كما هو الحال مع جميع البروتوكولات والإرشادات، من المحتم أن يتم اتباع خطوات معينة للبروتوكول في هذه الدراسة خاصة بأدق وأكبر قدر من الدقة. بعد التنبيب الأولية للفئران، من المهم للتأكد من أنه يتم التنفس بثبات ودون صعوبة. سيؤدي إلى إدخال أنبوب داخل الرغامى عن طريق الخطأ إلى المريء بدلاً من القصبة الهوائية في راسبينج، نفسا صعبة والنزيف ومثير اللاحقة من الفئران بسبب تسليم مخدر قاصرة على الرئتين.
عند تسجيل الأوراق غشاء مايلر فوق مركز لفتح بين السائق وتوسيع الدائرة، من المحتم أن الأوراق في الوسط، وتغطي كامل فتح39،41. ميساليجنينج الأوراق خلال الافتتاح سيؤدي إلى تسرب الهواء من غرفة السائق، وانخفاض في الضغط المطلوب للغشاء الاندفاع المحتملة والحرمان من الإدارة لإصابة الانفجار. وضع بشكل صحيح وأمن تركيب كتلة الفولاذ التبعي ضد المضخة الهيدروليكية اليد الدائرة كتلة وسائق ضروري أيضا كما هو تشديد مقبض مضخة هيدروليكية من ناحية وتأكيد الدائرة السائق ما زال الضغط دون التسريبات. الموضع الصحيح كتلة الفولاذ يسمح للدائرة برنامج التشغيل إغلاق محكم ضد توسيع الدائرة، وبالتالي خلق ختم الإلزامية المطلوبة على الدائرة فتح الأوراق غشاء مايلر وبين السائق وتوسيع الدائرة.
أثناء الأعمال التحضيرية قبل الاستخراج السفينة MCA، الغاز PSS مع خليط المطلوبة من 21% O2 و 5% CO2 في توازن ن2 اكويليبراتيس الحل ويسهل استلزم محايدة pH الفسيولوجية اللازمة تعمل PSS الحل21،،من3334.
اكويليبراتينج الشرائح في ضغط مستمر على 60 دقيقة21،32،،من3334 إلزامي الغاية كما تسمح هذه الخطوة في الجزء المتعلق انقباض التالية المعروضة تمدد أقصى خلال الضغط الابتدائي الأولى. هذا الحدث يثبت حدوث لهجة عفوية، وخاصية موحية الشريان صحية32،33،34. على الرغم من أن مستويات ضغط متنوعة للجزء المتعلق بالموازنة قد استخدمت في34،،من33دراسات أخرى42، هذه الدراسة وماثيو et al.21،35 من غولدنغ et al. ويم غولدنغ et al.43 اكويليبراتيد الشرائح في 50 ملم زئبق. بينما اكويليبراتينج جمع شرائح في أي مكان بين 40 ملم زئبق – 100 ملم زئبق32 يسمح لبعض المرونة والتعديل لأن هذه الخطوة من البروتوكول، فترة الموازنة مدار داخل تلك المعلمات الضغط في نهاية المطاف يؤكد صحة الشرايين اللازمة للاستمرار في هذه التجربة.
ربما أخذ الحذر الشديد عند إزالة الدماغ من الجمجمة وقطاعات MCA اليسار واليمين من "دائرة ويليس" مع الحفاظ على سلامة تلك السفن هو الخطوة الأكثر أهمية للبروتوكول بأكمله. ثقب في الدماغ مع رونجيورس العظام، وتمزق أو تمتد شديدة الأجزاء أثناء إزالة أو سحب السفن بطريق الخطأ مع الملعقة الجراحية عند حفر المخ خارج الجمجمة سيؤدي في نهاية المطاف في تدمير المقطوع اتحاد الماليزيين الصينيين، مما تسبب في الأجزاء غير الصالحة للاستعمال، وتوقف استخدام مجموعة من الشرايين، في نهاية المطاف يفرغ التجربة كاملة بالنسبة لهذا الحيوان.
على الرغم من أن قياس استجابات الأوعية الدموية الدماغية للمحفزات المماطلة أو كونستريكتوري في اتحاد الماليزيين الصينيين شرائح السابقين فيفو التي جمعت بعد الأثر أو تبي المجراة في الانفجار وقد حققت نجاحا، المنهجية ليس دون صعوبات و/أو القيود. ربما واحدة من ملموس أكثر التعقيدات المرتبطة بدراسة آثار تبي على تداول المفرج الدماغي هو فصل آثار صريحة تبي على السفن من الآثار الضمنية التي تكبدتها نتيجة لمختلف المواد و العناصر التي تم إنشاؤها بواسطة المخ أصيب44. يمكن أن يحتمل أن التهرب هذه الحيرة يمكن تصوره من خلال تحليل السابقين فيفو ردود فعل فاسوكونستريكتوري وفاسوديلاتوري من حصاد perfused و/أو الضغط لاتحاد الماليزيين الصينيين. في محاولة لتقليل الفترة الزمنية التي يتعرض لها الشرايين الدماغية المجراة في تصريفها محلياً متني المواد فعال في الأوعية قبل الوفاة، جمع الشرايين الدماغية مباشرة بعد تبي يمكن أن يقلل درجة مثل التعرض لفترات طويلة الآثار. السابقين فيفو دراسات منعزلة MCA بالإضافة إلى ذلك يقدم إمكانية تحليل آليات الإصابات الرضية والأوعية الدموية من خلال استخدام يضع مستقبلات خاصة والخصوم أو المركبات المشهورة لإصابة الأوعية الدموية التي ليس من شأنه أن يتيح التدقيق كفاءة أو أنها تمييزية في فيفو. وفي وقت لاحق، هذا السابقين فيفو الأسلوب يمكن دمجها مع السابقين فيفو التعرض للمخدرات لاختبار ردود شذوذ الناتجة (تضيق الأوعية أو تمدد للجزء المتعلق بالسفينة بسبب التعرض للمخدرات داخل الأوعية أو اكسترافاسكولار).
القيود الأخرى تشمل تقريبا أو بفارغ الصبر إزالة لاتحاد الماليزيين الصينيين من الدماغ المقطوع مما يؤدي إلى تمزق سابق لأوانه للسفن، وبالتالي إبطال استعمالها. وباﻹضافة إلى ذلك، السماح لأكثر من بضع دقائق تنقضي بين القتل الرحيم للحيوان، مجموعة من السفن ووضعهم في الحل PSS استعداد يمكن أن ينفي أيضا قدرتها على الاستمرار. عندما بشكل صحيح واتباعها، الأساليب الموصوفة في هذا البروتوكول لاختبار ردود شذوذ لاتحاد الماليزيين الصينيين بعد بتبي تستغرق عدة ساعات من البداية إلى النهاية، والمحاولات التي ترمي إلى تقليص المدة الزمنية المطلوبة للنجاح يمكن أن ينتج التجريبية فشل. ومع ذلك، يتم هذا الأسلوب في المختبر، ويستخدم إلى حد كبير أكثر الأدوات الفعالة من حيث التكلفة والمعدات مما المجراة في الرنين المغناطيسي عالية الدقة (السيد) التصوير بالموجات فوق الصوتية دوبلر التقليدية أو45،46 / تقنيات فيلوسيميتريك47،،من4849 التي تستخدم أيضا لدراسات السفينة.
من المحتمل أن تكون هذه النتائج أن الإصابة خفيفة بتبي يرتبط بضعف ردود تسويفية الدماغي إلى خفض الضغط داخل الأوعية دالة بالتشنج6،7 وفسمك هايبركونستريكشن50 ذكرت سابقا بعد التعرض انفجار يؤدي في النهاية إلى حدوث مثل خفض التروية الدماغية النسبي. بالإضافة إلى ذلك، الأضرار الناجمة عن الانفجار تعوق ردود فعل المماطلة العادي من المفرج الدماغي يمكن ربما زيادة تعزيز التخفيضات في التروية الدماغية عندما تقترن بانخفاض ضغط الدم الشرياني، وجود حالات متكررة أثناء العمليات القتالية.
تشير هذه النتائج إلى أن بتبي يؤدي إلى تغيير إلى آليات تسهيل مراقبة الأوعية الدموية الشريانية. ولو لوحظ ضعف الأوعية الدموية الدماغية المرحلة الحادة رد شذوذ الشرايين إلى تخفيض الضغط داخل الأوعية لإصابة بعد ساعة على الأقل، لا تزال هناك ثغرات في المعلومات المحيطة بالمرحلة الحادة بعد بتبي. أهمية تحديد ما هي الإصابات العيوب البدنية والبيوكيميائية للمفرج الدماغي وتعرض الدماغ بتبي الأسباب يمكن أن تساعد في تحديد مستوى النجاح العلاجية و/أو إعادة التأهيل إلى حد ما مباشرة بعد الإصابة.