هنا، نقدم بروتوكول تلطيخ مرنة لتحديد الألياف المرنة في أنسجة سرطان المعدة pT3N0M0 على أقسام رسمية ثابتة، البارافين جزءا لا يتجزأ. في وقت لاحق، ونحن نصف طريقة لتحديد ما إذا كانت الخلايا السرطانية تغزو وراء لامينا مرنة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تلطيخ مطاطي على الشرائح جزءا لا يتجزأ من البارافين من أنسجة سرطان المعدة pT3N0M0
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
اللامينا المرنة، التي تقع عادة في طبقة شبه mesothelial، المتاخمة للخلايا الوسطى العبية، هو amphiphilic على الهيماتوإكسلين وeosin (H & E) تلطيخ ولكن يمكن تصورها من خلال تلطيخ مرنة. واحدة من الفوائد الهامة للتلطيخ المرن هو أنه يجعل من السهل تحديد ما إذا كانت الخلايا السرطانية قد غزت وراء لامينا مرنة. وهذا يساعد في دراسة مدى الغزو السطحي البريكوني، وبالتالي التمييز بين مراحل pT3 و pT4 في سرطان الجهاز الهضمي. في هذه الدراسة، نقدم بروتوكول لتحديد الألياف المرنة في أقسام الأنسجة السرطانية المعدية المثبتة رسميا، البارافين جزءا لا يتجزأ من pT3N0M0. نحن إعداد أقسام البارافين 5-μm ثابتة على الشرائح، ومن ثم يتم إزالة جميع الشرائح وإعادة ترطيبها أثناء إجراء تلطيخ. في وقت لاحق، يتم أكسدة جميع الأقسام من قبل برمنغنات البوتاسيوم، مبيض بحمض الأكساليك، ملطخة بتلطيخ مرن، وملطخة من قبل فان غيسون. وأخيرا، فإننا ندرس تأثير تلطيخ؛ لامينا مرنة ملطخة الأزرق والأسود وألياف الكولاجين ملطخة الأحمر، في حين أن الخلايا السرطانية ملطخة في ظلال متفاوتة من الأصفر. كما أننا نصف بالتفصيل الأساليب المستخدمة لتحديد العلاقة الموضعية بين الخلايا السرطانية واللامينا المرنة. هذه الطريقة بسيطة، منخفضة التكلفة، وقابلة للتطبيق على نطاق واسع في تحديد غزو سطح البريكوني في سرطان الجهاز الهضمي بسبب انتقائيته المعلقة للألياف المرنة والنتائج الحقيقية.
المقدمة
وفقا للورم، عقدة، وورم (TNM) نظام تنظيم السرطان، وتشخيص سرطان المعدة في المرحلة المرضية pT4 هو أسوأ بكثير من ذلك في pT3 (UICC 8/ AJCC)1. مع سرطان المعدة ، عادة ما يعتمد تصنيف الورم الأولي (pT) على عمق غزو الورم2. يتم تعريف سرطان المعدة pT3 المرحلة المرضية على أنه سرطان يغزو من خلال بروبريا العضلات في الأنسجة تحت الجلد، في حين يتم تعريف سرطان المعدة pT4 كسرطان اختراق إلى سطح البريطونالحشوي. وجود الغازية السطحية البريكونية هو المفتاح للتمييزبين المرحلتين 2. ومع ذلك، لأن طبقة الخلايا الوسطى العبية هي رقيقة جدا، يمكن أن تتلف خلال الجراحة، والعلاج بعد الجراحة، وتثبيت3. ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
بين عامي 1994 و 2005، تم اختيار عينات المرضى من قبل اثنين من أخصائيي أمراض الجهاز الهضمي من ذوي الخبرة في مستشفى السرطان التابعة لمدرسة شيانغيا للطب، جامعة الجنوب الوسطى، من المرضى الذين عانوا من استئصال المعدة، مع التشخيص المرضي بعد الجراحة لسرطان المعدة في مرحلة pT3N0M0 (وفقا للمرحلة TNM السابع). وقد وافقت لجنة استعراض الأخلاقيات على هذه الدراسة.
1 - تقسيم الأقسام
- ضع كتلة البارافين في حامل ثابت للميكروتومي الزلاجة، والتي يمكن أن تتحرك إلى الوراء وإلى الأمام عبر النصل. ضبط الزاوية المثلى بين كتلة وسكين microtome.
ملاحظة: الزاوية المثلى لا تعتمد فقط على هندسة النصل ولكن أيضا على سرعة القطع وتقنية. - تقليم كتلة البارافين....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تلطيخ مرن ناجح يكشف بوضوح لامينا مرنة والخلايا السرطانية في سرطان المعدة pT3. الشكل 1 - حقل الطاقة المنخفضة، فحص مجهري بعد تلطيخ محلول الإيلاستين، قبل وصمة عار فان غيسون وفقا للبروتوكول المذكور - يظهر لامينا مرنة قريبة من الخلايا المصلية المصلية وملطخة الأزرق والأسود في شكل خيوط، ولا تزال هناك مسافة معينة بين الخلايا السرطانية ولامينا مرنة. الشكل 2 هو تلطيخ مرن نموذجي مع وصمة عار فان غيسون، حيث لامينا مرنة ملطخة الأزرق والأسود، أ.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
توفر هذه الطريقة المقترحة هنا نهجاً دقيقاً لتحديد لامينا مطاطية تحت الجلد. ويمكن استخدام هذه الطريقة لتقييم ما إذا كانت الخلايا السرطانية قد غزت لامينا مرنة في سرطان المعدة pT3N0M012. لامينا مرنة هو المحمر في H & E-الملون المقاطع، والتي لا يمكن تمييزها بسهولة من ألياف الكولاجين، وغيرها من أساليب التشخيص المساعدة القائمة، مثل علم الخلايا والكيمياء المناعية، كما بذلت قيمة تشخيصية محدودة. العثور على الخلايا السرطانية في السائل الري الصفاق لا يشير بالضرورة إلى وجود غزو مصلي للورم الأولي ، والذي قد يكو.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
ويشكر المؤلفون الدعم المقدم جزئياً من المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية (NO.81401902 وNO.81501992) ومؤسسة هونان للعلوم الطبيعية (NO.2017SK2134, NO.2018JJ2238). المخطوطة من تأليف غوانغ لي. يتم تنفيذ التجربة بأكملها من قبل قوانغ لي وهايان يانغ. ويشكر أصحاب البلاغ مساعدة أخصائيي الأمراض والزملاء الذين يتابعون بيانات المرضى.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| مجموعة تلطيخ Elastin-Van Gieson | Baso | BA4083B | تستخدم لتلوين الألياف المرنة وألياف الكولاجين والألياف العضلية & nbsp ؛ |
| Permount TM تصاعد متوسط | MXB Biotechnologies | DAB-0033 | يستخدم لتركيب |
| الإيثانول | LMAI Bio & nbsp ؛ | LM64-17-5 | 100٪ |
| Xylene | LMAI Bio | LX820585 |
المراجع
- Jiang, C. G., et al. Clinicopathologic characteristics and prognosis of gastric cancer invading the subserosa. Journal of Surgical Oncology. 102 (7), 737-741 (2010).
- Amin, M. B., et al. AJCC Cancer Staging Manual. 8th ed. , Springer. New York, NY. (2017). <....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
