مقالة منهجية

تقييم شامل لفعالية وسلامة إيصال الأدوية المستهدفة للمشيمة باستخدام ثلاثة أساليب تكميلية

DOI:

10.3791/58219

⸱

سبتمبر 10, 2018

 ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory for Reproductive Health, Institute of Biomedicine and Biotechnology, Shenzhen Institutes of Advanced Technology, Chinese Academy of Sciences, 2College of Veterinary Medicine, Hunan Agricultural University, 3Key Laboratory of Chemical Engineering Process and Technology for High-efficiency Conversion, College of Chemistry and Material Sciences, Heilongjiang University, 4Department of Obstetrics and Gynecology, Wayne State University School of Medicine

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ونحن تصف نظام الذي يستخدم ثلاثة أساليب لتقييم سلامة وفعالية لإيصال الأدوية المستهدفة للمشيمة: في فيفو التصوير لرصد تراكم نانوحبيبات، والموجات فوق الصوتية عالية التردد لرصد التنمية المشيمة والجنين ، و [هبلك] التحديد الكمي لإيصال الأدوية إلى أنسجة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لا توجد علاجات فعالة موجودة حاليا لمضاعفات الحمل المرتبطة بالمشيمة، ووضع استراتيجيات لإيصال الأدوية المستهدفة للمشيمة مع التقليل من الآثار الجانبية على الجنين والأم لا تزال صعبة. الناقلين نانوحبيبات هادفة توفر فرصاً جديدة لعلاج أمراض المشيمة. نحن أظهرت مؤخرا أن ببتيد اصطناعية كبريتات شوندروتن المشيمة بربط (بلكسا-BP) يمكن أن تستخدم لتوجيه جسيمات نانوية لتسليم المخدرات إلى المشيمة. في هذا البروتوكول، نحن تصف بالتفصيل نظام لتقييم كفاءة إيصال المخدرات إلى المشيمة بلكسا-بي بي أن توظف ثلاثة طرق منفصلة المستخدمة في تركيبة: في فيفو التصوير بالموجات فوق الصوتية عالية التردد (هفوس) وعالية الأداء كروماتوغرافيا سائلة ([هبلك]). استخدام في فيفو جسيمات نانوية التصوير، بلكسا-بي بي-تسترشد كانت تصور في مشيمة الحيوانات الحية، بينما هفوس و [هبلك] أظهرت أن جسيمات نانوية بلكسا-بي بي-مترافق كفاءة وعلى وجه التحديد تسليم الميثوتريكسات للمشيمة. وهكذا، يمكن استخدام مزيج من هذه الأساليب كأداة فعالة لإيصال المخدرات إلى المشيمة المستهدفة وتطوير استراتيجيات جديدة للعلاج لعدة مضاعفات الحمل.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مضاعفات الحمل بوساطة المشيمة، بما في ذلك مقدمات الارتعاج وفقدان الحمل، أبروبتيون المشيمية والعمر الحملي الصغيرة (SGA)، مشتركة وأن يؤدي إلى اعتلال الأمهات والأجنة كبيرة ووفيات1،2، 3، وعدد قليل جداً من المخدرات قد ثبت أن تكون فعالة لعلاج الحمل واضطرابات4،5. وضع استراتيجيات لإيصال الأدوية المستهدفة للمشيمة أكثر انتقائية وأكثر أمنا خلال الحمل لا تزال صعبة في العلاج بالعقاقير الحديثة.

في السنوات الأخيرة، ركزت عدة تقارير مستهدفة إيصال المخدرات إلى الأنسجة أوتيروبلاسينتال بجسيمات نانوية طلاء مع الببتيدات أو الأجسام المضادة كأدوات المستهدفة للمشيمة. تشمل هذه جسم6 (EGFR) مستقبلات عامل نمو البشرة-مكافحة وورم-صاروخ موجه الببتيدات (كجكرك وإيرجد)7، الببتيدات المستهدفة للمشيمة8، الببتيدات المستهدفة المفرج المشيمية9 وأجسام مضادة ضد مستقبلات الاوكسيتوسين10.

هنا، علينا أن نظهر أن ببتيد اصطناعية كبريتات شوندروتن المشيمة بربط (بلكسا-BP) يمكن أن تستخدم لإيصال جسيمات نانوية وحمولاتها المخدرات الموجهة إلى المشيمة11. Nanoparticles بلكسا-بي بي-تسترشد مكملة أوتيروبلاسينتال عن استهداف أساليب نظراً لأنها تستهدف تروفوبلست المشيمة.

كطريقة غير الغازية، وقد استخدمت في فيفو تصوير لرصد الجينات الخاصة بالمشيمة في الفئران12، وإيندوسيانيني الأخضر (ICG) قد استخدمت على نطاق واسع لتعقب جسيمات نانوية استخدام fluorescence التصوير، نظم13 ،من 1415. وهكذا، نحن حقن الوريد جسيمات نانوية بلكسا-بي بي-مترافق محملة ICG (بلكسا-INPs) لتصور توزيع بلكسا-البرنامج النووي العراقي في الفئران الحوامل مع تصوير الأسفار. ثم أننا حقن الوريد الميثوتريكسات (MTX)-تحميل بلكسا-مصادر القدرة النووية في الفئران الحوامل. الموجات فوق الصوتية عالية التردد (هفوس)، آخر غير الغازية، في الوقت الحقيقي التصوير،أداة1617 تم استخدامه لرصد وضع الجنين والمشيمة في الفئران. وأخيراً، كنا كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء ([هبلك]) لقياس توزيع MTX في المشيمة والأجنة.

ونحن في هذا البروتوكول، تصف بالتفصيل النظام ثلاثة-الأسلوب الذي يستخدمه نانوكاريرس بلكسا-بي بي-تسترشد لتقييم كفاءة إيصال المخدرات تستهدف المشيمة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

جميع التجارب التي الماوس تتبع بدقة بروتوكولات (SIAT-IRB-160520-YYS-FXJ-A0232) وافقت عليها بالعناية بالحيوان واستخدام اللجنة من شنتشن معاهد للتكنولوجيا المتقدمة، الأكاديمية الصينية للعلوم.

1-خلاصة المشيمة كبريتات شوندروتن بوليمر الدهون المستهدفة بجسيمات نانوية

  1. توليف تحميل MTX و ICG جسيمات نانوية دهن البوليمر (منبس و INPs على التوالي) وجسيمات نانوية بلكسا-بي بي-مترافق (بلكسا-منبس وبلكسا INPs) كما هو موضح في التفصيل في أماكن أخرى18.

2. في فيفو Fluorescence التصوير

  1. إعداد الفئران الحوامل
    1. وضع مؤتمر نزع السلاح-1 الإناث الفئران (8-12 أسبوعا) مع خصوبة الذكور من نفس السلالة في قفص واحد (الذكور: الإناث = 1:2) في بعد ظهر اليوم والاختيار المهبل المقابس التالية صباح اليوم. إذا كان من الملاحظ سداده مهبلية، تعريف الماوس كيوم الجنينية 0.5 (E0.5).
    2. دورة البيت الفئران الحوامل وحدها في غرفة خالية من مسببات الأمراض حيوانية مع ح ضوء/10 ح 14 مظلمة وتوفير حرية الوصول إلى الغذاء والماء حتى E14.5.
  2. حقن الوريد لجسيمات نانوية
    1. قبل الإجراء، تعقيم جسيمات نانوية عن طريق الترشيح من خلال عامل تصفية حقنه 0.22 ميكرومتر. وزن الماوس الحامل في E11.5 لتحديد كمية وحجم الحقن نانوحبيبات.
      ملاحظة: يجب أن يكون حجم الحقن نانوحبيبات أقل من 1% (الحجم والوزن) من وزن الجسم للماوس الحوامل. على سبيل المثال، يجب أن يكون حجم الحقن نانوحبيبات أقل من 0.25 مل في ماوس 25 جرام.
    2. لتمدد الوريد الذيل، الحارة الذيل لمدة 5-10 دقيقة مع وسادة تدفئة.
    3. قبل الحقن، نضح INPs أو INPs بلكسا في محقن الأنسولين ز 28.
    4. نقل الماوس الحوامل إلى جهاز القابضة التي يقيد الماوس مع السماح بالوصول إلى هذا السياق الذيل. تنظيف الذيل مع مسحه الكحول. قم بإدراج حقنه في الوريد الذيل. حقن INPs أو بلكسا-INPs (ما يعادل ICG 5 مغ/كغ) ببطء مع الضغط حتى على مدى 5-10 ق.
      ملاحظة: إيقاف الحقن إذا نفطة يظهر في الذيل لأن هذه النتيجة تشير إلى أن الإبرة ليست في هذا السياق. ينبغي عدم تقاسم المحاقن بين الفئران للحد من انتقال الأمراض والتلوث عبر.
    5. سجل الوقت الحقن. ومن ناحية أخرى، تطبيق ضغط لطيف على موقع الحقن حتى يتوقف النزف، التي عادة ما تستغرق 30-60 ثانية.
  3. التصوير في فيفو
    1. صورة و 30 دقيقة بعد الحقن، الفئران الحوامل في فيفو fluorescence نظام التصوير باستخدام.
    2. تخدير الفئران الحوامل مع معدل تدفق الأوكسجين 1.0 لتر في الدقيقة وإيسوفلوراني في 2-4% في دائرة المرتبطة بها لوحدة التخدير والتحقق من التخدير الكامل ببطء وانتظام التنفس. ثم نقلها إلى غرفة التصوير. ضع الفئران الحوامل أنيسثيتيزيد إلى غرفة التصوير، حفظ الحيوانات في موقف ضعيف.
    3. وضع مخروط الآنف أكثر من الفم والأنف للسماح باستنشاق إيسوفلوراني 1-2 في المائة مع معدل تدفق الأوكسجين 1.0 لتر في الدقيقة للمحافظة على التخدير.
    4. حدد المعلمات 2D-الأسفار والتصوير الفوتوغرافي للصور إشارات fluorescence ICG. ضبط التعرض السيارات وموجات الإثارة/الانبعاثات إلى 710/820 نيوتن متر.
    5. في نهاية عملية التصوير، إيقاف تدفق isoflurane لوقف التخدير، والعودة بعناية الفئران الحوامل إلى اقفاصها.
    6. 48 ساعة بعد الحقن نانوحبيبات، تخدير الفئران الحوامل مع إيسوفلوراني ومن ثم التضحية السد بخلع عنق الرحم. جمع الأجنة والمشيمة استخدام الملقط جرايفى، جرايفى ملقط الأنسجة، وتشريح المقص.
    7. وضع المشيمة والأجنة في غرفة التصوير، والصورة باستخدام الطريقة الموضحة في الخطوة 2.3.4.

3. هفوس التقييم من التنمية الجنينية

  1. نماذج حيوانية
    1. الحصول على وإعداد الفئران الحوامل كما هو موضح في الخطوة 2، 1.
    2. استخدام هفوس للفئران الحوامل الصورة في ه 6.5 (البروتوكولات 3.2 و 3.3.3). أولاً، تأكيد الحمل بتصور أجنة في اليوم E6.5 ومن ثم تخصيص الفئران الحوامل عشوائياً إلى ثلاث مجموعات: مجموعة حركة الأشخاص الطبيعيين، مجموعة بلكسا-حركة الأشخاص الطبيعيين، ومجموعة الفوسفات مخزنة المالحة (PBS).
    3. حقن برنامج تلفزيوني، منبس أو بلكسا-منبس (1 مغ/كغ، أي ما يعادل MTX) في عروق ذيل الفئران الحوامل يوميا ابتداء من الساعة E6.5 كما هو موضح في الخطوة 2، 2.
  2. التحضير للتصوير
    1. 24 ساعة بعد حقن جسيمات نانوية، صورة الفئران الحوامل استخدام هفوس نظام التصوير.
    2. تخدير الفئران الحوامل كما هو موضح في الخطوة 2.3.2. بدوره على عناصر تحكم درجة الحرارة المتكاملة من منصة التصوير وتسخَّن المنهاج إلى 37-42 درجة مئوية. تأمين الفئران الحوامل في موقف ضعيف على منصة استخدام الشريط.
    3. مكان مخروط الآنف متصل إلى وحدة التخدير عبر الآنف. تطبيق isoflurane 2% مع معدل تدفق الأوكسجين 1.0 لتر في الدقيقة للمحافظة على التخدير المطرد.
    4. إزالة الشعر كيميائيا من البطن باستخدام كريم مزيل الشعر. تمحو القشدة المتبقية جيدا بشاش غارقة في المياه، ومن ثم معطف البطن مع اقتران جل الصوتية.
  3. التصوير الداخلي
    1. ضع محول 40 ميغاهرتز في الذراع الميكانيكية.
    2. ضبط موضع محول طاقة للحصول على صور طولية للجنين والمشيمة مع منطقة الفائدة الواقعة في المنطقة المركزية.
    3. ب-وضع التصوير والتحليل
      ملاحظة: مشاهدة فيلم 1.
      1. انقر فوق الزر ب-الوضع وأقل محول على بطنه حتى تأتي بالجنين والمشيمة في طريقة العرض. اضغط على الزر مسح/تجميد لبدء/إيقاف التصوير، اضغط على تخزين سينمائية لتخزين حلقة سينمائية، واضغط على تخزين الإطار لتخزين الصور الإطار.
      2. انقر فوق زر الإجراء لتحليل طول الكيس الحملي (ع) وطول الردف التاج الجنين (CRL)، بيباريتال القطر (برميل يوميا)، ومحيط البطن (AC)، قطرها المشيمية (PD) وسمك المشيمة (PT).
    4. تصوير دوبلر الأسبق والتحليل
      ملاحظة: مشاهدة فيلم 1.
      1. استخدام نفس المسح الضوئي الإسقاط وانقر فوق الزر الأسبق ، ضع مربع حجم العينات في وسط الشريان السري واضغط مسح/تجميد الشروع في تصوير. انقر فوق تخزين سينمائية لجمع الصور الشريان السري.
      2. انقر فوق الزر مقياس لحساب السرعة القصوى الشريان السري (UA).
    5. تصوير دوبلر وضع الألوان وتحليل
      1. استخدام نفس المسح الضوئي الإسقاط، انقر فوق الزر لون وضبط موضع محول طاقة الحصول على صور لقلب الجنين. اضغط على مسح/تجميد للشروع في تصوير و سينما تخزين لجمع الصور.
      2. انقر فوق الزر مقياس لحساب معدل قلب الجنين (الموارد البشرية).

4. تحليل [هبلك]

  1. إعداد الأنسجة
    1. حقن الفئران الحوامل بجرعة واحدة من منبس أو بلكسا-منبس (ما يعادل MTX 1 مغ/كغ) في أواخر فترة الحمل (مثلاً., E14.5) كما هو موضح في الخطوة 3.1.3.
    2. بعد 24 ساعة، تخدير الفئران بحقن داخل أفيرتين في 240 ميكروغرام/الوزن (ز). ضمان أي رد على قرصه سيرا على أقدام للتحقق من أن يتم تخديره الفئران تماما.
    3. رش منطقة الصدر مع الإيثانول 75%. أداء القلب نضح (قطع الاذينين الأيمن ونتخلل عن طريق البطين الأيسر) كما تم وصفه سابقا بالتفصيل19،20 مع 50 مل من المثلج ملحي 0.9% لمدة 10 دقيقة لإزالة جسيمات نانوية غير منضم.
    4. Euthanize السد. القيام العملية قيصرية جمع الأجنة والمشيمة استخدام الملقط جرايفى، تشريح مقص وملقط الأنسجة جرايفى، وتخزين الأنسجة في-80 درجة مئوية قبل التحليل.
    5. إعداد الحل التجانس (حمض بيرتشلوريك 10%)، والحفاظ على الجليد. تجمع حوالي 200 ملغ أنسجة، وإضافة 500 ميكروليتر من تجانس الحل لكل عينة. مجانسة العينات باستخدام الخالطون بأقصى سرعة 30 ثانية، وتكرار هذا الإجراء مرتين.
    6. الطرد المركزي في عينات ز × 14,000 لمدة 20 دقيقة في 4 درجات مئوية. تصفية المادة طافية (حوالي 300 ميكروليتر) من خلال مرشح حقنه 0.45 ميكرومتر، ونقل السائل الناتج قنينة [هبلك]. ضع قارورة العينة إلى علبة أوتوسامبلير للحقن.
  2. إعداد معايير
    1. إعداد الحل التالي لمرحلة الجوال: 40 مم بوتاسيوم فوسفات مائي (pH 4.5) والاسيتو الانيتريل (88:12، v/v). تصفية الحل من خلال مرشح حقنه حجم مسام 0.45 ميكرومتر ونقل السائل الناتج باستخدام زجاجة خزان [هبلك] نظيفة.
      ملاحظة: تعديل درجة الحموضة بحامض الفوسفوريك 0.1 متر. استخدام الاهتزاز بالموجات فوق الصوتية لمدة 15 دقيقة ديغا المرحلة المتنقلة في كل مرة سابقة لاستخدام.
    2. تزن 10 مغ MTX في أنبوب الطرد مركزي 1.5 مل. أضف 1 مل هيدروكسيد الصوديوم 1 متر.
    3. الدوامة بسرعة عالية حتى يذوب MTX تماما.
      ملاحظة: هذا هو الرصيد الابتدائي ويمكن تخزينها في-20 درجة مئوية لعدة أشهر.
    4. لإنشاء مخزون MTX الثانوي (500 ميكروغرام/مل)، يؤدي إلى تمييع 50 ميكروليتر من الرصيد الأساسي في ميكروليتر 950 المرحلة المتنقلة.
      ملاحظة: تخزين على الجليد حتى الاستخدام، وإعداد يومية جديدة. من المهم استخدام المرحلة متنقلة لإعداد معايير لتجنب قمم الناتجة عن خلط حلول متباينة بعد الحقن بعينه.
    5. بذل مزيد من تخفيف لإنشاء المعايير (الجدول 1). تخزين المعايير على الجليد وإعداد يومية جديدة. تشغيل المعايير في سلسلة مع العينات التجريبية.
عددالتركيز النهائي (ميكروغرام/مل)500 ميكروغرام/مل ميكروليتر القياسية،Phase(μL) الجوال
10.51999
212998
32.55995
41020980
52550950
650100900
7100200800

الجدول 1. إعداد من المنحنى المعياري ل MTX. تركيز MTX القياسية الحل النهائي من 0.5-100 ميكروغرام/مل.

  1. الأجهزة [هبلك] و معلمات العملية
    ملاحظة: تم تحليل العينات على نظام [هبلك] مزودة بمضخة المذيبات، جهاز كشف سبيكتروفوتوميتريك الأشعة فوق البنفسجية (313 نانومتر)، وعمود C18 (250 × 4-6 مم، وحجم الجسيمات ميكرومترات 5).
    1. قم بتشغيل ديجاسير [هبلك] لإزالة الهواء من النظام. قم بتشغيل التدفق، اكويليبراتينج العمود مع المرحلة المتنقلة لمدة 30 دقيقة للحد من الضوضاء خط الأساس.
    2. تعيين درجة حرارة العمود إلى 25 درجة مئوية وضخ 20 ميكروليتر عينة من وحدات التخزين بمعدل تدفق من 1 مل/دقيقة، وانقر فوق الأسلوب Run لبدء التحليل.
    3. عند إتمام يمتد، يدوياً تغيير المرحلة المتنقلة إلى الاسيتو الانيتريل [هبلك]-الصف. تشغيل لمدة 15 دقيقة تقريبا لحماية النظام.
      ملاحظة: يمكن أن يؤدي عدم القيام بهذه الخطوة بعد وقت التشغيل الموصى بها في الضرر للعمود.
    4. للتحليل الكمي، وحساب المناطق الواقعة تحت قمم MTX القياسية من اهتمام باستخدام برنامج النظام [هبلك].

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذه المخطوطة، كانت جسيمات نانوية بلكسا-بي بي-مترافق مع MTX (بلكسا-منبس) أو ICG (بلكسا-INPs) تحميل حقن الوريد في الفئران الحوامل. وكشفت في فيفو تصوير إشارات ICG قوي في منطقة الرحم و 30 دقيقة بعد حقن بلكسا-البرنامج النووي العراقي. كانت المترجمة INPs أساسا إلى منطقة الكبد والطحال (الشكل 1A). في 48 ساعة بعد الحقن بلكسا-البرنامج النووي العراقي، جرى التضحية الفئران الحوامل، بالكشف عن الإشارات ICG فقط في المشيمة، بينما مع لا إشارات تم كشفها في الجنين (

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في هذه المخطوطة، فإننا مخطط نظام الثلاث-طريقة لتحديد ما إذا كانت جسيمات نانوية بلكسا-بي بي-تسترشد أداة فعالة لاستهداف إيصال المخدرات إلى المشيمة. تأكد استخدام في فيفو التصوير لرصد الأشعة تحت الحمراء الفلورسنت ICG إشارة خصوصية استخدام بلكسا-هناك استهداف المشيمية هفوس و [هبلك]، أثبتنا أن جسيمات نانوية بلكسا-بي بي-مترافق يمكن أن يحقق كفاءة MTX فقط إلى خلايا المشيمة، لا إلى الجنين.

في في فيفو fluorescence تصوير التجارب، مهمان حملية من الفئران الحوامل. وتبدأ المشيمة إلى النموذج حو...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

X.F. و B.Z. من المخترعين في طلب البراءة PCT/CN2017/108646 المقدمة التي سيت الذي يغطي أسلوب توصيل العقاقير الخاصة بالمشيمة وتطبيقه. أن تعلن جميع مؤلفين آخرين أن لديهم لا تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بتأييد هذا العمل بمنح من المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية (81771617) والعلوم الطبيعية مؤسسة من مقاطعة قوانغدونغ (2016A030313178) منحت إلى X.F.؛ منحة من "شنتشن الأساسي البحث الصندوق" (JCYJ20170413165233512) منحت إلى X.F؛ يونيس كينيدي شرايفر الوطني معهد صحة الطفل والتنمية البشرية من "معاهد الصحة الوطنية في" إطار جائزة رقم R01HD088549 (المحتوى هي المسؤولة الوحيدة عن المؤلفين ولا تمثل بالضرورة المسؤول آراء من المعاهد الوطنية للصحة) إلى ن. ن.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
CD-1 الفئرانبكين فيتال ريفر201أنثى (8-12 أسبوع)
حقنة الأنسولينBD328421للحقن الوريدي
الإيثانول المطلقسينوفارم10009218لتخليق الجسيمات النانوية
ليسيثين فول الصوياأفانتي الدهون القطبية441601لتخليق الجسيمات النانوية
DSPE-PEG-COOHأفانتي الدهون القطبية880125لتخليق الجسيمات النانوية
PLGAسيجما ألدريتش719897لتخليق الجسيمات النانوية
معالج بالموجات فوق الصوتيةSonicsVCX130لتخليق الجسيمات النانوية
ميثوتريكسات (MTX)سيجما ألدريتشV900324لتخليق الجسيمات النانوية
إندوسيانين أخضر (ICG)سيجما ألدريتش1340009في الجسم الحي تصوير
محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS)HycloneSH30028.01
IVIS أداة طيفPerkin Elmerللتصوير في الجسم
الحي جل نقل الموجات فوق الصوتيةGuanggongZC4252418للتصوير بالموجات فوق الصوتية
IsofluraneLunan PharmaceuticalI0040للحفاظ على التخدير
كريم مزيل الشعرنايرTMG001لإزالة محول الفراء
40 ميجاهرتزVisualSonicsMS550Sللتصوير بالموجات فوق الصوتية
نظام التصوير بالموجات فوق الصوتية عالي الترددVisualSonicsVevo2100للتصوير بالموجات فوق الصوتية
AvertinSigma-AldrichT48402للتخدير
مضخة حقنةMindraySK-500IIIللتروية
محلول ملحي 0.9٪MeilunbioMA0083للنضح القلبي
1.5 مل أنابيب البولي بروبلينAXYGENMCT-150-C-80
& deg ؛ الفريزر CThermo Fisher Scientific88600V
CentrigugeCenceH1650R
حمض البيركلوريكسيجما ألدريتش311421لترسيب البروتين
الخالطSCIENTZSCIENTZ-48لتجانس مرشح
حقنة الأنسجة (0.45 & mu ؛ م)ميليبورSLHV033RS01
هيدروكسيد الصوديومسينوفارم 10019763 كيميائيلحل
قوارير MTX HPLC670650620 المياهل HPLC
فوسفات البوتاسيوم ثنائي القاعدةسينوفارم20032117ل HPLC
أسيتونيتريلJKchemical932537لعمود HPLC
C18المياه186003966لنظام HPLC
HPLCShimadzuل HPLC
الكيميائية القلبية الكيميائية

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Rodger, M. A., et al. The Association of Factor V Leiden and Prothrombin Gene Mutation and Placenta-Mediated Pregnancy Complications: A Systematic Review and Meta-analysis of Prospective Cohort Studies. PLOS Medicine. 7 (6), e1000292(2010).
  2. Rodger, M. A., et al. Inherited thrombophilia and pregnancy complications revisited. Obstetrics & Gynecology. 112 (2 Pt 1), 320-324 (2008).
  3. Brenner, B., Aharon, A. Thrombophilia and adverse pregnancy outcome. Clinics in Perinatology. 34 (4), 527-541 (2007).
  4. Fisk, N. M., McKee, M., Atun, R. Relative and absolute addressability of global disease burden in maternal and perinatal health by investment in R&D. Tropical Medicine & International Health. 16 (6), 662-668 (2011).
  5. Fisk, N. M., Atun, R. Market failure and the poverty of new drugs in maternal health. PLOS Medicine. 5 (1), e22(2008).
  6. Kaitu'u-Lino, T. uJ., et al. Targeted nanoparticle delivery of doxorubicin into placental tissues to treat ectopic pregnancies. Endocrinology. 154 (2), 911-919 (2013).
  7. King, A., et al. Tumor-homing peptides as tools for targeted delivery of payloads to the placenta. Science Advances. 2 (5), e1600349(2016).
  8. Beards, F., Jones, L. E., Charnock, J., Forbes, K., Harris, L. K. Placental Homing Peptide-microRNA Inhibitor Conjugates for Targeted Enhancement of Intrinsic Placental Growth Signaling. Theranostics. 7 (11), 2940-2955 (2017).
  9. Cureton, N., et al. Selective Targeting of a Novel Vasodilator to the Uterine Vasculature to Treat Impaired Uteroplacental Perfusion in Pregnancy. Theranostics. 7 (15), 3715-3731 (2017).
  10. Paul, J. W., et al. Drug delivery to the human and mouse uterus using immunoliposomes targeted to the oxytocin receptor. American Journal of Obstetrics and Gynecology. 216 (3), e281-e283 (2017).
  11. Zhang, B., et al. Placenta-specific drug delivery by trophoblast-targeted nanoparticles in mice. Theranostics. 8 (10), 2765-2781 (2018).
  12. Fan, X., et al. Noninvasive monitoring of placenta-specific transgene expression by bioluminescence imaging. PloS One. 6 (1), e16348(2011).
  13. Murata, M., Tahara, K., Takeuchi, H. Real-time in vivo imaging of surface-modified liposomes to evaluate their behavior after pulmonary administration. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 86 (1), 115-119 (2014).
  14. Ito, A., et al. New whole-body multimodality imaging of gastric cancer peritoneal metastasis combining fluorescence imaging with ICG-labeled antibody and MRI in mice. Gastric Cancer. 17 (3), 497-507 (2014).
  15. Mazza, M., et al. Liposome-Indocyanine Green Nanoprobes for Optical Labeling and Tracking of Human Mesenchymal Stem Cells Post-Transplantation In Vivo. Advanced Healthcare Materials. 6 (21), (2017).
  16. Greco, A., et al. High frequency ultrasound for in vivo pregnancy diagnosis and staging of placental and fetal development in mice. PloS One. 8 (10), e77205(2013).
  17. Spurney, C. F., Leatherbury, L., Lo, C. W. High-frequency ultrasound database profiling growth, development, and cardiovascular function in C57BL/6J mouse fetuses. Journal of the American Society of Echocardiography. 17 (8), 893-900 (2004).
  18. Zhang, B., et al. Synthesis and characterization of placental chondroitin sulfate A (plCSA) -targeting lipid-polymer nanoparticles. Journal of Visualized Experiments. , (2018).
  19. Devraj, K., Guerit, S., Macas, J., Reiss, Y. An In Vivo Blood-brain Barrier Permeability Assay in Mice Using Fluorescently Labeled Tracers. Journal of Visualized Experiments. (132), (2018).
  20. Beeton, C., Chandy, K. G. Isolation of mononuclear cells from the central nervous system of rats with EAE. Journal of Visualized Experiments. (10), 527(2007).
  21. Watson, E. D., Cross, J. C. Development of structures and transport functions in the mouse placenta. Physiology. 20 (3), 180-193 (2005).
  22. Frangioni, J. V. In vivo near-infrared fluorescence imaging. Current Opinion in Chemical Biology. 7 (5), 626-634 (2003).
  23. Flores, L. E., Hildebrandt, T. B., Kuhl, A. A., Drews, B. Early detection and staging of spontaneous embryo resorption by ultrasound biomicroscopy in murine pregnancy. Reproductive Biology and Endocrinology. 12, 38(2014).
  24. Khankin, E. V., Hacker, M. R., Zelop, C. M., Karumanchi, S. A., Rana, S. Intravital high-frequency ultrasonography to evaluate cardiovascular and uteroplacental blood flow in mouse pregnancy. Pregnancy Hypertension. 2 (2), 84-92 (2012).
  25. Phoon, C. K. Imaging tools for the developmental biologist: ultrasound biomicroscopy of mouse embryonic development. Pediatric Research. 60 (1), 14-21 (2006).
  26. Pallares, P., Gonzalez-Bulnes, A. Non-invasive ultrasonographic characterization of phenotypic changes during embryo development in non-anesthetized mice of different genotypes. Theriogenology. 70 (1), 44-52 (2008).
  27. Parvani, J. G., Gujrati, M. D., Mack, M. A., Schiemann, W. P., Lu, Z. -R. Silencing β3 integrin by targeted ECO/siRNA nanoparticles inhibits EMT and metastasis of triple-negative breast cancer. Cancer Research. 75 (11), 2316-2325 (2015).
  28. Zhang, B., et al. Targeted delivery of doxorubicin by CSA-binding nanoparticles for choriocarcinoma treatment. Drug Delivery. 25 (1), 461-471 (2018).
  29. Jenkins, D. E., et al. Bioluminescent imaging (BLI) to improve and refine traditional murine models of tumor growth and metastasis. Clinical & Experimental Metastasis. 20 (8), 733-744 (2003).
  30. Keelan, J. A., Leong, J. W., Ho, D., Iyer, K. S. Therapeutic and safety considerations of nanoparticle-mediated drug delivery in pregnancy. Nanomedicine. 10 (14), 2229-2247 (2015).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

14 5

مقالات ذات صلة