Berthiaume, F. Impact of complete spinal cord injury on neovascularization and tissue granulation in mouse model of skin pressure ulcers. Journal of Neurotrauma. 34 (13), A72-A73 (2017).
- Kumar, S., Yarmush, M. L., Dash, B. C., Hsia, H. C., Berthiaume, F. Impact of complete spinal cord injury on healing of skin ulcers in mouse models. Journal of Neurotrauma. 35 (6), 815-824 (2018).
- Basso, D. M., Fisher, L. C., Anderson, A. J., Jakeman, L. B., McTigue, D. M., Popovich, P. G. Basso Mouse Scale for locomotion detects differences in recovery after spinal cord injury in five common mouse strains. Journal of Neurotrauma. 23 (5), 635-659 (2006).
- Leary, S., et al. AVMA Guidelines for the Euthanasia of Animals. , American Veterinary Medical Association. Schaumburg, Illinois, USA. (2013).
- Stadler, I., Zhang, R. Y., Oskoui, P., Whittaker, M. S., Lanzafame, R. J. Development of a simple, noninvasive, clinically relevant model of pressure ulcers in the mouse. Journal of Investigative Surgery. 17 (4), 221-227 (2004).
- Peirce, S. M., Skalak, T. C., Rodeheaver, G. T. Ischemia-reperfusion injury in chronic pressure ulcer formation: a skin model in the rat. Wound Repair and Regeneration. 8 (1), 68-76 (2000).
- Wong, V. W., Sorkin, M., Glotzbach, J. P., Longaker, M. T., Gurtner, G. C. Surgical approaches to create murine models of human wound healing. Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2011, 969618-969625 (2011).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
