يتم وضع سير عمل باستخدام الطرد المركزي التدفق الخلوي أو التفاضلية لاكتشاف وتحديد وعزل الهيئات أبوبتوتيك من نموذج أبوبتوتيك بدرجة نقاء عالية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
كشف وعزل الهيئات أبوبتوتيك بدرجة نقاء عالية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الهيئات أبوبتوتيك (أبوبدس)، ميكروفيسيكليس، واكسوسوميس من الأعضاء الرئيسيين في الأسرة حويصلة خارج الخلية، مع كونها واحدة من نوع أكبر أبوبدس. واقترح أن أبوبدس يمكن أن تساعد في إزالة الخلايا، فضلا عن الاتصالات بين الخلايا من خلال الاتجار بالجزيئات الحيوية. النهج التقليدية المستخدمة لتحديد وعزل أبوبدس هي غالباً ما تكون محدودة بسبب عدم دقة القياس الكمي ونقاء العينة منخفضا. هنا، يمكننا وصف سير عمل تأكيد تنظيم دورات تعريفية للمبرمج، والتحقق من صحة تكوين عببد، وعزل أبوبدس بدرجة نقاء عالية. وسنعمل أيضا الخطوط العريضة ومقارنة الأسفار تنشيط الخلية الفرز (نظام مراقبة الأصول الميدانية) والطرد المركزي التفاضلي على أساس نهج لعزل أبوبدس. وعلاوة على ذلك، سيتم تأكيد نقاء أبوبدس معزولة باستخدام سبق إنشاء التدفق الخلوي على تلطيخ والأسلوب التحليلي. مجتمعة، باستخدام النهج المبين، الناجم عن تفكيك الخلية المبرمج و apoptotic الوحيدات THP-1 والتحقق من صحتها، وعببد المتولدة من وحيدات THP-1 كانت معزولة لدرجة نقاء من 97-99%.
المقدمة
المبرمج، نموذج مدروسة من موت الخلايا المبرمج، مطلوب للمحافظة على التوازن الفسيولوجي وإزالة الخلايا الضارة داخل جسم الإنسان1. بعد إدخال المبرمج، خلايا أبوبتوتيك (أبوسيلس) يمكن إجراء سلسلة من التغييرات الشكلية وتفكيكه إلى حويصلات غشاء زمنياً صغيرة تسمى أبوبدس. عموما، هذه العملية هي المعروفة بتفكيك خلية أبوبتوتيك ويمكن تقسيمها إلى 3 خطوات متميزة استناداً إلى مورفولوجيا2،3. الخطوة 1 (غشاء البلازما بلبينغ) يتسم بتشكيل هياكل تشبه البالون على سطح الخلية المعروفة باسم بليبس4،5. الخطوة 2 (apoptotic تشكيل نتوء) يتضمن تشكيل نتوءات غشاء طويلة مثل أبوبتوبوديا، أبوبتوبوديا بالخرز و microtubule المسامير6،،من78. وأخيراً، يتضمن الخطوة 3 (تشكيل عببد) تجزؤ نتوءات أبوبتوتيك و/أو أبوسيلس لتوليد أبوبدس6،9. وقد اقترح النتائج السابقة دور أبوبدس في مساعدة إزالة خلية أبوبتوتيك والتوسط للاتصالات بين الخلايا. على سبيل المثال، يقترح أن تجزئة أبوسيل إلى أبوبدس قد يولد القطع الصغيرة 'لدغة الحجم' التي يمكن إزالتها بسهولة عن طريق إحاطة البالعات2،10،11. وعلاوة على ذلك، قد تأوي أبوبدس سلسلة من الجزيئات الحيوية مثل الحمض النووي، والجيش الملكي النيبالي، والبروتينات، والتي قد تكون بهن إلى الخلايا المجاورة لتيسير خلية خلية الاتصالات12،،من1314. وظيفيا التحقيق في هذه العمليات، من المهم للتأكد من المعلمات الرئيسية الثلاث بما في ذلك (ط) التحقق من صحة الاستقراء المبرمج وتشكيل عببد، (ثانيا) عزل أبوبدس، و (ثالثا) تأكيد نقاء عببد.
سابقا، قد استخدمت عدد من الأساليب بما في ذلك التدفق الخلوي والمجهر الإلكتروني لدراسة الخلايا وأبوبدس15،16،،من1718. ومع ذلك، عببد الكشف والتحديد الكمي غالباً ما تكون صعبة أو تجاهلها. على سبيل المثال، الاعتداء المبرمج على أساس قياس التدفق الأكثر استخداماً بشكل روتيني توظف annexin الخامس (A5، بروتين الذي يربط الخارجية 'أكل-لي' إشارة فوسفاتيديلسيريني (بتدسير)) والحمض النووي (PI) يوديد propidium19وصمة عار. ومع ذلك، باستخدام هذا المزيج العالمي وصمة عار، يفترض التحليل أن هناك ثلاثة أنواع فقط من مجموعات فرعية خلية (خلايا قابلة للحياة وأبوسيلس ونخريه الخلايا) في العينة. وعلاوة على ذلك، على الرغم من اعتبار "معيار الذهبي" بالعديد من الباحثين للمبرمج، التدفق الخلوي فحوصات وتحليل البيانات اللاحقة غالباً ما يستبعد أبوبدس من خلال خطوة أولية النابضة تحديد أحداث منتدى التعاون الأمني/SSCمتوسطة-عالية . ولذلك، قمنا مؤخرا بتطوير فحص الخلوي تدفق رواية استخدام A5 والي-برو-3، وصمة عار النووية الأخرى التي يمكن اتخاذها بصورة انتقائية طريق caspase 3/7-تنشيط بانيكسين 1 (PANX1) القنوات7،20. كما caspase الناجمين عن 3 PANX1 التنشيط يسبق التعرض بتدسير في مرحلة مبكرة من المبرمج، إلى-برو-3 خلطات بقع نخرية الخلايا وأبوبتوتيك. وبالإضافة إلى ذلك، يشمل هذا النهج جنبا إلى جنب مع الرواية لدينا النابضة استراتيجية المكتسبة جميع الأحداث أثناء تحليل البيانات، ونتيجة لذلك حددت ست مجموعات فرعية خلية/الجسيمات، بما في ذلك: (ط) خلايا قابلة للحياة (منتدى التعاون الأمني/SSCمتوسطة/عالية، A5 منخفض ، 3--إلى--برومنخفضة)، (ثانيا) A5– أبوسيلس المبكر (منتدى التعاون الأمني/SSCمتوسطة/عالية، A5منخفضة، إلى-برو-3المتوسطة)، (ثالثا) A5+ أبوسيلس (منتدى التعاون الأمني/SSCمتوسطة/عالية، A5عالية ، إلى-برو-3المتوسطة)، (رابعا) نخرية الخلايا أو أبوسيلس الراحل (منتدى التعاون الأمني/SSCمتوسطة/عالية، A5عالية، إلى-برو-3عالية)، (v) أبوبدس (منتدى التعاون الأمني/SSCمنخفضة، A5الوسيطة، إلى-برو-3منخفض /الوسيطة)، و (سادسا) الحطام (منتدى التعاون الأمني/SSCمنخفضة، A5منخفضة، إلى-برو-3منخفض)20. نهجنا تشدد على أهمية تحليل جميع خلايا/الجسيمات مجموعات فرعية، والأهم من ذلك، فصل أبوبدس عن الخلايا والحطام20. وهكذا، يوضح هذا النهج أسلوب فعال للتحقق من صحة الاستقراء المبرمج وتشكيل عببد في وقت واحد.
تقليديا، كانت معزولة عن طريق مجموعة متنوعة من النهج التفاضلي الطرد المركزي حيث يمكن فصل أبوبدس من الخلايا أو حويصلات خارج الخلية الأخرى على أساس كثافة أبوبدس. ومع ذلك، تقتصر أساليب الطرد المركزي هذه غالباً ما منخفض عببد النقاء، عدم وجود خطوة التحديد الكمي لتأكيد نقاوة العينة، و/أو عدم القدرة على فصل الخلية المحددة بنوع أبوبدس17،،من2122. ولذلك وضعنا مؤخرا نهجين والقائم على نظام مراقبة الأصول الميدانية ونهج المستندة إلى استخدام الطرد المركزي تفاضلية جديدة التي يمكن أن تقترن باسلوبنا الخلوي التدفق المحددة سابقا للتحقق من صحة الاستقراء من المبرمج وعينه نقاء23. عببد العزلة عبر نهجنا القائم على نظام مراقبة الأصول الميدانية يمكن أن تثري أبوبدس ما يصل إلى 99 ٪ النقاء، ويمكن أن يقترن بمجموعة متنوعة من الأجسام المضادة لنوع معين خلية لعزل أبوبدس من الخلايا المختلطة السكان، وعينات الأنسجة وسوائل الجسم23. وعلاوة على ذلك، يوضح نهجنا الطرد المركزي التفاضلي المنقحة طريقة فعالة لعزل أبوبدس إلى > نقاء 90%23.
في هذه الورقة، ويصف لنا بالتفصيل لدينا إجراءات تجريبية للتحقق من صحة الاستقراء المبرمج، وكشف وتحديد تشكيل عببد. كما وضعت العزلة عببد مهام سير العمل باستخدام الأساليب القائمة على نظام مراقبة الأصول الميدانية والتفاضلية المستندة إلى استخدام الطرد المركزي ومقارنة. وتظهر البيانات الممثلة أن المنهجية وصف يوفر أداة فعالة متطورة للدراسات المستقبلية عببد.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1-تنظيم دورات تعريفية للمبرمج
- الطرد المركزي عينة الخلية في ز 300 x لمدة 5 دقائق وتجاهل المادة طافية لإزالة أي حطام خلية موجودة مسبقاً.
ملاحظة: عند استخدام خلايا ملتصقة، بذور الخلايا في وقت مبكر وتغسل مع 1 × الحل مخزنة الفوسفات (PBS) قبل التعريفي المبرمج. - تحديد عدد الخلايا وجمع الخلايا.
ملاحظة: اعتماداً على عزلة بعد الفحص، نوصي بعدد خلايا بداية على الأقل 1 × 107 الخلايا. - ريسوسبيند في وسائط كاملة (متوسط كل منها تحتوي على مصل العجل الجنين 10% (المجلد/المجلد)، البنسلين 50 وحدة دولية/مل، 50 ميكروغرام/مل ستربتوميسين الخليط) لتركيز 1 × 106 خلايا/مل نهائي.
- الكوة ~ 2 × 106 خلايا كل من صفيحة جيدا 6 جيدا.
- للحث على المبرمج، إزالة غطاء لوحة وتشعيع الخلايا في 150 مللي جول/سم2 باستخدام إيرادياتور من الأشعة فوق البنفسجية. يجب أن يستغرق ذلك حوالي 30-60 ثانية.
ملاحظة: قبل التشعيع، ضمان أن يتم الاحتفاظ ~0.5 x 106 خلايا لمراقبة الخلية 'أونتريتيد'.
ملاحظة: يمكن أن يتسبب المبرمج أيضا عن طريق أساليب أخرى مثل مكافحة منظمة تضامن النساء الأفريقيات أو مصل مجاعة6. - احتضان عند 37 درجة مئوية، 5% CO2 2-8 ساعات، اعتماداً على خط الخلية.
- استخدام مجهر ضوء أعلى مقاعد البدلاء، تصور الخلايا للتأكد من وجود مورفولوجيس أبوبتوتيك، مثل بلبينغ وتشكيل أبوبتوبوديا، وتشكيل عببد.
ملاحظة: يكفي 40 X التكبير - استخدام ماصة P1000، "الماصة؛" وجمع عينات من أبوبتوتيك.
- أغسل اللوحة مع برنامج تلفزيوني 1 x والجمع بين العينة المتبقية لضمان أقصى غلة.
- ~1/10 جمع التحكمال 'العينة Apoptotic كله' (WAS).
- جمع العينة 'المعالجة'.
- الطرد المركزي عينات أونتريتيد وكان في 3,000 س ز لمدة 6 دقائق.
- ريسوسبيند في 1 مل من س 1 برنامج تلفزيوني وجانبا على الجليد.
- لعزل عببد، تواصل أما الخطوة 2 أو 3 مع العينة apoptotic المتبقية.
2-عببد العزلة عن طريق نظام مراقبة الأصول الميدانية
- الطرد المركزي عينة كاملة في 3,000 س ز لمدة 6 دقائق.
- إزالة معظم المادة طافية دون تعطيل بيليه.
- ريسوسبيند في حل المصبوغة التي تحتوي على 1 مل من x A5 1 ملزمة العازلة، ميليلتر 75 من A5-فيتك، وميليلتر 2 إلى-برو-3 الواحدة 1 × 107 الخلايا.
- احتضان عينة في الظلام في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق.
- إضافة 1-2 مل من x A5 1 ربط المخزن المؤقت والطرد المركزي عينة في 3,000 س ز لمدة 6 دقيقة لإزالة وصمة عار الزائدة.
ملاحظة: لعينات الأنسجة أو الخلايا المختلطة السكان، أداء جسم تلطيخ خطوة باستخدام تركيبة من علامات خاصة بنوع الخلية في المخزن المؤقت لربط x A5 1 واحتضان على الجليد لمدة 20 دقيقة (أو وفقا للبروتوكول الخاص بالشركة المصنعة) قبل استخدام الطرد المركزي في 3,000 ز x 6 دقيقة. - ريسوسبيند بيليه عينة في 3 مل من نظام مراقبة الأصول الميدانية المخزن المؤقت (س 1 برنامج تلفزيوني، المخزن المؤقت ملزم x A5 1، 10% منتدى التعاون الأمني، 2 مم يدتا) الواحدة 1 × 107 الخلايا.
- التصفية من خلال مصفاة خلية ميكرومتر 70 في جولة السفلي، أنبوب بولي بروبلين (التدفق الخلوي) والاحتفاظ بعينات الجليد وفي الظلام.
- قم بتشغيل الجهاز نظام مراقبة الأصول الميدانية والقيام بإعداد قياسية باستخدام فوهة 100 ميكرومتر وتنفيذ التأخير قطره وضمان تدفق مستقر.
- تحميل العينة وسرعة اكتساب ~ 1000 الأحداث/s.
- ضبط منتدى التعاون الأمني والتعاون بين بلدان الجنوب، آسيا والمحيط الهادئ (إلى-برو-3) والفولتية فيتك (A5) ووضع الأحداث ضمن مؤامرات نظام مراقبة الأصول الميدانية لضمان السكان يمكن أن يفصل بوضوح.
- سجل الأحداث 20,000.
- قم بإعداد استراتيجية النابضة كما هو الحال في الجزء 4.
- في تخطيط الفرز، إضافة بوابة عببد النهائي كالسكان الفرز المطلوب.
- البدء في الحصول على العينة وإجراء فرز اختبار عن طريق جمع أبوبدس 5,000-10,000 في أنبوب جديد يحتوي على المخزن المؤقت لنظام مراقبة الأصول الميدانية ~ 250 ميليلتر.
- أداء نظام تدفق العودة وتحميل أبوبدس تم فرزها.
- حيازة وتسجيل اختبار-فرز أبوبدس.
- تحقق من أن نقاء عببد ~ 99% بمقارنة منتدى التعاون الأمني المحور (ص) مقابل A5 (المحور السيني الأحداث).
ملاحظة: تلطيخ A5 قد خفض قليلاً عند إعادة تحليل العينات بسبب تبيض الليزر. - متى تحقق درجة نقاء عالية، تحميل العينة الأصلية ومواصلة الفرز حتى تم الحصول على العدد المطلوب من أبوبدس.
ملاحظة: إذا لزم الأمر، فرز ثنائي يمكن إنجازها لعزل في نفس الوقت أبوسيلس وأبوبدس.
ملاحظة: عند فرز على مدى فترة طويلة من الزمن، نوصي بحضانة أنبوب جمع عند 4 درجة مئوية. - بمجرد اكتمال الفرز، جمع جزء صغير من أبوبدس نوعا ما بعد، وبعد فرز أبوسيلس، أونتريتيد، وكان التحقق من صحة المبرمج وتأكيد نقاء نوعا ما بعد.
ملاحظة: على الرغم من أن اختبار الفرز والنقاء نوعا ما بعد أن لا تختلف اختلافاً كبيرا، وهذا يستند على إعدادات الدفق والاستقرار.
3-عببد العزلة عن طريق الطرد المركزي التفاضلي
- الطرد المركزي عينة apoptotic المتبقية في 300 غرام x لمدة 10 دقائق.
- جمع المادة طافية، تاركاً ~ 500 ميليلتر لتجنب عرقلة بيليه الخلية، وإضافة إلى أنبوب مخروطي 15 مل جديدة.
- إزالة ميليلتر 500 المتبقية وريسوسبيند بيليه الخلية في 2 مل من برنامج تلفزيوني 1 x (وهذا يمثل 'الكسر أثري أبوسيل'.
- الطرد المركزي المادة طافية المجمعة لمدة 20 دقيقة في 3,000 ز.
- التحقق من بيليه وإزالة المادة طافية (المادة طافية قد تحتوي على حويصلات خارج الخلية الصغيرة بما في ذلك ميكروفيسيكليس واكسوسوميس) بعناية.
- ريسوسبيند بيليه في 1 مل من برنامج تلفزيوني 1 x (وهذا يمثل الكسر 'التخصيب عببد')
- جمع 100 ميليلتر من كل قابلة للحياة وكان، أبوسيل عالي التخصيب، وأثرى عببد عينات في جولة جديدة-قاع، أنبوب البوليستيرين (التدفق الخلوي).
- إضافة 100 ميليلتر من وصمة عار الذي يحتوي على 2 ملزمة المخزن المؤقت x A5، 1: 100 A5-فيتك و 1:1,000 إلى-برو-3
- احتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق في الظلام.
- تحليل العينات بالتدفق الخلوي، استخدام استراتيجية النابضة كما هو موضح أعلاه للتحقق من صحة الاستقراء ناجحة للمبرمج ونقاء الكسر أثري عببد.
4-التدفق الخلوي النابضة الاستراتيجية
- الأرض إلى-برو-3 المحور (ص) ضد منتدى التعاون الأمني محور (س) لفصل الخلايا نخرية (إلى-برو-3عالية) من كل أخرى غير بيرميبيليزيد الأحداث (3--إلى--برومنخفضة/متوسطة).
- حدد كافة الأحداث غير بيرميبيليزيد والأرض SSC ضد A5. بوابة اثنين من السكان بما في ذلك السكان 1 (P1)،متوسطة/عاليةمن التعاون بين بلدان الجنوب، الخلايا A5منخفضة/متوسطة والسكان 2 (P2)، جميع الأحداث الأخرى.
- من P2، ارسم 3--إلى--برو ضد A5 ثم حدد الأحداثمتوسطة/عالية A5 استبعاد كل خلية الحطام.
- حدد كافة الأحداث الإيجابية A5 ومؤامرة ضد A5، منتدى التعاون الأمني. فصل أبوبدس (FSCمنخفضة) من أبوسيلس (FSCمتوسطة/عالية).
ملاحظة: عند النابضة أبوبدس لعزل عببد عبر النهج القائم على نظام مراقبة الأصول الميدانية، نوصي خطوة نهائية بتحديد أبوبدس ومقارنة 3--إلى--برو إلى A5 وتحديد كافة الأحداث. وهذا ما يضمن أن بوابة الفرز النهائي يستخدم fluorescence بدلاً من المعلمات منتدى التعاون الأمني/التعاون بين بلدان الجنوب. - لتحليل خلايا قابلة للحياة، وحدد P1 وقم بإجراء إحدى استراتيجيتين النابضة. لتحليل خلايا قابلة للحياة العامة، وارسم منتدى التعاون الأمني ضد A5 وحدد كافة الخلاياالمتوسطة/العالية منتدى التعاون الأمني، وبالتالي إزالة المتبقية خلية الحطام. بدلاً من ذلك، يمكن فصل خلايا قابلة للتطبيق لإجراء تحليل متعمق، من A5– أبوسيلس المبكر برسم 3--إلى--برو ضد منتدى التعاون الأمني. حدد إلى-برو-3منخفضةومنتدى التعاون الأمنيمتوسطة/عالية الخلايا قابلة للتطبيق وإلى-برو-3المتوسطة، منتدى التعاون الأمنيالمتوسطة/العالية A5– أبوسيلس المبكر.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
باستخدام الإجراء المبين هنا، حملت THP-1 الوحيدات المبرمج وتم الكشف عن أبوبدس ومعزولة عن طريق القائم على نظام مراقبة الأصول الميدانية أو اتباع نهج تفاضلي الطرد المركزي (الشكل 1). أولاً، حملت المبرمج باشعاع الأشعة فوق البنفسجية، وتم جمع عينات بعد 2-3 ساعة حضانة عند تعرض الخلايا مورفولوجيس أبوبتوتيك، بما في ذلك بلبينغ وتشكيل نتوء غشاء أبوبتوتيك وجيل أبوبدس6. واستخدمت أسلوب قياس تدفق إلى-برو-3 وتستند إلى A5 لتأكيد التعريفي للمبرمج الوحيدات...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
منذ أوائل الوصف الخاص به في الخمسينات، تقدمت ميدان المبرمج ملحوظا، أصبحت منطقة بارزة لبحث. ورغم الاهتمام الواسع والجهود المكثفة، جوانب معينة من المبرمج، وبخاصة تشكيل أبوبدس، لم جيدا تدرس نظراً لعدم وجود منهجيات ملائمة. تشمل هذه لا سيما الحد في تتبع التقدم المبرمج وتشكيل عببد في وقت واحد باستخدام قياس التدفق التقليدي تحليل A5/PI والشوائب من العزلة عببد. وقد وضعنا مؤخرا نهج لمعالجة أوجه القصور هذه المنهجية.
لدينا التدفق الخلوي النهج الجديد القائم التحليلية يسمح أبوبدس، التي غالباً ما يتم تجاهلها...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
وهذا عمل تدعمها المنح التي تقدمها الوطنية للصحة ومجلس البحوث الطبية (GNT1125033 و GNT1140187) والمجلس الأسترالي للبحوث (DP170103790) إلى I.K.H.P.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| الخلايا على سبيل المثال الخلايا الأحادية البشرية المستنبتة THP-1 (رقم الاستنساخ: TIB-202) | ATCC-RPMI | ||
| 1640 تقنيات الحياة المتوسطة | 22400-089 | ||
| خليط البنسلين والستربتومايسين | Life Technologies | 15140122 | |
| FSC | Gibco | 10099-141 | |
| 1x PBS | - | ||
| Annexin V FITC | BD | ||
| يوديد | Life Technologies | T3605 | TO-PRO-3 في تهيج الجلد والعين والجهاز التنفسي. تجنب الاتصال المباشر. |
| 10x Annexin V ملزمة عازلة | BD Bioscience | 556454 | |
| EDTA | Sigma-Aldrich | 1001710526 | |
| أنبوب الطرد المركزي (15 مل) أنبوب | الدقيق Cellstar | ||
| (1.5 مل) | Sarstedt | 72.690.001 | |
| حاضنة زراعة الأنسجة (37 درجة ؛ C ، 5٪ CO2) | - | ||
| جهاز الطرد المركزي | Beckman Coulter | 392932 | |
| التدفق الخلوي FACS ARIA III ، تم تكوينه بجهازي ليزر للكشف عن FITC و APC | الخلوي BD Bioscience-FACS | ||
| Canto II ، تم تكوينه بجهازي ليزر للكشف عن FITC و APC | برنامج BD Bioscience-FACS | ||
| Diva 6.1.1 | برنامج BD Bioscience | - | |
| برنامج FlowJo 8.8.6 | - | ||
| الأشعة فوق البنفسجية ستراتالينكر 1800 | ستراتاجين | - |
المراجع
- Poon, I. K., Lucas, C. D., Rossi, A. G., Ravichandran, K. S. Apoptotic cell clearance: basic biology and therapeutic potential. Nature Reviews. Immunology. 14, 166-180 (2014).
- Atkin-Smith, G. K., Poon, I. K. Disassembly of the Dying: Mechanisms and Functions. Trends in Cell Biology. 27, 151-162 (2017).
- Tixeira, R., et al. Defining the morphologic features and products of cell disassembly during apoptosis. Apoptosis: An International Journal on Programmed Cell Death. 22, 475-477 (2017).
- Sebbagh, M., et al. Caspase-3-mediated cleavage of ROCK I induces MLC phosphorylation and apoptotic membrane blebbing. Nature Cell Biology. 3, 346-352 (2001).
- Coleman, M. L., et al. Membrane blebbing during apoptosis results from caspase-mediated activation of ROCK I. Nature Cell Biology. 3, 339-345 (2001).
- Atkin-Smith, G. K., et al. A novel mechanism of generating extracellular vesicles during apoptosis via a beads-on-a-string membrane structure. Nature Communications. 6, 7439(2015).
- Poon, I. K., et al. Unexpected link between an antibiotic, pannexin channels and apoptosis. Nature. 507, 329-334 (2014).
- Moss, D. K., Betin, V. M., Malesinski, S. D., Lane, J. D. A novel role for microtubules in apoptotic chromatin dynamics and cellular fragmentation. Journal of Cell Science. 119, 2362-2374 (2006).
- Kerr, J. F., Wyllie, A. H., Currie, A. R. Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implications in tissue kinetics. British journal of cancer. 26, 239-257 (1972).
- Witasp, E., et al. Bridge over troubled water: milk fat globule epidermal growth factor 8 promotes human monocyte-derived macrophage clearance of non-blebbing phosphatidylserine-positive target cells. Cell Death and Differentiation. 14, 1063-1065 (2007).
- Orlando, K. A., Stone, N. L., Pittman, R. N. Rho kinase regulates fragmentation and phagocytosis of apoptotic cells. Experimental Cell Research. 312, 5-15 (2006).
- Holmgren, L., et al. Horizontal transfer of DNA by the uptake of apoptotic bodies. Blood. 93, 3956-3963 (1999).
- Zernecke, A., et al. Delivery of microRNA-126 by apoptotic bodies induces CXCL12-dependent vascular protection. Science Signaling. 2, ra81(2009).
- Schiller, M., et al. Autoantigens are translocated into small apoptotic bodies during early stages of apoptosis. Cell Death and Differentiation. 15, 183-191 (2008).
- Elamin, M. H., et al. Curcumin inhibits the Sonic Hedgehog signaling pathway and triggers apoptosis in medulloblastoma cells. Molecular Carcinogenesis. 49, 302-314 (2010).
- Sagulenko, V., et al. AIM2 and NLRP3 inflammasomes activate both apoptotic and pyroptotic death pathways via ASC. Cell Death and Differentiation. 20, 1149-1160 (2013).
- Crescitelli, R., et al. Distinct RNA profiles in subpopulations of extracellular vesicles: apoptotic bodies, microvesicles and exosomes. Journal of Extracellular Vesicles. 2, (2013).
- Turiak, L., et al. Proteomic characterization of thymocyte-derived microvesicles and apoptotic bodies in BALB/c mice. Journal of Proteomics. 74, 2025-2033 (2011).
- Vermes, I., Haanen, C., Steffens-Nakken, H., Reutelingsperger, C. A novel assay for apoptosis. Flow cytometric detection of phosphatidylserine expression on early apoptotic cells using fluorescein labelled Annexin V. Journal of Immunological Methods. 184, 39-51 (1995).
- Jiang, L., et al. Monitoring the progression of cell death and the disassembly of dying cells by flow cytometry. Nature Protocols. 11, 655-663 (2016).
- Berda-Haddad, Y., et al. Sterile inflammation of endothelial cell-derived apoptotic bodies is mediated by interleukin-1alpha. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108, 20684-20689 (2011).
- Lleo, A., et al. Shotgun proteomics: identification of unique protein profiles of apoptotic bodies from biliary epithelial cells. Hepatology. 60, 1314-1323 (2014).
- Atkin-Smith, G. K., et al. Isolation of cell type-specific apoptotic bodies by fluorescence-activated cell sorting. Scientific Reports. 7, 39846(2017).
- Jiang, L., et al. Determining the contents and cell origins of apoptotic bodies by flow cytometry. Scientific Reports. 7, 14444(2017).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
