توفر هذه المقالة طريقة فعالة ومجدية لبناء أوراق الخلايا الجذعية متعددة الطبقات مع خاصية الخلايا الجذعية مواتية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
بناء ورقة الطبقات الوسيطة من الخلايا الجذعية مع نظام 3D دينامية الثقافة
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
العلاج بالخلايا الجذعية يظهر مبشرة بالخير مستقبلا في تجديد الجهاز المصاب والأنسجة، وقد وضعت الخلية ورقة تقنية لتحسين استبقاء خلية منخفضة وبقاء الفقراء داخل المنطقة الهدف. ومع ذلك، أثناء عملية البناء في المختبر ، إيجاد حل للحفاظ على الخلايا الجذعية بيواكتيفيتي وزيادة حجم الخلية داخل الخلية الورقة حاجة ملحة. هنا، يقدم هذا البروتوكول طريقة لبناء ورقة خلية متعددة الطبقات مع بيواكتيفيتي الخلايا الجذعية مواتية وقابلية التشغيل الأمثل. تامور الخنزيري ديسيلولاريزيد (الحزب الديمقراطي التقدمي) أعدها phospholipase طريقة ديسيلولاريزيشن2 (جيش التحرير الشعبي الصيني2) سقالة خلية ورقة، وهي معزولة الفئران نخاع العظام الخلايا الجذعية الوسيطة (بمسكس) وتوسيع كخلايا المصنف. يتكون هيكل ورقة مؤقتة الخلية متعدد الطبقات باستخدام RAD16--أنا هيدروجيل الببتيد. وأخيراً، هو مثقف الورقة خلية مع نظام التروية دينامية لتحقيق الاستقرار في هيكل ثلاثي الأبعاد (3D)، والورقة الخلية يمكن الحصول عليها بعد ثقافة 48 ساعة في المختبر. هذا البروتوكول يوفر طريقة فعالة ومجدية لبناء ورقة خلايا الجذعية المتعددة الطبقات، والورقة خلية يمكن تطويرها كمنتج علاج بخلايا الجذعية مواتية في المستقبل.
المقدمة
وقد تم الإبلاغ عن العلاج بالخلايا الجذعية كعلاج فعال للعديد من الأمراض؛ ومع ذلك، استبقاء خلية منخفضة وبقاء الفقراء داخل المنطقة الهدف تظل القضايا الحرجة بعد حقن الخلايا الجذعية التقليدية. لحل هذه المشكلة، وضع علماء هندسة الأنسجة خلية ورقة تقنية. أعدت ورقة خلية مونولاييريد مع المصفوفة خارج الخلية سليمة أولاً باستخدام طبق ثقافة الاستجابة لدرجة الحرارة1، وأفادت به دراسات المتابعة تحسينات هامة للاحتفاظ بالخلايا الجذعية، والبقاء على قيد الحياة داخل إينفاركتيد المجال2،3. من بين الأساليب، سجلت بناء الورقة خلية متعددة الطبقات كاستراتيجية فعالة لتحسين بقاء الخلية والخلية ورقة التأثير العلاجي
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
جميع الخلايا الجذعية وإجراءات التجربة الحيوانية كانت تجري وفقا للمبادئ التوجيهية الأخلاقية "الدليل الوطني" لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية ووافقت عليها لجنة الاستخدام (قوانغتشو، الصين) وجامعة جينان العناية بالحيوان.
1-إعداد السقالة النيابة العامة مع ديسيلولاريزيشن2 جيش التحرير الشعبي الصيني الأسلوب14
ملاحظة: انظر الشكل 1A لتخطيطي للأسلوب ديسيلولاريزيشن2 جيش التحرير الشعبي الصيني.
- تحضير 100 مل من جيش التحرير الشعبي الصيني يو/مليلتر 2002 الحل. إضافة 0.5 غ من ديوكسيتشولاتي الصوديوم و 2 مل من جيش التحرير الشعبي الصيني....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
ويرد في الشكل 1التخطيطي التشييد ورقة الخلايا الجذعية متعددة الطبقات. إعداد السقالة ورقة الخلية بواسطة الأسلوب ديسيلولاريزيشن2 جيش التحرير الشعبي الصيني هو الخطوة الأولى. بناء على السقالة، شيد هيكل خلية 3D مؤقتة بخلط الخلايا الجذعية مع hydrogel الببتيد RAD16-1. من أجل الحصول على ورقة خلية متعددة الطبقات مع بيواكتيفيتي الخلايا الجذعية مواتية والقوة الميكانيكية الأمثل، هو مثقف الورقة الخلية في نظام التروية دينامية. تحت إمدادات التغذية الحيوية، مسموح ب.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هذا البروتوكول التقارير وسيلة فعالة لبناء ورقة MSC متعدد الطبقات. يسلك هذه الورقة الخلية أمثل القوة الميكانيكية وخلية عالية الكثافة بذر بيواكتيفيتي الخلايا الجذعية مواتية. استخدام بمسكس على سبيل مثال، يتم إنشاء هيكل الخلية 3D بسرعة مع RAD16--أنا هيدروجيل الببتيد. بعد يجري المستزرعة في النظام نضح دينامية، بنجاح الحصول على الورقة بمسك متعدد الطبقات وبمسكس الحفاظ على تعبير عالية من الخلايا الجذعية علامات.
تشييد هيكل الخلية متعدد الطبقات المؤقتة هو الخطوة الحاسمة للبروتوكول. RAD16-ببتيد المائية تج.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
هذا العمل كان تدعمها "مؤسسة العلوم الطبيعية الوطنية الصينية" (رقم المنحة 31771064)؛ العلوم والتكنولوجيا تخطيط المشروع من مقاطعة قوانغدونغ (منحة الأرقام 2013B010404030 و 2014A010105029 و 2016A020214012)؛ العلوم والتكنولوجيا تخطيط المشروع من قوانغتشو (رقم المنحة 201607010063)؛ والمرحلة الجامعية الابتكار وتنظيم برنامج تدريبي (رقم المنحة 201610559028)؛ المؤسسة الوطنية للعلوم "العلماء الشباب من الصين" (منح رقم 31800819).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| فوسفوليباز A2 | Sigma-Aldrich | P6534 | |
| ديوكسيكولات الصوديوم | سيجما-ألدريتش | D6750-100G | |
| عازلة الفوسفات | Gibco BRL | 89033 | |
| البنسلين ستربتومايسين / أمفوتريسين | Gibco BRL | 15640055 | |
| عازلة بيكربونات | Sigma-Aldrich | C3041 | |
| مكثف الطاولة | Changzhou Aohua Instrument Co. | KT20183 | |
| Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) Corning | Cellgro | 10-014-CVR | |
| مصل الأبقار الجنينية في أمريكا الجنوبية ؛ | Gibco BRL | 10270-106 / P30-3302 | |
| L-Glutamine | Corning Cellgro | 25-005-CI | |
| 0.25٪ Trypsin / 2.21 mM EDTA | Corning Cellgro | 25-053-CI | |
| خزانة السلامة الحيوية | Esco ، سنغافورة | AC2-2S1 | |
| حاضنة درجة حرارة ثابتة ؛ | Esco,سنغافورة | CLS-170B-8 | |
| أنبوب الطرد المركزي | كورنينج | 430790 | |
| EP أنبوب | Axygen | 31617934 | |
| آلة الطرد المركزي | TOMOS | 1-16R & nbsp ؛ | |
| السكروز | سيجما ألدريتش | S9378-500G | |
| بورا ماتريكس | BD | 354250 | |
| نظام ثقافة التروية الديناميكية | Minucells and Minutissue | D-93077 | |
| مضخة التمعج | Ismatec | IPC N8 | |
| أنابيب المضخة | Ismatec | Nr.1306 | |
| MINUSHEET 1300 | الأنسجة ريغنسبورغ | ||
| نظام التروية الديناميكية MINUSHEET | Regensburg | ||
| MINUSHEET 0006 | معدات تبادل الغاز Regensburg | ||
| MINUSHEET 0002 | Regensburg | زجاجة زجاجية 500 مل | |
| مينوشيت 1301 | حاوية ثقافة التروية |
المراجع
- Miyahara, Y., et al. Monolayered mesenchymal stem cells repair scarred myocardium after myocardial infarction. Nature Medicine. 12 (4), 459-465 (2006).
- Narita, T., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
