ويصف هذا العمل استنساخ عبئا مايديس Ustilago حصان طروادة لإيصال بروتينات الذرة يفرز في الموقع إلى ثلاثة أنواع مختلفة من الأنسجة الذرة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
استخدام مايديس Ustilago كحصان طروادة "إيصال بروتينات الذرة في الموقع"
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
مستوحاة من أسطورة حصان طروادة Homer´s، نحن هندسيا الممرض مايديس Ustilago توصيل البروتينات يفرزها إلى أبوبلاست الذرة التي تسمح بتحليل المظهرية المجراة في الذرة. هذا الأسلوب لا يعتمد على تحويل الذرة ولكن يستغل قدرات الافرازية من مسببات الأمراض وعلم الوراثة الميكروبية. هذه الوثيقة، فإنه يسمح تفتيش المجراة في تسليم البروتينات يفرزها مع ارتفاع القرار الزمانية المكانية في أنواع مختلفة من مواقع الإصابة والأنسجة. يمكن استخدامها لعابر يكمل الذرة خسارة للدالة تعمل، لتوصيف وظيفيا نطاقات البروتين، لتحليل آثار البروتين خارج الهدف، أو لدراسة البروتين هدوئي الجرعة الزائدة، مما يجعله أداة قوية لاستراتيجية حصان طروادة دراسات البروتين في النظام محصول الذرة. ويتضمن هذا العمل بروتوكول دقيق بشأن كيفية توليد سلالة حصان طروادة تليها البروتوكولات العدوى موحدة لتطبيق هذا الأسلوب على ثلاثة أنواع مختلفة من الأنسجة الذرة.
المقدمة
الممرض بيوتروفيك مايديس Ustilago هو المسبّب ل مرض التفحم الذرة1. أنه يصيب جميع أجزاء الجوي من الذرة الناتج في الأورام الكبيرة التي تحتوي على جراثيم ميلانيزيد، أسود. على الصعيد العالمي، يقدر مايديس U. يسبب خسارة سنوية من حوالي 2 في المائة محصول الذرة، بينما تقدر الأورام كطعام شهي تذوقي في المكسيك. مصنع العدوى هو بدأها أبريسوريوم التي تفرز الإنزيمات ليسينج جدار الخلية لاختراق الطبقة الأولى من خلايا البشرة الذرة. من موقع إصابة الأولية، ينمو مايديس U. إينتراسيلولارلي وإينتيرسيلولارلي، وغزو الخلية واحد إلى اثنين طبقات كل يوم1،2. نتائج الإصابة بنجاح في تضخم النباتات التي تتحول إلى أورام مرئية إلى خمسة أيام بعد الإصابة1،،من34. خلال جميع مراحل العدوى، إينفاجيناتي الفطرية خيوط فطرية الغشاء الهيولى المصنع دون أي اتصال مباشر إلى1،السيتوبلازم المضيف2. أبوبلاسميك ضيق المساحة بين خيوط فطرية إصابة وغشاء البلازما النبات يعتبر الموقع المضيف/الممرض التفاعلية، وتسمى منطقة التفاعل بيوتروفيك. وللتغلب على نظام المناعة الفطرية النباتية، تفرز U. مايديس صفيف بروتينات المستجيب في منطقة التفاعل بيوتروفيك1. وتتخذ بعض المستجيبة بالخلايا النباتية، بينما البعض الآخر لا يزال في بيوتروفيك تفاعل المنطقة5،6،،من78. واحد أبوبلاستيك المستجيب هو UmPit2، الذي يتفاعل مع البروتياز أبوبلاستيك الذرة لمنع الإفراج عن الببتيد ZmZIP1 من زمبروزيب،أبوبلاستيك البروتياز النشاط9مما يشير إلى10.
على مدى العقود الماضية، U. مايديس أصبح ليس إلا نموذجا لعلم الوراثة الفطرية في تفاعل الكائنات الممرضة النباتية، ولكن أيضا أداة قيمة في مجال التكنولوجيا الأحيائية بسبب دورة الحياة مفهومة جيدا، سهولة الوراثية وتعبير مغايرة يفرز البروتينات11،،من1213. إشارات لإفراز البروتين التقليدية وغير التقليدية على حد سواء قد تم تحديد السماح بالتحكم في تعديلات بوستترانسلاشونال14. في الآونة الأخيرة، استخدمت U. مايديس كأداة حصان طروادة لدراسة صغيرة، ويفرز البروتينات الذرة في الموقع15. النهج حصان طروادة الذي استخدمت بنجاح لتحليل وظيفة البروتين الصغيرة، ويفرز ZmMAC1 التي تشارك في وضع العضو الذكرى. ZmMAC1 يدفع شعبة بيريكلينال pluripotent الخلايا ومواصفات مصير خلية من خلايا المنشأ حديثا15. بنفس الطريقة، كشف عن الوظيفة البيولوجية للذرة الببتيد المرتبط بالضرر ZmZIP1. مايديس U. إفراز الذرة ZmZIP1 أدت إلى إعاقة الورم تشكيل10. وهكذا، تمثل النهج حصان طروادة طريقا بديلة قيماً للبروتين في دراسات الموقع مع ارتفاع القرار الزمانية المكانية التي لا لا تتطلب توليد خطوط تحويل الذرة مستقرة ولا تسلل الأنسجة مع هيتيرولوجوسلي أعرب عنه وتنقية البروتينات. على وجه الخصوص، استراتيجية حصان طروادة يتيح إفراز أي البروتين مغايرة في أبوبلاست الذرة والمقارنة المباشرة للمصابين مقابل الخلايا النباتية غير المصابة داخل النسيج نفسه.
هذا البروتوكول يوضح الخطوات الرئيسية لتوليد عبئا حصان طروادة مايديس الولايات المتحدة لدراسة وتين فائدة. كذلك يتضمن معلومات دقيقة عن إجراءات العدوى من ثلاثة أنواع مختلفة من الأنسجة الذرة (أوراق الكبار، شرابات وآذان) مع مايديس شين، الذي شرط أساسي لدراسة وظيفة البروتين وتطور الإصابة الزمانية المكانية في هذه الأنسجة المستهدفة. أي مواصفات أخرى معين على الذرة الجينات التضخيم والمجهري تقنيات، التصوير منذ هذه الخطوات محددة الهدف وتعتمد على الصك. وهكذا، هذا البروتوكول هو موجهة إلى المستخدمين ذوي الخبرة من تقنيات البيولوجيا الجزيئية القياسية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1-بناء حصان طروادة مايديس u.
ملاحظة: انظر الشكل 1.
- تضخيم جين للفائدة من الذرة كدنا استخدام الإشعال الخاصة بالجينات وتصحيح التجارب المطبعية بوليميريز الحمض النووي. استنساخ المنتج بكر الأولية وتحويل بنية كولاي اتباع الإرشادات الخاصة بالمورد بلازميد. تحقق من الجين الصحيح لتسلسل الفائدة سانغر التسلسل قبل استخدامها لاستنساخ الخطوات المقبلة.
ملاحظة: مواصفات بكر تحتاج إلى أن يكون الأمثل نظراً لخصوصيات تسلسل التمهيدي وشروط الرد الأمثل دنا بوليميريز. - تصميم كبسولة تفجير لتضخيم الجين الذرة من الفائدة دون تسلسل الترميز إشارة هضميد (SP).
- تمديد نهاية 5´ التمهيدي عكسي مع فكرة رسياتا و ضابط صفأنا قطع الموقع (الجدول 1).
- تضخيم الجين الذرة للفائدة مع بوليميريز الحمض النووي تصحيح التجارب المطبعية استخدام بنية بكر ولدت في 1.1 كقالب PCR.
- مزدوج-خلاصة المنتج بكر وبلازميد التحول U. مايديس ، p123-سأمpit2-سأمpit2-Zmmac1-مشري-ها15، مع إكسباو ضابط صف أولاً تنقية المنتج بكر وبلازميد هضمها.
- اضطر المنتج بكر هضمها في p123-سأمpit2-سأمpit2-Zmmac1-مشري-ها القالب باستخدام الحمض النووي T4 ليجاسى اتباع التعليمات manufacturer´s. تحويل المنتج ربط كولاي والتحقق من الجين الصحيح لتسلسل الاهتمام سانغر التسلسل.
- لينيريزي p123-سأمpit2-سأمpit2-Zmالجينات للفائدة-مشري-ها مع إنزيم التقييد Sspالأول وتحويل الحمض النووي في الولايات المتحدة سولوباثوجينيك مايديس سلالة SG20016. عزل ترانسفورمانتس مايديس الولايات المتحدة بالتحديد كاربوكسين وتأكيد ترانسفورمانتس معزولة بالجنوب لطخة تحليل16.
ملاحظة: لكل البروتين من الفائدة، مستقلة على الأقل ثلاثة مايديس U. ترانسفورمانتس ينبغي أن تكون معزولة وتحليلها لتقدير آثار النمط الظاهري أي خلفية عشوائية الطفرات.
2-ثقافة وسائل الإعلام
- إعداد ييبسلايت السائلة متوسطة16: استخراج الخميرة 1.0% (w/v)، 0.4% (w/v) باكتو-ببتون، والسكروز 0.4% (w/v). تذوب جميع المكونات في ddH2س والاوتوكلاف في 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة؛ التعقيم في درجة حرارة أعلى، لفترة أطول من الوقت أو بصورة متكررة وسوف يقلل من جودة المتوسطة.
- إعداد البطاطا-سكر العنب-أجار (PD-أجار)20: أجار سكر العنب البطاطا 3.9% (w/v)، و 1.0% (w/v) 1 م تريس-HCl pH 8.0 (نادي 0.01 M). مزيج جميع المكونات في الزجاجة للتعقيم مباشرة وإضافة ddH2س بالإضافة إلى حانة إثارة مغناطيسية. اﻷوتوكﻻف في 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة؛ التعقيم في درجة حرارة أعلى، لفترة أطول من الوقت أو بصورة متكررة وسوف يقلل من جودة المتوسطة.
- إعداد PD-الفحم أجار20: 3.9% (w/v) البطاطا الدكستروز أجار والفحم 1% (w/v) 1.0% (v/v) 1 م تريس-HCl pH 8.0 (نادي 0.01 M). مزيج جميع المكونات في الزجاجة للتعقيم مباشرة وإضافة ddH2س بالإضافة إلى حانة إثارة مغناطيسية. اﻷوتوكﻻف في 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة؛ التعقيم في درجة حرارة أعلى، لفترة أطول من الوقت أو بصورة متكررة وسوف يقلل من جودة المتوسطة.
3-مصنع العدوى
- إجراء تحليل لانقسام الخلية الذرة ردا على حصان طروادة تسليم البروتين (مثلاً، على أساس الفحص المجهري خلية العد) مسبقاً. U. مايديسالناجمة عن انتشار الخلايا الذرة ويبدأ تشكيل الورم اللاحقة حول 4-5 أيام بعد الإصابة. التقييمات الكمية المرض تعتمد على الأنسجة، وينبغي أن يتم من 6 إلى 14 يوما بعد الإصابة.
ملاحظة: أصناف الذرة متميزة تظهر مستويات مختلفة من التعرض للإصابة مايديس U. . الذرة جمقابل W23، A188، جاسب فلينت، أوائل الذهبي البنطم أو Va35 تظهر حساسية تجاه هذا الممرض وبالتالي فهي أصناف مناسبة للدراسات حصان طروادة. - إعداد العدوى مايديس u.
- وتشمل سلالة السلف SG200 كعنصر سلبي في كل حصان طروادة التجارب بغية تقدير الآثار الجانبية على العدوى بسلالة محوره وراثيا. هنا، استخدم سلالة مايديس الولايات المتحدة الإعراب عن نسخة غير يفرز البروتين من الفائدة كعنصر سلبي. ومع ذلك، لأسباب تتعلق بالطابع العملي (مثلاً، أكبر عروض)، سلالة السلف قد يكون الاختيار أسهل من التحكم.
- قبل البدء التجربة، تقدير ما كميات من عدوى الثقافة مطلوبة. نضع في اعتبارنا أن العدوى لكل مصنع يتطلب 1-1.5 مل تعليق مايديس الولايات المتحدة تعتمد على نوع النسيج الذرة.
ملاحظة: حوالي 1 مل ثقافة بين عشية وضحاها كافية لتمييع ل التطوير التنظيمي600 مل 0.2 في 20 من ييبسخفيفة متوسطة، ومل 25 ثقافة مايديس الولايات المتحدة مع OD600 من 0.8-1.0 كافية لعدوى نباتات 13-16. - الصفر مايديس U. من أجار PD لوحة باستخدام ماصة باستور معقمة وتطعيم في 5 مل من ييبسخفيفة متوسطة واسمحوا ثقافة تنمو في 28 درجة مئوية مع الهز المستمر في 200 لفة في الدقيقة ح 16.
- قبل الإصابة، دراسة ثقافة التطعيم مايديس شين بالفحص المجهري الخفيفة القياسية للنمو السليم والتلوث البكتيري في 400 X التكبير.
ملاحظة: في ثقافة مناسبة، وهو فقط على شكل السيجار الفطر مرئية (الشكل 2). - مزيج ميليلتر 900 من جديد ييبسالضوء مع 100 ميليلتر للثقافة بين عشية وضحاها، وقياس OD600 استخدام ييبسخفيفة متوسطة كقرص فارغ في تحليل جهاز المطياف الضوئي.
- تمييع الثقافة بين عشية وضحاها مع ييبسخفيفة متوسطة جديدة ل التطوير التنظيمي600 من 0.2 وترك ثقافة تنمو في 28 درجة مئوية مع الهز المستمر 200 لفة في الدقيقة حتى تصل إلى مرحلة النمو سجل منتصف المؤشرة التطوير التنظيمي600 نانومتر 0.8-1.0.
ملاحظة: U. مايديس الخلايا تكرار كل ح 2 في ظل هذه الظروف، وبالتالي التوصل إلى التطوير التنظيمي المطلوب600 بعد ح 4-5 من زراعة. - حصاد الخلايا OD600 من 0.8-1.0 بالغزل في 3,000 س ز لمدة 10 دقائق، وتجاهل المادة طافية.
- أغسل بيليه الخلية مرة واحدة مع ddH2o. لهذا الغرض، إضافة إلى حجم ثقافة واحدة من ddH2س، تدور مع 3000 x ز لمدة 10 دقائق وتجاهل المادة طافية.
- ريسوسبيند بيليه الخلية بعناية في ddH2س باستخدام ماصة زجاجية 20 مل، وبالتالي ضبط التطوير التنظيمي النهائي600 إلى 3.0 (بالنسبة مقايسة حصان طروادة) أو 1.0 (لتصنيف الأمراض).
- تحقق حصان طروادة: في إفراز بﻻنتا من البروتين الانصهار الذرة
- إصابة بذور الذرة مع سلالة حصان طروادة17.
- القيام بتصوير مجهرية من الشتلات المصابة في 2-3 أيام بعد العدوى باستخدام مجهر مسح ليزر [كنفوكل]. وتحقيقا لهذه الغاية، المكوس قطعة مستطيلة من ورقة 1 سم أسفل نقطة الحقن ووضع العينة على شريحة مجهر وإضافة قطره من ddH2o. أن تصور البروتينات الانصهار مشري، تثير عينة في λ = 561 نيوتن متر وسجل الانبعاثات في λ = 580-630 نيوتن متر.
- يترك عدوى ذرة الكبار
- زراعة نباتات الذرة إلى مرحلة يترك الكبار (عندما يقل نبات ينمو 7 داخل الساق).
ملاحظة: يتم الوصول إلى هذه المرحلة بعد أربعة أسابيع عند البذر تحت ظروف الاحتباس الحراري ح 14، 28 درجة مئوية اليوم/10 ح، وإيقاع ليلة 22 درجة مئوية باستخدام عام W23. قد تختلف المدة مع شروط الذرة الصنف والاحتباس الحراري. - نقل ثقافة مايديس U. (انظر 3.2.9) في محقن 3 مل مع إبرة حقن 20 × 1.
- اضغط ساق بعناية لتعريب الأنسجة أرض في الساق. ويمكن تمييز قاعدة أرض بانتقال من ساق أكثر صعوبة للأنسجة ليونة.
- وضع علامة أرض على ساق استخدام قلم.
- حقن 1.5 مل مايديس U. الثقافة 1 سم فوق أرض تبادل لإطلاق النار أو أرض نورات.
- معدل أعراض المرض في 6 و 12 يوما بعد الإصابة.
- زراعة نباتات الذرة إلى مرحلة يترك الكبار (عندما يقل نبات ينمو 7 داخل الساق).
- عدوى شرابات
- زراعة نباتات الذرة حتى وصلت إلى مرحلة شرابه.
ملاحظة: وكان وضع جدول زمني مفصل في التنمية العضو الذكرى وشرابه في عام الذرة W23 هو موضح سابقا18،19. شرابات المحتوية على أنثيرس هو ما قبل تكون عرضه للإصابة مايديس الولايات المتحدة ؛ في عام الذرة W23 شرابات بحجم 4-7 سم. - اضغط على ساق بعناية لتعريب الشرابة في الساق.
- وضع علامة على الحافة وقاعدة الشرابة على وقف استخدام قلم.
- نقل ثقافة مايديس U. (انظر 3.2.9) في محقن 3 مل مع إبرة حقن 20 × 1.
- حقن 1.5 مل العدوى حولها الشرابة. لضمان التوزيع المتساوي للعدوى، ببطء مكان كل 0.5 مل على الحافة والجزء الأوسط والقاعدة من شرابه تم وضع علامة بالقلم.
- معدل أعراض المرض في 10 أيام بعد الإصابة.
- زراعة نباتات الذرة حتى وصلت إلى مرحلة شرابه.
- عدوى آذان
ملاحظة: تطوير أنسجة الإذن تختلف في ظروف الاحتباس الحراري وأصناف الذرة متميزة ويجب أن يراعي بدقة قبل التطعيم. آذان بدأت تتفوق الحرير عرضه للعدوى U. مايديس .- نقل ثقافة مايديس U. (انظر 3.2.9) في محقن 3 مللي مع إبرة حقن 20 × 1.
- حقن إبرة التطعيم في المسافة بين أوراق قشر عميق قدر الإمكان دون إصابة الإذن.
- الإصدار 1.5 مل العدوى حول الإذن.
- إزالة حقنه بالإضافة إلى الإبر والتدليك بعناية الكوز لتوزيع حل مايديس الولايات المتحدة على قدم المساواة.
- معدل أعراض المرض في 14 يوما بعد الإصابة.
- التأكد من صلاحية العدوى مايديس u.
- إسقاط 10 ميليلتر من العدوى على طبق أجار فحم PD واحتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة يومين.
ملاحظة: إذا كان كل ثقافة مايديس الولايات المتحدة غير قادرة على شكل خيوط، الميسليوم الأبيض رقيق، وتصبح مرئية (الشكل 5)
- إسقاط 10 ميليلتر من العدوى على طبق أجار فحم PD واحتضان في درجة حرارة الغرفة لمدة يومين.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يتم استنساخ بنيات لإجراء التجارب على حصان طروادة U. مايديس إلى بلازميد ف p123أمpit2-سأمpit2-الجينات للاهتمام--متشيري--هكتار. الجين الذرة للفائدة هو تنصهر فيها مراسل مشري fluorescence وبيفرتون ها--الوسم. يتم التعبير عن البروتين الانصهار تحت سيطرة المروج مايديس الولايات المتحدة Umpit2 الذي يتم تنشيطه على وجه التحديد أثناء العدوى21. لإف...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
بحوث المحاصيل الحديثة تتطلب البروتوكولات للتحليل الجزيئي في الجينية ومستويات البروتين. الوصول الوراثية عن طريق التحول غير متاح أو غير فعال وتستغرق وقتاً طويلاً لمعظم أنواع المحاصيل مثل الذرة. وعلاوة على ذلك، الأدوات الوراثية الموثوقة، مثل نظم مراسل المروج نادرة، مما يجعل من الصعب على دراسة وظيفة البروتين في الموقع مع ارتفاع القرار الزمانية المكانية في مواقع متميزة من الأنسجة. يمكن دراسة البروتينات أبوبلاستيك بتسلل هيتيرولوجوسلي المعلنة وتنقية البروتينات داخل الأنسجة. على الرغم من أوجه التقدم في تعبير مغايرة من ا...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
الكتاب يود أن يشكر هيلدبراند أرمين ونور الدين ديلا، توماس دريسيلهاوس ومارتن بارنيسكي لتوفير مواد المختبر الفضائي ومحطة. كان يدعمها العمل الأصلي على طريقة حصان طروادة زمالة بوستدوك ليوبولدينا وجبهة الخلاص الوطني المشروع IOS13-39229. وأيد SFB924 (مشاريع A14 و B14) من DFG العمل المعروضة في هذه المقالة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
SSP < م > I NEB R0132 السكروز سيجما ألدريتش S0389 T4 DNA ligase NEB M0202 TRIS <
يستخدم المسح الضوئي بالليزر متحد البؤر 400 ضعف يمكن استبدال VWR 90000-745 يستخدم مقياس الطيف الضوئي المعدات المتاحة محليا
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 2 مل حقنة | ب. براون | 4606027 فولت | |
| 23 جم × 1 1/4 إبرة تحت الجلد | ب. براون | 4657640 | |
| باكتو بيبتون | BD | 211677 | |
| (كدنا) من الذرة | من أنسجة الذرة التي تعبر عن جين | ||
| الفحم المترابط | سيجما-ألدريتش | 05105 | |
| مجهر | المعدات المتوفرة | ||
| محليا Cuvette (10 مم × 4 مم × 45 مم) | Sarstedt | 67742 | |
| الحاضنة شاكر ضبط على 28 درجة ؛ C ، 200 دورة في الدقيقة | تستخدم المعدات المتاحة محليا | ||
| المجهر الخفيف مع تكبير | استخدام المعدات المتاحة | ||
| محلياNco< em> I | NEB | R0193 | |
| p123-PUmpit2-SpUmpit2-Zmmac1-mCherry-Ha< / em> | يرجى الاتصال بالمؤلف المراسل ؛ | ||
| ماصة باستور (زجاج ، طرف طويل) | VWR | 14673-043 | |
| pCR-Blunt-II-TOPO | Thermo Fisher Scientific | K280002 بناقلات الاستنساخ الأساسية الأخرى مثل pENTR أو pJET | |
| Potato Dextrose Agar ؛ | يستخدم قلم | ||
| Sharpie | المعدات المتاحة محليا | ||
| سيجما ألدريتش | TRIS-RO | ||
| em>Xba< / em> أنا | NEB | R0145 | |
| مستخلص الخميرة | 212750 | د.ب |
المراجع
- Kämper, J., et al. Insights from the genome of the biotrophic fungal plant pathogen Ustilago maydis. Nature. 444, 97-101 (2006).
- Doehlemann, G., et al. Establishment of compatibility in the Ustilago maydis/maize pathosystem. Journal of Plant Physiology. 165, 29-40 (2008).
- Matei, A., et al. How to make a tumour: cell type specific dissection of Ustilago maydis-induced tumour development in maize leaves. New Phytologist. , (2018).
- Doehlemann, G., et al. Reprogramming a maize plant: transcriptional and metabolic changes induced by the fungal biotroph Ustilago maydis. The Plant Journal. 56, 181-195 (2008).
- Doehlemann, G., et al. Pep1, a secreted effector protein of Ustilago maydis., is required for successful invasion of plant cells. PLOS Pathogens. 5, e1000290(2009).
- Redkar, A., et al. A secreted effector protein of Ustilago maydis guides maize leaf cells to form tumors. The Plant Cell. 27, 1332-1351 (2015).
- Djamei, A., et al. Metabolic priming by a secreted fungal effector. Nature. 478, 395-398 (2011).
- Tanaka, S., et al. A secreted Ustilago maydis effector promotes virulence by targeting anthocyanin biosynthesis in maize. eLife. 3, e01355(2014).
- Mueller, A. N., Ziemann, S., Treitschke, S., Assmann, D., Doehlemann, G. Compatibility in the Ustilago maydis-maize interaction requires inhibition of host cysteine proteases by the fungal effector Pit2. PLOS Pathogens. 9, e1003177(2013).
- Ziemann, S., et al. An apoplastic peptide activates salicylic acid signalling in maize. Nature Plants. 4, 172-180 (2018).
- Juárez-Montiel, M., et al. The corn smut ('Huitlacoche') as a new platform for oral vaccines. PLoS One. 10, e0133535(2015).
- Sarkari, P., Feldbrügge, M., Schipper, K. Gene Expression Systems in Fungi: Advancements and Applications. Schmoll, M., Dattenböck, C. , Springer International Publishing. 183-200 (2016).
- Monreal-Escalante, E., et al. The corn smut-made cholera oral vaccine is thermostable and induces long-lasting immunity in mouse. Journal of Biotechnology. 234, 1-6 (2016).
- Stock, J., et al. Applying unconventional secretion of the endochitinase Cts1 to export heterologous proteins in Ustilago maydis. Journal of Biotechnology. 161, 80-91 (2012).
- van der Linde, K., et al. Pathogen Trojan horse delivers bioactive host protein to alter maize (Zea mays) anther cell behavior in situ. The Plant Cell. 30, 528-542 (2018).
- Bösch, K., et al. Genetic manipulation of the plant pathogen Ustilago maydis to study fungal biology and plant microbe interactions. Journal of Visualized Experiments. , e54522(2016).
- Chavan, S., Smith, S. M. A rapid and efficient method for assessing pathogenicity of Ustilago maydis on maize and teosinte lines. Journal of Visualized Experiments. 50712, (2014).
- Kelliher, T., Walbot, V. Emergence and patterning of the five cell types of the Zea mays anther locule. Developmental Biology. 350, 32-49 (2011).
- Egger, R. L., Walbot, V. Quantifying Zea mays. tassel development and correlation with anther developmental stages as a guide for experimental studies. Maydica. 60, M34(2015).
- Holliday, R. Bacteria, Bacteriophages, and Fungi: Volume 1. King, R. C. , Springer US. 575-595 (1974).
- Doehlemann, G., Reissmann, S., Aßmann, D., Fleckenstein, M., Kahmann, R. Two linked genes encoding a secreted effector and a membrane protein are essential for Ustilago maydis-induced tumour formation. Molecular Microbiology. 81, 751-766 (2011).
- Banuett, F., Herskowitz, I. Different a alleles of Ustilago maydis are necessary for maintenance of filamentous growth but not for meiosis. Proceedings of the National Academy of Sciences. 86, 5878-5882 (1989).
- Bortfeld, M., Auffarth, K., Kahmann, R., Basse, C. W. The Ustilago maydis a2 mating-type locus genes lga2 and rga2 compromise pathogenicity in the absence of the mitochondrial p32 family protein Mrb1. The Plant Cell. 16, 2233-2248 (2004).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
