مقالة منهجية

نموذج الماوس لتقييم الفطرية الاستجابة المناعية للعدوى المكوّرات العنقودية الذهبية

12.7K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/59015

⸱

فبراير 28, 2019

 ,  ,  ,  , 
1Department of Biomedical Engineering, University of California Davis, 2Department of Dermatology, Johns Hopkins University School of Medicine

في هذه المقالة

ملخص

ويرد وصف نهج للكشف في الوقت الحقيقي للاستجابة المناعية الفطرية لإصابة جلدية وعدوى المكوّرات العنقودية الذهبية من الفئران. بمقارنة ليسم-اجفب الفئران (التي تملك العَدلات الفلورسنت) مع ليسم-اجفب نيوزيلند سلالة الماوس العوز، ونحن نتقدم فهمنا للإصابة، ووضع نهج لمكافحة العدوى.

الملخص

المكوّرات العنقودية الذهبية الإصابات (S. aureus)، بما في ذلك البقع المقاومة للميثيسيلين، عبئا هائلا على نظام الرعاية الصحية. مع معدلات الإصابة بعدوى المكوّرات س. تسلق سنوياً، هناك طلب لإجراء بحوث إضافية في القدرة الإمراضية لها. تعزيز فهمنا للاستجابة المضيف الممرض نماذج حيوانية للأمراض المعدية ويؤدي إلى تطوير علاجات فعالة. العَدلات دور أساسي في الاستجابة المناعية الفطرية الذي يتحكم بعدوى المكوّرات س. عن طريق تشكيل خراج الحائط قبالة العدوى وتسهل إزالة البكتيرية؛ عدد العَدلات تسلل التهاب جلد المذهبة س. غالباً ما يرتبط بنتائج المرض. ليسم-اجفب الفئران، التي تمتلك المعززة أخضر نيون البروتين (اجفب) إدراجها في منطقة المروج م Lysozyme () (معبراً عنها بالدرجة الأولى العَدلات)، عندما تستخدم بالاقتران مع fluorescence أسرة الحيوانات الحية في تصوير (FLI) تقديم وسائل القياس الكمي هجرة العَدلات نونينفاسيفيلي وطوليا إلى إصابة الجلد. عندما يقترن طرحه المذهبة س. السلالة ومتسلسلة المجراة في تصوير طرحه كله الحيوانية (BLI)، فمن الممكن طوليا رصد ديناميات تجنيد العَدلات وعبء البكتيرية في المجراة في الموقع العدوى في الفئران تخديره من بداية العدوى بالقرار أو الموت. الفئران أكثر مقاومة لعدد من عوامل الفوعة تنتجها في المذهبة س. أن تيسر الاستعمار الفعلي والإصابة في البشر. الفئران العوز تقديم نموذج حيوانات أكثر حساسية للنظر في استمرار المذهبة س. الالتهابات وقدرة علاجية لتعزيز الاستجابات المناعية الفطرية. هنا، نحن تميز الردود في الفئران ليسم-اجفب التي قد تم تربيتها للفئران التي تفتقر إلى MyD88 (ليسم-اجفب × MyD88--/-- الفئران) جنبا إلى جنب مع الفئران البرية من نوع ليسم-اجفب للتحقيق في المذهبة س. الجلد عدوى الجرح. الكشف المتزامن المتعدد الأطياف تمكين دراسة ديناميات تجنيد العَدلات باستخدام المجراة في FLI، عبء البكتيرية باستخدام BLI في الحية، والتئام طوليا ونونينفاسيفيلي على مر الزمن.

المقدمة

المكوّرات العنقودية الذهبية (S. aureus) تستأثر بغالبية الجلد والتهابات الأنسجة الرخوة (ستيس) في الولايات المتحدة1. حدوث مقاومة مثسلين المذهبة س. (الجرثومة) التهابات زيادة مطردة على مدى العقدين الماضيين الماضي2، تحفيز دراسة آليات استمرار واكتشاف استراتيجيات جديدة للعلاج. هو معيار العناية لهذه الجرثومة الالتهابات الجهازية العلاج بالمضادات الحيوية، ولكن أصبحت هذه الجرثومة مقاومة متزايدة للمضادات الحيوية على مدى الساعة3 وهذه الأدوية يمكن أن تقلل من ميكروبيومي المفيدة للمضيف، مما تسبب في آثار سلبية على الصحة، لا سيما في 4من الأطفال. الدراسات الإكلينيكية وقد فحص استراتيجيات بديلة لعلاج هذه الجرثومة التهابات5، ولكن ترجمة هذه النهج إلى العيادة وقد ثبت تحديا بسبب ظهور عوامل الفوعة إحباط المضيف الاستجابات المناعية6. تشريح ديناميات الممرض المضيف محرك الأقراص المذهبة س. ستيس، قمنا بضم موسع وقراءات الطولي لعدد العَدلات المعينين إلى السرير الجرح مع تدابير الحركية لوفرة البكتيريا والجرح بالمنطقة.

العَدلات هي الكريات البيض المتداولة الأكثر وفرة في البشر وأول المستجيبين لعدوى بكتيرية وهو7. العَدلات عنصر ضروري لاستجابة مضيف فعالة ضد العدوى S. المذهبة سبب آلياتها جراثيم، بما في ذلك إنتاج الأنواع الأكسجين التفاعلية، البروتياز، الببتيدات المضادة للميكروبات والاستجابات الوظيفية بما في ذلك البلعمه وفخ خارج الخلية العَدلات إنتاج8،9. إظهار البشرية المرضى الذين يعانون من عيوب وراثية في وظيفة العَدلات، مثل الداء الحبيبي المزمن ومتلازمة شيدياك-Higashi، زيادة تعرض للإصابة المكوّرات س . وبالإضافة إلى ذلك، المرضى مع الوراثية (مثل قلة العَدلات الخلقي) والمكتسبة (مثل قلة العَدلات ينظر في المرضى العلاج الكيميائي) عيوب في عدد العَدلات أيضا عرضه ل الإصابة في المذهبة س. 10. نظراً لأهمية العَدلات في تطهير العدوى S. aureus ، تعزيز قدرتها المناعية أو ضبط أعدادهم داخل آفة المذهبة س. قد يكون استراتيجية فعالة في حل العدوى.

على مدى العقد الماضي، وضعت الفئران المحورة وراثيا مع الصحفيين العَدلات فلورية لدراسة عن الاتجار بالبشر11،12. الجمع بين الفئران مراسل العَدلات مع تقنيات التصوير الحيوان كله يسمح تحليل الزمانية المكانية من العَدلات في الأنسجة والأعضاء. عندما يتم دمجها مع سلالات طرحه في المذهبة س.، من الممكن تعقب تراكم العَدلات استجابة لوفرة المذهبة س. والثبات في سياق البكتيرية ضراوة العوامل التي مباشرة وغير مباشرة التشويش أرقام العَدلات في الأنسجة المتضررة13،14،،من1516.

الفئران أقل عرضه المذهبة S. الفوعة والمناعة آليات التهرب من البشر. على هذا النحو، قد لا تكون الفئران البرية من نوع نموذج حيوان مثالي للتحقيق في مدى فعالية العلاجية لعلاج مزمن المذهبة س. ونظرا للإصابة. الفئران التي تفتقر إلى MyD88 (أي، MyD88--/-- الفئران)، عبئا ماوس المناعة يفتقر إلى مستقبلات interleukin-1 الوظيفية (إيل-1R) وعدد القتلى مثل مستقبلات (TLR) إشارات، إظهار قابلية أكبر لعدوى المكوّرات س. بالمقارنة مع الفئران البرية من نوع17 وضعف في الاتجار العَدلات إلى موقع عدوى المكوّرات س. بالجلد18. تطوير سلالة الماوس التي تمتلك مراسل العَدلات نيون MyD88--/-- الفئران قدمت نموذج بديل لتحقق فعالية العلاجات لعلاج عدوى المكوّرات س. مقارنة بالحالي العَدلات مراسل الفئران.

في هذا البروتوكول، تميز عدوى المكوّرات س في المناعة ليسم-اجفب × MyD88--/-- الفئران، ومقارنة بدوره الوقت والقرار للعدوى مع الفئران ليسم-اجفب. × ليسم-اجفب MyD88--/-- الفئران وضع عدوى مزمنة التي لم تحل، وتستسلم 75% للإصابة بعد 8 أيام. يحدث خلل كبير في تجنيد العَدلات الأولية ما يزيد على 72 ح المرحلة التحريضية للعدوى، وتجنيد العَدلات أقل بنسبة 50% خلال المرحلة الأخيرة من الإصابة. زيادة قابلية × ليسم-اجفب MyD88-/-- الفئران يجعل هذا خاصة سلالة نموذجا السريري دقيق تقييم فعالية تقنيات علاجية جديدة تستهدف عدوى المكوّرات S. مقارنة بالحالي النماذج التي استخدام الفئران البرية من نوع، لا سيما تقنيات تهدف إلى تعزيز الاستجابة المناعية الفطرية ضد العدوى.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

وتم استعراض جميع الدراسات الماوس ووافقت عليها لجنة الاستخدام في "جامعة كاليفورنيا ديفيس" ورعاية الحيوان المؤسسية وأجريت وفقا للمبادئ التوجيهية لقانون رعاية الحيوان وقانون تمديد الأبحاث الصحية. تأكد من استخدام قفازات معقمة عند العمل مع الحيوانات.

1-الماوس المصدر والإسكان

  1. جني الفئران ليسم-اجفب على خلفية وراثية C57BL/6J كما هو موضح سابقا12. اشتقاق ليسم-اجفب × MyD88--/-- الفئران بعبور الفئران ليسم-اجفب مع MyD88--/-- الفئران على خلفية C57BL/6J.
  2. بيت الفئران في فيفاريوم. لهذه الدراسات، تم إيواء الحيوانات في جامعة كاليفورنيا، ديفيس في المجموعات قبل الجراحة والجراحة التالية مساكن واحد. استخدام الفئران تتراوح أعمارهم ما بين 10-16 أسبوعا.

2-إعداد البكتيرية والتقدير الكمي

  1. إزالة طرحه سلالة المذهبة س للفائدة من تخزين-80 درجة مئوية ذوبان الجليد على الجليد. الانتصارات على طبق أجار الدم بقرى 5%. احتضان لوحة سترياكيد في حاضنة هوميديفيد عند 37 درجة مئوية بين عشية وضحاها (ح 16).
    ملاحظة: استخدمت في هذا البروتوكول، أن سلالة ALC2906 SH1000. يتضمن هذه السلالة pSK236 بلازميد المكوك مع المروج البنسلين-البروتين 2 تنصهر فيها كاسيت مراسل لوكسابكدي من لومينيسسينس فوتوهابدوس18.
  2. إعداد مرق الصويا تريبتيك (TSB) عن طريق خلط 0.03 غرام مسحوق TSB الواحد مل من المياه النقية، والاوتوكلاف TSB لتعقيم. عندما يبرد، إضافة أي المضادات الحيوية اللازمة باستخدام تقنية معقمة. في هذا البروتوكول، إضافة 10 ميكروغرام/مل من الكلورامفينيكول18 إلى لجان لتحديد للتعبير بلازميد المكوك pSK236، الذي يحتوي على كاسيت لوكسابكدي الإضاءة الحيوية.
  3. اختيار 3-4 مستعمرات منفصلة من اللوحة س المذهبة إلى TSB مع 10 ميكروغرام/مل الكلورامفينيكول للبدء بثقافة بين عشية وضحاها. احتضان البكتيريا في شاكر تحضين على 37 درجة مئوية بين عشية وضحاها (ح 16).
  4. بدء ثقافة جرثومية جديدة من ثقافة بين عشية وضحاها بتمييع عينة 01:50 إلى TSB مع 10 ميكروغرام/مل الكلورامفينيكول. الثقافة في شاكر تحضين على 200 لفة في الدقيقة و 37 درجة مئوية.
  5. ساعتين بعد تقسيم في المذهبة س.، رصد الكثافة البصرية 600 نانومتر (OD600) على جهاز المطياف الضوئي. مراقبة OD600 مقابل الوقت لإيجاد نمو مرحلة منتصف لوغاريتمي. لسلالة ALC2906 SH1000، OD600 0.5 منتصف لوغاريتمي ويناظر بتركيز 1 × 108 زيمبابوي/مليلتر (الشكل 1).
  6. يغسل OD600 عند 0.5، البكتيريا 1:1 مع دببس المثلج. الطرد المركزي البكتيريا لمدة 10 دقائق في 3000 x ز و 4 درجات مئوية. عناية صب المادة طافية وإضافة دببس برود إضافية ودوامه تماما. أجهزة الطرد المركزي مرة أخرى لمدة 10 دقيقة في 3000 x ز و 4 درجات مئوية.
  7. صب المادة طافية بعناية. ريسوسبيند بيليه البكتيرية في تركيز المطلوب. لهذه الدراسات، وجمع 3 مل من ALC2906 SH1000 وريسوسبيند في 1.5 مل من برنامج تلفزيوني، مضاهاة لتركيز بكتيريا لحوالي 2 × 108 زيمبابوي/مل. تبقى البكتيريا على الجليد حتى الاستخدام.
  8. للتحقق من تركيز البكتيريا، يؤدي إلى تمييع 100 ميليلتر من المضيفين العينة البكتيرية و 1: 100.000 في برنامج تلفزيوني. لوحة 20 ميليلتر مختبرين على صفيحة أجار. احتضان عند 37 درجة مئوية في حاضنة هوميديفيد عن 16 h. كفوس العد عن طريق الفحص الإجمالي وحساب تركيز بكتيرية في اليوم التالي.

3-استئصالية إصابة الجلد والتطعيم المكوّرات س.

  1. إدارة 100 ميليلتر من 0.03 ملغ/مل البوبرينورفين هيدروكلوريد (~0.2 مغ/كغ) إلى كل الماوس عن طريق الحقن داخل.
  2. عشرون دقيقة بعد الحقن، الفئران المكان 2-4 في دائرة مع الأكسجين LPM 2-3 مع إيسوفلوراني 2-4%. حالما يتم تخديره تماما من الفئران، نقل الفئران واحد في كل مرة إلى مخروط الآنف متصل بالأكسجين LPM 2-3 مع إيسوفلوراني 2-4%. تحقق من يتم تخديره الفئران تماما معسر بحزم كل مخلب خلفي بين الإبهام والسبابة. المضي قدما إلى الخطوة التالية إذا لم يستجب الحيوان إلى رشة.
  3. حلق 1 بوصة من القسم 2 بوصة في الجزء الخلفي الماوس مع لوس أنجليس كليبرز الكهربائية وتطهير منطقة قصاصات الفراء استخدام مسح نظيفة أو شاش. تجنب استخدام محلول مزيل الشعر لأنه قد يسبب التهاب الزائدة.
  4. تنظيف الجزء الخلفي الماوس أولاً مع 10% بوفيدون غارقة الشاش ثم مع إيثانول 70% من غارقة شاش. تنظيف المنطقة في نمط دوامة، الانتقال إلى الخارج من وسط منطقة العمليات الجراحية. الانتظار حوالي 1 دقيقة لمنطقة العمليات الجراحية لتجف قبل الجراحة.
  5. عقد حلق مؤخرة الماوس فضفاضة بين اثنين من أصابعه واضغط خزعة لكمه عقيمة 6 مم في وسط منطقة الجراحية مستعدة بقوة. عدم سحب الجلد مشدود.
    1. تطور الخزعة لكمه لإنشاء مخطط دائري على الجلد أن التخفيضات تماما عن طريق الجلد في قسم واحد على الأقل من المخطط التفصيلي. أن يكون حريصا على عدم قطع في رباط أو النسيج الأساسي.
    2. استخدام مقص معقم والملقط لقطع طريق البشرة والأدمة في أعقاب نمط دائري مطبوع الخزعة لكمه.

4- س. المكوّرات التطعيم

  1. ملء حقنه الأنسولين ز 28 مع إينوكولانت البكتيرية طرحه المنشود. في هذه الدراسة، إدارة بتركيز 1 × 108 زيمبابوي/مليلتر (50 ميليلتر). لا تدير أكثر من 100 ميليلتر من وحدة التخزين.
  2. حقن 50 ميليلتر من إينوكولانت بين اللفافة والأنسجة في وسط الجرح في الجزء الخلفي الماوس. التأكد من أن إينوكولانت أشكال فقاعة في مركز الجرح مع الحد الأدنى من التسرب أو التشتت.
    1. سحب الأدمة إلى الجانب وعقد المحاقن مواز تقريبا للأنسجة ببطء دفع المحاقن الأنسجة حتى يشعر انخفاض مفاجئ في المقاومة، مما يشير إلى ثقب من اللفافة. يؤدي المحاقن داخل مركز الجرح والاستغناء عن إينوكولانت بطء بعناية. إزالة المحاقن ببطء من الحيوان.
  3. حقن نفس الحجم من برنامج تلفزيوني المعقمة في جروح الحيوانات مصابة كما هو موضح أعلاه.
  4. إرجاع الحيوان إلى قفصة. ضع القفص تحت مصباح حرارة أو فوق وسادة تدفئة، ورصد هذا الحيوان حتى التعافي من التخدير.

5-وفي فيفو BLI و FLI

  1. تهيئة تصوير الحيوان كله من خلال برنامج الصك. تخدير الفئران في دائرة تلقي الأوكسجين LPM 2-3 مع إيسوفلوراني 2-4%. تقديم نوسيكونيس داخل جهاز التصوير التخدير.
  2. ضع الماوس الجرحى والمصابين إلى التصوير. ضع الماوس مثل الجرح مستوية قدر الإمكان. استخدام إنشاء التسلسل التالي للصورة الفئران.
    1. حدد التﻷلؤ و تصوير كوضع التصوير. لقد حان وقت التعرض 1 دقيقة في binning الصغيرة ووقف و/1 (التﻷلؤ) ووقف F/8 (صورة). عامل التصفية الانبعاثات مفتوح. انقر فوق الزر الحصول سجل في الصورة.
    2. حدد الأسفار و تصوير كوضع التصوير. هو وقت التعرض 1 s binning الصغيرة ووقف و/1 (الأسفار) ووقف F/8 (صورة) مع الطول موجي إثارة من 465/30 نانومتر وانبعاث الطول موجي 520/20 شمال البحر الأبيض المتوسط بكثافة عالية مصباح. انقر فوق الزر الحصول سجل في الصورة.
  3. إرجاع الحيوان إلى القفص ومراقبة حتى التعافي من التخدير.
  4. صورة الفئران يوميا كما هو موضح أعلاه.

6. تحليل الصور

  1. فتح الصور كمياً.
  2. ضع منطقة دائرية كبيرة للفائدة (ROI) على منطقة الجرح كاملة بما في ذلك المحيطة بالجلد لكل الماوس في الصورة. العَدلات المجراة في إشارات اجفب FLI والمجراه في BLI S. aureus إشارات تتجاوز حافة الجرح بعد عدة أيام وقد أدرجت في هذه الدراسات (الشكل 2 ألف و 2 باء). انقر فوق قياس العائد على الاستثمار ، وقيم السجل للتمويه يعني لكل الماوس. مؤامرة التمويه يعني كل إشارة (p/s) مقابل الزمن.
  3. إذا هي رغبت الأرقام المطلقة من العَدلات أو س المذهبة في الجرح، إجراء التجارب التالية.
    1. للربط بين عدد العَدلات لإشارات اجفب FLI المجراة في، الجرح الفئران C57BL/6J كما هو موضح أعلاه، ونقل مجموعة من العَدلات المشتقة من نخاع العظم (5 × 105 إلى 1 × 107) من ليسم-اجفب أو ليسم-EGFPxMyD88-/- الجهات المانحة مباشرة فوق الجروح المختلفة. الصورة كما هو موضح أعلاه وكورليت اجفب FLI المجراة في إشارات إلى كمية معروفة من العَدلات.
    2. لربط المذهبة س زيمبابوي لإشارات BLI المجراة في، الجرح وتصيب الفئران كما هو موضح أعلاه. في يوم 1 العدوى بعد سجل المجراة في BLI إشارات من الفئران وعلى الفور euthanize والبرد وجثث. المكوس الجرح ومجانسة الأنسجة، ولوحة تخفيف البكتيرية في أجار للحضانة بين عشية وضحاها. في اليوم التالي، عد المستعمرات لتحديد زيمبابوي كل الجرح.
  4. لقياس تناسب شفاء الجرح عائد تعميم على حافة الجرح وقياس المنطقة الجرح (سم2) وارسم تغير كسرى من الأساس مقابل الوقت (الشكل 2).

7-الإحصاءات

ملاحظة: يتم عرض كافة البيانات كما يعني ±SEM. واعتبرت ف < 0.05 يعتد به إحصائيا

  1. تحديد الاختلافات بين المجموعتين في يوم واحد باستخدام الأسلوب هولم-صداق وألفا = 0.05، وتحليل كل نقطة الوقت كل على حدة، دون افتراض يتمشى في التنمية المستدامة.
  2. مقارنة الاختلافات بين مجموعات متعددة في نفس اليوم من ANOVA أحادي الاتجاه مع posttest مقارنات متعددة توكي. وقد تم تحليل البقاء على قيد الحياة بين المجموعات التجريبية بواسطة الأسلوب رف-كوكس.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

× ليسم-اجفب MyD88--/-- الفئران يكونون أكثر عرضه للإصابة المكوّرات س. من الفئران ليسم-اجفب

وقد شيد السلالة من S. aureus المستخدمة في هذه الدراسة،، ALC290618مع بلازميد يحتوي على بنية لوكس تنتج إشارات طرحه من البكتيريا الحية ونشاط التاييض. عندما طعمت في الفئران، يمكن استخدام الإضاءة الحيوية المجراة في (BLI) تقنيات التصوير لقياس عبء البكتيريا داخل جرحا مصابة طوليا. ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

نماذج عدوى المكوّرات س. التي تستخدم طرحه المذهبة س. الإصابة في ماوس مراسل العَدلات نيون بالاقتران مع تقنيات متقدمة للتصوير الضوئي المجراة في الحيوان كله تقدمت معرفتنا فطرية الاستجابة المناعية للعدوى. وقد أظهرت الدراسات السابقة باستخدام الماوس ليسم-اجفب أن يصل إلى تجنيد العَدلات7 1 × 10 جرحا S. aureus مصابة خلال 24 ساعة الأولى من الإصابة14، والجرح تجنيد العَدلات تمديد بهم نصف العمر من يوما ونصف يوم لمدة 5 أيام وردا على . س. في المذهبة-إصابة

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

لويد س. ميلر قد تلقت منحة الدعم من ميديموني وشركة فايزر، ريجينيرون، ومؤسسة نانثيلث قريبا-شيونج تشان ورسوم الاستشارات من بيوثيرابيوتيكس نوفيومي ومؤسسة نانثيلث قريبا-شيونج تشان التي لا علاقة لها بالعمل وأفادت في هذه الورقة. ليس لها علاقة بالكشف عن المؤلفين الآخرين.

شكر وتقدير

وأيده هذا العمل الوطني معاهد للصحة منح R01 AI129302 (إلى S.I.S.)، وبرنامج التدريب في علم الصيدلة: "من مقاعد البدلاء" إلى السرير في "جامعة كاليفورنيا ديفيس" (المعاهد الوطنية للصحة T32 GM099608 إلى L.S.A). الجزيئية والجينية التصوير (كمجي) في جامعة كاليفورنيا في ديفيز قدمت الدعم التكنولوجي رائع.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
14 مل من مادة البولي بروبيلين ذات الأنبوب المستديرFalcon352059
6 مم خزعة يمكن التخلصIntegra Miltex33-36
Bioluminescent S. aureus< / em>Lloyd Miller, Johns Hopkins ALC 2906 SH1000
أجار الدم البقري ، 5٪ ، هاردي التشخيصVWR10118-938
بوبرينوبرين هيدروكلوريد عن طريق الحقنالإمدادات الطبية الغربية72920.3 مجم / مل
C57BL / 6J الفئرانجاكسون مختبرية000664
الكلورامفينيكول (مسحوق بلوري)كواشف فيشر الحيويةBP904-100
DPBS (1x)Gibco 14190-144
محاقن الأنسولينBecton, Dickson and Company3294610.35 مم (28 جم) × 12.7 مم (1/2 بوصة)
IVIS Spectrum In Vivo ImagingPerkin Elmer124262
Living Image Software – سلسلة IVIS SpectrumPerkin Elmer128113
LysM-eGFP الفئرانتوماس غراف ألبرت أينشتاين كلية نيويورك   ؛NA
مقياس الطيف الضوئي MicrovolumeThermoFisher ScientificND-2000
MyD88 KO الفئرانجاكسونالمختبري 009088
غير المنسوجةAMD- Ritmed IncA2101-CH5 سم × 5 سم
بوفيدون اليود 10٪ محلولAplicare697731
Prism 7.0GraphPad ترخيص البرمجيات 
مرق الصويا Trypticبيكتون وديكسون وشركاه211825
القاع منها System الإسفنج

المراجع

  1. Moran, G. J., et al. Methicillin-Resistant S. aureus Infections among Patients in the Emergency Department. New England Journal of Medicine. 355 (7), 666-674 (2009).
  2. Suaya, J. A., et al. Incidence and cost of hospitalizations associated with Staphylococcus aureus skin and soft tissue infections in the United States from 2001 through 2009. BMC Infectious Diseases. 14 (1), 296(2014).
  3. Ventola, C. L. The antibiotic resistance crisis: part 1: causes and threats. P & T : a Peer-Reviewed Journal for Formulary Management. 40 (4), 277-283 (2015).
  4. Blaser, M. J. Antibiotic use and its consequences for the normal microbiome. Science. 352 (6285), 544-545 (2016).
  5. Hilliard, J. J., et al. Anti-Alpha-Toxin Monoclonal Antibody and Antibiotic Combination Therapy Improves Disease Outcome and Accelerates Healing in a Staphylococcus aureus Dermonecrosis Model. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 59 (1), 299-309 (2015).
  6. Proctor, R. A. Recent developments for Staphylococcus aureus vaccines: clinical and basic science challenges. European Cells & Materials. 30, 315-326 (2015).
  7. Mölne, L., Verdrengh, M., Tarkowski, A. Role of Neutrophil Leukocytes in Cutaneous Infection Caused by Staphylococcus aureus. Infection and Immunity. 68 (11), 6162-6167 (2000).
  8. Kolaczkowska, E., Kubes, P. Neutrophil recruitment and function in health and inflammation. Nature Reviews Immunology. 13 (3), 159-175 (2013).
  9. Borregaard, N. Neutrophils, from Marrow to Microbes. Immunity. 33 (5), 657-670 (2010).
  10. Miller, L. S., Cho, J. S. Immunity against Staphylococcus aureus cutaneous infections. Nature Reviews Immunology. 11 (8), 505-518 (2011).
  11. Hasenberg, A., et al. Catchup: a mouse model for imaging-based tracking and modulation of neutrophil granulocytes. Nature Methods. 12 (5), 445-452 (2015).
  12. Faust, N., Varas, F., Kelly, L. M., Heck, S., Graf, T. Insertion of enhanced green fluorescent protein into the lysozyme gene creates mice with green fluorescent granulocytes and macrophages. Blood. 96 (2), 719-726 (2000).
  13. Falahee, P. C., et al. α-Toxin Regulates Local Granulocyte Expansion from Hematopoietic Stem and Progenitor Cells in Staphylococcus aureus-Infected Wounds. Journal of immunology. 199 (5), Baltimore, Md. 1772-1782 (2017).
  14. Kim, M. -H., et al. Dynamics of Neutrophil Infiltration during Cutaneous Wound Healing and Infection Using Fluorescence Imaging. Journal of Investigative Dermatology. 128 (7), 1812-1820 (2008).
  15. Liese, J., Rooijakkers, S. H. M., Strijp, J. A. G., Novick, R. P., Dustin, M. L. Intravital two-photon microscopy of host-pathogen interactions in a mouse model of Staphylococcus aureus skin abscess formation. Cellular Microbiology. 15 (6), 891-909 (2013).
  16. Bogoslowski, A., Butcher, E. C., Kubes, P. Neutrophils recruited through high endothelial venules of the lymph nodes via PNAd intercept disseminating Staphylococcus aureus. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (10), 2449-2454 (2018).
  17. Takeuchi, O., Hoshino, K., Akira, S. Cutting Edge: TLR2-Deficient and MyD88-Deficient Mice Are Highly Susceptible to Staphylococcus aureus Infection. The Journal of Immunology. 165 (10), 5392-5396 (2000).
  18. Miller, L. S., et al. MyD88 Mediates Neutrophil Recruitment Initiated by IL-1R but Not TLR2 Activation in Immunity against Staphylococcus aureus. Immunity. 24 (1), 79-91 (2006).
  19. Macedo, L., et al. Wound healing is impaired in MyD88-deficient mice: a role for MyD88 in the regulation of wound healing by adenosine A2A receptors. The American Journal of Pathology. 171 (6), 1774-1788 (2007).
  20. Cho, J. S., et al. Neutrophil-derived IL-1β Is Sufficient for Abscess Formation in Immunity against Staphylococcus aureus in Mice. PLoS Pathogens. 8 (11), e1003047(2012).
  21. Granick, J. L., et al. Staphylococcus aureus recognition by hematopoietic stem and progenitor cells via TLR2/MyD88/PGE2 stimulates granulopoiesis in wounds. Blood. 122 (10), 1770-1778 (2013).
  22. Kim, M. H., et al. Neutrophil survival and c-kit+-progenitor proliferation in Staphylococcus aureus-infected skin wounds promote resolution. Blood. 117 (12), 3343-3352 (2011).
  23. Foster, T. J. Immune evasion by staphylococci. Nature Reviews Microbiology. 3 (12), 948-958 (2005).
  24. Gordon, R. J., Lowy, F. D. Pathogenesis of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus Infection. Clinical Infectious Diseases. 46 (Supplement_5), S350-S359 (2008).
  25. Cho, J. S., et al. Neutrophil-derived IL-1β Is Sufficient for Abscess Formation in Immunity against Staphylococcus aureus in Mice. PLoS Pathogens. 8 (11), e1003047-e1003020 (2012).
  26. Bernthal, N. M., et al. A mouse model of post-arthroplasty Staphylococcus aureus joint infection to evaluate in vivo the efficacy of antimicrobial implant coatings. PLoS ONE. 5 (9), e12580(2010).
  27. Plaut, R. D., Mocca, C. P., Prabhakara, R., Merkel, T. J., Stibitz, S. Stably Luminescent Staphylococcus aureus Clinical Strains for Use in Bioluminescent Imaging. PLoS ONE. 8 (3), e59232(2013).
  28. Dillen, C. A., et al. Clonally expanded γδ T cells protect against Staphylococcus aureus skin reinfection. The Journal of Clinical Investigation. 128 (3), 1026-1042 (2018).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

LysM EGFP MyD88

مقالات ذات صلة