وتمثل العمليات التي تحكم غزو سرطان المثانة فرصاً للعلامات البيولوجية والتنمية العلاجية. هنا نقدم نموذجا غزو سرطان مثانة الذي يتضمن الثقافة ثلاثي الأبعاد من الماغنيسيوم الورم والوقت الفاصل بين التصوير والفحص المجهري [كنفوكل]. هذا الأسلوب مفيد لتحديد ملامح عملية الغازية وفحص العوامل العلاجية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نظام الثقافة خلية ثلاثية الأبعاد لدراسة الغزو وتقييم المداواة في سرطان المثانة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
سرطان المثانة مشكلة صحية كبيرة. ويقدر أن أكثر من 000 16 شخص سيموتون هذا العام في الولايات المتحدة من سرطان المثانة. بينما 75% سرطان المثانة غير الغازية ومن غير المرجح أن السرطاني، تقدم حوالي 25% إلى نمط نمو الغازية. وسيضع يصل إلى النصف من المرضى الذين يعانون من حالات السرطان الغازية الانتكاس المنتشر الفتاكة. ومن ثم، فهم إليه تطور سرطان المثانة الغازية أمر حاسم للتنبؤ بنتائج المرضى ومنع الانبثاث قاتلة. في هذه المقالة، نحن نقدم نموذجا غزو سرطان ثلاثية الأبعاد التي تتيح إدراج الخلايا السرطانية ومكونات stromal لتقليد في فيفو الظروف التي تحدث في المثانة وورم المكروية. هذا النموذج يوفر الفرصة لمراقبة عملية الغازية في الوقت الحقيقي باستخدام الوقت الفاصل بين التصوير، واستجواب المسارات الجزيئية المعنية باستخدام مركبات التصوير والشاشة إيممونوفلوريسسينت [كنفوكل] مع إمكانية غزو كتلة. وبينما يركز هذا البروتوكول على سرطان المثانة، فمن المرجح أنه يمكن استخدام طرق مماثلة لبحث الغزو وحركية في أنواع أخرى من الأورام، وكذلك.
المقدمة
الغزو هو خطوة حاسمة في تطور السرطان، مما هو مطلوب لورم خبيث، ويرتبط مع بقاء أقل وسوء التشخيص في المرضى. في سرطان المثانة البشرية، خبيثة الأكثر شيوعاً للمسالك البولية الذي يتسبب في وفاة حوالي 165,000 سنوياً في جميع أنحاء العالم، ترتبط مباشرة مرحلة السرطان والعلاج والتشخيص على وجود أو عدم وجود الغزو1. حوالي 75% حالات سرطان المثانة غير العضلات الغازية، وهي تدار ببتر المحلية. وفي المقابل، سرطان المثانة العضلات الغازية (حوالي 25 في المائة من جميع الحالات) هي الأورام العدوانية مع ارتفاع معدلات المنتشر ويتم التعامل مع العدوانية موقفية العلاج2،3. ولذلك، فهم المسارات الجزيئية التي تؤدي إلى غزو ض....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1-تزايد سرطان الماغنيسيوم
-
المتزايدة من خطوط الخلايا
- خلية شروط الثقافة الثقافة خلايا سرطان المثانة البشرية تحت ملتصقة التقليدية والاحتفاظ بحاضنة 37 درجة مئوية تزويد شركة 5%2. الحفاظ على الخلايا في < كونفلوينسي 90%.
ملاحظة: هو ثقافة وسائل الإعلام المستخدمة دولبيكو لتعديل الوسائط الأساسية الدنيا (دميم) التي تحتوي على 4.5 غرام/لتر د-الجلوكوز، ل الجلوتامين، بيروفات صوديوم 110 مغ/لتر، وتزويد 10% مصل بقرى الجنين (FBS) في جميع أنحاء هذا البروتوكول. - يوم واحد قبل البدء التجربة، تريبسينيزي (باستخدام 0.25% يدتا التربسين) الخلايا، وقياس تركيز الخلية وتوزيع 1 × 106 خلايا في 3 مل الثقافة الإعلامية في كل بئر من....
- خلية شروط الثقافة الثقافة خلايا سرطان المثانة البشرية تحت ملتصقة التقليدية والاحتفاظ بحاضنة 37 درجة مئوية تزويد شركة 5%2. الحفاظ على الخلايا في < كونفلوينسي 90%.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يتطلب نجاح إنشاء كروي ورم سرطان المثانة الغازية تشكيل الماغنيسيوم ورم حجم مناسب من خطوط الخلايا أو الأورام الأولية. الشكل 2 يظهر حجم مناسب الماغنيسيوم المتقدمة من أربعة خطوط الخلايا لسرطان المثانة البشرية (أم-UC9، أم UC13، أم-UC14، 253J، وأم-UC18). الشكل 2 ويبين ب كروي ورم من ورم مثانة المولدة بواسطة BBN ماوس المضمنة في مصفوفة الكولاجين. تم تضمين هذه الماغنيسيوم كما هو موضح أعلاه، وتم القبض على .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هنا يصف لنا نموذج كروي ورم ثلاثية الأبعاد التي تتيح المراقبة في الوقت الحقيقي من غزو سرطان المثانة هو أمر حاسم لتقدم وتطور سرطان خبيث. وهذا النظام قابلة لإدماج مختلف مكونات stromal والخلوية السماح لمحققين بالخص أفضل المكروية الأنسجة التي تتم فيها غزو سرطان المثانة. الماغنيسيوم سرطان المثانة يمكن أن تتولد من مصادر مختلفة مثل خطوط الخلايا (بما في ذلك خطوط الخلايا المحورة جينياً مفيدة للنظر في إشارات المسارات التي تؤثر على عمليات الغزو)، والماوس الأساسي الأورام (الموصوفة هنا). يمكن أن يحتمل أن يمكن تكييفها أيضا لتحليل الورم.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب يعلن لا تضارب المصالح المالية.
شكر وتقدير
المؤلف يود أن يشكر مختبر الدكتور هوارد كراوفورد (جامعة ميشيغان) للدعم التقني وتوفير المواد والمعدات اللازمة لهذه الدراسة، والن كيلر للدعم التقني.
تم تمويل هذا العمل من المنح المقدمة من جامعة مركز السرطان ميشيغان روجل الأساسية منحة CA046592 26S3، K08 المعاهد الوطنية للصحة CA201335-01A1 (حزب العمال التقدمي)، يا BCAN (حزب العمال التقدمي)، CA17483601A1 R01 المعاهد الوطنية للصحة (DMS).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| خطوط خلايا سرطان المثانة البشرية UM-UC9 ، UM-UC13 ، UM-UC14 ، UM-UC18 ، 253J | |||
| DMEM زراعة الخلايا المتوسطة | Thermo Fisher Scientific | 11995065 | |
| مصل الأبقار الجنينية ؛ | ثيرمو فيشر 26140079 | ||
| المضادات الحيوية المضادة للفطريات (100x) | ثيرمو فيشر العلمي | 15240062 | |
| التربسين-EDTA (0.25٪) ، الفينول الأحمر | ثيرمو فيشر العلمي | 25200056 | |
| ألبومين مصل الأبقار (BSA) | سيجما ألدريتش | A3803 | |
| ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) ، درجة الحموضة 7.4 ؛ | Thermo Fisher Scientific | 10010023 | |
| Costar مرفق منخفض للغاية 6 آبار العنقود | Corning | 3471 | |
| المجهر المقلوب التقليدي | Carl Zeiss | 491206-0001-000 | الاستخدام العام لزراعة الخلايا وفحص الكرويات |
| الكولاجين نوع 1 من ذيل الفئران ، تركيز عال ؛ | Corning | 354249 | |
| Nunc Lab-Tek II Chambered Coverglass | Thermo Fisher Scientific | 155382 | |
| مجهر متحد البؤر | Carl Zeiss | LSM800 | منظار متحد البؤر مع غرفة المناخ ، والتصوير متعدد المواقع ، ووظيفة المسح الضوئي Z-stack ؛ |
| معالجة الصور Cryostat micromtome | Leica Biosystems | CM3050 S | |
| Zen 2 | Carl Zeiss | ||
| محلول بارافورمالدهايد | علوم المجهر الإلكتروني | 15710 | |
| ImmEdge Hydrobl Barrier PAP | Pen Vector Laboratories | مركب H4000 | |
| O.C.T | Thermo Fisher Scientific | 23730571 | |
| Hoechst 33342 solution | Thermo Fisher Scientific | 62249 | |
| الأجسام المضادة ل ATDC (Trim29) | سيجما ألدريتش | HPA020053 | |
| المضادة للسيتوكيراتين 14 الجسم المضاد | Abcam | ab7800 | |
| الأجسام المضادة للفيمنتين | Abcam | ab24525 | |
| ProLong Diamond ؛ | تصاعد الوسط |
المراجع
- American Cancer Society. The Society. , Atlanta, GA. (2018).
- Knowles, M. A., Hurst, C. D. Molecular biology of bladder cancer: new insights into pathogenesis and clinical diversity. Nature Reviews Cancer. 15 (1), 25-41 (2015).
- DeGeorge, K. C., Holt, H. R., Hodges, S. C.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
