مقالة منهجية

قياس حساس للغاية من نفاذية الكبيبي في الفئران مع الفلورسيين إيزوثيوسيانات-بوليسوكروز 70

DOI:

10.3791/59064

⸱

أغسطس 9, 2019

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Nephrology, Medical Faculty, Heinrich-Heine-University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هنا، نقدم بروتوكول لاختبار نفاذية الكبيبي في الفئران باستخدام تعقب حساس للغاية وغير مشع. تسمح هذه الطريقة بتحليل البول المتكرر مع أحجام البول الصغيرة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

فقدان الزلال في البول (الزلال) يتوقع نتائج القلب والأوعية الدموية. في ظل الظروف الفسيولوجية، يتم تصفية كميات صغيرة من الزلال من قبل glomerulus وإعادة استيعابها في النظام أنبوبي حتى يتم التوصل إلى حد الامتصاص. الزيادات المبكرة في الترشيح الزلال المرضية قد, وبالتالي, قد غاب عن طريق تحليل الزلال. ولذلك، فإن استخدام التتبع لاختبار الانتقائية الكبيبية يبدو مفيداً. يمكن استخدام الفلورسنت المسمى الفلورسين إيزوثيوسينات (FITC)-بوليسوكروز (أي FITC-Ficoll)، لدراسة الانتقيط الكبيبي. يتم تصفية جزيئات FITC-polysucrose بحرية من قبل الكبيبي دون أن يتم إعادة امتصاصها في النظام الأنبوبي. في الفئران والجرذان، تم التحقيق في فيتك-بوليسوروس في نماذج من نفاذية الكبيبي باستخدام إجراءات معقدة تقنيا (أي القياسات المشعة، والكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء [HPLC]، والترشيح هلام). قمنا بتعديل وتسهيل بروتوكول يستند إلى التتبع FITC-polysucrose لاختبار الزيادات المبكرة والصغيرة في نفاذية الكبيبي إلى FITC-polysucrose 70 (حجم الزلال) في الفئران. تسمح هذه الطريقة بتحليل البول المتكرر مع أحجام البول الصغيرة (5 ميكرولتر). يحتوي هذا البروتوكول على معلومات حول كيفية تطبيق جهاز تتبع FITC-polysucrose 70 عن طريق الوريد ويتم جمع البول عن طريق قسطرة بولية بسيطة. يتم تحليل البول عن طريق قارئ لوحة الفلورة وتطبيعها إلى علامة تركيز البول (الكرياتينين)، وبالتالي تجنب الإجراءات المعقدة تقنيا.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

العيوب الوظيفية أو الهيكلية داخل حاجز الترشيح الكبيبي زيادة نفاذية الكبيبي إلى الزلال، مما أدى إلى الكشف عن الزلال في البول (الزلال). الزلال يتوقع نتائج القلب والأوعية الدموية وهو علامة هامة لإصابة الكبيبي1. حتى انخفاض مستويات الزلال، والكذب ضمن النطاق الطبيعي، وترتبط مع زيادة خطر القلب والأوعية الدموية1.

في ظل الظروف الفسيولوجية، يتم تصفية الزلال من خلال glomerulus ويتم إعادة امتصاصه تماما تقريبا في نظام أنبوبي2،3. في الفئران، وعادة ما يتم الكشف عن الزلال في البول عن طريق اختبار المناعية المرتبطة بإنزيم الزلال (ELISA) من 24 ساعة من جمع البول. إذا تم استخدام البول من جمع البول 24 ساعة أو البول بقعة، قد غاب عن اختلافات صغيرة في تركيزات الزلال بسبب مشاكل الحساسية اختبار. معظم الباحثين، لذلك، استخدام النماذج الحيوانية التي يتم فيها الزلال بسبب إصابة الكلى القوية بسبب السموم والأدوية وجراحة الكلى.

ولذلك، فإن العثور على طريقة حساسة للكشف عن التغيرات الصغيرة والعابرة في نفاذية الكبيبية مهم جدا ً للحقل. وقد قدم Rippe وآخرون نموذج الفئران لاختبار نفاذية الكبيبي عن طريق تطبيق التتبع المسمى الفلورسنت، وهي FITC-polysucrose 70 (أي، FITC-Ficoll 70)، في حجم الزلال4. يسمح تطبيق التتبع باختبار التغيرات قصيرة الأجل في نفاذية الكبيبي (فيغضون دقائق) وهو حساس جدا4 . وقد استخدمت دراستان طريقة التتبع في الفئران5،6. على الرغم من فوائده، وهذا الأسلوب، للأسف، لديه عيوب: فمن الناحية الفنية معقدة جدا، والمشعة، والغازية. يتم إجراء مزيد من التحليل للبول فقط باستخدام الترشيح هلام أو حجم استبعاد HPLC5،6.

ضمن هذه الورقة، نقدم طريقة بديلة، حساسة، غير مشعة، وسريعة لقياس نفاذية الكبيبي في الفئران باستخدام الفلورسنت المسمى FITC-polysucrose 70. من خلال إدخال قسطرة عبر القسطرة، جمع البول هو أقل الغازية من ثقب المثانة، استئصال الإحليل، وتطبيق القسطرة فوق العانة، ويسمح جمع البول كل 30 دقيقة على الأقل. قارئ لوحة الفلورسنت. يتم تطبيع تركيزات التتبع في البول إلى تركيزات الكرياتينين في البول باستخدام اختبار الكرياتينين الأنزيمي.

ولذلك، فإن هذه الطريقة الجديدة توفر أداة حساسة لدراسة الإصابة الكبيبية المبكرة مع زيادة نفاذية الكبيبي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وأجريت التحقيقات وفقا للمبادئ التوجيهية المبينة في دليل رعاية واستخدام الحيوانات المختبرية (منشورات المعاهد الوطنية للصحة في الولايات المتحدة رقم 85-23، المنقحة لعام 1996). وقد أجريت جميع التجارب الحيوانية وفقا للموافقات المؤسسية ذات الصلة (حكومة الولاية Landesamt für Natur, Umwelt und Verbraucherschutz [LANUV] الرقم المرجعي 84-02.04.2012.A397).

1- إعداد الأدوات والحلول والمعدات

  1. إعادة تشكيل FITC-polysucrose 70 مع 0.9٪ كلوريد الصوديوم المعقم (كلوريد الصوديوم) إلى تركيز نهائي من 10 ملغ / مل (أي، 100 ملغ في 10 مل من كلوريد الصوديوم).
  2. Dialyze FITC-polysucrose 70 الحل لإزالة جزيئات FITC الحرة بين عشية وضحاها في 4 درجة مئوية (قطع الوزن الجزيئي [MWCO] في 10,000). استخدم 1 لتر من حمض الكلس العقيم بنسبة 0.9% لكل 10 مل من فيتك-بوليسوكروس 70 تحت التحريك المستمر. حماية من الضوء. Aliquot في FITC-polysucrose dialyzed 70 وتخزينها في -20 درجة مئوية.
  3. بالنسبة لـ FITC-polysucrose 70 bolus، أضف 4 ميكرولتر من 10 ملغ/مل فيتك-بوليسوكروز 70 محلول إلى 996 ميكرولتر من 0.9٪ كل
  4. لحل ضخ الاعتدال، إضافة 20 درجة مئوية من 10 ملغ / مل فيتك-بوليسوكروز 70 الحل إلى 9.98 مل من 0.9٪ المعقمة NACl العائد إلى تركيز نهائي من 20 ميكروغرام / مل.
  5. للحل التجريبي، أضف الأدوية أو المواد إلى محلول التسريب (على سبيل المثال، للأنجيوتنسين الثاني [Ang II] [100 نانوغرام/كغ/دقيقة] لفأر 25 غرام، أضف 3 ميكروت من Ang II من محلول 1 mM).
  6. للجراحة، وإعداد واحد للمحملة، واثنين من المشابك الجراحية، زوج واحد من مقص الجراحية، وملاقط اثنين، وملاقط غرامة اثنين، زوج واحد من مقص غرامة، ومسحات. إعداد اثنين من المواضيع الحرير 10 سم (4-0 إلى 6-0) لإجراءات الربط.
  7. لوضع قسطرة وريدي مركزي، قم بإعداد حقنة 10 مل مع إبرة 21 G. ضع طرف الإبرة في قسطرة طولها 30 سم (بقطر داخلي [ID] يبلغ 0.58 مم). قم بتوصيل القسطرة عيار 0.58 مم بقسطرة مقاس 10 سم (مع بطاقة هوية تبلغ 0.28 مم). قطع غيض من القسطرة أصغر منحرف لخلق طرف حاد التي يتم إدخالها في الوريد الوداجي.
  8. إعداد التخدير (أي، الكيتامين التخدير داخل العين، 100 ملغ / كغ من وزن الجسم، وزيلازين، 5 ملغ / كغ من وزن الجسم).
  9. إعداد 22 G القسطرة الوعائية عن طريق التخلص من الإبرة ووضع علامة على القسطرة 1 سم من الطرف. سخني وسادة التدفئة إلى 37 درجة مئوية.
  10. إعداد جهاز ضغط الدم وتغيير غشاء قياس ضغط الدم إذا لزم الأمر.

2- مرحلة الإعداد

  1. القسطرة البولية
    ملاحظة: يتبع القسم 2-1 البروتوكول كما وصفه Reis et al.7. ويبين الشكل 1 والشكل التكميلي 1 وضع قسطرة بولية في الفئران الإناث.
    1. التخدير الماوس مع الكيتامين / xylazine (انظر الخطوة 1.8). استخدم اختبار قرصة القدم لتأكيد التخدير السليم. للحفاظ على التخدير، كرر التخدير (على سبيل المثال، مع نصف الجرعة) بعد 60 دقيقة.
      ملاحظة: يتم استخدام فئران FVB الإناث في هذا البروتوكول.
    2. ضع الماوس في درجة حرارة الظهر على وسادة تدفئة بزاوية 37 درجة مئوية. تشديد أسفل البطن والعثور على ostium مجرى البول (على سبيل المثال، تحت المجهر).
    3. استخدام الجزء البلاستيكي من القسطرة من 22 G القسطرة الوعائية وتليين مع هلام xylocaine. إدخاله بعناية 3 ملم في ostium مجرى البول مع موازية لمحور مجرى البول القاصي (الشكل1A).
    4. بدوره الجزء العلوي من القسطرة الوعائية 180 درجة عن طريق الحفاظ على طرف داخل ostium مجرى البول والحفاظ على محور مجرى البول (الشكل1B).
    5. إدخال القسطرة 7 ملم أبعد في الماوس بحيث يتم وضعها داخل المثانة (الشكل1C). لا تجبر القسطرة على تجاوز المقاومة. تصحيح موقف القسطرة من البداية إذا شعرت بالمقاومة. لاحظ أنه إذا كان موضع القسطرة البولية صحيحاً، فقد يظهر البول بالفعل داخل القسطرة.
    6. ضع أنبوب بني 1.5 مل فوق الجزء العلوي من القسطرة الوعائية لجمع البول. تطبيق 1 مل من 0.9٪ NaCl subcutaneously لتعزيز إنتاج البول.
  2. القسطرة الوريدية المركزية
    1. اكسر يرقبة الفأر ووضعها في التراكم مع الرأس نحو الجراح. فرط تمديد رأس الماوس مع شريط.
    2. تطهير الرقبة مع 70٪ إيزوبروبانول. قم بعمل شق جلدي صغير (5 مم) أسفل خط الفك، باستخدام ملاقط وزوج من المقصات. قطع الجلد حوالي 1 سم في اتجاه القص حتى يتم الوصول إلى منتصف القص.
    3. تشريح بعناية الجلد على الجانب الأيمن من الرقبة، وذلك باستخدام زوج من مقص. إجراء شق مستطيل من الجلد إلى الجانب الأيمن من الماوس لفضح الأنسجة الرخوة للرقبة. استخدام زوج من مقص وملاقط. إصلاح اللوحات الجلد مع اثنين من المشابك.
      ملاحظة: الوريد الوداجي يمتد على طول الجانب الأيسر من الغدة الدرقية أو يتم تغطيتها قليلا من الفص الأيمن للغدة الدرقية. بعد هذه الخطوة، استخدم المجهر للجراحة.
    4. كشف بعناية الوريد الوداجي عن طريق إعداد حادة، وذلك باستخدام غيض من ملاقط غرامة. تجنب الإصابة بفروع الوريد.
      ملاحظة: قد يكون من الضروري إزالة الأنسجة مع مقص غرامة. كن حذرا عند استخدام مقص لإزالة الأنسجة كما أنه يزيد من خطر النزيف.
    5. وضع وإغلاق الرباط مع خيط الحرير (4-0 إلى 6-0) في الجزء القاصي من الوريد الوداجي مرئية (نحو رأس الماوس). وضع التوتر على الرباط عن طريق إصلاح خيط الحرير مع شريط لضمان توتر طفيف على الوريد الوداجي. إعداد الرباط حول الجزء القريب من الوريد الوداجي.
    6. املأ القسطرة بمحلول التسريب المتساوي (انظر الخطوة 1.4) وقم بإصلاح القسطرة بشريط بحيث يقوم القسطرة بمحاذاة الوريد الوداجي. السيطرة على فقاعات لتجنب انسداد الهواء.
    7. ارفع الوريد الوداجي مع ملاقط رفيعة في موقع الإدراج (موقع الإدراج هو 1-2 مم قريب من الرباط). محاذاة الأنابيب موازية للوريد الوداجي. ثقب الوريد الوداجي، وتهدف إلى التجويف، وإدراج لحوالي 2-4 ملم، موازية لمحور الوريد الوداجي. تجنب أي حركات سريعة.
    8. أغلق الرباط لإصلاح القسطرة. السيطرة على ضيق الرباط عن طريق عرض بعناية من خلال المجهر. وضع مسحة رطبة على موقع الجراحة.
  3. قياس ضغط الدم
    1. وضع الذيل الكفة في الجزء السفلي من ذيل الماوس في حين يضع الماوس في recumbency الظهرية. بدء القياسات وتكرارها 10x لكل نقطة زمنية. بناء وسيلة من القياسات.
    2. ضبط موقف الذيل الكفة إذا كانت قياسات ضغط الدم لا تبدو صحيحة ويتم إنتاج بيانات كاذبة.

3- مرحلة التكافؤ

  1. تغيير أنبوب جمع البول قبل بدء مرحلة الاعتدال ووضعها على الجليد.
  2. إدخال حقنة 10 مل مليئة بمحلول مرحلة معادلة الفيت (انظر الخطوة 1.4) مع إبرة 21 G والقسطرة أكبر (مع معرف 0.58 ملم) ووضعها في مضخة الحقنة.
  3. أضعاف مسحة ووضعها حول قسطرة السفينة الصغيرة (مع معرف من 0.28 ملم) التي يتم إدخالها في الوريد الوداجي. وضع القسطرة داخل المسحة. وضع المشبك على مسحة لإلغاء تدفق الدم الرجعية أو انسداد الهواء. قم بتوصيل إبرة 27 G مع حقنة 1 مل مليئة ببولات FITC إلى نهاية قسطرة الأوعية الصغيرة.
  4. فتح المشبك وتطبيق bolus FITC (100 درجة مئوية). أغلق المشبك مرة أخرى واربط القسطرة الأكبر بالقسطرة الأصغر. بدء مضخة حقنة مع 0.008 مل / دقيقة (0.480 مل / ساعة). استمر في التسريب لمدة 60 دقيقة.

4- المرحلة التجريبية

ملاحظة: في هذه المرحلة ، يمكن التحقيق في تأثير الأدوية على الانتقائية الكبيبية.

  1. تغيير الأنبوب البولي (نقطة زمنية 0 دقيقة) إلى أنبوب بني آخر 1.5 مل. وضع مسحة حول قسطرة الأوعية الصغيرة وإغلاق المشبك كما هو مبين في الخطوة 3.3.
  2. افصل القسطرة الكبيرة عن قسطرة الأوعية الصغيرة. تغيير المحاقن إلى حلول المرحلة التجريبية (انظر الخطوة 1.5). دع مضخة التسريب تعمل بحيث يتم تعبئة القسطرة الكبيرة مع محلول التوازن.
  3. أعد توصيل القسطرة مع تجنب انسداد الهواء وإعادة فتح المشبك. بدء ضخ الحقنة في 0.008 مل / دقيقة.
  4. استمر في تشغيل مضخة الحقنة لمدة 60 دقيقة وجمع البول داخل الأنبوب البولي بعد ذلك (البول 60 دقيقة). ضع أنبوب البول على الثلج.
  5. التضحية بالماوس عن طريق خلع عنق الرحم أثناء التخدير. قبل التخلص من الفأر لوحظ لمدة 5 دقائق للتأكد من أنه ميت.

5. تحليل البول

  1. قياس الفلورة
    1. إذابة بركة البول والتخفيف من 1:10 مع الفوسفات المخزنة المالحة (PBS).
      ملاحظة: تجمع البول هو بركة من البول التي تم جمعها من الفئران السليمة في جمع البول 12-24 ساعة في قفص التمثيل الغذائي.
    2. إعداد معايير لقياس الفلورة. خذ 10 أنابيب بنية 1.5 مل ووسمها لفارغة (1:10 بركة البول المخففة) وتركيزات FITC-polysucrose 70 التالية (0.625، 1.25، 2.5، 5، 10، 20، 40، 80، و 160 ميكروغرام / مل).
    3. Pipet 246 μL من تجمع البول المخفف في أنبوب بني 1.5 مل وإضافة 4 ميكرولتر من تركيز المخزون FITC-polysucrose 70 (انظر الخطوة 1.1) للحصول على تركيز نهائي من 160 ميكروغرام / مل فيتك-بوليسوكروز 70. Pipet 100 درجة مئوية من تجمع البول المخفف في جميع الأنابيب الأخرى.
    4. تخفيف 1:2 عن طريق الأنابيب 100 درجة مئوية من 160 ميكروغرام / مل فيتك-بوليسوكروس 70 أنبوب في أنبوب 80 ميكروغرام / مل والاستمرار مع تركيزات أخرى. ضمان المزيج السليم من التركيزات المخففة (على سبيل المثال، عن طريق دوامة الأنبوب قبل الاستمرار).
    5. تمييع عينات بول الماوس (0 دقيقة، 60 دقيقة) 1:10 مع تجمع بولي مخفف.
    6. ماصة 5 ميكرولتر من كل تركيز FITC-polysucrose 70 القياسية وعينات بول الماوس كما triplicates في لوحة سوداء 384 جيدا. طرد مركزي لوحة في 1000 × ز لمدة 15 s لتجنب فقاعات.
    7. تحليل لوحة 384 جيدا في قارئ لوحة. أداء الإثارة في 496 نانومتر وقياس الفلورة في 525 نانومتر.
  2. قياس الكرياتينين
    1. اتبع إرشادات الشركة المصنعة. باختصار، إعداد معايير الكرياتينين عن طريق تخفيف 10 ميكرولتر من الحل القياسي الكرياتينين 100 مل مع 990 درجة مئوية من الكرياتينين اختبار العازلة لإعداد حل قياسي 1 MM.
    2. إضافة 0، 2، 4، 6، 8، و 10 ميكرولتر من 1 mM الكرياتينين الحل القياسي في لوحة 96 جيدا لتوليد 0، 2، 4، 6، 8، و 10 معايير nmol / جيدا، على التوالي. إضافة المخزن المؤقت للقراءة إلى كل بئر لجعل حجم إلى 50 درجة مئوية.
    3. إعداد يمزج رد الفعل عن طريق إضافة 42-44 درجة مئوية من الكرياتينين فحص العازلة، 2 ميكرولتر من الكرياتيناز، 2 ميكرولتر من الكرياتيناز، 2 ميكرولتر من مزيج إنزيم الكرياتينين، و 2 ميكرولتر من مسبار الكرياتينين. للفراغ، استخدم 44 ميكرولتر من المخزن المؤقت للكرياتينين، 2 ميكرولتر من الكرياتيناز، 2 ميكرولتر من مزيج إنزيم الكرياتينين، و1-2 ميكرولتر من مسبار الكرياتينين.
    4. إضافة 50 درجة مئوية من مزيج رد الفعل المناسب لكل بئر في لوحة 96 جيدا واحتضانه لمدة 60 دقيقة على شاكر أفقي في 37 درجة مئوية. حماية لوحة من الضوء أثناء الحضانة. قياس امتصاص في 570 نانومتر على قارئ لوحة.
    5. حساب تركيزات الكرياتينين عن طريق طرح القيمة الفارغة من جميع القراءات. والنتيجة سيكون وحدة nanomoles / ميكرولتر. مضاعفة تركيز الكرياتينين بالوزن الجزيئي للكرياتينين (113.12 نانو /نمول) لتلقي وحدة نانوغرام / ميكرولتر.

6 - تحليل البيانات

  1. حساب تركيز البول FITC-polysucrose 70 من المنحنى القياسي.
  2. مرجع فيتك-بوليسوكروز 70 تركيزات البول إلى تركيزات الكرياتينين في عينة البول التمثيلية.
  3. الرجوع إلى البول 60 دقيقة عينات إلى البول 0 دقيقة عينات من الضوابط والفئران المعالجة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وكما هو موضح في الشكل 2، يتم بناء طريقة اختبار نفاذية الكبيبي في الفئران على ثلاث مراحل. وتسمى المرحلة الأولى مرحلة الإعداد، حيث يتم وضع القسطرة البولية والقسطرة الوريدية المركزية. وتسمى المرحلة الثانية مرحلة التوازن، بدءا من حقن البولات الوريدي من FITC-polysucrose 70 وتليها التسريب المستمر من FITC-polysucrose 70 لمدة 60 دقيقة. وتسمى المرحلة الأخيرة المرحلة التجريبية. في هذه المرحلة، يستمر ضخ FITC-polysucrose 70 ويمكن اختبار الأدوية أو غيرها من المواد للتأثير...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الطريقة المعروضة تمكن المحقق من اختبار نفاذية الكبيبي في الفئران بطريقة حساسة جدا باستخدام التتبع. مع هذه الطريقة، يمكن تشخيص الزيادات على المدى القصير في نفاذية الكبيبي باستخدام كميات صغيرة فقط من البول. الخطوات الأكثر أهمية لإتقان هذه التقنية بنجاح هي 1) تطوير الخبرة اليدوية في جراحة الماوس، وخاصة في تعليب الوريد المركزي، 2) وضع القسطرة البولية دون الإضرار الغشاء المخاطي، و 3) الخبرة اليدوية في التعامل مع 384-جيدا لوحات مع كميات صغيرة من العينات.

عند وضع القسطرة الوريدية المركزية، من الضروري...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يشكر المؤلفون كريستينا شواند، وبلانكا دوفنجاك، ونيكولا كور على مساعدتهم التقنية الاستثنائية، والدكتور دينيس سون على مساعدته في فحص الفلورة. وقد تم دعم هذا البحث بمنحة من شركة Forschungsgemeinschaft الألمانية (DFG) SFB 612 TP B18 إلى L.C.R. و L.S. لم يكن للمحول أي دور في تصميم الدراسة، وجمع البيانات وتحليلها، أو قرار نشر المخطوطة أو إعدادها.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
Motic SMZ168 BLSMZ168BLموتيكلجراحة الفأر
KL1500LCDالفحص المجهري Pulch و Lorenz150500ضوء لجراحة الفأر
Microfederschereبراون ، مقص AesculapFD100Rناعم
Durotip Feine ScherenBraun ، AesculapBC210Rلقطع الرقبة
Anatomische PinzetteBraun ، AesculapBD215Rللجراحة  
Prä parierklemmeAesculapBJ008Rللجراحة  
SeraflexSerag WiessnerIC108000خيط الحرير
الكيتامين 10٪Medistarالتخدير
Rompun (Xylazin) 2٪التخديرBayer
Fine Bore Polythene Tubing ID 0.28mm OD 0.61mmPortex800/100/100القسطرة
غرامة تجويف البوليثين معرف الأنابيب 0.58mm OD 0.96mmPortex800/100/200القسطرة
جهاز هارفارد 11 بالإضافة إلىجهاز هارفارد70-2209مضخة حقنة
BD Insyte AutoguardBD381823  قسطرة بولية
كاشف متعدد الأوضاع DTX 880قارئ لوحة بيكمان كولتر
384 بئر صفيحةNunc262260384 بئر بلات
الكرياتينين فحص كيتسيجما ألدريتشMAK080لقياس تركيز الكرياتينين
96 لوحة بئرNunc260836لفحص الكرياتينين   ؛
بولي سوكروز المسمى FITC 70TBD ConsultancyFP70FITC-ficoll
Angiotensin IISigma-AldrichA9525يستخدم لاختبار نفاذية الكبيبات
BP-98ASoftronلقياس ضغط الدم
OTS 40.3040Medite01-4005-00لوحة تسخين لجراحة الماوس
Instillagel 6 ملFarco-Pharma GmbHللقسطرة البولية
ماكينة الحلاقةExactaAesculapGT415
مجهر ميكروتيتربليت

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chronic Kidney Disease Prognosis Consortium,, et al. Association of estimated glomerular filtration rate and albuminuria with all-cause and cardiovascular mortality in general population cohorts: a collaborative meta-analysis. Lancet. 375 (9731), 2073-2081 (2010).
  2. Mori, K. P., et al. Increase of Total Nephron Albumin Filtration and Reabsorption in Diabetic Nephropathy. Journal of the American Society of Nephrology. 28 (1), 278-289 (2017).
  3. Amsellem, S., et al. Cubilin is essential for albumin reabsorption in the renal proximal tubule. Journal of the American Society of Nephrology. 21 (11), 1859-1867 (2010).
  4. Axelsson, J., Rippe, A., Oberg, C. M., Rippe, B. Rapid, dynamic changes in glomerular permeability to macromolecules during systemic angiotensin II (ANG II) infusion in rats. American Journal of Physiology-Renal Physiology. 303 (6), F790-F799 (2012).
  5. Grande, G., et al. Unaltered size selectivity of the glomerular filtration barrier in caveolin-1 knockout mice. American Journal of Physiology-Renal Physiology. 297 (2), F257-F262 (2009).
  6. Jeansson, M., Haraldsson, B. Glomerular size and charge selectivity in the mouse after exposure to glucosaminoglycan-degrading enzymes. Journal of the American Society of Nephrology. 14 (7), 1756-1765 (2003).
  7. Reis, L. O., et al. Anatomical features of the urethra and urinary bladder catheterization in female mice and rats. An essential translational tool. Acta Cirurgica Brasileira. 26, 106-110 (2011).
  8. Konigshausen, E., et al. Angiotensin II increases glomerular permeability by beta-arrestin mediated nephrin endocytosis. Scientific Reports. 6, 39513(2016).
  9. Venturoli, D., Rippe, B. Ficoll and dextran vs. globular proteins as probes for testing glomerular permselectivity: effects of molecular size, shape, charge, and deformability. American Journal of Physiology-Renal Physiology. 288 (4), F605-F613 (2005).
  10. Bohrer, M. P., Deen, W. M., Robertson, C. R., Troy, J. L., Brenner, B. M. Influence of molecular configuration on the passage of macromolecules across the glomerular capillary wall. The Journal of General Physiology. 74 (5), 583-593 (1979).
  11. Dolinina, J., Rippe, A., Bentzer, P., Oberg, C. M. Glomerular hyperpermeability after acute unilateral ureteral obstruction: Effects of Tempol, NOS-, RhoA- and Rac-1-inhibition. American Journal of Physiology-Renal Physiology. , (2018).
  12. Dolinina, J., Sverrisson, K., Rippe, A., Oberg, C. M., Rippe, B. Nitric oxide synthase inhibition causes acute increases in glomerular permeability in vivo, dependent upon reactive oxygen species. American Journal of Physiology-Renal Physiology. 311 (5), F984-F990 (2016).
  13. Sverrisson, K., Axelsson, J., Rippe, A., Asgeirsson, D., Rippe, B. Acute reactive oxygen species (ROS)-dependent effects of IL-1beta, TNF-alpha, and IL-6 on the glomerular filtration barrier (GFB) in vivo. American Journal of Physiology-Renal Physiology. 309 (9), F800-F806 (2015).
  14. Sverrisson, K., Axelsson, J., Rippe, A., Asgeirsson, D., Rippe, B. Dynamic, size-selective effects of protamine sulfate and hyaluronidase on the rat glomerular filtration barrier in vivo. American Journal of Physiology-Renal Physiology. 307 (10), F1136-F1143 (2014).
  15. Sverrisson, K., et al. Extracellular fetal hemoglobin induces increases in glomerular permeability: inhibition with alpha1-microglobulin and tempol. American Journal of Physiology-Renal Physiology. 306 (4), F442-F448 (2014).
  16. Axelsson, J., Mahmutovic, I., Rippe, A., Rippe, B. Loss of size selectivity of the glomerular filtration barrier in rats following laparotomy and muscle trauma. American Journal of Physiology-Renal Physiology. 297 (3), F577-F582 (2009).
  17. Axelsson, J., Rippe, A., Rippe, B. Transient and sustained increases in glomerular permeability following ANP infusion in rats. American Journal of Physiology-Renal Physiology. 300 (1), F24-F30 (2011).
  18. Axelsson, J., Rippe, A., Rippe, B. Acute hyperglycemia induces rapid, reversible increases in glomerular permeability in nondiabetic rats. American Journal of Physiology-Renal Physiology. 298 (6), F1306-F1312 (2010).
  19. Axelsson, J., Rippe, A., Venturoli, D., Sward, P., Rippe, B. Effects of early endotoxemia and dextran-induced anaphylaxis on the size selectivity of the glomerular filtration barrier in rats. American Journal of Physiology-Renal Physiology. 296 (2), F242-F248 (2009).
  20. Andersson, M., Nilsson, U., Hjalmarsson, C., Haraldsson, B., Nystrom, J. S. Mild renal ischemia-reperfusion reduces charge and size selectivity of the glomerular barrier. American Journal of Physiology-Renal Physiology. 292 (6), F1802-F1809 (2007).
  21. Dolinina, J., Rippe, A., Bentzer, P., Oberg, C. M. Glomerular hyperpermeability after acute unilateral ureteral obstruction: effects of Tempol, NOS, RhoA, and Rac-1 inhibition. American Journal of Physiology-Renal Physiology. 315 (3), F445-F453 (2018).
  22. Rosengren, B. I., et al. Transvascular protein transport in mice lacking endothelial caveolae. American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 291 (3), H1371-H1377 (2006).
  23. Whitesall, S. E., Hoff, J. B., Vollmer, A. P., D'Alecy, L. G. Comparison of simultaneous measurement of mouse systolic arterial blood pressure by radiotelemetry and tail-cuff methods. American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 286 (6), H2408-H2415 (2004).
  24. Eisner, C., et al. Major contribution of tubular secretion to creatinine clearance in mice. Kidney International. 77 (6), 519-526 (2010).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

70 FITC II

مقالات ذات صلة