هنا نقدم لدينا بروتوكول لإنتاج فعل المباشر المتكفل محمر (المقدمة) من الماوس الليفية الكبار استخدام النسخ التي يحركها عامل النسب إعادة برمجة (DLR).
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
توجيه نسب إعادة برمجة الماوس الكبار تنتجها الخلايا الليفية لموروث محمر
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
الالتزام خلية محمر والتمايز المضي قدما من خلال تفعيل شبكة النسخي مقيدة بالنسب مدبرة من قبل مجموعة من مصير الخلية تحديد ونضج العوامل. ونحن المبينة سابقا لتحديد الحد الأدنى لعدد من العوامل اللازمة لإرشاد وتطوير خلايا الدم الحمراء باستخدام النسب المباشر إعادة برمجة الخلايا الليفية في محمر المستحث المتكفل/السلائف (المقدمة). لقد أظهرنا أن overexpression من Gata1، Tal1، Lmo2، و جيم-حركة (جتلم) يمكن سرعة تحويل موريني والبشرية الليفية مباشرة إلى المقدمة التي تشبه الخلايا محمر حسن النية من حيث التشكل، النمط الظاهري، والتعبير الجيني. ونحن نعتزم أن المقدمة ستوفر أداة لا تقدر بثمن لدراسة اللائحة مصير تكون الكريات الحمر والخلية. هنا يصف لنا عملية تدريجية لتحويل ذيل موريني نصيحة الليفية في المقدمة عن طريق النسخ يحركها عامل مباشرة نسب إعادة برمجة (DLR). في هذا المثال، نقوم بإعادة برمجة في الخلايا الليفية من الفئران محمر تتبع النسب التي تعبر عن البروتين نيون أصفر (يفب) تحت سيطرة المروج الجينات (ابور) مستقبلات ارثروبويتين، تمكين التصور خلية محمر مصير الحث على إعادة برمجة. وفي أعقاب هذا البروتوكول، يمكن أن تعاد برمجتها الليفية في المقدمة في غضون خمسة إلى ثمانية أيام.
بينما لا يزال يمكن إدخال تحسينات على العملية، ونحن تبين أن جتلم بوساطة إعادة برمجة عملية سريعة ومباشرة، مما أسفر عن الخلايا التي تحتوي على خصائص من حسن النية الخلايا السلف والسلائف محمر.
المقدمة
خلايا الدم الحمراء (كرات الدم الحمراء) ضرورية في جميع الفقاريات ويشكلون نسبة 84 في المائة من كافة الخلايا من الهيئات البشرية1. من الجنينية إلى حياة الكبار، صحتنا تعتمد اعتماداً كبيرا على التنظيم الدقيق للتوازن ربك. من المعروف استمرار الإنتاج لكرات الدم الحمراء الناضجة في جميع أنحاء التنمية في مرحلة البلوغ تكون الكريات الحمر. تحديا رئيسيا في تكون الكريات الحمر للبحث هو تحديد الجهات التنظيمية الرئيسية التي تنسق التنمية ربك والتبديل بين البدائية ونهائية تكون الكريات الحمر. النسب المباشر إعادة برمجة المتكفل محمر فرصة لزيادة فهم التنمية محمر في فيفو.
النسب المباشر برمجة (DLR)، المعروفة أيضا باسم ترانسديفيرينتييشن، هو عملية إعادة برمجة واحدة من نوع الخلية مباشرة إلى آخر، تجاوز pluripotent ومراحل السلف مولتيبوتينت. وقد استخدمت حتى الآن DLR لإنتاج العديد من أنواع الخلايا بما في ذلك العصبية2و المكونة للدم3،،من45، والكبد6 والكلوية7، خلايا السلف. لعلماء الأحياء التنموي، أصبح DLR أداة هامة لاستجواب جوانب الالتزام بالنسب والتمايز المحطة الطرفية عمليات8،9. يمكن تكمل DLR واستبدال جزئيا في فيفو دراسات لفهم آليات لمصير الخلية العوامل المحددة أثناء التطوير. وينص البروتوكول DLR لإعادة برمجة لموروث محمر المبينة في هذه الورقة الحقل طريقة مجانية للدراسات التنموية لتكون الكريات الحمر.
وقد أثبتنا سابقا أن overexpression كوكتيل أربعة معامل، GATA1، TAL1، LMO2، و ج-حركة (جتلم)، كافية لإعادة برمجة الليفية مورين والبشرية على السواء مباشرة إلى فروعه محمر المستحث (المقدمة) 10-الخلايا محمر "جتلم" برمجة يشابه إلى حد كبير حسن النية محمر البدائية موروث من حيث التعبير مورفولوجيا والنمط الظاهري والجيني10. وهكذا المقدمة قد حدت من قدرة الانتشار وناضجة للكريات الحمراء المنواه مماثلة لتلك التي تنتجها عابر في الجنين المبكر قبل بداية نهائي تكون الكريات الحمر. عن طريق إجراء تغييرات في شروط إعادة برمجة (مثل الطفرات في إعادة برمجة العوامل أو إضافة عوامل أخرى)، يمكننا أن نفهم كيف يؤدي ذلك إلى تغييرات في التنمية محمر والتمايز. ونحن على سبيل المثال أظهرت أن Klf1 أو Myb بالإضافة إلى كوكتيل جتلم تغيير نمط التعبير جلوبين من الدرجة الأولى الجنينية (البدائية) للكبار أساسا (نهائي). وهذا الاستنتاج يؤكد صلاحية استخدام DLR كأداة لتحديد العوامل التنموية في تكون الكريات الحمر.
هنا، فإننا مخطط عملية توليد المقدمة من ذيل الماوس نصيحة الليفية (الصناديق الاستئمانية). في نتائج تمثيلية، أجرينا إعادة برمجة في الخلايا الليفية من الفئران تتبع النسب محمر (ابور-لجنة المساواة العرقية R26-ايفب) الذي يعرب عن البروتين نيون أصفر (ايفب) من محور Rosa26 في جميع الخلايا التي أعرب عن مستقبلات ارثروبويتين، السماح للتصور من السهل الالتزام بنسب محمر. باستخدام هذا الأسلوب، يفب الإيجابية (+ ابور) خلايا موجودة لها في أقرب وقت بعد توصيل خمسة أيام. ويوفر هذا البروتوكول، ولذلك، تقنية سريعة وقوية لتوليد محمر فروعه في المختبر.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1-إنشاء وصيانة ذيل الماوس الأساسي تلميح الثقافات تنتجها الخلايا الليفية
- إعداد أطباق الجيلاتين المغلفة (يوصي طبق 10 سم للذيل واحد) التي تغطي السطح مع الجيلاتين 0.1% وحضانة الأطباق لمدة 20 دقيقة تقريبا في 37 درجة مئوية. نضح الحل الجيلاتين من الطبق والسماح لها الجاف ح 2 على الأقل.
- Euthanize الفئران بخلع عنق الرحم. قم بإزالة الذيل مع مقص، قص عند قاعدة الذيل. وضع الذيل في الفوسفات مخزنة المالحة دولبيكو (دببس) بنسبة 2% مصل بقرى الجنين (FBS) حتى جاهزة للاستخدام.
ملاحظة: للحصول على أفضل النتائج، ذيول ينبغي أن تؤخذ من الفئران حوالي 6 إلى 8 أسابيع من العمر. يمكن أن تؤخذ ذيول من الفئران أقدم من 8 أسابيع عمر، ومع ذلك، كسن الفئران، والقدرة على الانتشار الخلايا الليفية وكفاءة إعادة برمجة انخفاض11. - تنفيذ كافة الخطوات اللاحقة من هذا البروتوكول في غطاء زراعة الأنسجة تحت ظروف معقمة. تعد حلاً التربسين مخفف 0.02% التربسين-يدتا في دببس وإضافة 5 مل في طبق غير مصقول 10 سم.
- أغسل الذيل، أولاً في الإيثانول 70%، ثم في دببس. في طبق، مكان الذيل مسطح واستخدام الملقط لأنه عقد في المكان. إجراء شق في الذيل على طول محورها الطولي من القاعدة إلى الحافة.
- فهم الذيل مع زوج واحد من الملقط وأنه عقد عمودياً. استخدام زوج ثاني من الملقط، قبضة الجلد بجوار الشق في القاعدة الذيل وقشر مرة أخرى. القيام بذلك في كلا الجانبين من الشق حتى يمكن خلع الجلد عن طريق سحب أسفل تجاه طرف الذيل.
- اضغط الذيل مقشرة مع الملقط على الطبق الذي يحتوي على الحل التربسين وقطع الذيل إلى حوالي 1 سم قطع طويلة. مع قطع ذيل في حل التربسين، استخدام مقص لتفتيت القطع إلى أجزاء أصغر. احتضان قطعة الذيل في حل التربسين في 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق.
ملاحظة: يفضل أصغر القطع بغية توفير كل قطعة مساحة سطحية عالية لنسبة الحجم. - آرو التربسين استخدام وحدات التخزين 2 متوسطة التوسع (FEX) تنتجها الخلايا الليفية (عالية-الجلوكوز دولبيكو تعديل النسر المتوسطة (دميم) مع 15% FBS، مم 2 لتر-الجلوتامين والأحماض الأمينية الأساسية عدم (نيا) 100 يو/مليلتر البنسلين/ستربتوميسين).
- جمع محتويات الطبق في أنبوب 50 مل وأجهزة الطرد المركزي في 350 × ز لمدة 5 دقائق في 4 درجات مئوية. نضح المادة طافية وريسوسبيند أجزاء الذيل في 10 مل من جديد FEX المتوسطة.
- نقل أجزاء الذيل في المتوسط إلى طبق المغلفة بالجيلاتين واحتضان في 37 درجة مئوية في 5% CO2 و 4% س2، إضافة جديدة FEX المتوسطة كل يومين.
ملاحظة: بعد خمسة إلى سبعة أيام، شظايا الذيل قد تعلق في الجزء السفلي من الطبق ويمكن رؤية الليفية تتحرك بعيداً عنها. - متى تم اكتشاف مجموعات من الخلايا الليفية، بلطف يهز الطبق إزاحة قطعة الذيل ونضح على المديين المتوسط وجميع أجزاء العظام ترك الليفية تعلق على اللوحة. إضافة جديد FEX المتوسطة والثقافة الليفية حتى روافد.
- لضمان لا تلوث الليفية بفروعه المكونة للدم، فصل الخلايا من لوحة باستخدام 1 x التربسين-يدتا لمدة 5 دقائق وجمع الخلايا. المستنفدة للخلايا معربا عن علامات المكونة للدم (CD117، CD5، CD45R (B220)، CD11b، ومكافحة-غرام-1 (Ly-ز 6/ج)، 7-4، ومكررا ثانيا-119) باستخدام نظام فصل مغناطيسي10.
2-لفي الإنتاج
- بذور الخلايا التغليف للفيروس في حوالي 2.5 × 104 خلايا/سم2 (2.0 × 106 خلايا لطبق 10 سم) طبق تعامل زراعة الأنسجة (بفراغ-الغاز البلازما) والثقافة بين عشية وضحاها في دميم عالية-الجلوكوز مع 10% FBS، 10 مم الصوديوم بيروفات، و 100 يو/مليلتر البنسلين/ستربتوميسين CO 37 درجة مئوية و 5%2.
- في صباح اليوم التالي، تغيير المتوسطة دميم مع أي إضافات استخدام نصف حجم استخدامها للثقافة بين عشية وضحاها (5 مل لطبق 10 سم). في فترة ما بعد الظهر، تحقق من أن الخلايا هي روافد 70-80% وتبدأ في تعداء.
- لكل عامل من عوامل إعادة برمجة، Gata1، Tal1، Lmo2، و حركة ج، وإعداد خليط 2:1 ناقل التعبير (بمكس) وناقلات مساعد (التي تحتوي على جينات هفوة وبول). لطبق 10 سم الخلايا الليفية، استخدام 6 ميكروغرام من ناقلات التعبير و 3 ميكروغرام لناقل مساعد في وحدة تخزين نهائي من 100 ميليلتر في المتوسط دميم.
- لكل عامل من عوامل إعادة برمجة، إعداد 300 ميليلتر من درجة حرارة الغرفة (RT) دميم في أنبوب البوليستيرين عقيمة وإضافة 27 ميليلتر من كاشف تعداء التجارية بعناية.
ملاحظة: ينبغي أن تعرض RT قبل استخدام الكاشف تعداء ويجب إضافة مباشرة في المتوسط كما يمكن أن تجعل خصائص الالكتروستاتيكي المجمع من التمسك بجدار الأنبوبة البلاستيكية. - إضافة مزيج بلازميد في أنبوب يحتوي على كاشف تعداء، دوامة بإيجاز واحتضان خليط كاشف-الحمض النووي تعداء لمدة 15 دقيقة في "الرايت بإيجاز" دوامة الخليط وإضافة دروبويسي إلى الخلايا التغليف للفيروس حيث تعداء مزيج الحمض النووي كاشف تنتشر بشكل متساو على الثقافة واحتضان في 37 درجة مئوية بين عشية وضحاها.
- 24 ساعة بعد تعداء، تغيير المتوسطة دميم مع 20% FBS والبنسلين يو/مليلتر 100/ستربتوميسين. ح 48 بعد تعداء، جمع المادة طافية وتصفيته من خلال عامل تصفية حقنه حجم المسام 0.22 ميكرومتر.
ملاحظة: يمكن المجمدة إلى-80 درجة مئوية سوبيرناتانتس الفيروسية وأبقى حتى المطلوبة، على الرغم من أن نقل أكثر كفاءة إذا تم استخدام المادة طافية الفيروسية الطازجة.
3-جتلم توصيل والحصاد iEP
- أطباق في المتوسط FEX البذور الذيل تلميح الليفية في 1 × 104 خلايا/سم2 على 0.1% الجيلاتين المغلفة مسبقاً واحتضانها في 37 درجة مئوية ح 24.
- وفي اليوم التالي إعداد خليط توصيل كما يلي.
- إضافة المجلد 1 من المادة طافية الفيروسية لكل عامل من عوامل إعادة برمجة وتستكمل مع 4 ميكروغرام/مل من كاشف (40 ٪) من الإصابة بالفيروس إلى 6 مجلدات من FEX المتوسطة (60%).
- بالنسبة لطبق 10 سم الخلايا الليفية، إضافة 1 مل من كل المادة طافية الفيروسية (4 × الفيروسات = 4 مل) تستكمل مع 4 ميكروغرام/مل من كاشف عدوى الفيروس إلى 6 مل من FEX المتوسطة، أي ما مجموعة 10 مل توصيل خليط.
- نضح FEX المتوسطة من ثقافة تنتجها الخلايا الليفية واستبداله بخليط توصيل. احتضان توصيل ح 4 في 37 درجة مئوية في ظروف التاكسج (5% CO2 و 4% س2).
- نضح الخليط توصيل واستبداله بالمتوسطة إعادة برمجة جديدة (توسيع خالية من المصل المتوسطة (سفيم)، 100 يو/ملبينيسيلين/ستربتوميسين، 100 نانوغرام/مليلتر مورين "الخلايا الجذعية عامل" (سوف)، 10 نانوغرام/مل مورين انترلوكين-3 (IL3)، 2 يو/مليلتر الإنسان المؤتلف الاريثروبويتين (هريبو)، و 100 نانومتر الديكساميتازون).
- احتضانها ديسات 8 37 درجة مئوية في ظروف التاكسج، مضيفاً المتوسطة إعادة برمجة جديدة كل يومين. بعد خمسة إلى ثمانية أيام، سوف تسفر إعادة برمجة ناجحة عن مجموعات من الخلايا التي قد فصل من اللوحة.
- جمع الخلايا أعيدت برمجتها للتحليل، بلطف "الماصة؛" صعودا وهبوطاً حصادها مباشرة من الطبق. حصاد أونترانسدوسيد الليفية للمقارنة، فصل الخلايا من لوحة باستخدام 1 x التربسين-يدتا وجمع.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
وهنا يقدم بروتوكول استنساخه لإنتاج المقدمة من الكبار الليفية استخدام النسخ DLR يحركها عامل. نقوم بتقييم الخلية إعادة برمجة استخدام التدفق الخلوي وتشكيل مستعمرة فحوصات والجينات تحليل التعبير. وللمساعدة في تصور التحويل إلى مصير الخلية محمر، أجرينا إعادة برمجة في الخلايا الليفية من الفئران تتبع النسب محمر (ابور-لجنة المساواة العرقية R26-ايفب) الذي يعرب عن البروتين نيون أصفر (ايفب) من موضع Rosa26 في كافة الخلايا التي يتم التعبير عن مستقبلات الاريثروبويتين (ابور<...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
Overexpression كوكتيل أربعة معامل، GATA1، TAL1، LMO2، و ج-حركة (جتلم)، غير كافية لإعادة برمجة الخلايا الليفية مورين والبشرية مباشرة إلى المقدمة10. الخلايا محمر أعيدت برمجتها تشبه إلى حد كبير حسن النية محمر موروث من حيث مورفولوجيا والنمط الظاهري، والتعبير الجيني، والقدرة على تشكيل مستعمرة. ويؤكد هذا الاستنتاج أن الأساس المنطقي لاستخدام إعادة برمجة المباشر كأداة لتحديد العوامل التنموية ف...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب قد لا يوجد تضارب في التقرير.
شكر وتقدير
ونشكر وانغ إيفلين وهايد غريغوري (معهد وايتهيد، كامبريدج، ماجستير) للاستنساخ وهارفي لوديش (معهد وايتهيد) لتوفير العديد من البلازميدات المستخدمة لإنشاء مكتبة للفيروسات الرجعية. ونحن نشكر مجاهد سيفا وصوفي سينجبرانت (قسم الطب الجزيئي والعلاج الجيني، وجامعة لوند) وكارلسون غوران سونيجي شامية (قسم أمراض الدم الجزيئية، جامعة لوند) لأدوارها في وصف لإنتاج iEP. ونود أيضا تقر وأن تشكر بوليسيو جوليان (مركز الطب التجديدي، ومجمع البحوث الطبية الحيوية برشلونة)، فيوليتا رايون-استرادا (روكفلر جامعة نيويورك)، وكارل والكليي (معهد "البحوث الطبية في" سانت فنسنت و قسم للطب، مستشفى سانت فنسنت، جامعة ملبورن)، أنخل الراية (المؤسسة الكتلانية للبحوث والدراسات المتقدمة، برشلونة)، وفيجاي غ. سانكاران (معهد واسع من معهد ماساتشوستس للتكنولوجيا وجامعة هارفارد، كمبردج ) لمساهماتها السابقة في هذا العمل. هذا العمل كان يدعمها راغنار سودربيرغ المؤسسة (J.F.)؛ البحوث السويدية مجلس (J.F.)؛ هيروكي ستيفتيلسين انجكفيست Byggmästare (إلى J.F.)؛ المؤسسة السويدية للبحوث الاستراتيجية (ل J.F.)؛ المؤسسة أك ويبيرج (J.F.)؛ ماري كوري تكامل منحة (J.F.).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| DMEM بدون بيروفات الصوديوم | GE Life Sciences | SH30022.01 | زراعة لخلايا PhGP |
| DMEM مع بيروفات الصوديوم | GE Life | Sciences SH30243.01 | وسائط زراعة للأرومات الليفية ذات طرف الذيل |
| StemSpan مصل خالية من التوسع وسائل الإعلام (SFEM) | تقنيات الخلايا الجذعية | 9650 | إعادة برمجة الوسائط |
| مصل الأبقار الجنيني HyClone | GE Life Sciences | SH30071.03HI | عامل النمو |
| البنسلين / الستربتومايسين HyClone (100x) | Ge Life Sciences | SV30010 | المضادة للحيوية |
| (100x) | Thermo Fisher | 11140050 | SNL مع عامل |
| تفكك | الخلايا Trypsin HyClone (1x) | GE Life Sciences | SH30042.01 |
| عامل الخلايا الجذعية للفأر (mSCF) | تمت إضافة Peprotech | 250-03 | إلى إعادة برمجة الوسائط |
| المؤتلف Murine Il-3 | Peprotech | 213-13 | تمت إضافته إلى إعادة برمجة الوسائط |
| الإريثروبويتين البشري المؤتلف (hrEPO) | Peprotech | 100-64 | تمت إضافته إلى إعادة برمجة الوسائط |
| Dexamethasone | Sigma | 50-02-2 & nbsp ؛ | تمت الإضافة إلى إعادة برمجة الوسائط |
| الجيلاتين من جلد الخنازير | Sigma | 9000-70-8 | تفكيك في dH2O وتستخدم لطلاء الألواح. تأكد من التعقيم قبل الاستخدام. |
| Blasticidin S هيدروكلوريد | سيجما | 3/9/3513 | اختيار المضادات الحيوية. يؤثر على كل من الخلايا المؤيدة وحقيقية النواة |
| Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS) | Ge Life Sciences | SH30850.03 | تستخدم لغسل الخطوات |
| Polybrene | Merck | TR-1003-G | Infection / Transfection كاشف |
| كاشف التعداء FuGENE HD | Promega | E2311 | كاشف التعداء لخط خلية PhGP |
| وحدة تصفية حقنة Millex-GP 0.22 & micro ؛ m | Merck | SLGP033RS | تستخدم لتصفية المواد الطافية للفيروس |
| BD Emerald تحت الجلد حقنة | Becton Dickinson | SKU: 307736 | تستخدم لتصفية المواد الطافية للفيروس |
| 100 مم | الثقافة Corning | 430167 | زراعة الخلايا |
| 6 آبار لوحة | Falcon | 10799541 | ثقافة الخلايا |
| ملقط الجواهري # 5 | Sklar | 66-7642 | تستخدم ل التعامل مع شظايا الذيل الصغيرة |
| Sklarlite Iris Scissors | Sklar | 23-1149 | تستخدم لتقطيع الذيل إلى قطع |
| صغيرة مجموعة استنفاد خلايا النسب ، الفأر | Miltenyi Biotec | 130-090-858 | لاستنفاد الخلايا المكونة للدم في مزارع الخلايا الليفية |
| CD117 MicroBeads ، الفأر | Miltenyi Biotec | 130-091-224 | لاستنفاد الخلايا المكونة للدم في مزارع |
| الخلايا الليفيةخلايا PheonixGP | ATCC | CRL-3215 | خط خلية التعبئة والتغليف الفيروسي القهقري |
| EcoPAC (pCL-Eco) | Novus Biologicals | NBP2-29540 | مساعد فيروسات قهقرية يحتوي على جينات الكمامة والبول |
| pMX-Gata1 | مستنسخ في المختبر | ||
| pMX-Tal1 | مستنسخ في المختبر | ||
| pMX-Lmo2 | مستنسخ في المختبر | ||
| pMX-cMyc | مستنسخ في المختبر | ||
| برنامج CellSens Standard 1.6 | برنامج تحليل Cytospin |
المراجع
- Sender, R., Fuchs, S., Milo, R. Are We Really Vastly Outnumbered? Revisiting the Ratio of Bacterial to Host Cells in Humans. Cell. 164 (3), 337-340 (2016).
- Lujan, E., Chanda, S., Ahlenius, H., Sudhof, T. C., Wernig, M. Direct conversion of mouse fibroblasts to self-renewing, tripotent neural precursor cells. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (7), 2527-2532 (2012).
- Szabo, E., et al. Direct conversion of human fibroblasts to multilineage blood progenitors. Nature. 468 (7323), 521-526 (2010).
- Pereira, C. F., et al. Induction of a hemogenic program in mouse fibroblasts. Cell Stem Cell. 13 (2), 205-218 (2013).
- Batta, K., Florkowska, M., Kouskoff, V., Lacaud, G. Direct reprogramming of murine fibroblasts to hematopoietic progenitor cells. Cell Reports. 9 (5), 1871-1884 (2014).
- Yu, B., et al. Reprogramming fibroblasts into bipotential hepatic stem cells by defined factors. Cell Stem Cell. 13 (3), 328-340 (2013).
- Hendry, C. E., et al. Direct transcriptional reprogramming of adult cells to embryonic nephron progenitors. Journal of the American Society of Nephrology. 24 (9), 1424-1434 (2013).
- Vierbuchen, T., Wernig, M. Direct lineage conversions: unnatural but useful. Nature Biotechnology. 29 (10), 892-907 (2011).
- Capellera-Garcia, S., Flygare, J. Direct lineage reprogramming: a useful addition to the blood cell research toolbox. Expert Review of Hematology. 10 (2), 107-109 (2017).
- Capellera-Garcia, S., et al. Defining the Minimal Factors Required for Erythropoiesis through Direct Lineage Conversion. Cell Reports. 15 (11), 2550-2562 (2016).
- Mahmoudi, S., Brunet, A. Aging and reprogramming: a two-way street. Current Opinions in Cellular Biology. 24 (6), 744-756 (2012).
- Singbrant, S., et al. Erythropoietin couples erythropoiesis, B-lymphopoiesis, and bone homeostasis within the bone marrow microenvironment. Blood. 117 (21), 5631-5642 (2011).
- Heinrich, A. C., Pelanda, R., Klingmuller, U. A mouse model for visualization and conditional mutations in the erythroid lineage. Blood. 104 (3), 659-666 (2004).
- Gautier, E. L., et al. Gene-expression profiles and transcriptional regulatory pathways that underlie the identity and diversity of mouse tissue macrophages. Nature Immunology. 13 (11), 1118-1128 (2012).
- Psaila, B., et al. Single-cell profiling of human megakaryocyte-erythroid progenitors identifies distinct megakaryocyte and erythroid differentiation pathways. Genome Biology. 17 (1), 83(2016).
- Pulecio, J., et al. Direct Conversion of Fibroblasts to Megakaryocyte Progenitors. Cell Reports. 17 (3), 671-683 (2016).
- Kurita, R., et al. Establishment of immortalized human erythroid progenitor cell lines able to produce enucleated red blood cells. PLoS One. 8 (3), 59890(2013).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
