يصف هذا البروتوكول غرس نافذه زجاجيه علي الحبل الشوكي للماوس لتسهيل التصور بواسطة المجهر الانترافيتال.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
استئصال الصفيحة الفقرية وغرس نافذه الحبل الشوكي في الماوس
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يصف هذا البروتوكول طريقه لاستئصال صفيحه الحبل الشوكي وغرس النوافذ الزجاجية لتصوير الحبل الشوكي للماوس في الجسم المجري . ويستخدم المبخر الرقمي المتكامل لتحقيق مستوي مستقر من التخدير بمعدل تدفق منخفض من الايزوفلواني. يتم أزاله عمود فقري واحد ، ويتم تراكب الغطاء الزجاجي المتاح تجاريا علي سرير رفيع. ثم تلصق الصفيحة الخلفية البلاستيكية المطبوعة ثلاثية الابعاد بالأشواك الفقرية المجاورة باستخدام لاصق الانسجه والاسمنت السني. يتم استخدام منصة التثبيت للحد من الحركة الملموسة من التنفس وضربات القلب. هذه الطريقة السريعة والخالية من المشبك مناسبه تماما لمجهر متعدد الفوتونات الحاد. يتم تضمين البيانات التمثيلية لتطبيق هذه التقنية علي اثنين من الفوتون المجهري من الاوعيه الدموية في الحبل الشوكي في الفئران المحورة وراثيا التعبير عن eGFP: العرج-5-بروتين تقاطع ضيق.
المقدمة
النماذج الحيوانية المحورة وراثيا التعبير عن البروتينات الفلورية ، عندما يقترن مع المجهر الانترافيتال ، توفر منصة قويه لمعالجه علم الاحياء والفيزيولوجيا المرضية. لتطبيق هذه التقنيات علي الحبل الشوكي ، والبروتوكولات المتخصصة مطلوبه لاعداد الحبل الشوكي للتصوير. وتتمثل أحدي هذه الاستراتيجيات في اجراء عمليه استئصال الصفيحة الفقرية وغرس الحبل الشوكي. وتشمل الميزات الرئيسية للبروتوكول المثالي لاستئصال الصفيحة المجهرية الحفاظ علي بنيه الانسجه الاصليه ووظيفتها ، واستقرار حقل التصوير ، ووقت المعالجة السريع ، واستنساخ النتائج. ويتمثل أحد التحديات الخاصة في تحقيق الاستقرار في مجال التصوير مقابل الحركة المستحثة بالتنفس ونبض القلب. وقد تم الإبلاغ عن استراتيجيات متعددة السابقين وفي الجسم الفيفو لتحقيق هذه الأهداف1,2,3,4,5. معظم في الأساليب المجرية تنطوي علي لقط الجانبين من العمود الفقري2,4 وغالبا ما يعقبه زرع جهاز معدني جامد3,4 للاستقرار اثناء الجراحة تطبيقات التصوير النهائي. لقط العمود الفقري يمكن ان يضر بتدفق الدم والحث علي أعاده عرض البروتين حاجز الدم في الدماغ (BBB).
والغرض من هذا الأسلوب هو جعل الحبل الشوكي سليمه متاحه للتصوير البصري في الماوس الحية مع التقليل من غزو البروتوكول وتحسين النتائج. ونحن وصف استئصال الصفيحة واحده والغطاء الزجاجي الاجراء غرس يقترن البيضاوي الحد الأدنى من البلاستيك 3D-مطبوعه الخلفية التي لا تزال تحقق الاستقرار الميكانيكية القوية. يتم التزام باللوحة الخلفية مباشره بالعمود الفقري الامامي والخلفي مع الاسمنت السني. وقد تم تجهيز اللوحة الخلفية مع أذرع التمديد الجانبية مع ثقوب المسمار التي نعلق بشكل صارم علي مرحله المجهر عن طريق ذراع معدنيه. هذا المراسي بشكل فعال الفقرة الاماميه والخلفية السليمة إلى مرحله المجهر ، وتوفير المقاومة الميكانيكية للقطع المصنوعة الحركة التي لولا ذلك سيتم إدخالها عن طريق التنفس وضربات القلب. وقد تم تحسين هذه الطريقة لاستئصال الصفيحة الفقرية لفقره واحده في المستوي الصدري 12 ، وحذف المشابك المستخدمة في استراتيجيات بديله للاستقرار اثناء التصوير في الجسم المجري . الاجراء سريع ، أخذ ما يقرب من 30 دقيقه لكل ماوس.
ويمكن استخدام هذا البروتوكول لدراسة أليات الامراض من BBB. و BBB هو نظام الاوعيه الدقيقة الديناميكية التي تتالف من الخلايا البطانية, العضلات الملساء الاوعيه الدموية, pericytes, وعمليات القدم تموت التي توفر بيئة انتقائية للغاية للجهاز العصبي المركزي (CNS). البيانات التمثيلية تصور تطبيق هذا البروتوكول في الفئران المحورة وراثيا المهندسة للتعبير عن البروتين الفلوري الأخضر المعزز (eGFP): العرج-5 ، وهو البروتين تقاطع الضيق BBB. يمكن أيضا تخصيص ملفات الطباعة الخلفية المتوفرة للتطبيقات البديلة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
جميع التجارب تتبع جامعه إلينوي ، شيكاغو المؤسسية الرعاية الحيوانية والبروتوكولات لجنه الاستخدام. هذا هو اجراء المحطة الطرفية.
1. اعداد كاشف
- اعداد السائل النخاعي الدماغي الاصطناعي (aCSF) لاحتواء 125 mM كلوريد الصوديوم ، 5 ملم KCl ، 10 ملم الجلوكوز ، 10 مم HEPES ، 2 مم MgCl2· 6h2o ، 2 مم cacl2· 2H2س في ddh 2س. فلتر معقم وتجميد في الاستخدامات الفردية. الدافئة aCSF في حمام المياه إلى 39 درجه مئوية قبل الاستخدام.
- الدافئة انخفاض ذوبان نقطه الانصهار (2 ٪) في aCSF حتى يذوب تماما في حمام المياه تعيين إلى 65 درجه مئوية. خلال استئصال الصفيحة الفقرية ، تبرد المحارة المذابة إلى 39 درجه مئوية في حمام مائي ، بحيث يمكن ان تكون جاهزه علي مقربه من درجه الحرارة الفسيولوجية للخطوة 5.2.
ملاحظه: يمكن تخزين المحلول المركب عند-20 درجه مئوية في الارصفه الاحاديه الاستخدام. - اعداد معقم 50 ملغ/مل كاربروفين في المياه الجرثومية. يخزن عند درجه حرارة 4 درجات مئوية.
- غطاء نظيف-نظارات مع 70 ٪ الايثانول ، وثلاثه يغسل من ddH2O ، وتخزين الجافة في حاويه خاليه من الغبار.
2. لوحه الخلفية 3D الطباعة
- استخدام برنامج 3D CAD يستخدم لإنشاء نموذج للابعاد المبينة في الشكل 1. الداخلية هو القطع الناقص علي أوسع نطاق في السطح السفلي فيما يتعلق الطابعة وقص مع قطع الاسمية للقطع ناقص أصغر تشكيل تجويف علي السطح المعاكس. اثنين من إسقاط الاسلحه مع ثقوب لقبول مسامير تمتد أفقيا ، لتعلق علي اللوحة الخلفية عقد شوكه. من هذا الهيكل ثلاثي الابعاد ، أنشئ ملف شبكه ثلاثي الابعاد (. STL).
ملاحظه: انظر الشكل 1B-D والملفين التكميليين 1 و 2. - تحميل ملف الشبكة ثلاثية الابعاد المثلثة إلى طابعه ثلاثية الابعاد.
- طباعه اللوحات الخلفية باستخدام فوهه 0.4 mm الساخنة نهاية وارتفاع طبقه 0.2 مم. حدد درجه حرارة فوهه 205 درجه مئوية ، درجه حرارة السرير من 45 درجه مئوية ، وسرعه الطباعة من 45 ملم/ثانيه.
- تقييم اللوحات الخلفية المطبوعة ثلاثية الابعاد الناتجة بصريا للسلامة الهيكلية (الشكل 1E) ؛ الفشل الهيكلي الإجمالي (التجويف الغائب ، الجدار المنهار) يشير إلى عيوب الطباعة (الشكل 1F).
3. التحضير الجراحي
- سخني وساده التسخين.
- تحميل ايزوفلوراني في حقنه التسليم اثناء العمل في غطاء الدخان الكيميائية. إرفاق حقنه التسليم إلى وحده ايزوفلونان.
- حدد الماوس 8 \ u201212-العمر الأسبوع. تزن الحيوانية. الحث علي التخدير باستخدام 2 ٪ ايزوفلواني في غرفه الحث. حقن كاربروفين في 5 مغ/كغ جلد.
- وضع الأنف مخروط وتقديم ايزوفلونان في 2 ٪ مع معدل تدفق 150 مل/دقيقه لصيانة الطائرة الجراحية من التخدير (الشكل 2A-E). التفاف وساده التدفئة مع وساده ماصه القابل للتصرف لسهوله تنظيف.
- وضع الحيوانية علي وساده التدفئة في محطه الجراحية وتثبيت مخروط الأنف. تليين ميزان الحرارة مع هلام البترول وادراجه 5 ملم في المستقيم. الشريط التحقيق ميزان الحرارة إلى الذيل للاستقرار. تطبيق مرهم العيون علي عيني الماوس.
- للحفاظ علي الترطيب ، وتطبيق 200 μL من الحل اللاكتيتي الرنين عن طريق الحقن تحت الجلد كل 30 دقيقه حتى إنهاء التجربة.
- رش دورسوم مع الايثانول 70 ٪ ، وأزاله الفراء مع المقص ، وتنظيف الموقع مع povidone-اليود.
4. استئصال الصفيحة الفقرية
- وضع الحيوانية بين قضبان الاذن. هذه المحافظة علي موقف رئيس الماوس فيما يتعلق الأنف مخروط.
- تاكد من ان الحيوانية تخدير عميق كما تقييمها بسبب عدم وجود منعكس قرصه بين الرقمية ونمط التنفس ثابت.
- جعل 1.5 سم rostral-caudal شق في الخط الأوسط علي المنطقة السفلية الصدرية/العلوية القطنية باستخدام شفره #11 (الشكل 2). فصل الجلد عن طريق استيعاب ذلك مع ملقط مسننه حاده و/أو أصابع القفازات. استخدام ملقط لفصل وقشر الظهر اي الانسجه الضامة الشفافة المتبقية تحت الجلد. وينبغي الآن كشف العضلات السطحية; أزاحه هذا مع الرمح الجراحية رغوة.
- استخدام الرماح الجراحية رغوة (أو curette) لمسح بعيدا المتبقية ، أعمق العضلات من الفقرة المستهدفة (الصدرية 12). لإنشاء مقعد للوحه الخلفية ، وأيضا مسح بعيدا العضلات من الجانب الخلفي من الصدر 11 ، والجانب الامامي من الصدر 13. السيطرة علي اي نزيف عن طريق تطبيق ضغط لطيف مع الرمح الجراحية أو استخدام الحد الأدنى من النبض مع بندقية الحذر. الاستمرار في أزاله العضلات المتبقية بعيدا عن الأوتار باستخدام ملقط
- بمجرد أزاله العضلات ، افصل الأوتار بعناية عن طريق القص بالملقط. يجب ان يكون هناك الكثير من المساحة لتصور والتلاعب الحبل عند اكتمال هذه الخطوة. تاكد من ان المادة الجافية للمساحة بين الفقرية ، والعظم الرقائقي شبه الشفاف ، والاوعيه الدموية السطحية المركزية تحت العظم ، والشريان المشع الامامي أصبحت الآن مرئية بوضوح.
- الرطب في المنطقة مع aCSF الدافئة. استخدام microdrill لرقيقه بشكل متكرر العظم الصفائي باستخدام السكتات الدماغية المستقيمة موازيه للمحور الطويل من الحبل الشوكي (الشكل 2، الشكل 3). إذا رغبت في ذلك ، والاستفادة من مرحله مزلق لتدوير منصة الجراحية لراحة مريحه محسنه (علي سبيل المثال ، يمكن للمشغل اليمني تدوير المنصة الجراحية عكس عقارب الدقيقة لخطوه الحفر).
ملاحظه: يتم بناء المرحلة مزلق المستخدمة من لوحه ألمنيوم العلوي الذي الشرائح ± 15 ملم فيما يتعلق لوحه قاعده ثابته. - فهم برفق عمليه سبينوس سطحيه مع ملقط ورفع الفقرة. يجب ان ترفع العظم بعيدا بسهوله. إذا كان هناك مقاومه ، وتكرار ترقق العظام مع الحفر وإذا لزم الأمر استخدام مقص القزحية ، وتوخي الحذر لهدف نصائح مقص التصاعدي لتجنب اتلاف الانسجه.
ملاحظه: من أجل الحفاظ علي الجافية سليمه ، فمن الضروري عدم الشد علي العظم. - استخدام ملقط #4 لمسح بعيدا اي شظايا العظام. استخدام الرمح الجراحية لتطبيق ضغط ثابت لطيف للسيطرة علي اي نزيف. شطف الانسجه مع aCSF الدافئة. لا تسمح للانسجه بالجفاف.
5. الغطاء-زرع الزجاج
- ضعي برفق 3 مم غطاء البوسيليكات-الزجاج علي الحبل المكشوف.
- تاكد من ان يتم تبريد اجنشا إلى 39 درجه مئوية. باستخدام ملعقة صغيره ، وتطبيق الحارة 2 ٪ اجنشا/aCSF إلى حافه الغطاء الزجاج والسماح العمل الشعرية لرسمه تحت السطح.
ملاحظه: عند درجات حرارة اقل من 39 درجه مئوية ، قد تبدا الاغثار بالهلام. في حاله حدوث ذلك ، يسخن باستخدام حمام مائي أو ميكروويف. بعض المشغلين يفضلون أولا تطبيق قطره واحده من اجنشا ووضع غطاء الزجاج علي القمه. - ضعي لاصق الانسجه علي العمليات المفصلية العظمية المكشوفة للفقرة المجاورة السليمة علي المستوي الصدري 11 في العمود الفقري ومستوي الصدر 13 العمود الفقري. تطبيق لاصق الانسجه اضافيه في حلقه حول موقع استئصال الصفيحة الفقرية ، علي وتر المجاورة وعمليه عرضيه.
ملاحظه: مطلوب لاصق الانسجه للالتزام السليم للاسمنت الأسنان في الخطوات اللاحقة. تشكل العمليات المفصلية مقعدا طبيعيا يمكن ان تستريح عليه الصفيحة الخلفية (الشكل 3). التصاق بالعمليات المفصلية سيشكل اقوي نقاط التعلق. - خلط الاسمنت الأسنان مع تسارع في صينية خلط الخزف. استخدام ملعقة صغيره لنقل الاسمنت الأسنان علي طبقه لاصقه الانسجه. استخدام الاسمنت الأسنان للالتزام حامي إلى المجال الجراحي ، تركزت علي النافذة. السماح 10 دقيقه للاسمنت الأسنان لعلاج.
ملاحظه: ان التصاق اللوحة الخلفية بالعمليات المفصلية الاماميه والخلفية يوفر الاستقرار الهيكلي الأساسي للزرع. - استخدام الاسمنت الأسنان اضافيه لملء القاعدة الداخلية من اللوحة الخلفية ، والسفلي من اللوحة الخلفية: واجهه الانسجه.
ملاحظه: التطبيق الإضافي للاسمنت الأسنان يحسن التزام ويقلل من خطر تسرب السائل الغمر الهدف المجهر (المالحة) من أسفل اللوحة الخلفية. - تقدم حامل اللوحة الخلفية المتشعب إلى الموضع المناسب عبر النافذة. تامين اللوحة الخلفية في حامل اللوحة الخلفية مع مسامير.
ملاحظه: استخدم هذا البروتوكول حامل اللوحة الخلفية المخصصة (الشكل 2G\U2012H). - ضع المحلول الملحي علي اللوحة الخلفية لاختبار التسرب. إذا كان اي تسرب السوائل ، وتجفيف المنطقة وتطبيق المزيد من الاسمنت الأسنان.
6. اعداد التصوير
- نقل الحيوانية علي منصة الجراحية إلى الجدول البصري.
ملاحظه: يمكن نقل منصتنا الجراحية ، حامل اللوحة الخلفية ، وحامل مخروط الأنف ايزوفلونان بين محطتي التصوير الجراحية والفوتون كوحدة واحده ، مع تطبيق التخدير الايزوفلواني المستمر (الشكل 2D،H). ويمكن تجميع وحدات مماثله من الشوك والحزم والدعامات الداعمة التي يمكن الحصول عليها من المصادر التجارية (مثل ثورلاب). لانترافيتال المجهري ، يجب ان يكون هناك ما لا يقل عن 11 بوصه من أزاله بين هدف المجهر والجدول البصري لاستيعاب ارتفاع منصة الجراحية. - Affix المنصة الجراحية إلى الجدول البصري باستخدام الفولاذ المقاوم للصدا تصاعد آخر الملل لقط شوكه.
- تطبيق المالحة الطازجة في بئر الصفيحة الخلفية. خفض عدسه الغمر بالماء في البئر.
- استخدم الضوء المرسل أو الضوئي لتحديد مجال الاهتمام والتركيز. التبديل إلى وضع المسح الضوئي بالليزر وأداء في الصور المجرية وفقا لطول الموجات الليزر الاثاره المناسبة اثنين من الفوتون ، والمرشحات الثنائية والممرات للفلوبورس الموجودة في الانسجه6.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
توفر النوافذ الزجاجية المزروعة والانترافيتال المجهري ثنائي الفوتون أداه مفيده لتقييم التغيرات الديناميكية في بروتينات الجهاز العصبي العام. تتاثر السلامة الوظيفية لل BBB بالتعبير ، والتعريب تحت الخلوي ، ومعدلات دوران البروتينات المفرقة الضيقة7. وقد أظهرت الدراسات السابقة ان البروتينات تقاطع ضيق الخضوع لأعاده عرض سريعة وديناميكية في حاله مستقره8. وقد استخدمت في الوقت الراهن لاستئصال الصفيحة الفقرية والزجاج اعداد النافذة في eGFP المحورة وراثيا:...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الطريقة الموصوفة هنا تسمح للتصوير مستقره من الحبل الشوكي في الفئران من خلال نافذه زجاجيه. وقد تم تطبيق هذه الطريقة لتقييم BBB أعاده عرض في eGFP المحورة وراثيا: Claudin5 +/-الفئران التي تعبر عن الفلورية BBB البروتين مفرق ضيق ، ولكن يمكن تطبيقها بشكل جيد علي قدم المساواة للدراسات من اي البروتينات الفلورية أو الخلايا في الحبل الشوكي.
وقد تم تطوير طرق متعددة لاستئصال الصفيحة الفقرية وتثبيت الحبل الشوكي. جميع البروتوكولات عنوان تثبيت الحبل الشوكي اثناء التصوير وتنفيذ النافذة للوصول البصري إلى بنيه ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.
شكر وتقدير
ويدعم S.E. لوتس من قبل المركز الوطني للنهوض بالعلوم الانتقالية, المعاهد الوطنية للصحة, تحت منحه KL2TR002002 وجامعه إلينوي شيكاغو كليه الطب بدء الأموال. ويدعم سيمون الفورد من قبل RO1 MH084874. المحتوي هو فقط مسؤوليه المؤلفين ولا يمثل بالضرورة الآراء الرسمية لمعاهد القومية للصحة. ويشكر المؤلفان دراتان اغاليو في قسم علم الأعصاب في المركز الطبي بجامعه كولومبيا لأجهزه الفئران التي تعمل بالرنين العصبي الليفي: كلوبين-5 ، والمناقشات العلمية ، والرؤى في تطوير البروتوكول الجراحي وتطبيقات التصوير. ويشكر المؤلفون سونيل ب. غاندي في قسم بيولوجيا الأعصاب والسلوك في جامعه كاليفورنيا ، ايرفين لتصميم النموذج الاولي للجهاز المجسم ووحده تحكم درجه الحرارة الحيوانية ، ومناقشه البروتوكول الجراحي ، التدريب في المجهر الثنائي الفوتون. ويشكر المؤلفون أيضا ستيف بيكنز (w. Nuhsbaum, Inc.) للحصول علي المساعدة في تخصيص المجسم الفراغي الجراحي ، و Ron Lipinski (صناعه الحيتان) للأجزاء المجسمة بالقطع.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| طابعة ثلاثية الأبعاد | Raise3D | Pro2 | لطباعة الألواح الخلفية خيوط |
| الطباعة ثلاثية الأبعاد PLA | الداخلية | PLA + -175-B | مادة الطباعة ثلاثية الأبعاد البلاستيكية السوداء ثلاثية |
| برنامج | Dassault Systemes | Solidworks | المستخدمة لتصميم الأشكال ثلاثية الأبعاد |
| برنامج الطابعة ثلاثية الأبعاد | برنامج Raise3D | Ideamaker | المستخدم للتفاعل مع الطابعة ثلاثية الأبعاد |
| 3D مطبوعة البيضاوي الخلفية | مخصص | مجال التصوير | |
| مجهر تشريح جراحي | Leica | M205 C | مجهزة ب Leica FusionOptics ، هدف Planapo 0.63x M-series ، ومرحلة الانزلاق |
| كاميرا مجهر | Leica | MC170 | HD كاميرا ملونة لتصور المجال |
| الجراحي مرحلة الانزلاق | Leica | 10446301 | مرحلة الانزلاق مصنوعة من لوحين معدنيين. لوحة القاعدة ثابتة. تنزلق اللوحة العلوية على واجهة مدهونة للسماح بالحركة الدورانية والخطية. |
| المحطة الجراحية وشوكة التثبيت | Whale Manufactoring | مخصص | لاستئصال الصفيحة |
| الفقرية SomnoSuite وحدة توصيل الأيزوفلوران منخفضة التدفق | Kent Scientific | SS-01 | إدارة التخدير الجراحي مع مبخر رقمي متكامل |
| من الفولاذ المقاوم للصدأ مقاس 1.5 بوصة بعد التركيب | ThorLabs | P50 / M | لتركيب المحطة الجراحية على طاولة بصرية للتصوير |
| ثنائي الفوتونشوكة لقط مضادة للتركيب مقاس 1.5 بوصة بعد | ThorLabs | PF175 | لتثبيت تركيب المحطة الجراحية على طاولة بصرية للتصوير ثنائي الفوتون |
| جهاز هارفارد المثالي للعظام | 72-6065 | ترقق العظام لاستئصال الصفيحة | |
| الفقرية حمام مائي | فيشر ساينتفيك | 15-462-10 | الكي الملحي |
| الدافئ FST | 18010-00 | الكي البسيط | |
| وسادة التدفئة | القياسية | BF11222 | 1.9 بوصة × 4.5 بوصة سخان سيليكون مع 20 بوصة خيوط تفلون ، 10 واط ، 5 فولت |
| K نوع مسبار المستقيم المقترن بالحرارة | Physitemp | RET3 | قياس درجة حرارة جسم الفأر |
| الفازلين | Sigma | 8009-03-8 | مسبار المستقيم التشحيم |
| وحدة تحكم حرارية منظمة التغذية المرتدة | مخصصة | NA | تشمل البدائل المتاحة تجاريا سلسلة Physitemp TCAT |
| PVA الجراحية للعين | القندس الزائر دولي | 40400-8 | امتصاص الدم |
| ماكينة تشذيب كهربائية | Wahl | 41590-0438 | تشذيب فرو |
| الماوس ، # 11 | FST | 14002-14 | الأدوات الجراحية |
| ، # 5 | FST | 11254-20 | أداة جراحية |
| ، # 4 | FST | 14002-14 | أداة جراحية |
| ملقط مسنن تيتاتنيوم | WPI | 555047FT | أداة جراحية |
| مقص قزحية التيتانيوم | WPI | 555562S | أداة جراحية |
| لاصق الأنسجة Vetbond | 3M | 084-1469SB | تحضير سطح الأنسجة لأكريليك الأسنان |
| صينية خلط السيراميك | Jack Richeson | 420716 | خلط عامل أكريليك الأسنان مع مسرع |
| أكريليك الأسنان Orthojet | Lang Dental | 1520BLK ، 1503BLK | ربط دائم بلوحة خلفية للأنسجة |
| زجاج غطاء دائري صغير ، # 1 سمك ، 3 مم | جهاز هارفارد | 64-0720 | نافذة بصرية |
| NaCl | Fisher Scientific | 7647-14-5 | ل aCSF |
| KCl | Fisher Scientific | 7447-40-7 | ل aCSF |
| Glucose | Fisher Scientific | 50-99-7 | ل aCSF |
| HEPES | Sigma | 7365-45-9 | ل aCSF |
| MgCl2 & ميددوت. 6H2O | فيشر العلمي | 7791-18-6 | ل aCSF |
| CaCl2< / sub>· ؛ 2H2< / sub>O | Fisher Scientific | 10035-04-8 | ل aCSF |
| كاربروفين | ريماديل | QM01AE91 | تسكين |
| المياه المضادة للجراثيم | هنري شاين | 2587428 | مخفف للكاربروفين |
| إيزوفلوران | هنري شاين | 11695-6776-2 | مرحب التخدير |
| باكستر | 0338-0117-04 | الترطيب للماوس | |
| Agarose High EEO | Sigma | A9793 | نقطة هلام 34-37 درجة مئوية |
| مرهم تشحيم بصري | Akwa Tears | 68788-0697 | منع جفاف القرنية |
| MOM مجهر |
المراجع
- Weinger, J. G., et al. Two-photon imaging of cellular dynamics in the mouse spinal cord. Journal of Visualized Experiments. (96), (2015).
- Davalos, D., Akassoglou, K. In vivo imaging of the mouse spinal cord using two-photon microscopy. Journal of Visualized Experiments. (59), (2012).
- Farrar, M. J., Schaffer, C. B. A procedure for implanting a spinal chamber for longitudinal in vivo imaging of the mouse spinal cord. Journal of Visualized Experiments. (94), (2014).
- Fenrich, K. K., Weber, P., Rougon, G., Debarbieux, F. Implanting glass spinal cord windows in adult mice with experimental autoimmune encephalomyelitis. Journal of Visualized Experiments. (82), e50826(2013).
- Figley, S. A., et al. A spinal cord window chamber model for in vivo longitudinal multimodal optical and acoustic imaging in a murine model. PLOS ONE. 8 (3), e58081(2013).
- Helmchen, F., Denk, W. Deep tissue two-photon microscopy. Nature Methods. 2 (12), 932-940 (2005).
- Liebner, S., et al. Functional morphology of the blood-brain barrier in health and disease. Acta Neuropathologica. 135 (3), 311-336 (2018).
- Shen, L., Weber, C. R., Turner, J. R. The tight junction protein complex undergoes rapid and continuous molecular remodeling at steady state. Journal of Cell Biology. 181 (4), 683-695 (2008).
- Knowland, D., et al. Stepwise recruitment of transcellular and paracellular pathways underlies blood-brain barrier breakdown in stroke. Neuron. 82, 1-15 (2014).
- Lutz, S. E., et al. Caveolin1 Is Required for Th1 Cell Infiltration, but Not Tight Junction Remodeling, at the Blood-Brain Barrier in Autoimmune Neuroinflammation. Cell Reports. 21 (8), 2104-2117 (2017).
- Harrison, M., et al. Vertebral landmarks for the identification of spinal cord segments in the mouse. Neuroimage. 68, 22-29 (2013).
- Cupido, A., Catalin, B., Steffens, H., Kirchhoff, F. Laser Scanning Microscopy and Quantitative Image Analysis of Neuronal Tissue. Bakota, L., Brandt, R. , Springer. New York. 37-50 (2014).
- Sekiguchi, K. J., et al. Imaging large-scale cellular activity in spinal cord of freely behaving mice. Nature Communications. 7, 11450(2016).
- Nadrigny, F., Le Meur, K., Schomburg, E. D., Safavi-Abbasi, S., Dibaj, P. Two-photon laser-scanning microscopy for single and repetitive imaging of dorsal and lateral spinal white matter in vivo. Physiological Research. 66 (3), 531-537 (2017).
- Adelsperger, A. R., Bigiarelli-Nogas, K. J., Toore, I., Goergen, C. J. Use of a Low-flow Digital Anesthesia System for Mice and Rats. Journal of Visualized Experiments. (115), (2016).
- Damen, F. W., Adelsperger, A. R., Wilson, K. E., Goergen, C. J. Comparison of Traditional and Integrated Digital Anesthetic Vaporizers. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 54 (6), 756-762 (2015).
- Miyamoto, K., et al. Selective COX-2 inhibitor celecoxib prevents experimental autoimmune encephalomyelitis through COX-2-independent pathway. Brain. 129 (Pt 8), 1984-1992 (2006).
- Muthian, G., et al. COX-2 inhibitors modulate IL-12 signaling through JAK-STAT pathway leading to Th1 response in experimental allergic encephalomyelitis. Journal of Clinical Immunology. 26 (1), 73-85 (2006).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
