وتمثل العمليات التي تحكم غزو سرطان المثانة فرصاً للعلامات البيولوجية والتنمية العلاجية. هنا نقدم نموذجا غزو سرطان مثانة الذي يتضمن الثقافة ثلاثي الأبعاد من الماغنيسيوم الورم والوقت الفاصل بين التصوير والفحص المجهري [كنفوكل]. هذا الأسلوب مفيد لتحديد ملامح عملية الغازية وفحص العوامل العلاجية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نظام الثقافة خلية ثلاثية الأبعاد لدراسة الغزو وتقييم المداواة في سرطان المثانة
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
سرطان المثانة مشكلة صحية كبيرة. ويقدر أن أكثر من 000 16 شخص سيموتون هذا العام في الولايات المتحدة من سرطان المثانة. بينما 75% سرطان المثانة غير الغازية ومن غير المرجح أن السرطاني، تقدم حوالي 25% إلى نمط نمو الغازية. وسيضع يصل إلى النصف من المرضى الذين يعانون من حالات السرطان الغازية الانتكاس المنتشر الفتاكة. ومن ثم، فهم إليه تطور سرطان المثانة الغازية أمر حاسم للتنبؤ بنتائج المرضى ومنع الانبثاث قاتلة. في هذه المقالة، نحن نقدم نموذجا غزو سرطان ثلاثية الأبعاد التي تتيح إدراج الخلايا السرطانية ومكونات stromal لتقليد في فيفو الظروف التي تحدث في المثانة وورم المكروية. هذا النموذج يوفر الفرصة لمراقبة عملية الغازية في الوقت الحقيقي باستخدام الوقت الفاصل بين التصوير، واستجواب المسارات الجزيئية المعنية باستخدام مركبات التصوير والشاشة إيممونوفلوريسسينت [كنفوكل] مع إمكانية غزو كتلة. وبينما يركز هذا البروتوكول على سرطان المثانة، فمن المرجح أنه يمكن استخدام طرق مماثلة لبحث الغزو وحركية في أنواع أخرى من الأورام، وكذلك.
المقدمة
الغزو هو خطوة حاسمة في تطور السرطان، مما هو مطلوب لورم خبيث، ويرتبط مع بقاء أقل وسوء التشخيص في المرضى. في سرطان المثانة البشرية، خبيثة الأكثر شيوعاً للمسالك البولية الذي يتسبب في وفاة حوالي 165,000 سنوياً في جميع أنحاء العالم، ترتبط مباشرة مرحلة السرطان والعلاج والتشخيص على وجود أو عدم وجود الغزو1. حوالي 75% حالات سرطان المثانة غير العضلات الغازية، وهي تدار ببتر المحلية. وفي المقابل، سرطان المثانة العضلات الغازية (حوالي 25 في المائة من جميع الحالات) هي الأورام العدوانية مع ارتفاع معدلات المنتشر ويتم التعامل مع العدوانية موقفية العلاج2،3. ولذلك، فهم المسارات الجزيئية التي تؤدي إلى غزو ضروري لتوصيف مخاطر تطور الغازية أفضل وتطوير التدخلات العلاجية التي يمكن أن تحول دون تطور الغازية.
تطور الورم الغازية يحدث في بيئة (ثلاثي الأبعاد) ثلاثية الأبعاد معقدة وتتضمن ورم الخلية التفاعل مع سائر الخلايا السرطانية وسدى والغشاء وأنواع أخرى من الخلايا، بما في ذلك الخلايا المناعية، والخلايا الليفية، وخلايا العضلات والأوعية الدموية خلايا بطانية. دعم نفاذية (مثلاً، ترانسويل) نظم التحليل وتستخدم عادة كوانتيتاتي سرطان الخلية غزو4، ولكن هذه النظم محدودة نظراً لأنها لا تتيح الرصد المجهري لعملية الغزو في الوقت الحقيقي استرجاع العينات لتلطيخ المزيد والتحليل الجزيئي التحدي. تطوير نظام كروي ورم المثانة ثلاثي الأبعاد لدراسة الغزو المرغوب فيه لأنه يسمح بإدماج مكونات ميكرونفيرونمينتال المعرفة مع توفير الراحة للنظم في المختبر .
في هذا البروتوكول، يصف لنا نظام استجواب العمليات الغازية من خلايا سرطان المثانة البشرية باستخدام مقايسة غزو كروي ثلاثي الأبعاد إدراج مصفوفات جل المستندة إلى الكولاجين والفحص المجهري [كنفوكل] للسماح لمحققين لرصد حركية الخلية و الغزو في الوقت الحقيقي (الشكل 1أ). هذا النظام هو تنوعاً ويمكن تعديلها لاستجواب مختلف ورم stromal/إعدادات. أنها تتضمن معظم خطوط خلايا سرطان المثانة أو أورام المثانة الأولية والخلايا اللحمية إضافية مثل السرطان المرتبطة الليفية والخلايا المناعية5،،من67. هذا البروتوكول توضح مصفوفة تتكون من الكولاجين 1 نوع، ولكن يمكن تعديلها لإدراج جزيئات أخرى مثل فيبرونيكتين أو لامينين أو بروتينات الكولاجين الأخرى. يمكن أن تتبع العمليات الغازية ح 72 أو أكثر اعتماداً على قدرة النظام المستخدمة والمجهر. التثبيت وتلطيخ الفلورة الورم جزءا لا يتجزأ من مصفوفة ثلاثية الأبعاد قبل وأثناء وبعد غزو يسمح استجواب upregulated البروتينات في الخلايا الغازية، وبالتالي توفير المعلومات الحاسمة التي عادة ما تكون غائبة أو صعوبة في جمع استخدام نماذج ثلاثية الأبعاد من ثقافة أخرى. ويمكن استخدام هذا النظام أيضا مركبات الشاشة التي منع الغزو، وتحدد مسارات إشارات المتضررين من هذه المركبات.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1-تزايد سرطان الماغنيسيوم
-
المتزايدة من خطوط الخلايا
- خلية شروط الثقافة الثقافة خلايا سرطان المثانة البشرية تحت ملتصقة التقليدية والاحتفاظ بحاضنة 37 درجة مئوية تزويد شركة 5%2. الحفاظ على الخلايا في < كونفلوينسي 90%.
ملاحظة: هو ثقافة وسائل الإعلام المستخدمة دولبيكو لتعديل الوسائط الأساسية الدنيا (دميم) التي تحتوي على 4.5 غرام/لتر د-الجلوكوز، ل الجلوتامين، بيروفات صوديوم 110 مغ/لتر، وتزويد 10% مصل بقرى الجنين (FBS) في جميع أنحاء هذا البروتوكول. - يوم واحد قبل البدء التجربة، تريبسينيزي (باستخدام 0.25% يدتا التربسين) الخلايا، وقياس تركيز الخلية وتوزيع 1 × 106 خلايا في 3 مل الثقافة الإعلامية في كل بئر من صفيحة المرفق 6-جيدا جداً منخفضة.
- احتضان خلايا في شروط مرفق منخفضة عند 37 درجة مئوية إيه وان سيكس ح. هذا وينبغي إتاحة وقت كاف للخلايا للتجميع في الماغنيسيوم لمعظم خطوط الخلايا في سرطان المثانة.
ملاحظة: يمكن ملاحظة تشكيل الماغنيسيوم بالمجهر المقلوب الحقل مشرق. أن الحجم الأمثل وعدد من الماغنيسيوم قد تعتمد على التجارب الفردية، ولكن نجد أن الماغنيسيوم مع أقطار من 50 ميكرون إلى 150 ميكرون عموما مناسبة للوقت الفاصل بين التصوير باستخدام عدسة هدف X 20. - لإدراج أنواع خلية إضافية، مثل الخلايا الليفية أو الخلايا المناعية إلى الماغنيسيوم، مزيج الخلايا المطلوب مع الخلايا السرطانية في نسبة المطلوب (1:1، 01:10، إلخ.) في ملحق منخفضة للغاية لوحة واحتضان في 37 درجة مئوية ح إيه وان سيكس للسماح بتشكيل الماغنيسيوم نوع الخلية المختلطة.
- خلية شروط الثقافة الثقافة خلايا سرطان المثانة البشرية تحت ملتصقة التقليدية والاحتفاظ بحاضنة 37 درجة مئوية تزويد شركة 5%2. الحفاظ على الخلايا في < كونفلوينسي 90%.
-
المتزايدة من الأورام الأولية
ملاحظة: مصادر الورم يمكن أيضا استخلاص الماغنيسيوم من ورم المثانة الأولية مثل الأورام المتقدمة من ورم المثانة الناجمة عن مادة مسرطنة نماذج8. على سبيل المثال، أورام المثانة المتولدة من الفئران التي تتغذى على ن-بوتيل-ن-(4-هيدروكسيبوتيل) النيتروسامين (BBN)، يمكن حصادها ومفروم إلى قطع صغيرة (حوالي 0.5 مم3) استخدام الأدوات الجراحية المعقمة. هضم العينات الأولية من المثانة البشرية يمكن أيضا دراسة الأمراض السرطانية في هذا النظام.- جمع وتغسل 0.5 مم3 قطع الورم في 5 مل المثلج مخزنة الفوسفات المالحة (PBS). الطرد المركزي في 200 x ز لمدة 5 دقائق في 4 درجات مئوية. كرر هذه الخطوة الغسيل مرة واحدة.
- جمع قطع الورم بالطرد المركزي في x 200 غ لمدة 10 دقائق في 4 درجات مئوية. إزالة المادة طافية وإضافة 5 مل دميم التي تحتوي على 10% FBS. نقل ورم كروي/وسائط مزيج لصفيحة مرفق 6-جيدا جداً منخفضة. احتضان في 37 درجة مئوية إيه وان سيكس ح قبل تضمينها في مصفوفة الكولاجين (راجع الخطوة 2، 3).
2-إعداد دائرة الثقافة ثلاثي الأبعاد
-
يضعف الكولاجين النوع-1 (مشتقة من ذيل فأر) في دميم التي تحتوي على 10% FBS لجعل خليط 2 مغ/مل وفقا لإرشادات الشركة المصنعة.
- وباختصار، مزيج الكولاجين مع كمية مناسبة من حل هيدروكسيد الصوديوم ن 1 ودميم بيبيتينج لطيف استناداً إلى إرشادات الشركة المصنعة لتحقيق الأس الهيدروجيني الفسيولوجي.
- بعد خلط الكولاجين ودميم، بسرعة معطف آبار الشريحة الدائرة (بالنسبة لمعظم التطبيقات، شرائح الدائرة مع تغطية عدد 1.5-كوب الأمثل) مع الكولاجين-دميم المخلوط قبل التجميد (200 ميليلتر في البئر). تسمح الشريحة المغلفة الدائرة أن تكون ثابتة عند درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة.
ملاحظة: يمكن تعديل تكوين مصفوفة المستندة إلى الكولاجين عن طريق إضافة مكونات المصفوفة خارج الخلية الأخرى، مثل فيبرونيكتين أو لامينين، وفقا لأغراض التجربة.
- بلطف بيبيت 500 ميليلتر من الوسائط التي تحتوي على الماغنيسيوم (أو قطع الورم، إذا تم استخدام عينة الورم الرئيسي) من لوحة المرفق 6-جيدا جداً منخفضة في أنبوب ميكروسينتريفوجي مل 1.5 فارغة. انتظر 2 دقيقة للسماح الماغنيسيوم تسوية إلى الجزء السفلي من الأنبوب.
- بعناية إزالة المادة طافية من الأنبوب. إعداد أنبوب آخر من نوع-1 الكولاجين (2 مغ/مل) مختلطة مع دميم التي تحتوي على 10% FBS وإضافة 500 ميليلتر من هذا الخليط بسرعة الماغنيسيوم. بلطف مزيج الماغنيسيوم والكولاجين ببطء بيبيتينج.
- إضافة 250 ميليلتر من خليط الماغنيسيوم/الكولاجين إلى بئر شريحة الدائرة المغلفة من قبل الكولاجين. السماح الكولاجين مصفوفة تحتوي على الماغنيسيوم على ترسيخ تماما (حوالي 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية).
- بعد هو توطد المصفوفة الكولاجين، إضافة 1 مل دميم التي تحتوي على 10% FBS لكل بئر (الشكل 1ب). احتضان شريحة الدائرة في حاضنة 37 درجة مئوية تزويد 5% CO2 حتى جاهزة للتصوير.
3-يعيش خلية الوقت الفاصل بين التصوير
- تشغيل المجهر [كنفوكل] اتباع إرشادات الشركة المصنعة والتأكد من أن الدائرة المناخ تصل إلى 37 درجة مئوية، ويتم تزويد شركة 5%2.
ملاحظة: لدينا قاعة ومجهر عادة ما تتطلب ح 1 للوصول إلى توازن النظام. - بعناية بنقل الشريحة الدائرة إلى محول الشرائح المرفقة بالمجهر.
- موقع الماغنيسيوم اهتمام باستخدام طاقة منخفضة وهدف (مثلاً، 5 س) وبدء التصوير بهدف السلطة العليا (في البروتوكول الحالي، يتم استخدام 20 X الهدف بالنسبة لتصوير الخلايا الحية لأن جودة الصورة أفضل).
ملاحظة: لعينات الورم الابتدائي المثانة، 5 X 10 X أهداف قد يلزم ومن أجل تغطية أكبر منطقة التصوير. لدينا الوقت الفاصل بين التصوير، يتم تعيين الفاصل الزمني التصوير ك 30 دقيقة وتستخدم كدسة Z لصورة كروي كله. عادة المسافة بين Z-شرائح يتم تعيين إلى 4 ميكرومتر 20 س والهدف والمسافة الإجمالية لمحور Z هو حوالي 200 ميكرومتر. الصور يمكن الحصول عليها باستخدام DIC ومع الأسفار إذا أنسجة خلايا/ميناء علامات البروتين الفلورسنت. - إجراء تصوير مرور الزمن ح 24 – 72.
ملاحظة: يتم تحديد المدة حسب نوع الخلية واحتياجات التجربة.
4-إعداد كتلة العينة التي تحتوي على الماغنيسيوم السرطان لتقطيع الأنسجة المجمدة
- رفع كتلة هلام الكولاجين والماغنيسيوم من الشرائح الدائرة بعناية باستخدام الملقط الصغيرة. وضع كتلة هلام الكولاجين في الأنسجة بلاستيكية العفن.
- شطف جل الكولاجين مع 1 x PBS بإيجاز ومن ثم إصلاحه مع بارافورمالدهيد 4% (PFA) في برنامج تلفزيوني لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
تنبيه: منهاج عمل بيجين هو مادة مسرطنة محتملة وينبغي التعامل معها بحذر. - أغسل جل الكولاجين مع 1.5 مل من س 1 برنامج تلفزيوني حول شاكر لاستبدال 15 دقيقة برنامج تلفزيوني وكرر الخطوة السابقة الغسيل 3 x.
- تطبيق طبقة رقيقة (حوالي 3 مم) قطع الأمثل درجة الحرارة (OCT) مجمع لتغطية الجزء السفلي من العفن الأنسجة البلاستيكية الجديدة. ضع الثابتة وغسلها جل الكولاجين على رأس OCT مركب، ثم تضمين بعناية الجل كله عن طريق ملء القالب مع أكتوبر مجمع مع تجنب تشكيل أي فقاعات الهواء في OCT.
- ترك العفن في 4 درجات مئوية عن ح 1.
- ضع القالب الذي يتضمن عينة وأكتوبر مجمع على طبق بيتري 100 ملم تطفو على النتروجين السائل. تسمح العينة لتجميد فلاش تماما.
- تخزين كتلة العينة المجمدة في-80 درجة مئوية لاستخدامها في المستقبل.
5-الفلورة تصوير الماغنيسيوم السرطان مقطعة مجمدة
- نقل كتلة العينة المجمدة من الثلاجة-80 درجة مئوية إلى الدائرة-20 درجة مئوية كريوستات.
-
أداء تمزيقها المجمدة التقليدية بتعيين فاصل المقطع إلى 7 ميكرومتر. اسمحوا عينات مقطعة نعلق على الشريحة الزجاجية دون التجاعيد أو المحاصرين الجوية.
- تخزين الشرائح في-80 درجة مئوية قبل القيام بتلوين المزيد.
ملاحظة: يمكن استخدام فترات زمنية مختلفة لتناسب الاحتياجات التجريبية.
- تخزين الشرائح في-80 درجة مئوية قبل القيام بتلوين المزيد.
- الهواء الجاف للشرائح ح 1 في درجة حرارة الغرفة.
- بيرميبيليزي العينات مع برنامج تلفزيوني يحتوي على 0.5% X-100 تريتون لمدة 15 دقيقة.
- أغسل عينات x 3 مع برنامج تلفزيوني لمدة 10 دقيقة للمياه والصرف الصحي.
- تطويق هذه العينات على الشريحة بالحواجز مسعور باستخدام قلم حاجز مسعور.
- معالجة العينات بعرقلة الحل (1 x برنامج تلفزيوني يحتوي على 5% من ألبومين المصل البقري (BSA))، ح 1 في درجة حرارة الغرفة.
- تطبيق ميليلتر 40 من الحل الأساسي الذي يحتوي على الأجسام المضادة (1 x برنامج تلفزيوني يحتوي على 5% جيش صرب البوسنة، مع تخفيف 1: 100 من جسم الأولية) لكل عينة على الشريحة.
- احتضان الشرائح في جسم الأولية في 37 درجة مئوية ح 1 أو في درجة حرارة الغرفة بين عشية وضحاها (وقت الحضانة وشروط تختلف اعتماداً على جسم الأولية).
- أغسل عينات x 3 مع برنامج تلفزيوني لمدة 15 دقيقة (الواحدة والمياه والصرف الصحي).
- تطبيق ميليلتر 40 الثانوية التي تحتوي على جسم الحل (1 x برنامج تلفزيوني يحتوي على 5% من جيش صرب البوسنة مع رافعة جسم الثانوي تمييع) لكل عينة على الشريحة.
- أغسل عينات x 3 مع برنامج تلفزيوني لمدة 15 دقيقة (الواحدة والمياه والصرف الصحي).
- وصمة عار العينات مع الحل هويشت 33342 (1 ميكروغرام/ملليلتر، تضعف في برنامج تلفزيوني) في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. ثم أغسل العينات مع برنامج تلفزيوني لمدة 5 دقائق.
- تحميل العينات مع تصاعد المتوسطة وغطاء لهم مع كشوف تغطية حجم مناسب. اترك الشرائح في الظلام في درجة حرارة الغرفة ح 24، ثم قم بإجراء الفحص المجهري [كنفوكل].
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يتطلب نجاح إنشاء كروي ورم سرطان المثانة الغازية تشكيل الماغنيسيوم ورم حجم مناسب من خطوط الخلايا أو الأورام الأولية. الشكل 2 يظهر حجم مناسب الماغنيسيوم المتقدمة من أربعة خطوط الخلايا لسرطان المثانة البشرية (أم-UC9، أم UC13، أم-UC14، 253J، وأم-UC18). الشكل 2 ويبين ب كروي ورم من ورم مثانة المولدة بواسطة BBN ماوس المضمنة في مصفوفة الكولاجين. تم تضمين هذه الماغنيسيوم كما هو موضح أعلاه، وتم القبض على ...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هنا يصف لنا نموذج كروي ورم ثلاثية الأبعاد التي تتيح المراقبة في الوقت الحقيقي من غزو سرطان المثانة هو أمر حاسم لتقدم وتطور سرطان خبيث. وهذا النظام قابلة لإدماج مختلف مكونات stromal والخلوية السماح لمحققين بالخص أفضل المكروية الأنسجة التي تتم فيها غزو سرطان المثانة. الماغنيسيوم سرطان المثانة يمكن أن تتولد من مصادر مختلفة مثل خطوط الخلايا (بما في ذلك خطوط الخلايا المحورة جينياً مفيدة للنظر في إشارات المسارات التي تؤثر على عمليات الغزو)، والماوس الأساسي الأورام (الموصوفة هنا). يمكن أن يحتمل أن يمكن تكييفها أيضا لتحليل الورم...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب يعلن لا تضارب المصالح المالية.
شكر وتقدير
المؤلف يود أن يشكر مختبر الدكتور هوارد كراوفورد (جامعة ميشيغان) للدعم التقني وتوفير المواد والمعدات اللازمة لهذه الدراسة، والن كيلر للدعم التقني.
تم تمويل هذا العمل من المنح المقدمة من جامعة مركز السرطان ميشيغان روجل الأساسية منحة CA046592 26S3، K08 المعاهد الوطنية للصحة CA201335-01A1 (حزب العمال التقدمي)، يا BCAN (حزب العمال التقدمي)، CA17483601A1 R01 المعاهد الوطنية للصحة (DMS).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| خطوط خلايا سرطان المثانة البشرية UM-UC9 ، UM-UC13 ، UM-UC14 ، UM-UC18 ، 253J | |||
| DMEM زراعة الخلايا المتوسطة | Thermo Fisher Scientific | 11995065 | |
| مصل الأبقار الجنينية ؛ | ثيرمو فيشر 26140079 | ||
| المضادات الحيوية المضادة للفطريات (100x) | ثيرمو فيشر العلمي | 15240062 | |
| التربسين-EDTA (0.25٪) ، الفينول الأحمر | ثيرمو فيشر العلمي | 25200056 | |
| ألبومين مصل الأبقار (BSA) | سيجما ألدريتش | A3803 | |
| ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) ، درجة الحموضة 7.4 ؛ | Thermo Fisher Scientific | 10010023 | |
| Costar مرفق منخفض للغاية 6 آبار العنقود | Corning | 3471 | |
| المجهر المقلوب التقليدي | Carl Zeiss | 491206-0001-000 | الاستخدام العام لزراعة الخلايا وفحص الكرويات |
| الكولاجين نوع 1 من ذيل الفئران ، تركيز عال ؛ | Corning | 354249 | |
| Nunc Lab-Tek II Chambered Coverglass | Thermo Fisher Scientific | 155382 | |
| مجهر متحد البؤر | Carl Zeiss | LSM800 | منظار متحد البؤر مع غرفة المناخ ، والتصوير متعدد المواقع ، ووظيفة المسح الضوئي Z-stack ؛ |
| معالجة الصور Cryostat micromtome | Leica Biosystems | CM3050 S | |
| Zen 2 | Carl Zeiss | ||
| محلول بارافورمالدهايد | علوم المجهر الإلكتروني | 15710 | |
| ImmEdge Hydrobl Barrier PAP | Pen Vector Laboratories | مركب H4000 | |
| O.C.T | Thermo Fisher Scientific | 23730571 | |
| Hoechst 33342 solution | Thermo Fisher Scientific | 62249 | |
| الأجسام المضادة ل ATDC (Trim29) | سيجما ألدريتش | HPA020053 | |
| المضادة للسيتوكيراتين 14 الجسم المضاد | Abcam | ab7800 | |
| الأجسام المضادة للفيمنتين | Abcam | ab24525 | |
| ProLong Diamond ؛ | تصاعد الوسط |
المراجع
- American Cancer Society. The Society. , Atlanta, GA. (2018).
- Knowles, M. A., Hurst, C. D. Molecular biology of bladder cancer: new insights into pathogenesis and clinical diversity. Nature Reviews Cancer. 15 (1), 25-41 (2015).
- DeGeorge, K. C., Holt, H. R., Hodges, S. C. Bladder Cancer: Diagnosis and Treatment. American Family Physician. American Family Physician. 96 (8), 507-514 (2017).
- Repesh, L. A. A new in vitro. assay for quantitating tumor cell invasion. Invasion Metastasis. 9 (3), 192-208 (1989).
- Doillon, C. J., Gagnon, E., Paradis, R., Koutsilieris, M. Three-dimensional culture system as a model for studying cancer cell invasion capacity and anticancer drug sensitivity. Anticancer Research. 24 (4), 2169-2177 (2004).
- Duong, H. S., Le, A. D., Zhang, Q., Messadi, D. V. A novel 3-dimensional culture system as an in vitro. model for studying oral cancer cell invasion. International Journal of Expermintal Pathology. 86 (6), 365-374 (2005).
- Rebelo, S. P., et al. 3D-3-culture: A tool to unveil macrophage plasticity in the tumour microenvironment. Biomaterials. , 185-197 (2018).
- Vasconcelos-Nobrega, C., Colaco, A., Lopes, C., Oliveira, P. A. Review: BBN as an urothelial carcinogen. In Vivo. 26 (4), 727-739 (2012).
- Palmbos, P. L., et al. ATDC/TRIM29 Drives Invasive Bladder Cancer Formation through miRNA-Mediated and Epigenetic Mechanisms. Cancer Research. 75 (23), 5155-5166 (2015).
- Wang, L., et al. ATDC induces an invasive switch in KRAS-induced pancreatic tumorigenesis. Genes & Development. 29 (2), 171-183 (2015).
- Fife, C. M., McCarroll, J. A., Kavallaris, M. Movers and shakers: cell cytoskeleton in cancer metastasis. British Journal of Pharmacology. 171 (24), 5507-5523 (2014).
- Akhmanova, A., Steinmetz, M. O. Control of microtubule organization and dynamics: two ends in the limelight. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 16 (12), 711-726 (2015).
- Cheung, K. J., Gabrielson, E., Werb, Z., Ewald, A. J. Collective invasion in breast cancer requires a conserved basal epithelial program. Cell. 155 (7), 1639-1651 (2013).
- Kidd, M. E., Shumaker, D. K., Ridge, K. M. The role of vimentin intermediate filaments in the progression of lung cancer. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 50 (1), 1-6 (2014).
- Lowery, J., Kuczmarski, E. R., Herrmann, H., Goldman, R. D. Intermediate Filaments Play a Pivotal Role in Regulating Cell Architecture and Function. Journal of Biological Chemistry. 290 (28), 17145-17153 (2015).
- Papafotiou, G., et al. KRT14 marks a subpopulation of bladder basal cells with pivotal role in regeneration and tumorigenesis. Nature Communications. 7, 11914(2016).
- Sun, W., Lim, C. T., Kurniawan, N. A. Mechanistic adaptability of cancer cells strongly affects anti-migratory drug efficacy. Journal of the Royal Society Interface. 11 (99), (2014).
- Goddette, D. W., Frieden, C. Actin polymerization. The mechanism of action of cytochalasin D. Journal of Biological Chemistry. 261 (34), 15974-15980 (1986).
- Berrier, A. L., Yamada, K. M. Cell-matrix adhesion. Journal of Cellular Physiology. 213 (3), 565-573 (2007).
- Lee, J. H., et al. Collagen gel three-dimensional matrices combined with adhesive proteins stimulate neuronal differentiation of mesenchymal stem cells. Journal of the Royal Society Interface. 8 (60), 998-1010 (2011).
- LeBleu, V. S., Macdonald, B., Kalluri, R. Structure and function of basement membranes. Experimental Biology and Medicine. 232 (9), 1121-1129 (2007).
- Rakha, E. A., et al. Invasion in breast lesions: the role of the epithelial-stroma barrier. Histopathology. , (2017).
- Erler, J. T., Weaver, V. M. Three-dimensional context regulation of metastasis. Clinical & Experimental Metastasis. 26 (1), 35-49 (2009).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
