والهدف من هذا البروتوكول إظهار كيفية حمل الثغور متفاوت المسافات في cotyledons شتلات نبات التمويل بمعاملة الغمر بمحلول متوسطة المحتوية على السكر وكيفية مراقبة هياكل داخل الخلايا مثل المعايشة والليزر microtubules في الخلايا الحرس متفاوت المسافات باستخدام [كنفوكل] مجهرية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نظام التوجيهي "الثغور متفاوت" "السكر الحل العلاج الغمر" في شتلات نبات التمويل
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
حركة stomatal يتوسط تبادل الغازات في النبات، هو أمر ضروري لعملية التمثيل الضوئي والرشح. ستوماتال فتح وإغلاق يتم إنجازه بزيادة كبيرة وانخفاض في حجم الخلية الحرس، على التوالي. نظراً لحدوث النقل المكوكية من الأيونات والماء بين خلايا الحرس وخلايا البشرة المجاورة أكبر أثناء حركة ستوماتال، يعتبر توزيع الثغور النباتية متباعدة توزيع أمثل لحركة ستوماتال. نظم تجريبية لزعزعة نمط متباعدة من الثغور مفيدة لدراسة أهمية على نمط تباعد. وقد حددت عدة الجينات الرئيسية المرتبطة بتوزيع ستوماتال متباعدة، والثغور متفاوت المسافات يمكن أن يتسبب تجريبيا بتغيير هذه الجينات. بدلاً من ذلك، يمكن أن يتسبب أيضا الثغور متفاوت المسافات بالعلاجات الخارجية دون التعديل الوراثي. في هذه المقالة، يصف لنا نظام تعريفية بسيطة الثغور متفاوت المسافات في شتلات نبات التمويل بمعاملة الغمر مع حل متوسطة التي تحتوي على السكروز. لدينا طريقة سهلة وتسري مباشرة على خطوط المحورة وراثيا أو المسخ. وترد المعايشة أكبر كعلامة مميزة خلية بيولوجية الناجمة عن السكروز خلايا الحرس متفاوت المسافات. وبالإضافة إلى ذلك، يظهر صورة مجهرية [كنفوكل] ممثل microtubules القشرية كمثال للمراقبة داخل الخلايا من خلايا الحرس متفاوت المسافات. يتم الاحتفاظ باتجاه شعاعي microtubules القشرية في مجمع الحرس الخلايا كما هو الحال في خلايا الحرس متباعدة في ظروف السيطرة.
المقدمة
ستوما النباتات جهازا أساسيا لتبادل الغازات لعملية التمثيل الضوئي والرشح، وهو إنجاز حركة ستوماتال بتغييرات كبيرة في خلايا الحرس عن طريق امتصاص أيون يحركها والإفراج عن المياه. تحت مجهر، يمكننا أن نلاحظ نمط توزيع متباعدة من الثغور على أسطح الأوراق والسيقان. ويعتبر هذا التوزيع متباعدة من الثغور للمساعدة في حركة ستوماتال، والتي يتم تنظيمها بواسطة تبادل الأيونات والماء بين خلايا الحرس والمجاورة لخلايا البشرة1،2. نظم تعريفية تجريبية الثغور متفاوت المسافات مفيدة للتحقيق أهمية توزيع الثغور متباعدة.
وأفيد أن التكتل المكاني من الثغور يمكن أن يتسبب بالتعديل الوراثي للجينات الرئيسية لحراسة الخلي....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1-إعداد موراشيجي 1/2-سكوغ متوسطة 3% الحل التي تحتوي على السكروز
- إضافة 1.1 غ أملاح Murashige سكوغ المتوسطة و 15 ز السكروز إلى كوب.
- إضافة 490 مل ماء المقطر ويخلط جيدا باستخدام شريط إثارة.
- قم بضبط درجة الحموضة إلى 5.8 استخدام كوه.
- نقل الحل في زجاجة متوسطة وتمييع إلى 500 مل بالماء المقطر.
- تعقيم الحل بالتعقيم (121 درجة مئوية، 20 دقيقة). إذا لم تستخدم مباشرة، قد أبقى هذا الحل في 4 درجات مئوية بعد التعقيم.
2-تنظيم دورات تعريفية الثغور متفاوت المسافات التي تحتوي على السكروز الحل المتوسط الغمر العلاج
- تعقيم البذور.
- إعداد الحل التعقيم بإضافة 500 ميليلتر من 5% كلور نشط الحل ناكلو....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
هنا، تم عرض البروتوكول المتعلق بأسلوب بسيط لحمل المجموعات ستوماتال مع الحل المتوسطة التي تحتوي على السكروز في التمويل ألف شتلة. خلايا الحرس متفاوت المسافات نمت في الحل المتوسط الذي يحتوي على السكروز (الشكل 1ب) لها المعايشة أكبر من خلايا الحرس نمت في ظروف خالية من السكروز التحكم (الشكل 1أ). وأكد توسيع المعايشة مع الأشعة المقطعية-التجارة والنقل11، وعلامة ستروما بلاس.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وقد قدمنا البروتوكولات لتحريض الثغور متفاوت المسافات في التمويل ألف شتلة بمعاملة الغمر مع حل متوسطة التي تحتوي على السكروز. كما هو موضح هنا، هذا الأسلوب بسيط جداً ويتطلب أي مهارة متخصصة لكن يمكن حمل كفاءة الثغور متفاوت المسافات. تتجمع أكثر من 45 في المائة خلايا الحرس مع 3% السكروز المحتوية على الحل المتوسط (قيم المتوسط الحسابي للملاحظات مستقلة أكثر من 20)6. وعلاوة على ذلك، هذا النظام التجريبي يمكن تطبيقها مباشرة على خطوط المحورة وراثيا أو متحولة كما هو موضح لخطوط المعدلة وراثيا معربا عن ا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
ونحن ممتنون للبروفيسور سيشيرو هاسيزاوا على دعمه الكريم لعملنا. أيد هذا العمل المنح المقدمة من "الجمعية اليابانية" لأرقام كاكينهجرانت النهوض بالعلوم (JSPS) 17 ك 19380 ومنح 18 ح 05492، من مؤسسة سوميتومو للحصول على منح "مشاريع بحوث العلوم الأساسية" رقم 160146، و "مؤسسة كانون" T.H. ووضعت هذا النظام التجريبي تحت دعم المالي من عدد كاكينهجرانت JSPS 26891006 إلى أ. ك. ونحن نشكر روبي لويس، ماجستير، من مجموعة ادانز (www.edanzediting.com/ac) لتحرير مسودة للمخطوطة.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 24 بئر لوحة | سوميتومو الباكليت | MS-0824R | |
| 488 نانومتر ليزر | فوروكاوا دينكو | HPU-50101-PFS2 | |
| 488 نانومتر ليزر | أوليمبوس | الياقوت 488-20 / O | |
| 510 نانومتر مرشح التمرير الطويل | أوليمبوس | BA510IF | |
| 524 - 546 نانومتر مرشح تمرير | النطاق Semrock | FF01-535 / 22-25 | |
| 530 نانومتر تمريرة قصيرة مرشح | أوليمبوس | BA530RIF | |
| 561 نانومتر ليزر | CVI Melles Griot | 85-YCA-025-040 | |
| 604 - 644 نانومتر مرشح تمرير النطاق | Semrock | FF01-624 / 40-25 | |
| رأس المسح بالليزر متحد البؤر | يوكوجاوا | CSU10 | |
| رأس المسح بالليزر متحد البؤر | أوليمبوس | FV300 | |
| كاميرا CCD المبردة | القياسات | الضوئيةبرنامج الحصول على الصور CoolSNAP HQ2 | |
| الأجهزة الجزيئية | MetaMorph الإصدار 7.8.2.0 | ||
| برنامج الحصول على الصور | Olympus | FLUOVIEW v5.0 | |
| زيت الغمر | زيت الغمر أوليمبوس | من النوع F | ne = 1.518 (23 درجة) |
| المجهر المقلوب | أوليمبوس | IX-70 | |
| المجهر المقلوب | أوليمبوس | IX-71 | |
| Murashige و Skoog خليط الملح النباتي | FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation | 392-00591 | Murashige T and Skoog F (1962) وسيط منقح للنمو السريع والمقايسات الحيوية مع مزارع أنسجة التبغ. علم وظائف الأعضاء Plantarum 15 (3) ، 473-497. |
| عدسة موضوعية | أوليمبوس | UPlanApo 100x / 1.35 NA زيت القزحية 1.35 | NA = 1.35 |
| عدسة موضوعية | أوليمبوس | أبلانAPO 40x / 0.85 NA | NA = 0.85 |
| سكروز | فوجي فيلم واكو شركة بيور كيماويكال | كوربوريشن 196-00015 |
المراجع
- Raschke, K., Fellows, M. P. Stomatal movement in Zea mays: shuttle of potassium and chloride between guard cells and subsidiary cells. Planta. 101 (4), 296-316 (1971).
- Higaki, T., Hashimoto-Sugimoto, M., Akita, K., Iba, K., Hasezawa, S.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
