مقالة منهجية

عكس التحليل التضخيم متحاور حلقة تتوسط النسخ (RT-مصباح) للفيروس Zika والجينات التدبير المنزلي في البول والمصل، وعينات البعوض

DOI:

10.3791/58436

⸱

سبتمبر 14, 2018

 ,  ,  ,  , 
1Department of Urology, Beaumont Health System, 2Foundational Sciences, College of Medicine, Central Michigan University, 3Oakland University William Beaumont School of Medicine

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هذا البروتوكول يوفر طريقة فعالة ومنخفضة التكلفة الكشف عن الفيروسات Zika أو التحكم في الأهداف في عينات البول ومصل الدم البشري أو البعوض بالنسخ العكسي بوساطة حلقة متحاور التضخيم (RT-مصباح). هذا الأسلوب لا يتطلب عزل الجيش الملكي النيبالي ويمكن أن يتم في غضون 30 دقيقة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الإصابة بفيروس زكى (زيكف) يمكن أن تكون أعراض عند البالغين، إلا أن العدوى خلال الحمل يمكن أن يؤدي إلى الإجهاض، والتشوهات الخلقية العصبية الحادة. والهدف من هذا البروتوكول بسرعة الكشف عن زيكف في عينات من الإنسان والبعوض. معيار الذهب الحالي للكشف عن زيكف هو النسخ العكسي الكمي PCR (قرة-PCR)؛ عكس النسخ بوساطة حلقة التضخيم متحاور (RT-مصباح) قد تسمح لاختبار أكثر كفاءة وتكلفة منخفضة دون الحاجة إلى معدات مكلفة. في هذه الدراسة، يتم استخدام RT-مصباح للكشف عن زيكف في عينات بيولوجية مختلفة داخل 30 دقيقة، دون الأول عزل الحمض النووي الريبي من العينة. ويتجلى هذا الأسلوب استخدام زيكف إصابة المريض البول والمصل، وإصابة عينات البعوض. الحمض النووي الريبي ريبوسومال 18S واكتين تستخدم كعناصر تحكم في نماذج الإنسان والبعوض، على التوالي.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في عام 2015، Zika الفيروسات (زيكف) اكتسبت الاهتمام العالمي البارز كمرض معد للقلق لأنه يرتبط ارتباطاً العدوى خلال الحمل بالإجهاض، الاملاص، والعيوب الخلقية العصبية الحادة بما في ذلك صغر الرأس، فضلا عن سائر خلقي 1من العيوب الخلقية. في حالات نادرة، ارتبطت زيكف بمتلازمة غيان-باريه. زيكف تنتقل أساسا عن طريق بعوض؛ ومع ذلك، فإنه أيضا يمكن أن ينتشر عن طريق الاتصال الجنسي1. نظراً لأن العدوى مع زيكف غير متناظرة في معظم الناس، أو يعرض بأعراض تشبه الإنفلونزا خفيفة تتداخل مع أعراض عدوى أخرى أربورفيروسيس1، كان هناك حاجة لتحسين أساليب الكشف السريع وفعالة من حيث التكلفة من زيكف شاشة كل الناس، فضلا عن السكان المحليين من البعوض.

النسخ العكسي الكمي PCR (قرة-PCR) تحليل موثوق بها للكشف عن زيكف؛ ومع ذلك، يتطلب هذا الأسلوب تكلفة المعدات المتخصصة والموظفين المدربين وعزل الحمض النووي الريبي من العينة للفائدة. النسخ العكسي بوساطة حلقة متحاور التضخيم (RT-مصباح) هو أسلوب تضخيم حمض النووي خطوة واحدة تستند إلى تقنية PCR فقط تتطلب درجة حرارة الحضانة واحد نتيجة لاستخدام بوليميراز الدنا لاسخدام مع حبلا خصائص التشرد. هذا تلتف الحاجة ثيرموسيكلير ويقلل من طول الفترة الزمنية اللازمة لإتمام المقايسة. وتشمل المزايا الإضافية RT-مصباح خصوصية عالية وحساسية، ومتانة في طائفة من مستويات الحموضة ودرجات الحرارة، ومقاومة ل مثبطات بكر العديد من2. أنها منخفضة التكلفة نسبيا والكاشفات مستقرة عند درجة حرارة الغرفة. ونظرا لهذه الخصائص، يمكن نشر RT-مصباح في مختبر أو في الميدان. وقد وضعت على هذا النحو، مصباح ردود الفعل للكشف عن مجموعة من العوامل الممرضة وأنواع أخرى من العدوى3،،من45. وهدف البروتوكول RT-مصباح، المذكورة في هذه الورقة الكشف عن زيكف دون عزل الحمض النووي الريبي في البشرية عينات مصل الدم والبول، وكذلك كما هو الحال في بعوضة مصابة واحدة خلال 30 دقيقة عن طريق RT-مصباح. يمكن استخدام هذا الأسلوب لاستبدال قرت-بكر كما هو أداة تشخيصية الحساسة والسريعة التي تعمل بسرعة وفي بيئات خارج المختبر.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت الموافقة على جميع الأساليب الموصوفة هنا بالمؤسسية استعراض المجلس (مجلس الهجرة واللاجئين) الصحة بومونت. جميع التجارب التي أجريت وفقا للمبادئ التوجيهية ذات الصلة والأنظمة.

تنبيه: ينبغي معالجة جميع المواد المعدية يحتمل أن تكون وفقا لمعايير السلامة البيولوجية المستوى 2 بما في ذلك استخدام معدات الحماية الشخصية. ينبغي القيام بأي من الإجراءات التي قد تنتج الهباء الجوي في السلامة الأحيائية مجلس الوزراء. بالإضافة إلى ذلك، ينبغي القيام بعمل مع البعوض يعيش في مرفق مفصليات الأرجل احتواء المستوى 1-3 مناسبة. نظراً لرابطة زيكف الإصابة بتشوهات خلقية، النساء الحوامل، تحاول أن تصور، أو الشركاء في هذه المرأة ينبغي كثيرا التقليل من تعرضهم المختبر إلى زيكف. نقل العينات زيكف تصنف في الولايات المتحدة "فئة ب المواد البيولوجية" وفقا لإدارة اللوائح المتعلقة بالنقل الخطرة المواد (49 CFR Part 171-180) وشحن العينات ولذلك ينبغي أن تلتزم تلك المبادئ التوجيهية. يتطلب استيراد بيوسبيسيمينس "الولايات المتحدة من زيكف" مراكز لمكافحة الأمراض والوقاية منها تراخيص الاستيراد. استيراد أي المفصليات التي يمكن أن تكون بمثابة ناقل لنقل زيكف، وحتى لو كانت غير مصابة، يتطلب الحصول على تصريح "وزارة الزراعة في الولايات المتحدة" (وزارة الزراعة). تعتبر هذه المعلومات الحالية في وقت النشر. يمكن الاطلاع على أحدث التوصيات في https://www.cdc.gov/zika/laboratories/lab-safety.html.

ملاحظة: ردود الفعل RT-مصباح هم عرضه لمعدلات أعلى من ردود الفعل الإيجابية الكاذبة، حيث ينبغي اتخاذ الاحتياطات في التخطيط التجريبية. يجب استخدام جميع الإعداد والتنفيذ لردود الفعل RT-مصباح الماصات المعينة ونصائح عامل التصفية. ومن الناحية المثالية، ينبغي أن تنشأ تدفق عمل الوحشي. إذا كان ذلك ممكناً، يجب أن يتم التحليل والتصوير (القسم 5) في غرفة مغلقة منفصلة لمنع التلوث. ينبغي أن تظل فتح أنابيب الاختبار التي تحتوي على منتجات RT-مصباح إلى الحد أدنى.

1 التحضير التمهيدي RT-مصباح

  1. إعادة تشكيل كل التمهيدي RT-مصباح المجففة بالتبريد في الماء الصف الجزيئية لتركيز نهائي من 100 ميكرومتر (الجدول 1). باختصار دوامة الحل التمهيدي لضمان حل متجانسة وتدور بإيجاز إلى الأسفل الحل بأقصى سرعة ممكنة في جدول أعلى أجهزة الطرد مركزي لجمع جميع التمهيدي الحل.
  2. إعداد 10 × RT-مصباح "التمهيدي مزيج" من الإشعال FIP، المقاضاة، F3، B3، والمجلة، ورطل استخدام وحدات التخزين الموجودة في الجدول 2. باختصار دوامة الحل التمهيدي لضمان حل متجانسة، وتدور بإيجاز إلى الأسفل الحل بأقصى سرعة ممكنة في جدول أعلى أجهزة الطرد مركزي لتجنب أي خسارة.
    ملاحظة: لا تحتوي على مصباح RT التمهيدي عبد اللطيف-مصرية أكتين (عايض) تمهيدي رطل (كبسولة تفجير حلقة ليست دائماً ضرورية لردود الفعل RT-مصباح). في هذه الحالة، استبدال وحدة التخزين التمهيدي رطل مع المياه الصف الجزيئية.
  3. تخزين الإشعال في-20 درجة مئوية بين الاستخدامات وتجنب دورات مجانية من الدفء.

2. إعداد نموذج

  1. لعينات البول البشري: استخدام أما البول الطازجة أو المجمدة البول أو البول في حافظة. للعينة الطازجة أو المجمدة: فورا تدور أسفل العينة بعد جمع لمدة 10 دقيقة في 700 x ز، واستخدام المادة طافية للتحليل أو تجميد في-80 درجة مئوية لاستخدامها في المستقبل. ذوبان الجليد العينات المجمدة على الجليد قبل الاستخدام.
  2. لعينات مصل الدم البشري: استخدام أما عينات مصلية الطازجة أو المجمدة.
  3. زيكف المصابة خطوط الخلايا: استخدام وسائل الإعلام مشروطة أو خلية ليساتيس.
    ملاحظة: الخلية الحرة مكيفة وسائل الإعلام من عبد اللطيف. albopictus الخلايا C6/36 8 أيام بعد العدوى يمكن استخدامها كعناصر إيجابية لردود فعل زيكف RT-مصباح.
  4. للبعوض Ae-مصرية : استخدام أما جثث البعوض كاملة طازجة أو مجمدة. ذوبان الجليد البعوض مجمدة في الجليد. إعداد البعوض خام ليساتي عن طريق بعوضة فردية في 100 ميليلتر من الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) وتجانسه بسحق البعوض 10 مرات مع تلميح بيبيت P10 (الشكل 1). باختصار الطرد المركزي النفط الخام بيليه أي حطام. استخدام المادة طافية للمتلقين للمعلومات مصباح RT التحليل.
    ملاحظة: يمكن إنشاء عناصر إيجابية في إعداد مختبر بإصابة أنثى البعوض باستخدام microinjection الوعائي مع مكافئات الجينوم3 حوالي 10 من الفيروس في مجلد من 200 nL وحصاد البعوض 5 أيام ما بعد الإصابة.

3-إعداد مزيج ماجستير RT-مصباح

  1. إعداد رد فعل مزيج رئيسي RT-مصباح على الجليد للتمهيدي كل تعيين لاستخدامها باستخدام دليل التخزين في الجدول 3.
    ملاحظة: الاستخدام من اليوراسيل ثيرمولابيلي DNA Glycosylase (UDG) يساعد في منع المغلوطة.
  2. ثم تدور دوامة بإيجاز لضمان أن جميع العينات جيدا مختلطة، أسفل بإيجاز لمنع فقدان وحدة التخزين.

4-RT-مصباح بالانزيم

  1. بيبيت 23.0 ميليلتر مزيج الرئيسي RT-مصباح كل رد فعل في أنبوب بكر 200 ميليلتر. إضافة ميليلتر 2.0 من عينة البول (مصل الدم، أو المادة طافية ليستي البعوض النفط الخام كما هو موضح في الخطوة 2). وهذا سيجلب الحجم الإجمالي ميليلتر 25.0 كل رد فعل RT-مصباح. لمراقبة سلبية، استخدام المياه الصف الجزيئية. إدراج عنصر تحكم إيجابية.
    ملاحظة: يمكن استخدام أرصدة القياسية أو الفيروسات PCR من المادة طافية خطوط الخلايا المصابة كعنصر إيجابي.
    1. اختياري: تشمل فعل تحكم خصوصية المفصليات ذات الصلة مثل فيروس حمى الضنك (DENV). تحضير العينة كما هو موضح في الخطوة 2 وفقا لنوع العينة. إضافة ميليلتر 2.0 لمراقبة النوعية إلى 23.0 ميليلتر من مزيج RT-مصباح رئيسية في أنبوب بكر 200 ميليلتر.
  2. الحرارة العينات من 61 درجة مئوية مدة 30 دقيقة باستخدام كتلة الحرارة أو حوض ماء، أو ثيرموسيكلير.
  3. إلغاء الحرارة بوليميراز بالتدفئة إلى 80 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.

5-مصباح RT التحليل

ملاحظة: إجراء تحليل RT-مصباح في مساحة منفصلة، والمغلقة.

  1. بعد الحضانة، الوصول إلى ردود فعل RT-مصباح بصريا بالنظر لوجود تغيير اللون.
    1. يضعف الحمض النووي نيون صبغ 01:10 في المخزن المؤقت تاي (40 مم تريس، 20 ملم حمض الخليك، يدتا 1 مم).
      تنبيه: أي وصمة عار الحمض النووي بربط الأحماض النووية وذلك هو مادة مسرطنة. ارتداء القفازات عند التعامل.
    2. إلى 12 ميليلتر من رد فعل RT-مصباح، إضافة 2 ميليلتر لتمييع صبغة الفلورسنت الحمض النووي.
      ملاحظة: ردود الفعل السلبية سوف تكون برتقالية اللون وردود الفعل الإيجابية ستكون الأصفر/أخضر اللون.
    3. اختياري: التقاط صور لردود الفعل RT-مصباح على خلفية بيضاء باستخدام كاميرا.
  2. وضع العينات تحت الأشعة فوق البنفسجية نانومتر 302 الخفيفة لتأكيد وجود منتجات RT-مصباح بالأسفار. التقاط صورة للنتيجة باستخدام كاميرا.
    ملاحظة: سوف يكون ردود فعل إيجابية RT-مصباح إخراج فلورسنت.
    تنبيه: ارتداء درع غوغل أو الوجه واقية العين الأشعة فوق البنفسجية عند العمل مع ضوء الأشعة فوق البنفسجية.
  3. اختياري: تأكيد وجود منتجات RT-مصباح قبل تنفيذ استشراد هلام على العينات.
    1. صب 2% [اغروس] هلام في المخزن المؤقت x TAE 1 مع وصمة حمض النووي للتصور.
      تنبيه: أي وصمة عار الحمض النووي بربط الأحماض النووية وذلك هو مادة مسرطنة. ارتداء القفازات عند التعامل.
    2. إضافة 5 ميليلتر سلم الحمض النووي في الممر الأول لمقارنة الأوزان الجزيئية.
    3. لكل رد فعل RT-مصباح، مزيج ميليلتر 13 RT-مصباح رد فعل خليط مع 2 ميليلتر لتحميل صبغ الحمض النووي. تحميل الخليط 15 ميليلتر التي تحتوي على الحمض النووي تحميل صبغ.
    4. تشغيل الهلام في 90 الخامس لمدة 90 دقيقة أو حتى يتم فصل العصابات والصورة مع 302 ضوء الأشعة فوق البنفسجية في شمال البحر الأبيض المتوسط.
      ملاحظة: ردود فعل إيجابية RT-مصباح سيكون نمط لاديرينج. لا يجب أن يتضمن ردود الفعل السلبية RT-مصباح أي العصابات.

6-التصرف

  1. التخلص من ردود الفعل RT-مصباح في حقائب مختومة مزدوجة. عدم اﻷوتوكﻻف كهذا قد أيروسوليزي للمنتجات RT-مصباح، مما أدى إلى ردود فعل إيجابية كاذبة في المستقبل.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يمكن تحليل ردود فعل RT-مصباح باستخدام ثلاث طرق مختلفة. أولاً، مع إضافة صبغة الفلورسنت الحمض النووي، ستكون ردود الفعل الإيجابية الأصفر/أخضر اللون حيث ستظهر ردود الفعل السلبية برتقالية اللون للعين المجردة. ثانيا، يؤدي إضافة صبغة الفلورسنت الحمض النووي لرد فعل RT-مصباح إشارة فلورسنت عند العينات متحمسون بالأشعة فوق البنفسجية. ردود الفعل السلبية لن يكون إشارة فلورية القابلة للكشف على أي الأسفار الخلفية التي قد تكون موجودة بكميات صغيرة في مراقبة سلبية. وأخيراً، يمكن تشغيل RT-مصباح ردود الفعل عل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الإنزيم زيكف RT-مصباح المبينة في هذه الورقة يعمل استخدام عينات الإنسان والبعوض6. كان الحد الأقصى للكشف عن حوالي 1 الجينوم ما يعادل6، الذي ينبغي أن يكون كافياً نظراً للحمل الفيروسي نموذجية للمريض زيكف المصابين بأعراض 103 إلى 10 مل بفو/6 7. بالإضافة إلى ذلك، يمكن الكشف عن هذا الأسلوب زيكف في عينات دون الأولى عزل الحمض النووي الريبي ودون تضخيم الفيروس في خلية ثقافة. وهذا يقلل بشكل ملحوظ الوقت والكلفة، والمخاطر الصحية لهذ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليل وأم بي سي على الملكية الفكرية وسائل تشخيص فيروس زيكا. الكتاب المتبقية قد لا المصالح المتنافسة.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بتأييد هذا العمل مساهمة الأسرة الخيرية مورين ورونالد هيرش وحقل معهد علوم الأعصاب، سانت ماري في ولاية ميشيغان. وكان الممولين أي دور في تصميم الدراسة أو جمع البيانات والتحليل، وقرار نشر أو إعداد المخطوطة. كما نشكر الدكتور برناديت زوانس وجناح إيليا لاستعراضها الحرجة من المخطوطة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
Bst< / em> 2.0 WarmStart DNA polymeraseNew England BiolabsM0537S
Isothermal Amplification Buffer  نيو إنجلاند بيولابزB0537S
WarmStart RTx النسخ العكسينيو إنجلاند بيولابزM0380S
أنتاركتيكا الحرارية UDGنيو إنجلاند بيولابيسM0372S
MgSO4< / sub>England BiolabsB1003S
100 mM dATP SolutionNew England BiolabsN0440Sمجموعة ديوكسي نيوكليوتيد N0446S
100 ملي مولار dCTP الحلنيو إنجلاند بيولابسN0441Sمجموعة ديوكسي نوكليوتيد N0446S
100 ملي مولار dTTP محلولنيو إنجلاند بيولابيسN0443Sديوكسي نيوكليوتيد N0446S
100 ملي مولار dGTP محلولنيو إنجلاند بيولابسN0442Sمجموعة ديوكسي نيوكليوتيد N0446S
100 ملي مولار dUTP محلولثيرمو فيشر العلميR0133
SYBR الأخضر الأول الحمض النووي جل وصمة عارInvitrogenS7563
نانسي -520سيجما ألدريتش01494
كتلة منخفض الحمض النوويInvitrogen10-068-013
زيكا التحكم الوضعيمعهد روبرت كوخ ، ألمانياN / A
AgaroseThermo Fisher ScientificBP1600
BlueJuice Gel Load BufferInvitrogen10816015
الاشعالتقنيات الحمض النووي المتكاملة مخصصأوليغو
نوكلياز ماءخال من النوكلياز أمبيونAM9938
حافظة للبولنورجن بيوتيك18126
ZIKV PCR قياسيمعهد روبرت كوخN / AVero E6 الخلايا الطافية
DENV2 غينيا الجديدة C التحكمفي كونيتيكت التجربة الزراعية المحطةN / A
New مجموعة سلم مادة

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Petersen, L. R., Jamieson, D. J., Powers, A. M., Honein, M. A. Zika Virus. New England Journal of Medicine. 374 (16), 1552-1563 (2016).
  2. Francois, P., et al. Robustness of a loop-mediated isothermal amplification reaction for diagnostic applications. Federation of European Microbiological Societies Immunology and Medical Microbiology. 62 (1), 41-48 (2011).
  3. Tomita, N., Mori, Y., Kanda, H., Notomi, T. Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) of gene sequences and simple visual detection of products. Nature Protocols. 3 (5), 877-882 (2008).
  4. Gandasegui, J., et al. The Rapid-Heat LAMPellet Method: A Potential Diagnostic Method for Human Urogenital Schistosomiasis. Public Library of Science Neglected Tropical Diseases. 9 (7), 0003963(2015).
  5. Barkway, C. P., Pocock, R. L., Vrba, V., Blake, D. P. Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assays for the species-specific detection of Eimeria that infect chickens. The Journal of Visualized Experiments. (96), (2015).
  6. Lamb, L. E., et al. Rapid Detection of Zika Virus in Urine Samples and Infected Mosquitos by Reverse Transcription-Loop-Mediated Isothermal Amplification. Scientific Reports. 8 (1), 3803(2018).
  7. Faye, O., et al. One-step RT-PCR for detection of Zika virus. Journal of Clinical Virology. 43 (1), 96-101 (2008).
  8. Schrader, C., Schielke, A., Ellerbroek, L., Johne, R. PCR inhibitors - occurrence, properties and removal. Journal of Applied Microbiology. 113 (5), 1014-1026 (2012).
  9. Poole, C. B., Tanner, N. A., Zhang, Y., Evans, T. C., Carlow, C. K. Diagnosis of brugian filariasis by loop-mediated isothermal amplification. Public Library of Science Neglected Tropical Diseases. 6 (12), 1948(2012).
  10. Tanner, N. A., Zhang, Y., Evans, T. C. Simultaneous multiple target detection in real-time loop-mediated isothermal amplification. Biotechniques. 53 (2), 81-89 (2012).
  11. Chan, K., et al. Rapid, Affordable and Portable Medium-Throughput Molecular Device for Zika Virus. Scientific Reports. 6, 38223(2016).
  12. Lee, D., et al. Simple and Highly Sensitive Molecular Diagnosis of Zika Virus by Lateral Flow Assays. Analytical Chemistry. 88 (24), 12272-12278 (2016).
  13. Pardee, K., et al. Low-Cost Detection of Zika Virus Using Programmable Biomolecular Components. Cell. 165 (5), 1255-1266 (2016).
  14. Song, J., et al. Instrument-Free Point-of-Care Molecular Detection of Zika Virus. Analytical Chemistry. 88 (14), 7289-7294 (2016).
  15. Yaren, O., et al. Point of sampling detection of Zika virus within a multiplexed kit capable of detecting dengue and chikungunya. BioMed Central Infectious Diseases. 17 (1), 293(2017).
  16. Wang, X., et al. Rapid and sensitive detection of Zika virus by reverse transcription loop-mediated isothermal amplification. Journal of Virological Methods. 238, 86-93 (2016).
  17. Priye, A., et al. A smartphone-based diagnostic platform for rapid detection of Zika, chikungunya, and dengue viruses. Scientific Reports. 7, 44778(2017).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

RNA Master Mix

مقالات ذات صلة