يصف لنا بروتوكولا سهلة مصممة خصيصا للوصول إلى التركيزات الدقيقة والتي تسيطر عليها من سيفوفلوراني أو إيسوفلوراني في المختبر بغية تحسين فهمنا للآليات التي تشارك في إصابة الرئة الظهارية واختبار الرواية العلاج لمتلازمة الضائقة التنفسية الحادة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
في المختبر أسلوب التحكم بتركيزات غازات المهلجنة في استزراع الخلايا الظهارية السنخية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
متلازمة الضائقة التنفسية الحادة (اردز) مرض منتشر الإصابة السنخية مع إزالة السوائل السنخية البصر والتهاب حاد. استخدام وكلاء المهلجنة، مثل سيفوفلوراني أو إيسوفلوراني، لتخدير المرضى في وحدة العناية المركزة (اتحاد المحاكم الإسلامية) يمكن تحسين تبادل الغازات والحد من الوذمة السنخية، وتخفف من التهاب أثناء الضائقة. ومع ذلك، تفتقر إلى البيانات المتعلقة باستخدام العوامل المستنشقة للتخدير المستمر في وحدة العناية المركزة لعلاج أو منع تلف الرئة. لدراسة آثار وكلاء المهلجنة في الخلايا الظهارية السنخية في ظروف "الفسيولوجية"، وصف نظام سهل لخلايا الثقافة في واجهة الهواء السائل ويعرضهم لوكلاء المهلجنة لتوفير الكسور الدقيقة التي تسيطر عليها "الهواء" و "المتوسطة" التركيزات لهذه العوامل. قمنا بتطوير دائرة الغلق مختومة التي يمكن أن تتعرض لوحات مع الخلايا البشرية السنخية الظهارية مخلدة لكسر الدقيقة، التي تسيطر عليها سيفوفلوراني أو إيسوفلوراني باستخدام تدفق غاز مستمرة المقدمة من دائرة آلة مخدر. تعرض الخلايا إلى 4% سيفوفلوراني و 1% من إيسوفلوراني لمدة 24 ساعة. أجرى الغاز الكتلي لتحديد تركيز وكلاء المهلجنة حله في المتوسط. بعد الأول ساعة، وتركيزات سيفوفلوراني وإيسوفلوراني في المتوسط كانت 251 مغ/لتر و 25 مغ/لتر، على التوالي. حل منحنيات تمثل تركيزات سيفوفلوراني وإيسوفلوراني على المديين المتوسط وأظهرت دورات مماثلة على مر الزمن، مع هضبة الذي تم التوصل إليه في ساعة واحدة بعد التعرض.
هذا البروتوكول صمم خصيصا لتصل إلى تركيزات محددة والتي تسيطر عليها من سيفوفلوراني أو إيسوفلوراني في المختبر لتحسين فهمنا للآليات التي تشارك في إصابة الرئة الظهارية خلال الضائقة واختبار علاجات جديدة متلازمة.
المقدمة
متلازمة الضائقة التنفسية الحادة (اردز) متلازمة سريرية تتميز بإصابة التهاب منتشر وذمة الرئة هيبوكسيميك فشل في الجهاز التنفسي. على الرغم من الضائقة يمثل أكثر من 10% قبول في وحدة الرعاية المركزة (اتحاد المحاكم الإسلامية) وما يقرب من 25 في المائة من مرضى العناية المركزة التي تتطلب التهوية الميكانيكية، إلا أنها لا تزال تشكل تحديا المعترف بها بالنسبة للأطباء، مع معدل وفيات مستشفى من 35-45%1. على الرغم من الأبحاث المكثفة، لم تاريخ تحديد فعالية الضائقة دوائية العلاج أو الوقاية. اثنين من الميزات الرئيسية المساهمة في معدلات الوفيات في الضائقة: ضعف في إزالة السوائل السنخية (كأس آسيا) (أي، غيرت ارتشاف السوائل ذمة السنخية من أجوائها الرئة القاصي) و....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1-ثقافة "الخلايا الظهارية السنخية" (حلبي)
- ذوبان الجليد
- "الماصة؛" 4 مل من زراعة جاهزة للاستخدام البشري السنخية الظهارية (هوايك) المتوسطة في أنبوب بلاستيك 15 مل وسرعة ذوبان الجليد القنينة في حمام مائي مسخن (37 درجة مئوية).
- نقل تعليق خلية المذابة إلى أنبوب بلاستيك 15 مل يحتوي على 4 مل المتوسط قبل سينتريفوجينج الأنبوبة في 200 غ س لمدة 5 دقائق.
- نضح المادة طافية وبيليه الخلية مع 5 مل المتوسط زراعة ريسوسبيند. ثم قم بنقل الخلايا إلى قارورة T25.
- زراعة الخلايا تحت الظروف القياسية (5% CO2, 95% هوميديفيد الجوية, 37 درجة مئوية)
- تقسيم
- التحقق من حالة الخلايا مجهريا. عندما تكون الخلايا روافد ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
التركيزات من سيفوفلوراني وإيسوفلوراني، التي حلت في الأجل المتوسط على مر الزمن، ترد في الجدول 1 و الجدول 2، على التوالي.
الدورات الدراسية لتركيزات سيفوفلوراني وإيسوفلوراني في الأجل المتوسط كانت متشابهة مع مرور الوقت. فورا بعد أن تم تعيين تركيز مطلوب عامل المهلجنة، ارتفعت تركيزات خلال الساعة الأولى. ثم التوصل إلى هضبة، التي استمرت حتى تم إيقاف إدارة عامل المهلجنة. وبعد انقطاع الإدارة، انخفضت تركيز.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
لدينا بروتوكول وصف طريقة سهلة للكشف عن خلايا لجزء محدد من عامل مخدر المهلجنة، مثل سيفوفلوراني أو إيسوفلوراني. وعلاوة على ذلك، لدينا تقرير هنا – لأول مرة – علاقة صارمة بين الكسر الغاز وتركيز سيفوفلوراني وإيسوفلوراني داخل المتوسطة الثقافة نفسها. هذه الخطوة الأساسية الآن يسمح لنا باستخدام أمان لدينا غرفة الغلق لدراسة آثار هذه العوامل المهلجنة في أحادي الطبقة مثقف للخلايا الظهارية السنخية البشرية.
حاليا، تستخدم معظم فرق البحث دراسة آثار سيفوفلوراني في الخلايا السنخية جرة أولاً المشبعة بالغاز المهل.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب يعلن أن لديهم لا تضارب المصالح المالية.
شكر وتقدير
الكتاب يعترف المجلس الإقليمي اوفرن ("برنامج نوفو تشيرتشيور de la ضمور اوفيرني" عام 2013) والفرنسية الوكالة الوطنية للبحث ودي الاتجاه Générale de L'Offre سوينس (برنامج بحوث de ترانسلاتيوننيلي en "الصحة" ANR-13-PRTS-0010) للمنح. وكان الممولين لا تؤثر في تصميم الدراسة والسلوك، والتحليل، أو في إعداد هذه المادة.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| سيفوفلوران | باكستر | يجب تثبيط إجراء التجارب باستخدام سيفوفلوران أو إيزوفلوران أثناء الحمل بشدة | |
| Isoflurane | Virbac | يجب تثبيط إجراء التجارب باستخدام سيفوفلوران أو الأيزوفلوران أثناء الحمل بشدة | |
| الخلايا الظهارية السنخية البشرية | InScreenex | INS-CI-1015 | |
| huAEC Medium ( جاهز للاستخدام) | InScreenex | INS-ME-1013-500 مل | |
| دائرة آلة التخدير | دراجر | فابيوس | |
| محلل غاز | دراجر | فاموس بلس | |
| فلتر غاز التخدير | سيدانا طبي | فلور مرطبات | |
| ساخنة | فيشر & Paykel | MR850 | |
| Chamber | Curver | 00012-416-00 | |
| كروماتوغرافيا الغاز إلى جانب الكشف | الكتلة Thermo Fisher Scientific ، سان خوسيه ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية | Trace 1310 مع عمود السيليكا المنصهرة TSQ 8000evo | |
| (30 م × 1.4 &# 956 ؛ م ، 0.25 مم ID) | Restek ، Lisses ، فرنسا | Rxi-624Sil MS |
المراجع
- Bellani, G., Laffey, J. G., et al. Epidemiology, Patterns of Care, and Mortality for Patients With Acute Respiratory Distress Syndrome in Intensive Care Units in 50 Countries. JAMA:T Journal of the American Medical Association. 315 (8), 788-800 (2016).
- Thompson, B. T., Chambers, R. C., Liu, K. D.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
