مقالة منهجية

استخدام مسببات الأمراض بكتيرية للتحقيق لاستجابات المضيف الخلوية ومستوى أورجانيسميك

DOI:

10.3791/58775

⸱

فبراير 22, 2019

 ,  ,  , 
1Department of Microbiology & Immunology, University of Miami Miller School of Medicine, 2Department of Microbiology & Immunology, University of Illinois College of Medicine

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ونحن تصف كلا فحوصات الإصابة في المختبر وفي الحية التي يمكن استخدامها لتحليل أنشطة العوامل المضيفة-ترميز.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وهناك مجموعة متنوعة من استراتيجيات توظيف مسببات الأمراض البكتيرية البقاء على قيد الحياة وتتكاثر مرة واحدة داخل الخلية حقيقية النواة. مسببات الأمراض ما يسمى 'سيتوسوليك' (الليستريه المستوحدة، فليكسنيري دوسنتارياو بوركهولدريا pseudomallei، فرانسيسيلا تولارنسيسو الريكتسية spp.) الوصول إلى سيتوسول الخلية المصابة بها جسديا وانزيماتيكالي اللاإنسانية الغشاء فاكولار الأولية. مرة واحدة في سيتوسول، هذه العوامل الممرضة سواء تتكاثر، فضلا عن إنشاء قوات ميكانيكية كافية لاختراق غشاء بلازما الخلية المضيفة لتصيب خلايا جديدة. وهنا نعرض كيف يمكن قياس التدفق الخلوي بتشكيل مستعمرة فحوصات وحدة هذه الخطوة المحطة الطرفية دورة العدوى الخلوية لام الليستريه (Lm) وإعطاء أمثلة عن كيف كلا تأثير العوامل الخاصة بالعوامل الممرضة والمضيفة المشفرة هذه عملية. نعرض أيضا إصابة تناظر وثيق Lm العدوى ديناميات الخلايا المزروعة في المختبر وتلك الخلايا الكبدية المستمدة من الفئران المصابة المجراة. هذه الاختبارات الدالة على أساس بسيط نسبيا ويمكن الارتقاء بسهولة للقائم على اكتشاف شاشات الفائق للتضمين وظيفة الخلية حقيقية النواة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نماذج تجريبية على أساس الإصابة بطبيعتها صعبة بسبب اعتمادها على ظروف انطلاق الدولة المضيفة والممرض ومختلف الاستراتيجيات الإصابة بمسببات المرض وصعوبة إسناد العمليات يحركها العوامل الممرضة والمضيفة استناداً إلى النتائج. بكتيريا الليستريه المستوحدة (Lm) قد أصبح ممرض مثالي سبر ردود الدفاع المضيف بسبب لها الصوبة الوراثية والميكروبيولوجية واستراتيجيتها للعدوى الخلوي السريع وبروسيسيفي وواضحة نسبيا العلاقة بين تعمل العدوى المستوى الخلوي وأورجانيسميك به. العدوى الخلوية من Lm العائدات من خلال أربع مراحل متميزة1: (ط) غزو الهاتف الخلوي الذي يختتم Lm يجري المحاطة المنقبضة؛ (ثانيا) Lm-توجه انحلال الغشاء المنقبضة وإطلاق Lm في سيتوسول؛ (ثالثا) النسخ المتماثل إينتراسيتوسوليك؛ واختراق غشاء البلازما تنتج أما العدوى من الخلايا المجاورة مباشرة (مثل ورقة الظهارية)، أو في زنزانات انفرادية، إطلاق سراح Lm في الوسط خارج الخلية الجسدية (رابعا). كل مرحلة من هذه المراحل التي تروجها محددة Lm-ترميز العوامل (يشار إليها على أنها 'عوامل الفوعة')، عند حذف، يسبب تشوهات العدوى في النماذج الخلوية والحيوانات على حد سواء. هذه الاستراتيجية العامة العدوى تطورت بشكل مستقل بعدد من العوامل الممرضة 'سيتوسوليك' ما يسمى2.

تشكيل مستعمرة فحوصات وحدة (زيمبابوي) تستخدم على نطاق واسع لتقييم سواء في المختبر (أي الخلوية) كذلك كما في الحية (أي، أورجانيسميك) نتائج الإصابة. بالإضافة إلى حساسيتها عالية، خاصة بالنسبة للإصابات في المجراة، توفير فحوصات زيمبابوي قراءات لا لبس فيها لغزو العوامل الممرضة والبقاء على قيد الحياة/الانتشار داخل الخلايا. فحوصات زيمبابوي قد استخدمت على نطاق واسع لتحليل المحددات خلية Lm والمضيفة التي تؤثر على الإصابة. وكانت هذه الدراسات السابقة لتحليل الغزو الخلوية والنسخ المتماثل إينتراسيتوسوليك الإعلامية، فحوصات زيمبابوي لم، على حد علمنا، تستخدم لتعقب المرحلة الرابعة من عملية العدوى Lm : الهروب الخلوية. هنا، يمكننا وصف بسيط نسبيا يمكن رصد وسائل الهروب كيف الخلوية (يشار إليه فيما يلي 'ظهور') مقايسة زيمبابوي (فضلا عن التدفق الخلوي) وأمثلة تبين كيف كل العوامل الخاصة بالعوامل الممرضة والمضيفة المشفرة تنظيم هذه المرحلة من Lm دورة العدوى. تحليل المرحلة النهائية من دورة العدوى Lm الخلوية قد تجعل من الممكن تحديد الممرض إضافية وعوامل محددة لعدوى الخلية المضيفة والأنشطة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الفئران يعاملون معاملة إنسانية وفقا لجميع المبادئ التوجيهية الحكومية المناسبة للرعاية و "استخدام الحيوانات المختبرية" "معاهد الصحة الوطنية" واستخدامها تمت الموافقة لهذه الدراسة بأكملها جامعة ميامي مؤسسات الرعاية الحيوانية و "استخدام اللجنة" (بروتوكول 16-053).

1. إعداد الخلايا للإصابة

  1. نشر خط الخلية مثل بلعم الماوس 264.7 الخام في وسائل الإعلام زرع الأنسجة دميم تستكمل مع مصل العجل الجنين 10% (يشار إليها من الآن فصاعدا دميم/FCS) باستخدام قارورة 125 مل وحاضنة استنبات الأنسجة الإبقاء على 37 °C/5% CO2.
  2. اليوم قبل الإصابة، استخدام مكشطة خلية إزالة خلايا من قارورة التوسع وجمع في أنبوب مخروطي ملولبة 15 مل. الطرد المركزي خلايا في 800 x غ لمدة 10 دقائق، وصب المادة طافية وتعليق بيليه الخلية في 1 مل من دميم/FCS (بدون المضادات الحيوية) وتحديد عيار استخدام هيموسيتوميتير أو عداد الآلي خلية.
  3. ضبط عيار إلى 2 × 106 خلايا/مل وإضافة مل 0.10 (2 × 105 خلايا) إلى الآبار لطبق استنبات الأنسجة 48-جيدا. التأكد من أن تعليق خلية يغطي كامل سطح البئر.
    1. لوحة خلايا في آبار إضافية عن مصدر لاحق لوسائل الإعلام مكيفة. كما وضع مل 0.10 من دميم/FCS في ثلاث آبار إضافية لتكون بمثابة 'لا خلية تحكم'.
  4. تبني بين عشية وضحاها في حاضنة زراعة الأنسجة في 37 °C/5% CO2. في اليوم التالي، لا تقم بإزالة من حاضنة حتى العدوى البكتيريا مستعدة وجاهزة للاستخدام.

2-إعداد الليستريه المستوحدة (Lm) للإصابة

  1. تلقيح 2 مل ضخ القلب الدماغ (بهي) مع مستعمرة واحدة من صفيحة أجار السنة اللهب أثناء طازجة (< 2 أيام) من Lm واحتضان بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية مع الهز في تناوب 130/دقيقة.
  2. في اليوم التالي، إضافة مل 0.10 من الثقافة بين عشية وضحاها إلى 2 مل قبل استعد بهي وتستمر حضانة في 37 درجة مئوية مع الهز حتى الكثافة البصرية (OD600) ما بين 0.4 و 0.6.
  3. تحديد عيار البكتيرية تقريبية استخدام صيغة تحويل المستمدة من التجربة العملية. في المختبر، ولدينا ثقافة Lm متزايدة أضعافاً مضاعفة في بهي هو حوالي 1.3 × 109 مستعمرة تشكيل وحدات (زيمبابوي)/OD600. تصغير مقدار الوقت الثقافات البكتيرية تتعرض لدرجة حرارة الغرفة.
  4. قبل الإصابة بضبط عيار 5 × 107 زيمبابوي/مل تستخدم دميم/FCS المعالجون مسبقاً كمخفف.

3-العدوى

  1. العمل بسرعة ودقة، إضافة 20 ميليلتر (1 × 106 زيمبابوي؛ تعدد العدوى، موي = 5) طازج Lm العدوى (الخطوة 2-4 أعلاه) إلى الآبار بإمالة الطبق قليلاً، ووضع بعناية نصيحة بيبيت في وسائط الإعلام السطحية؛
    ملاحظة: تجنب لمس جدران البئر مع تلميح بيبيت.
  2. بلطف بيبيت محتويات كل بئر لضمان إكمال خلط؛ لا اهتز أو إمالة اللوحة كبيرة كهذا سوف تنتشر Lm على جدران البئر. العودة طبق ثقافة الخلية إلى 37 °C/5% CO2 حاضنة.
  3. تعد حلاً جنتاميسين 10 ميكروغرام/مل باستخدام وسائل الإعلام مكيفة من الآبار غير مصاب كمخفف.
  4. في 30 دقيقة بعد الإصابة (mpi)، بعناية إضافة محتويات الخلية العودة الثقافة الطبق وكذلك قبل 30 ميليلتر من الجنتاميسين الحل (التركيز النهائي 2.5 ميكروغرام/مل) ولطف بيبيت إلى 37 °C/5% CO2 حاضنة.
  5. في 60 معهد ماكس بلانك، حصاد الآبار المناسبة لزيمبابوى المقايسة (60 نقطة الوقت mpi) أو تحليل FCM (كما هو موضح أدناه في القسمين 4 و 5، على التوالي).
  6. للآبار المتبقية، وفي أوقات مختلفة بعد ذلك أما حصاد الخلايا كما قبل، أو لفحص ظهور Lm ، تماما إزالة الوسائط من البئر واستبدال 150 ميليلتر وسائط مكيفة خالية من الجنتاميسين.

4-أخذ عينات من معالجة وتحليل داخل الخلايا والناشئة Lm بمقايسة زيمبابوي

  1. للحصاد وآماله الطبق قليلاً وإزالة الوسائط كاملة بعناية من البئر. إضافة 0.50 مل ماء المقطر المعقم (dsH2س) إلى البئر. بعد 30 ثانية، نقل المياه الناتجة ليستي (100) إلى 1.5 مل ميكروسينتريفوجي الأنبوبة ودوامه بشدة لمدة 10 s.
  2. إعداد 10-1 و 10-2 تخفيف بإضافة أما 4.5 ميليلتر أو 50 ميليلتر من الماء ليساتي إلى 450 ميليلتر من dsH2س وإيجاز دوامة لضمان خلط دقيق.
  3. نشر 50 ميليلتر من 10010-1 و 10-2 عينات على لوحات أجار مرق (رطل) ليسوجيني.
  4. للاعتداء ل الناشئة Lm (الخطوة 3، 6 أعلاه) وإزالة 10 ميليلتر لوسائل الإعلام تتراكب وتقسيمه إلى مختبرين اثنين 5 ميليلتر: إلى قاسمة واحد إضافة 5 ميليلتر من دميم/FCS وقاسمه الثانية إضافة 5 ميليلتر من دميم/FCS التي تحتوي على 5 ميكروغرام/مل الجنتاميسين. عنصر التحكم هذا الأخير يميز بين الخلية Lm (الجنتاميسين الحساسة) والاعتداء داخل الخلايا Lm (الجنتاميسين المقاومة) في زيمبابوي اللاحقة.
  5. بعد 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة، إضافة ميليلتر 90 dsH2س، ودوامه قوة ل 10 s، وانتشار 50 ميليلتر في لوحات أجار رطل.
  6. تعداد المستعمرات Lm على ألواح أجار رطل بعد 2 يوما حضانة عند 37 درجة مئوية.

5-أخذ عينات من معالجة وتحليل داخل الخلايا والناشئة Lm بالتدفق الخلوي (FCM)

  1. إعداد الخلايا 264.7 الخام كما هو موضح في الخطوات 1، 1-4. ضبط الخلايا إلى 1 × 106 خلايا/مل وإضافة 1 مل (1 × 106 خلايا) إلى الآبار لطبق استنبات الأنسجة 6-جيدا.
  2. تعد العدوى البكتيريا كما هو موضح في الخطوة 2، 2، 1-3 وتصيب الخلايا مع حجم العدوى تناظر موي 50 (5 × 107 زيمبابوي).
  3. في ساعة ونصف بعد الإصابة (hpi)، جمع وسائل الإعلام من أول مجموعة من الآبار ووضع في أنبوب ميكروسينتريفوجي 1.5 مل مع 500 ميليلتر بارافورمالدهيد 4% (PFA) ومكان على الجليد حتى تم تجهيز جميع الآبار.
  4. جمع داخل الخلايا Lmوإضافة 1 مل من dsH2س إلى البئر، وبعد 60 ثانية، نقل المياه الناتجة ليستي إلى أنبوب ميكروسينتريفوجي 1.5 مل مع 500 ميليلتر من 4% منهاج عمل بيجين. الدوامة بقوة عن 10 s ومكان على الجليد حتى تم تجهيز جميع الآبار. (ويرد تجهيز عينة في الخطوة 5، 8 أدناه).
  5. للآبار المتبقية، قم بإزالة الوسائط واستبدال مع 1 مل من دميم/السفح مع 5 ميكروغرام/مل الجنتاميسين لقتل خارج الخلية Lm وعلى الفور بإعادة الخلايا إلى حاضنة.
  6. وبعد 30 دقيقة (2 hpi) قم بإزالة الوسائط واستبدل دميم/السفح دون الجنتاميسين.
  7. بعد ح 2 و 4 (hpi 4 و 6) تأخذ الثانية والثالثة الوقت النقاط عن طريق جمع وسائل الإعلام وليساتيس كخطوات 5.3 و 5.4.
  8. الطرد المركزي أنابيب في 10,000 س ز للمادة 7 الحد الأدنى إزالة طافية دون بيليه مثيرة للقلق.
  9. تعليق كل بيليه في تلطيخ كوكتيل ميليلتر 50% 4 منهاج عمل بيجين و 15 ميليلتر من فالويدين. احتضان أنابيب في الظلام عند 4 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة.
  10. بعد الاحتضان إضافة 1 مل من المخزن المؤقت لنظام مراقبة الأصول الميدانية لكل أنبوب وماصة صعودا وهبوطاً لمزيج.
  11. تدور أنابيب في 10,000 س ز للمادة 7 الحد الأدنى إزالة طافية دون بيليه مثيرة للقلق.
  12. تعليق كل بيليه في 400 ميليلتر من المخزن المؤقت لنظام مراقبة الأصول الميدانية للاستخدام الفوري، أو 200 ميليلتر من المخزن المؤقت لنظام مراقبة الأصول الميدانية وميليلتر 200% 4 منهاج عمل بيجين في حالة تخزين لتحليلها في وقت لاحق.
  13. تشغيل عينات تدفق الخلوي وتحليل البيانات التي تم جمعها.

6-أخذ العينات تجهيز وتحليل الاستعمار Lm واستجابات المضيف في الكبد

  1. إعداد Lm للإصابة كما هو موضح في الخطوة 2، 2، 1-3.
  2. حساب المبلغ اللازم لثقافة فرعية لعيار المرجوة من 3 × 106 زيمبابوي/مل.
  3. قبل الإصابة بإضعاف كمية البكتيريا المحسوبة متوازن الملح الحل (حبس حرارة قبل هانك) بحجم نهائي في 1 مل. هذا هو العدوى الإدخال التي يتم ضخها في الماوس.
  4. باستخدام حقنه الأنسولين 100U G½ 28، رسم 100 ميليلتر (3 × 105 زيمبابوي) من العدوى الإدخال وإزالة أي فقاعات الهواء مرئية.
  5. ضع الماوس (سلالة C57BL/6؛ الذكور بين 6 و 12 أسبوعا القديمة) إلى ضبط النفس الذي عقد واستخدام المياه الدافئة (أي أكثر من 45 درجة مئوية) إلى تمدد الوريد الذيل، ثم العدوى الإدخال بحقن الوريد.
  6. لوحة 10-2 و 10-3 تخفيف من العدوى الإدخال على لوحات 10bcm أجار رطل واحتضان بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية لتحديد الجرعة الإدخال الفعلي.
  7. في hpi 18، معاملة إنسانية euthanize الماوس (CO2 الخنق متبوعاً بخلع عنق الرحم) واستخدام مقص معقم الماوس مفتوحة قطع الصفاق لجمع فص جبهي الكبد باستخدام أزواج منفصلة من ملاقط ومقصات للخارج والداخل الماوس. وضع الكبد في 6 سم طبق بيتري على الجليد.
  8. قطع الكبد إلى مكعبات صغيرة ووضع في قنينة زجاجية مع شريط إثارة مغناطيسية. إضافة 2 مل من 2 مغ/مل كولاجيناز د تشكيلها في دميم دون FCS. احتضان القنينات في 37 درجة مئوية في محرض مغناطيسي لدقيقة 30−45. حالما يتم تجانس الأنسجة، أضف 3 مل من دميم/FCS لإلغاء تنشيط في كولاجيناز.
  9. تصفية الخلايا عن طريق مصفاة خلية 70 ميكرومتر في أنبوب مخروطي، إضافة مزيد من دميم/FCS إذا لزم الأمر.
  10. الطرد المركزي خلايا في 800 x ز بيليه عند 4 درجة مئوية لمدة 10 دقائق، وإزالة المادة طافية وتعليق خلية بيليه في 500 ميليلتر من المخزن المؤقت ACK خلايا الدم الحمراء.
  11. احتضان خلايا في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق في ACK المخزن المؤقت. تعليق الخلايا في 1 مل من دميم/FCS.
  12. الطرد المركزي خلايا في 800 x ز بيليه عند 4 درجة مئوية لمدة 10 دقائق، وإزالة المادة طافية وتعليق في 1 مل من دميم/FCS. بعد ذلك، عد الخلايا باستخدام هيموسيتوميتير أو عداد الآلي خلية.
  13. نقل الخلايا6 1 x 10 إلى 1.5 مل ميكروسينتريفوجي الأنبوبة وتدور لبيليه. ثم تعليق في 1 مل dsH2س ودوامه الخلايا. لوحة 50 ميليلتر في لوحات رطل في غير مخفف و 10-2 تخفيف واحتضان في 37 درجة مئوية لتعداد Lm لتحليل زيمبابوي.
  14. نقل 1 × 106 خلايا في أنابيب نظام مراقبة الأصول الميدانية لكل عينة الأنسجة وفقا لعدد خلايا وتغسل مع 1 مل من المخزن المؤقت لنظام مراقبة الأصول الميدانية.
  15. الطرد المركزي خلايا في 800 x ز بيليه عند 4 درجة مئوية لمدة 10 دقائق وإزالة المادة طافية.
  16. إعداد كوكتيل جسم الذي يحتوي على الأجسام المضادة التي تهم استناداً إلى التركيز الموصى به لكل جسم ونظام مراقبة الأصول الميدانية المخزن المؤقت. انظر الجدول للمواد المستخدمة في التحليل المبالغ الموصى بها.
  17. تعليق بيليه في 100 ميليلتر من جسم كوكتيل واحتضان أنابيب في الظلام عند 4 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
  18. وبعد الحضانة، إضافة 2 مل من المخزن المؤقت لنظام مراقبة الأصول الميدانية لكل أنبوبة وتعليق الخلايا.
  19. الطرد المركزي خلايا في 800 x ز لبيليه في 4 درجات مئوية وتجاهل المادة طافية. ثم تعليق بيليه في 400 ميليلتر من المخزن المؤقت لنظام مراقبة الأصول الميدانية للاستخدام الفوري، أو 200 ميليلتر من المخزن المؤقت لنظام مراقبة الأصول الميدانية وميليلتر 200% 4 منهاج العمل إذا تخزينها في وقت لاحق.
  20. تحليل الخلايا بالتدفق الخلوي (راجع الخطوة 5.13).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تقييم دور الممرض وترميز المضيف العوامل التي تؤثر على العدوى الخلوية
استخدام الإصابة بالشروط الموضحة أعلاه، يتم استرداد 0.15 في المائة من البرية من نوع الإدخال Lm بعد 1.5 ساعة حضانة المشتركة مع مثقف الضامة (الشكل 1أ). في ح 1.5 اللاحقة لاحتضان المشارك (ح 3 وظيفة العدوى، hpi)، كانت هناك زيادة النوبات في الانتعاش من قابلة للتطبيق لم ومن 3 إلى 6 hpi كان هناك زيادة إضافية قدرها 7.5-fold في استرداد مجدية Lm<...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بسبب برنامجها العدوى الخلوي السريع وبروسيسيفي وهو Lm ممرض مثالي للتحقيق في الأنشطة الخلوية التي تؤثر على الإصابة. قد حددت عددا من العوامل المضيفة سواء سلبا أو إيجاباً تؤثر على Lm العدوى الخلوية11،12،،من1314. اثنين مثل استضافة عوامل تتسم في المختبر، بيرفورين-2 ومثبطات ينظم الهيم (P2 ومرحبا)، تنظيم السمات المميزة لعملية العدوى Lm . كما هو موضح في ال...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
ACK Lysing BufferGibco A1049201
حبات التعويض التفاعلي ArC Amine مرق Life TechnologiesA10346
BHI (تسريب قلب الدماغ)EMD Miliporeمصفاة خلوية 110493
، 70 & ميكرو ؛ mVWR10199-656
Collagenase DRoche11088858001
DMEM media Gibco 11965-092
أنابيب FACS BD Falcon352054
FBS - تعطيل الحرارة سيجما ألدريتشF4135-500 مل
هانكس محلول الملح المتوازنSigma-AldrichH6648-6X500ML
LB agarتنمو الخلايا MSMBPE-4040
LIVE / DEAD Fixable Yellow Dead Cell Dead Spot Kit  لايف تكنولوجيزL349S9
الرودامين فالويدين محلل طيفي Thermo FischerR415
SP6800حقنة سوني
28 جم 1/2 "1ccBD329461
TPP ثقافة الأنسجة 48 ألواح الآبار   ؛MIDSCITP92048
TPP ثقافة الأنسجة 6 ألواح الآبار  MIDSCITP92406
UltraComp eBeadseBioscience01-2222-42
Antigen
CD11b BiolegendFlurochrome = PE Cy5 ، التخفيف = 1/100 ، استنساخ = M1 / 70
CD11cBiolegendFlurochrome = AF 647 ، التخفيف = 1/100 ، استنساخ = N418
CD45BiolegendFlurochrome = APC Cy7 ، التخفيف = 1/100 ، استنساخ = 30-F11
F4 / 80BiolegendFlurochrome = PE ، التخفيف = 1/100 ، استنساخ = BM8
Invitrogenالحي / الميتFlurochrome = AmCyN ، التخفيف = 1/100
Ly6CBiolegendFlurochrome = PacBlue ، التخفيف = 1/200 ، الاستنساخ = HK1.4
MHC IIBiolegendFlurochrome = AF 700 ، التخفيف = 1/200 ، الاستنساخ = M5 / 114.15.2
NK 1.1BiolegendFlurochrome = BV 605 ، التخفيف = 1/100 ، الاستنساخ = PK136

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Freitag, N. E., Port, G. C., Miner, M. D. Listeria monocytogenes - from saprophyte to intracellular pathogen. Nature Review Microbiology. 7 (9), 623-628 (2009).
  2. Ray, K., Marteyn, B., Sansonetti, P. J., Tang, C. M. Life on the inside: the intracellular lifestyle of cytosolic bacteria. Nature Review Microbiology. 7 (5), 333-340 (2009).
  3. Miner, M. D., Port, G. C., Freitag, N. E. Functional impact of mutational activation on the Listeria monocytogenes central virulence regulator PrfA. Microbiology. 154, 3579-3589 (2008).
  4. McCormack, R., et al. Perforin-2 Protects Host Cells and Mice by Restricting the Vacuole to Cytosol Transitioning of a Bacterial Pathogen. Infection and Immunity. 84, 1083-1091 (2016).
  5. Gregory, S. H., et al. Complementary adhesion molecules promote neutrophil-Kupffer cell interaction and the elimination of bacteria taken up by the liver. Journal of Immunology. 168, 308-315 (2002).
  6. Shi, C., et al. Monocyte trafficking to hepatic sites of bacterial infection is chemokine independent and directed by focal intercellular adhesion molecule-1 expression. Journal of Immunology. 184, 6266-6274 (2010).
  7. Pitts, M. G., Combs, T. A., D'Orazio, S. E. F. Neutrophils from Both Susceptible and Resistant Mice Efficiently Kill Opsonized Listeria monocytogenes. Infection and Immunity. 86, 00085(2018).
  8. Carr, K. D., et al. Specific depletion reveals a novel role for neutrophil-mediated protection in the liver during Listeria monocytogenes infection. European Journal of Immunology. 41 (9), 2666-2676 (2011).
  9. Blériot, C., et al. Liver-resident macrophage necroptosis orchestrates type 1 microbicidal inflammation and type-2-mediated tissue repair during bacterial infection. Immunity. 42 (1), 145-158 (2015).
  10. Jones, G. S., D'Orazio, S. E. F. Monocytes are the predominant cell type associated with Listeria monocytogenes in the gut, but they do not serve as an intracellular growth niche. Journal of Immunology. 198, 2796-2804 (2017).
  11. Agaisse, H., et al. Genome-wide RNAi screen for host factors required for intracellular bacterial infection. Science. 309, 1248-1251 (2005).
  12. Cheng, L. W., et al. Use of RNA interference in Drosophila S2 cells to identify host pathways controlling compartmentalization of an intracellular pathogen. Proceedings of the National Academy of Science U S A. 102, 13646-13651 (2005).
  13. Singh, R., Jamieson, A., Cresswell, P. GILT is a critical host factor for Listeria monocytogenes infection. Nature. 455, 1244-1247 (2008).
  14. Burrack, L. S., Harper, J. W., Higgins, D. E. Perturbation of vacuolar maturation promotes listeriolysin O-independent vacuolar escape during Listeria monocytogenes infection of human cells. Cellular Microbiology. 11, 1382-1398 (2009).
  15. Shrestha, N., et al. The host-encoded Heme Regulated Inhibitor (HRI) facilitates virulence-associated activities of bacterial pathogens. PLoS One. 8, 68754(2013).
  16. Bahnan, W. The eIF2α Kinase Heme-Regulated Inhibitor Protects the Host from Infection by Regulating Intracellular Pathogen Trafficking. Infection and Immunity. 20, 00707(2018).
  17. Kortebi, M., et al. Listeria monocytogenes switches from dissemination to persistence by adopting a vacuolar lifestyle in epithelial cells. PLoS Pathogen. 13, 1006734(2017).
  18. VanCleave, T. T., Pulsifer, A. R., Connor, M. G., Warawa, J. M., Lawrenz, M. B. Impact of Gentamicin Concentration and Exposure Time on Intracellular Yersinia pestis. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 7, 505(2017).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Listeria monocytogenesPathogen EffluxColony Forming UnitFlow CytometryGentamicin Protection AssayIntracellular ProliferationHost Cell InfectionCytosolic PathogensCellular Efflux AssayHigh Throughput Screening

مقالات ذات صلة