مقالة منهجية

ثقب الوريد Subclavian كطريقة بديلة لجمع عينات الدم في الفئران

14.1K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/58499

⸱

نوفمبر 18, 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Cardiology, The Second Xiangya Hospital, Central South University, 2Department of General Surgery, The Second Xiangya Hospital, Central South University

في هذه المقالة

ملخص

نقدم هنا، بروتوكولا لجمع عينات دم من الوريد subclavian الفئران.

الملخص

ومن الضروري جمع الدم بما فيه الكفاية حجم الدم في التجارب على الحيوانات. مقارنة بأساليب أكثر عدوانية أخرى مثل عينة الضفيرة الرجعية-المداري جمع جمع الدم من هذا السياق ذيل من الفئران شعبية وأقل إرهاقاً. ومع ذلك، يقتصر هذا الأسلوب جمع الدم في بعض الأحيان معدل نجاح غير مرضية. وهنا نقدم طريقة لجمع الدم من خلال ثقب الوريد subclavian. يقع في الاتجاه subclavian فقط تحت الترقوة وكبيرة بما يكفي للوفاء بمتطلبات التخزين لجمع الدم ومن هذا المنطلق. وتظهر النتائج التي توصلنا إليها أن هذا الأسلوب آمنة وقابلة للتطبيق للدم جمع العينات مع حجم الدم المطلوب. ويمكن جمع الدم من خلال ثقب الوريد subclavian كأسلوب لجمع دم بديلة في حالة الذيل الفاشلة المنطلق أخذ عينات الدم في الفئران.

المقدمة

من الضروري جمع الدم في الأبحاث الحيوانية. وتشمل الأوردة المستهدفة لجمع الدم الضفيرة الرجعية-المداري وحبل الوريد والوريد الصافن، والأوعية الدموية الذيل والشريان السباتي1،2،،من34. في بعض الأحيان، يمكن الحصول على الدم من الشريان الاورطي البطني، أو الوريد الأجوف، أو حتى في قلب5،،من67. في مثل هذه المناسبات، يجب التضحية بالحيوانات ولا يمكن استخدامه للمراقبة اللاحقة؛ وبالتالي، يتم استخدام هذه الأساليب أقل في العمل التجريبي اليومي. يتم جمع الدم من الوريد ذيل الفئران شعبية وأقل إرهاقاً بالمقارنة مع8من الأساليب المذكورة أعلاه.

ومع ذلك، يقتصر جمع الدم من الوريد الذيل أحياناً معدل نجاح غير مرضية. في بعض الأحيان، من الصعب أيضا الحصول على ما يكفي من حجم الدم بهذه الطريقة. كبير بما فيه الكفاية على المنوال subclavian ويقع فقط تحت عظم الترقوة، ثقب الوريد سوبكلافيان يمكن أن تكون طريقة بديلة لأخذ عينات من الدم إذا كانت أساليب جمع الدم الروتينية غير ناجحة. هنا، نحن نقدم وسيلة لجمع الدم عن طريق الوريد subclavian ثقب في الفئران.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

أقر هذه الدراسة "اللجنة المركزية للأخلاقيات جامعة جنوب" "بحوث الحيوان" من مستشفى إكسيانجيا الثانية (مدينة تشانغشا، الصين). أعدت المخطوطة وفقا سيصلون (بحوث الحيوان: الإبلاغ في فيفو التجارب)9من المبادئ التوجيهية.

1-المادية والحيوانية إعداد

  1. إعداد المواد المطلوبة: شريط لاصق، عامل نتف الشعر، 75% إيثانول، أنبوب جمع الدم، 2.5 مل حقنه متصلة بإبرة (24 غ، 0.6 مم × 25 مم) وماكينة حلاقة الشعر والجدول الإلكتروني، وقياس (انظر الجدول للمواد).
  2. استخدام 20 الفئران سبراغ داولي (SD) والذين تتراوح أعمارهم بين 8-10 أسابيع ووزنها 153 200 ز (انظر الجدول للمواد). الحفاظ على الفئران وفقا للدليل ل رعاية واستخدام الحيوانات المختبرية10.
  3. بيت الفئران تحت الظروف القياسية مع حرية الوصول إلى الغذاء ومياه الشرب. الاحتفاظ بها في أقفاص2 سم 530 مع الأسرة الخشب-الحلاقة (2 الفئران في قفص). الحفاظ على الحيوانات في درجة حرارة الغرفة درجة الحرارة التي تسيطر على حوالي 25 درجة مئوية.
  4. حمل التخدير العام (بينتوباربيتال الصوديوم 40 مغ/كغ) في جميع الحيوانات عن طريق الحقن داخل قبل ثقب الوريد سوبكلافيان.
  5. وضع الفئران في موقف ضعيف. إصلاح أطرافه هند في وضع مريح وإصلاح الطرف العلوي الموازي لمحور الجسم فقط بجانب الجذع.
    ملاحظة: يلزم لا التهوية الميكانيكية لهذا الإجراء (الشكل 1).
  6. تنظيف جانبي المساحة عظم لإزالة الفراء (مع ماكينة حلاقة الشعر وعامل نتف الشعر، انظر الجدول للمواد) وأي أوساخ مرئية. مسح العنق والصدر الجلد مع الإيثانول 75%. الاحتفاظ بمنطقة لثقب نظيفة وجافة مع شاش.

2-الدم جمع الإجراءات

ملاحظة: كلا الجانبين الوريد subclavian مناسبة للثقب، وهنا علينا أن نختار الجانب الأيسر لثقب. يتم تعريف موقع واتجاه الترقوة اليمنى بالإبهام الأيمن للمشغل (الشكل 2). فوس سوبراستيرنال تأثرنا بلطف مع السبابة كما فوس سوبراستيرنال في اتجاه الإبرة (الشكل 2).

  1. شطف المحاقن معقمة 2.5 مل مع الهيبارين الحل (10 وحدات دولية/مل).
  2. موقع ثقب 0.5 مم والذيلية لمنطقة 1/3 الخارجي في الترقوة اليمنى (الشكل 3). نقل المحاقن بلطف داخل الجلد من ثقب الموقع. وحالما تدخل الإبرة الجلد عظم، تطبيق الضغط السلبي مع اليد اليمنى للمشغل (الشكل 4).
    ملاحظة: حجم الدم متوسط والقصوى هي مل 1.0 و 1.4 مل، على التوالي. يتم وضع اتجاه فوس سوبراستيرنال اتجاه الإبرة وينبغي أن تكون متوازية تقريبا إلى الترقوة الخلفي فقط لأنها. عادة، يمكن الوصول إلى هذا السياق subclavian بإدخال إبرة حوالي 2 ملم في هذا الاتجاه. وبمجرد دخول الإبرة الوريد، ستدخل الدم المحاقن تحت ضغط سالب.
    1. الحفاظ على ضغط سلبي حتى يتم رسمها ما يكفي حجم الدم (الشكل 5).
  3. إذا كان جمع الدم الوريد subclavian غير ناجحة، سحب الإبرة إلى منطقة تحت الجلد وضبط اتجاه الإبرة الداخلية قليلاً للقص.
    1. إذا فشلت المحاولات الثلاث، تجنب الوريد subclavian من نفس الجانب واستخدام الجانب كونترالاتيرال لأخذ عينات من الدم.
  4. بعد جمع الدم، وإزالة ثقب الإبرة، وتطبيق الضغط على الموقع ثقب لمدة 1-2 دقيقة لوقف النزيف.
    ملاحظة: يجب أن يكون الضغط لطيف جداً لمنع الاختناق.

3-الدم عينة التجهيز

  1. نقل عينة الدم إلى أنبوب معدني مغلف تخثر الدم (مع يدتا) وجهاز الطرد المركزي لمدة 10 دقيقة في 1600 x ز جمع البلازما.
  2. نضح المادة طافية في أنبوب نظيف ومخزن في-80 درجة مئوية (الشكل 6).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

إجمالي 20 SD الفئران (ن الذكور = 10، الإناث n = 10) واستخدمت هنا. كوليكتيونواس الدم أداء المشغلين المهرة، الذين أدوا أكثر من 20 من أخذ عينات الدم من الوريد subclavian في الفئران، ومشغلي المبتدئين، الذين لديهم ثقب الوريد subclavian لا خبرة في الفئران أو غيرها من الحيوانات. قبل العمليات، شاهدت المبتدئين على الأقل 3 إجراءات القيام بالمشغلين المهرة.

أخذ عينات من الدم ونجحت في الفئران 17 من خلال الوصول الصحيح subclavian الوريد. فشل ه...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

هنا، نحن نقدم طريقة بديلة لاستخراج الدم من الوريد subclavian ونظهر أن هذا الأسلوب مجدية وآمنة، والمطبقة لأخذ عينات من الدم في الفئران. هذا الأسلوب مشتق من ثقب الوريد subclavian في زرع منظم ضربات القلب يؤدي للمرضى11. يقع الخلفي فقط ووالذيليه الترقوة على المنوال subclavian وهو استمرار الوريد الابطي. يتم تشغيله من الحد الخارجي للضلع الأول للحدود الآنسي الأمامي سكلين العضلات12. من هنا، فإنه ينضم مع حبل الوريد الداخلي لتشكيل الوريد brachiocephalic وأقنية الصرف الصحي في سوبر الور...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

وأيد هذا العمل المنحة من مؤسسة العلوم الطبيعية الوطنية لرقم الصين 81670269 ورقم 81500355 ورقم 81500226.

شكر وتقدير

لم يصرح بشيء.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
الفئرانهونان SJA مختبر المحدودة (تشانغشا ، مقاطعة هونان ، الصين)   ؛
البرمجيات الثابتةSPSS Statistics 17
وكيل إزالة الشعرفرنسا Yi Sha مستحضرات التجميل المحدودة (قوانغتشو ، مقاطعة قوانغدونغ ، الصين)
2.5 مل حقنةشاندونغ Weigao مجموعة البوليمر الطبي المحدودة (ويهاي ، مقاطعة شاندونغ ، الصين)
ماكينة حلاقةالشعر شنغهاي FLYCO الكهربائية المحدودة (شنغهاي ، الصين)
شريط لاصق3M Deutschland GmbH (EdisonstraBe 6،59157 Kamen ، ألمانيا)
Pentobarbital الصوديومMerck
75٪ الإيثانولقسم الصيدلة ، مستشفى Xiangya الثاني لجامعة
أنبوب جمعالدم Hubei Jinxing Technology & التنمية المحدودة (ووهان مقاطعة هوبى ، الصين) (2 مل)
مقياس إلكترونيدونغقوان Shengheng للإلكترونيات المحدودة (دونغقوان ، مقاطعة قوانغدنج ، الصين)
قفازات قماشللتخدير
hepainنانجينغ Xinbai الصيدلانية & nbsp ؛ المحدودة (نانجينغ ، مقاطعة جيانغسو ، الصين) (2 مل ، 12500 وحدة دولية) محلول
ملحيفيزيائيشركة هونان كيلون للأدوية المحدودة (يوييانغ ، مقاطعة هونان ، الصين) (100 مل)
وسط جنوب

المراجع

  1. Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. Journal of Pharmacology, Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).
  2. Korfmacher, W., et al. Utility of capillary microsampling for rat pharmacokinetic studies: Comparison of tail-vein bleed to jugular vein cannula sampling. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 76, 7-14 (2015).
  3. Feng, J., et al. Catheterization of the carotid artery and jugular vein to perform hemodynamic measures, infusions and blood sampling in a conscious rat model. Journal of Visualized Experiments. (95), (2015).
  4. Wickremsinhe, E. R., Renninger, M., Paulman, A., Pritt, M., Schultze, A. E. Impact of Repeated Tail Clip and Saphenous Vein Phlebotomy on Rats Used in Toxicology Studies. Toxicologic Pathology. 44 (7), 1013-1020 (2016).
  5. Takahashi, M., Makino, S., Kikkawa, T., Osumi, N. Preparation of rat serum suitable for mammalian whole embryo culture. Journal of Visualized Experiments. (90), e51969(2014).
  6. Cochran, B. J., et al. Determining Glucose Metabolism Kinetics Using 18F-FDG Micro-PET/CT. Journal of Visualized Experiments. (123), (2017).
  7. Beeton, C., Garcia, A., Chandy, K. G. Drawing blood from rats through the saphenous vein and by cardiac puncture. Journal of Visualized Experiments. (7), 266(2007).
  8. Zou, W., et al. Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System. Journal of Visualized Experiments. (130), (2017).
  9. Kilkenny, C., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution. Lab Animal. 44 (4), 377-378 (2010).
  10. National Institute of Health. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. , 8th, National Academies Press (US). US (Washington DC). (2011).
  11. Antonelli, D., Feldman, A., Freedberg, N. A., Turgeman, Y. Axillary vein puncture without contrast venography for pacemaker and defibrillator leads implantation. Pacing and Clinical Electrophysiology. 36 (9), 1107-1110 (2013).
  12. Luis, A. L., et al. Microscopic magnetic resonance imaging of the thoracic venous system in rats with congenital diaphragmatic hernia. Pediatric Surgery International. 27 (2), 175-180 (2011).
  13. Tsukamoto, A., Serizawa, K., Sato, R., Yamazaki, J., Inomata, T. Vital signs monitoring during injectable and inhalant anesthesia in mice. Experimental Animals. 64 (1), 57-64 (2015).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة